反向解析法在盐酸普萘洛尔片一致性评价中的应用

反向解析法在盐酸普萘洛尔片一致性评价中的应用

柏植政1，周

卫2，丁逸梅1，

3*

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南京工业大学药学院，南京210009;2中国药科大学，南京210009；

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南京工业大学江苏省药物研究所有限公司，南京210009

盐酸普萘洛尔是一种合成的β-肾上腺素能受体阻断剂，于1966年由阿斯利康公司开发上市，广泛用于治疗高血压、心绞痛、心律失常，作为辅助治疗甲状腺毒症，以及降低心肌梗死急性期的心血管死亡风险。根据国家食品药品监督管理总局（CF -DA ）对于仿制药一致性评价的要求，盐酸普萘洛尔属于CFDA 发布豁免生物等效性（BE ）的药品。

药物辅料的种类及用量可能会影响药物的吸收速率和吸收程度，特别对低渗透性药物的吸收影响更显著。因此，仿制制剂研究者通常采用与参比制剂保持相同的辅料组成和用量的策略。根据前期对盐酸普萘洛尔片原研产品的处方研究，获知硬脂酸/硬脂酸镁比例为体外溶出一致的关键参数。本研究旨在利用衍生化气相色谱和原子吸收测定硬脂酸与硬脂酸镁比例，反向解析原研产品处方，为盐酸普萘洛尔仿制药通过一致性评价提供参考。

1仪器与试药

气相色谱仪（岛津GC-2014）；溶出仪（RC806，紫外分光光度计）。

硬脂酸对照品（批号：BCBP3246V ，纯度≥98.5%），棕榈酸对照品（批号：SLBQ8869V ，纯度≥99%），镁对照溶液（批号：BCBL4523V ）均为Sigma

公司产品；盐酸普萘洛尔总混颗粒（批号：20170301），盐酸普萘洛尔自制片[0301-1批（0.5+2.0），0302-1批（0.5+1.5），0302-2批（0.4+2.0）]均由中国药科大学药剂教研室提供；盐酸普萘洛尔参比片（日本AstraZeneca 公司，10mg ，04360）；甲醇为色谱纯；正己烷、氯化钠、硫酸钠及三氟化硼-甲醇均为分析纯。

2方法与结果

2.1衍生化气相色谱法（测定总硬脂酸含量）[1，2]

2.1.1溶液配制对照品溶液的配制：精密称取硬脂酸对照品约10mg 、棕榈酸对照品约10mg ，置锥形瓶中，精密加入三氟化硼-甲醇溶液5mL ，振荡溶解，水浴回流20min ，放冷，加入正己烷15mL ，完全转移至分液漏斗中，加入10mL 水，加入10mL 饱和氯化钠溶液，振摇至分层，弃去下层（水层），正己烷层加入无水硫酸钠6g ，振摇，静置3min ，正己烷层完全转移至25mL 量瓶中，用正己烷稀释定容。

供试品溶液的配制：精密称定原研片粉约800mg ，置锥形瓶中，精密加入三氟化硼-甲醇溶液5mL ，振荡溶解，水浴回流20min ，放冷，加入正己烷15mL ，完全转移至分液漏斗中，加入10mL 水，加入10mL 饱和氯化钠溶液，振摇至分层，弃去下层（水层），正己烷层加入无水硫酸钠6g ，振摇，静置

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作者简介柏植政,男,在读硕士生E-mail:2656397589@ 通讯作者丁逸梅,女,研究员E-mail:jsyws@ 收稿日期2017-04-19修回日期2018-03-15

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min ，正己烷层完全转移至25mL 量瓶中，用正己烷

稀释定容[3，4]

。

2.1.2色谱条件色谱柱：HP-INNOWAX （30m ×0.32mm ，0.25μm ）；载气：氮气；流速：1.0mL ·min -1；进样口温度为250℃，检测器温度为260℃，升温程序：起始温度为170℃，维持2min ，以每分钟10℃的速率升温至240℃，保持，使色谱图记录至除溶剂峰外第二个主峰保留时间的3倍，硬脂酸甲酯峰与棕

榈峰甲酯峰分离度应大于5.0；进样体积：1μL 。

[5]

2.1.3专属性试验取对照品溶液和供试品溶液，在“2.1.2”色谱条件下进样。见图1。

2.1.4线性范围分别精密称定硬脂酸与棕榈酸对照品各7、8、10、12、13mg ，置锥形瓶中，按照“2.1.1”项下操作配制成含硬脂酸与棕榈酸56~104μg ·mL -1系列浓度对照品溶液。分别以硬脂酸、棕榈

酸浓度C （μg ·mL -1）

为横坐标，以峰面积A 为纵坐标，进行线性回归。结果表明，该方法检测的硬脂酸与棕榈酸均在56~104μg ·mL -1范围内，峰面积线性关系良好[2]，见表1。

为最低检测限，信噪比为S/N=10为定量限。结果表明硬脂酸、棕榈酸在本色谱条件下最低检测限为0.2μg ·mL -1。

2.1.6进样精密度、稳定性和重复性试验取对照品溶液，连续进样5次，计算得硬脂酸峰面积的RSD 为

3.68%，棕榈酸峰面积的RSD 为

4.15%。

取对照品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8h 进样，计算得硬脂酸面积的RSD 为4.36%，棕榈酸面积的RSD 为4.65%，结果表明，本品溶液在8h 内稳定。取供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8h 进样，计算得硬脂酸峰面积的RSD 为5.87%，棕榈酸峰面积的RSD 为5.71%，结果表明，本品溶液在8h 内稳定。

精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉（04360批）6份，按“供试品溶液制备”方法操作，分别进样测定，计算得硬脂酸含量的RSD 为4.89%，棕榈酸含量的RSD 为3.62%。

2.1.7回收率试验精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉约400mg 共9份，分别精密加入硬脂酸、棕榈酸对照品适量，配制成低、中、高浓度溶液（70%、

2.1.8样品的含量测定精密称

取盐酸普萘洛尔参比片粉（10mg/片）约800mg ，按照“2.1.1”项下操作，测得硬脂酸含量为1.253%，棕榈酸含量为1.24.%。从硬脂酸和棕榈酸的比例可以判断本品采用的是硬脂酸50。

图1棕榈酸及硬脂酸HPLC 图

(A )对照品;(B )供试品;(C )空白组溶液

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