天然药物化学实验讲义

实 验 一

苦参中氧化苦参碱和苦参碱的提取、分离、鉴定

一、目的要求

1、掌握用离子交换法提取生物碱的原理和方法。

2、掌握和熟练应用渗漉提取法及索式提取器连续回流提取操作。

3、掌握生物碱的常规定性检识方法。

二、概述

苦参系豆科植物苦参（Sophora fiavescens ）的根，具有清热利湿、祛风杀虫、解毒等功效。生物碱是苦参中的主要有效成分，主要有苦参碱、氧化苦参碱、羟基苦参碱、苦参醇碱、苦参烯碱、安那吉碱、巴普叶碱等。其中以氧化苦参碱含量最高，在苦参总碱中，氧化苦参碱的含量约占70%左右。 N N O

N

N O O

H

苦参碱 氧化苦参碱 苦参醇碱 苦参碱有四种形态，可溶于冷水、苯、乙醚或二硫化碳，难溶于石油醚，用H 2O 2处理可转变为氧化苦参碱。氧化苦参碱为无色柱状结晶，可溶于水、氯仿、乙醇，难溶于乙醚、石油醚，用SO 2处理可转变为苦参碱。

三、实验原理

苦参生物碱有一定碱性，可与酸结合成盐，因此用酸水提取后，总生物碱呈阳离子状态而被阳离子交换树脂所交换，再用氨水碱化后使生物碱游离，以有机溶剂回流提取。

四、实验内容

1、提取

苦参粗粉(100g)

以0.1%盐酸100ml 湿润半小时，装入渗漉筒中， 以0.1%盐酸900ml 渗漉，速度1-2滴/秒。

渗漉液

通过装湿重60g(约60ml)的阳离子交换树脂柱

交换，交换速度1-2滴/秒。（注意测定不同交

换时间pH值的变化，并进行沉淀反应测定）

吸碱树脂

将树脂倒入烧杯中，以蒸馏水洗至洗液无色抽滤后室

温晾干。将树脂置烧杯中，加入浓氨水，拌匀（加氨

水量以手握成团但不粘手为度），密闭放置

碱化树脂

放置20分钟，装入滤纸袋置索氏提取器中以二氯甲烷连

续回流提取2.5小时，回收二氯甲烷至尽，蒸尽水分。

残留物

以丙酮回流残留物，抽滤，溶液回收部分丙

酮，加盖放置，结晶，抽滤，干燥

粗品总碱结晶

2、色谱鉴定

色谱板：预制硅胶板

样品：精品总碱乙醇溶液（自制）

对照品；氧化苦参碱的乙醇溶液

展开剂：氯仿：甲醇：氨水（实验室准备）

显色剂：改良碘化铋钾试剂

结果：样品斑点与对照品斑点比较位置并计算R f值。

五、思考题

1、以反应式表示出离子交换树脂提取生物碱的原理。

2、苦参碱渗漉中若氢离子浓度过高，通过树脂时对交换有何影响？

实 验 二

槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备

一、目的要求

1、掌握黄酮成分的主要性质

2、掌握根据溶解性提取、分离芦丁的方法

3、熟悉糖的检识方法

二、概述

芦丁（Rutin ）又称为芸香苷，广泛存在于植物中，其中槐花米、荞麦叶中含量较高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。

槐米系豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾，具清热凉血、止血之功，常用来治疗多种出血症。槐米的主要成分为芦丁，含量可高达12~16%，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐米甲素、槐米乙素、槐米丙素等。芦丁具有减少毛细血管通透性的作用，临床上主要作为防治高血压的辅助治疗药物。

芦丁是黄酮苷，由槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水缩合而成，结构式如下：

芦丁含三分子结晶水，为浅黄色粉末或小针状晶，难溶于冷水（1：10000）、可溶于热水（1：200）、热甲醇（1：10）、冷甲醇（1：100）、热乙醇（1：60）、冷乙醇（1：650）、冷吡啶（1：12），不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等。易溶于碱液，酸化后又析出，全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠李糖。

槲皮素含两分子结晶水，能溶于冷乙醇（1：290）、易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。

三、实验原理

芦丁为黄酮苷，利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质进行提取。又利用其在冷、热醇中的溶解度差进行重结晶法分离精制。芦丁可被稀酸水解，生成的苷元及糖可通过定性反应及层析进行鉴别。

rut O OH O H O O OH

OH

四、实验内容

1、提取

槐米（20g稍研磨）

蒸馏水，沸后将槐米投入，继续加热保持微沸30

250ml，煮沸20分钟，药渣

自然干燥

2、精制

粗品芦丁

左右，水浴加热（空气冷凝）

液

放置，待结晶析出，抽滤至干

沉淀

干燥

精品芦丁

3、水解

精品芦丁(0.2g)

2%稀硫酸50ml，空气冷

40分钟，趁热过滤。

沉

水洗至中性抽滤、干燥。加氢氧化钡调PH6，过滤。

槲皮素

沉

水浴浓缩至1~2ml

浓缩液（备检查糖用）

4、芦丁、槲皮素的鉴定（自制两个样品的乙醇溶液）

（1）试管定性反应

①HCI-Mg粉反应：取样品溶液1ml加少许镁粉，再加浓HCI 1~2滴，观察颜色。

②FeCl3反应：取样品溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶液2~3滴，观察颜色。

③中性醋酸铅反应：取样品溶液1ml加5%的中性醋酸铅溶液1~2滴，观察现象。

④α-萘酚、浓H2SO4反应：取样品溶液1ml加α-萘酚试液2滴，振摇，沿管壁加1ml浓H2SO4，观察两界面处的颜色。

（2）AlCl3纸斑反应

取两个样品溶液在滤纸上各滴一个点，干燥后置紫外灯下观察荧光。然后在原斑点上喷AlCl3，干燥后重新置紫外光灯下观察。

5、糖的检识（径向纸色谱）

展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5），上层

显色剂：邻苯二甲酸-苯胺试剂（95℃烘干）

样品：水解浓缩液（自制）

对照品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液（实验室提供）

结果：径向展开，观察对照样品斑点及对照品斑点位置并计算R f值。

五、思考题

1、据黄酮类化合物的性质，再设计一种提取芦丁的方法。

2、怎样证明芦丁分子中只含有一分子葡萄糖和一分子鼠李糖？

3、如何确定芦丁结构中的糖连在槲皮素的3-OH上？