流式细胞术原理及应用
流式细胞术原理及应用
• AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DNA呈黄绿色荧光， RNA呈橙黄色荧光，可进行DNA/RNA双参数分析。
三、如何设计流式实验
准备工作： •确定实验要检测的marker •选择合适的荧光素标记的抗体 •选择合适的同型对照抗体
直方图（Distribution Histogram） 散点图（Dot Plot）
•横坐标：道数
•横坐标：某细胞参数
•纵坐标：细胞数
相对含量
•纵坐标：该细胞另一
参数含量
等高线图（Contour Plot）
细胞分选系统
• 电荷式分选 超声振动器(15-100kHz) 液流充电系统 高压偏转板 收集装置(流式管、离心 管、培养板、载波片等)
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2019/4/27
D、 单标对照 Single Staining Control •什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 •为什么要进行补偿调节？
FITC PE
laser
PC5
400
500
600
700
665
520 575
补偿调节方法：
FL-2(PE)
FL-2(-)
FL-1(FITC)
MACS ®技术：Magetic Activated Cell Sorting 免疫学+细胞生物学+磁力学
二、荧光素
•荧光的概念：
＜
激发波长 Excitation wavelength
发射波长(荧光波长) Emission wavelength
•激发光谱：特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光 •发射光谱：某一波长激发光引起荧光素发射的荧光
流式细胞术原理及应用
流式细胞术原理及应用
流式细胞术是通过一种名为流式细胞仪的仪器完成的，它能够以非常
高的精确度进行分析和检测。
流式细胞仪通过一根轴，从这个轴上有三根
弹性管，细胞进行注射，从而使细胞在管中行进，细胞同时也受到外界信
号的影响，这种信号可以来自磁场、电场或光场。
当细胞运行到仪器的另
一端时，它们会被照亮，通过一台摄像机可以拍摄到高清晰度的照片，然
后在计算机上进行分析处理。
流式细胞术广泛应用于早筛检、医学诊断、药物发现、药理学实验和
抗生素耐药性研究等方面，它能够更加精确、快速地进行细胞分析。
此外，流式细胞术也可以用于分析抗原抗体，免疫细胞介导的反应，以及细胞因
子如细胞因子和表面受体等的表达情况。
这种技术还可以用来监测血液中细胞水平的变化，如血小板、红细胞、白细胞等。
流式细胞术分析的工作原理及应用
流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理，可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中，并通过雷射束（Laser Beam）对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时，会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号，从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中，细胞通常会被标记上特定的荧光染料，以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的，也可以是多重的，用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时，还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释，以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用，可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测，可以检测特定细胞亚群的存在，并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性，进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外，流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞，从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中，可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记，可以确定它们的种类、数量和活性，从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
流式细胞术简介及应用进展课件
流式细胞术简介及应用进展
15
▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
流式细胞术简介及应用进展
5
BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
流式细胞术简介及应用进展
6
Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
流式细胞术简介及应用进展
11
BD FACSAria
BD FACSCount
CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
流式细胞术简介及应用进展
12
BD FACSCanto 2L 6C
流式细胞术简介及应用进展
13
BD FACS Calibur 1L 4C
流式细胞术简介及应用进展
14
三、流式细胞术应用的新进展
流式细胞术简介及应用进展
17
2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的生物技术，它通过将单个细胞悬浮在溶液中，利用激光器照射并检测细胞表面或内部的荧光标记物，实现对细胞的定量和质量分析。
流式细胞术具有高通量、高准确性和高灵敏度的特点，被广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、DNA含量测定、蛋白质定量、染色体分析、细胞凋亡测定等领域。
本文将对流式细胞术的原理和应用进行详细介绍。
一、流式细胞术的原理1. 细胞悬浮流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮在生理盐水或缓冲液中，以确保细胞处在单个状态，方便后续的激光检测。
2. 细胞标记细胞通常会被标记上与特定蛋白或分子结合的荧光标记物，通过特异性和高亲和力结合到细胞表面或内部的特定结构上。
这些标记物可以是荧光染料、荧光免疫球蛋白（Fluorescent-labeled antibodies）等。
3. 激光照射悬浮细胞通过流式细胞仪中的微流道单个流经，在通过激光照射后，激光与标记物产生光散射或荧光发射。
4. 光散射和荧光检测流式细胞仪通过多个检测器检测光散射和荧光发射强度，这些数据被传输到计算机中进行分析和图形呈现。
5. 数据分析通过计算机软件对检测到的数据进行图形处理和数据分析，包括各种细胞表型的区分、细胞计数、蛋白质表达水平、细胞周期分析等。
二、流式细胞术的应用1. 细胞表型分析流式细胞术可以用来分析细胞的表面标记物和内部标记物，比如CD标记、HLA标记、细胞凋亡标记等，帮助研究者深入了解细胞的功能和特性。
2. 细胞分选基于细胞表面标记物的差异，流式细胞术结合细胞分选仪可以实现对不同亚群细胞的快速纯化和分离，广泛应用于免疫学、干细胞研究等领域。
3. DNA含量测定通过DNA特异性荧光染料，流式细胞术可以对细胞的DNA含量进行测定，帮助研究细胞周期的变化、细胞增殖速率的测定等。
4. 蛋白质定量利用荧光标记的免疫球蛋白，流式细胞术可以对细胞中蛋白质的表达水平进行定量分析，比如研究细胞信号通路的活性等。
流式细胞术的原理及应用
流式细胞术的原理及应用前言流式细胞术（Flow Cytometry）是一项基于光学技术的分析和分类细胞及其组分的方法。
通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪，实现细胞的快速高通量检测和分析。
流式细胞术在生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域得到广泛应用。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其主要应用。
1. 原理1.1 细胞悬浮液的注射流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮液注入流式细胞仪。
悬浮液中的细胞会依次通过一个细胞注射口，形成细胞流。
1.2 通过激光激发荧光信号流式细胞仪利用激光束激发细胞或标记物的荧光信号。
细胞通常被染色或标记以便准确识别和分析细胞特定的特征。
1.3 接收荧光信号经过激发后，流式细胞仪会收集荧光信号，并通过各种光学和电子元件将其转化为电信号。
1.4 数据分析与可视化流式细胞仪将收集到的数据传输到计算机进行分析和可视化。
根据不同的荧光信号特性，可以得到细胞的表型、数量、活性等信息。
2. 应用流式细胞术在许多领域有着广泛的应用，在以下几个方面得到了突出的成果和应用：2.1 免疫学流式细胞术在免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以对免疫细胞进行表型和功能分析，了解免疫细胞的分布、表达特征、活性等信息，为研究免疫系统的机制提供了强有力的工具。
2.2 癌症研究流式细胞术在癌症研究中广泛应用。
通过流式细胞术，可以对癌细胞进行检测、鉴定和分析，了解癌细胞的异质性、增殖速率、转移能力等特征，为癌症的诊断和治疗提供重要信息。
2.3 微生物学研究流式细胞术在微生物学研究中起到关键作用。
通过流式细胞术，可以快速准确地对微生物进行定量分析和分型鉴定，如对细菌、真菌、病毒的检测和鉴别。
2.4 细胞工程与干细胞研究流式细胞术在细胞工程领域和干细胞研究中有着广泛的应用。
可以通过流式细胞术对干细胞进行分选、分析和富集，并对细胞工程的效果进行评估和监测。
2.5 遗传学研究流式细胞术在遗传学研究中也发挥着重要作用。
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①相同种属来源
②相同免疫球蛋白及亚型
③相同荧光素标记 ④相同剂量和浓度 ⑤但由未免疫动物血清纯化而来 •用此消除由于抗体非特异性结合到细胞表面Fc受体而产 生的背景染色
C、阳性对照 Positive Control • 设置阳性对照是为了检测荧光抗体是否有效，并不是每次分析时都 必须设置： 使用新的荧光素抗体时； 使用存储时间较长的荧光素抗体时。
激光光源与光束成形系统
1.氩离子气体激光器，22×66um 2.固体激光器 405nm, 488nm,561nm,635nm
光学系统
透镜、滤光片、小孔； LP：long-pass filter BP：band-pass filter
460 500 540
SP：short-pass filter
LP 500
22.5 hours
3）流式试验对照设置 • A、空白对照 Negative Control 细胞内物质自身也发出荧光，能被FCM灵敏的检测到，这种未染 色的细胞自身发出的一些荧光称为自发荧光。 设置空白对照（未染色的细胞），用以区分细胞的自发荧光和特 异性荧光，避免假阳性的结果。
001
001
SP 500
BP500/50
信号检测与分析系统
物理参数 •FSC：前向角散色光， 代表细胞大小 •SSC：侧向角散色光，代表细胞颗粒度
• 实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的细 胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
粒细胞
单核细胞
淋巴细胞
红细胞、死细胞和碎片
• 阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信 号，所以必须设置阈值，排除杂质、细胞碎片或体积较小的 死细胞。 • FSC反映细胞体积的大小，FCM应用时常选取FSC设定阈值。
•线性测量：DNA含量、RNA含量、总蛋白 含量 •对数测量：细胞膜表面抗原检测
直方图（Distribution Histogram） 散点图（Dot Plot） •横坐标：某细胞参数 •横坐标：道数 相对含量 •纵坐标：细胞数 •纵坐标：该细胞另一 参数含量
等高线图（Contour Plot）
细胞分选系统
• 细胞周期分析核酸染料 细胞膜非通透性染料：PI(碘化丙啶)、EB(溴化乙啶)，不 能进入完整细胞膜，标记时需要通过固定等方法增加细 胞膜的通透性。 细胞膜通透性染料：Hoechst、DPAI等能染活细胞的 DNA，但需紫外激光激发。 • PI标记法检测细胞周期 需要乙醇固定增加细胞膜的通透性； 需要加RNase，去除RNA对DNA的干扰。
002
• 流式结果中荧光强弱是一个相对值，光 电倍增管电压越大，电子信号越强；电 压越小，信号越弱。 • 通过调节电压，使阴性对照管的荧光强 度处于阴性的位置，实验组的荧光值都 是相对对照组。
B、同型对照 Isotype Control •同型对照抗体：与实验染色的单克隆抗体特异性无关的 免疫球蛋白亚型 （Fc段相同，F（ab’）2段不同） •与染色的单克隆抗体：
•分析细胞活性，细胞凋亡，和细胞
周期； •研究细胞的分化过程； •研究细胞增殖； •。。。
离成单细胞后）；
•肿瘤细胞系表型分析； •细胞活性的检测； •。。。
在高通量检测和新药研发中的应用： •细胞功能变化的研究； •细胞周期和活性； •细胞凋亡； •细胞增殖； •新药研发； •培养基研发； •。。。
B、根据抗原表达强弱合理分配荧光素
• 荧光素的强度： 染色指数 Stain Index
Stain Index = D/W CD4
• 高表达的抗原可用不太“亮”的染料，更“亮”的荧光素分配给表 达低的抗原： CD4-FITC、CD25-APC、FoxP3-PE
FSC
CD4 FITC
Foxp3 PE
海洋生物学 •富集和分析细菌，藻类，浮游植物 等 微生物学 •细菌和酵母检测； •荧光蛋白检测。 生物燃料 •Bodipy® 和/或 Nile Red中脂类的 定量 •藻类，蓝藻细菌，酵母和细菌等生 物的富集
四、常见流式细胞术应用
4.1 细胞周期检测 • 处于不同细胞周期的细胞DNA含量不 同，G0/G1期细胞含有二倍体量的DNA ，G2/M期细胞含有四倍体量的DNA， 而S期细胞DNA含量处于二倍体和四倍 体量之间。 • DNA荧光染料能与DNA结合，DNA含 量的多少与荧光染料的结合量成正比 ，荧光强度反应了DNA吸收荧光分子 的多少。通过流式检测就能反映细胞 内DNA的含量，区分细胞周期的G0/G1 期、S期和G2/M期细胞比例。
常用荧光素
常用荧光染料
• PI（碘化丙啶 535, 623） 可选择性的插入核酸双螺旋碱基对中。常用于 DNA分析，需要用RNase处理细胞排除RNA对DNA荧光定量的影响；PI 不能透过活细胞膜，常用于鉴定死细胞。 • 7-AAD（7-氨基放线菌素D 545, 647 ） 以插入的方式与DNA链的G-C碱基 对结合，不能透过活细胞膜，常用于鉴定死细胞。 • DAPI（4,4,6-二脒基二苯基吲哚 358, 456） 可以非嵌入方式与DNA链上的 A-T碱基对特异性结合。变异系数明显小于其他染料，一种理想的DNA定 量染料。 • Hoechst（343, 450）常见为Hoechst33342和Hoechst33258，非嵌入的方式 与DNA链上的A-T碱基对结合。能对活细胞染色，用于活细胞DNA定量 分析，如精子分选；还用于侧群细胞的分选。 • PY（派若宁 560, 573） RNA染料，能进入活细胞。 • AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DNA呈黄绿色荧光， RNA呈橙黄色荧光，可进行DNA/RNA双参数分析。
在肿瘤研究中的应用： •细胞凋亡的检测； •细胞周期分析； •细胞增殖研究； •荧光蛋白分析； •肿瘤干细胞的鉴定和功能分析； •循环肿瘤细胞的鉴定和功能分析； •实体瘤细胞的检测分析（肿瘤组织解
在细胞生物学和分子生物学研究中 的应用： •检测细胞转染效率； •检测转导效率； •分析细胞中荧光蛋白的表达； •分析蛋白—蛋白之间的相互作用 （FRET）
FL2-no stain
FL1-FITC stain
FL1-FITC stain
FL1-FITC stain
准确补偿的重要性
补偿调节要合适
未补偿 正确补偿
FITC-PE补偿太大
PE-FITC补偿太大
举例：双染实验
• 使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同 型对照抗体分别染色 • n色分析就要制备n 个补偿对照管
• 细胞因子分泌细胞研究
• 全血细胞研究 • 凋亡检测
• 不同类型的神经细胞的鉴定和功
能研究； • 星形胶质细胞和胶质细胞的鉴定
• 细胞增殖检测
• 干细胞向免疫细胞分化的研究 • 转染荧光蛋白细胞系研究 • 稀有细胞检测 • 。。。
和功能研究；
• 检测细胞活性，细胞凋亡和细胞 周期； • 神经细胞ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ育过程研究 • 干细胞向神经细胞分化研究 • 。。。
发射波长(荧光波长) Emission wavelength
＜
•激发光谱：特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光 •发射光谱：某一波长激发光引起荧光素发射的荧光 • 荧光素（FITC/PE/PerCP/APC等) 抗体偶联荧光素； 分子探针结合荧光素Annexin V-FITC； • 荧光染料/荧光化合物 PI、7-AAD等插入核酸链中； CFSE和蛋白质共价结合； – 荧光蛋白-如GFP、RFP、YFP、CFP、mCherry、DsRed等，自身发荧 光。
什么样的补偿最合适？
• 单染管的阴性群体和阳性群体在所需调节通道的荧光Median值相等时 为最合适的补偿。
Uncompensated
PE-Medianneg < PE-Medianpos
Compensated
PE-Medianneg= PE-Medianpos
Overcompensated
PE-Medianneg > PE-Medianpos
表面受体 黏附因子 胞内抗原
医学应用
HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病
科研应用
在免疫学研究中的应用: • 鉴定免疫细胞类型 • 抗原特异性T细胞研究 在神经生物学研究中的应用： • 神经干细胞和神经祖细胞的特性 研究；
SSC
SSC
CD25 APC
C、选择光谱重叠小的染料
• 尽量选择光谱重叠小的荧光素，如FITC/PE-Cy7； • 选择不同激光激发的荧光素，如FITC/APC，PE/APC；
D、尽量避免偶联染料使用带来的假阳性
CD8 PE-Cy7 CD3 PE-Cy5 样本曝光时间
0 hour
PE 2 hours
• 设置阳性对照的方法： 用肯定表达有该抗原的细胞来检测； 已经证明有效的、偶联其他荧光素的该抗原的抗体。
D、 单标对照 Single Staining Control
•什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 •为什么要进行补偿调节？
FITC PE
laser
PC5
400
500 520 575
600
流式细胞术原理及应用
一、什么是流式细胞术？ 流式细胞仪的构造 二、怎样设计流式实验？ 三、流式实验中涉及到的关键步骤 四、常见流式细胞术应用
一、流式细胞术基本概念
• 流式细胞术（Flow Cytometry）是对于处在快速直线 流动中的细胞和生物颗粒进行多参数、快速的定量分 析和分选技术. • 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合 成微球等。 • 对生物颗粒的物理参数及生物学特性进行定性和定量 分析。