皮质醇(cortisol)作业指导书
血浆皮质醇节律测定方法及注意事项
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牛皮质醇(Cortisol)说明书
牛皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中皮质醇(Cortisol)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛皮质醇（Cortisol）水平。
用纯化的牛皮质醇（Cortisol）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入皮质醇（Cortisol），再与HRP标记的皮质醇（Cortisol）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛皮质醇（Cortisol）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
小鼠皮质醇(Cortisol)ELISA检测试剂盒应用方法
小鼠皮质醇（Cortisol）ELISA检测试剂盒应用方法小鼠皮质醇（Cortisol）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被皮质醇（Cortisol）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
皮质醇(Cortisol)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求豪迈
皮质醇（Cortisol）测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中皮质醇（Cortisol）的含量。
1.1型号/包装规格
规格A：100人份/盒
规格B：100人份/盒
1.2主要组成成分
定标液和质控品的浓度具有批差异性，详见标签。
2.1 外观
试剂盒中的组分应澄清，应无沉淀和絮状物。
磁分离试剂摇匀后，应为均匀悬浊液，无明显凝集。
2.2 空白限
应不大于1ng/ml。
2.3 准确度
使用纯品作回收实验，其回收率应在(85%～115%)范围内。
2.4 线性
在[1,60]ng/ml测量范围内，剂量-反应曲线线性相关系数R≥0.9900。
2.5 重复性
用不同浓度的两个样本进行检测，各重复检测10次，其变异系数CV应不大于10%。
2.6 批间差
用三个批号试剂盒检测同一份样本，则三批试剂盒之间的批间变异系数CV 应不大于15%。
2.7 特异性
用测定试剂盒测定相应浓度的交叉反应物质，应满足下表要求：
2.8溯源性
根据GB/T 21415-2008及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至企业内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。
2.9 稳定性
试剂盒在规定的2℃～8℃下保存，有效期为12个月。
取到效期后的产品进行检测，结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.7项的要求。
罗氏中文说明书：Cortisol 11875116 122 V14
11875116 122 100测试主要用途用于体外定量检测人血清、血浆、尿液和唾液中皮质醇。
皮质醇检测用于鉴别和治疗肾上腺功能失调。
Elecsys和cobas e免疫分析仪的检测原理是电化学发光免疫法（ECLIA）。
概述皮质醇（氢化可的松）是机体最主要的糖皮质激素，对维持机体的多项生理机能有重要作用。
与其它糖皮质激素类似，皮质醇由共同的胆固醇前体在肾上腺皮质束状带合成。
血循环中约有90%的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（CBG）和白蛋白结合后进行运输。
仅有少量的游离皮质醇与其受体发生反应。
1皮质醇最重要的生理作用是提高血糖水平（提高糖异生和糖分解）、抗炎和免疫抑制反应。
皮质醇由肾上腺合成和分泌并受下丘脑-垂体-肾上腺皮质-轴的负反馈调节。
如果血中的皮质醇浓度减低，下丘脑则分泌促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）。
CRH能促进垂体释放促肾上腺皮质激素（ACTH）。
ACTH能促进肾上腺合成和分泌皮质醇。
皮质醇本身对垂体和下丘脑起负反馈作用。
此外压力能够促进皮质醇的分泌。
1血清皮质醇的浓度具有昼夜节律性变化。
1通常最高峰值出现在清晨（700nmol/L或25.4mg/dL），随后逐渐降低，到夜间可降至峰值浓度的一半左右。
因此在解释结果时，明确采血时间是很重要的。
检测患者血循环中皮质醇的含量可用于诊断肾上腺、垂体和下丘脑的机能是否正常。
2，3因此检测血清皮质醇的浓度可用监测多种疾病，如浓度明显增高的库欣氏综合征4，5或浓度明显降低的艾迪生病。
同时也可用于库欣氏综合征使用地塞米松抑制治疗或艾迪生病使用激素替代治疗的疗效监测。
库欣氏综合征实验室诊断的另一选择是检测24小时尿液中的皮质醇浓度，因为尿液中排泄的皮质醇不受昼夜节律性分泌的影响。
6这种方法能够准确的区分健康人与库欣氏综合征患者。
尿液中排泄的皮质醇均未与转运蛋白结合，因此被称为尿游离皮质醇（UFC）。
通常尿游离皮质醇与血中具有生物活性的游离皮质醇具有一定的比例关系。
兔子皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒说明书
兔子皮质醇（Cortisol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定兔子血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇（Cortisol）含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇（Cortisol）抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇（Cortisol）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180ng/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成180ng/ml，90ng/ml，45ng/ml，22.5ng/ml，11.25ng/ml，5.63ng/ml，2.82ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制90ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）180ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml。
4.检测稀释液A：1×10ml。
5.检测稀释液B：1×10ml。
6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
酶联免疫吸附法皮质醇浓度检测试剂盒说明书
EK8100-01Cortisol Competitive ELISA Kit检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Catalog NumberEK8100-48EK8100-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的皮质醇(Cortisol)浓度。
本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。
一、产品介绍1.背景介绍皮质醇，也称为醋酸氢化可的松或化合物F，是糖皮质激素中的一种类固醇激素。
在人类中，它由肾上腺中的肾上腺皮质束状带产生，在压力和低血糖时释放，可作为压力的一个生物标志物。
皮质醇的产量与ACTH依赖的昼夜节律相关，在早晨达到峰值，随后逐渐降低。
皮质醇在很多基质中可被检测到，如血液、粪便、尿液和唾液。
血清中90-95%的皮质醇与蛋白结合，包括皮质类固醇结合球蛋白和血清白蛋白。
皮质醇主要参与代谢和免疫。
在代谢方面，它可促进糖异生、肝糖原沉积和降低葡萄糖利用率。
在免疫方面，作为重要的抗炎因子，在过敏、免疫抑制和疾病抵抗中发挥重要作用。
异常的皮质醇水平与许多状况有关，包括前列腺癌、抑郁症和精神分裂症。
身体组织中皮质醇过高是库欣综合征的诱因。
2.检测原理本试剂盒采用固相竞争酶联免疫吸附检测技术。
兔抗小鼠抗体预包被在高亲和力的酶标板上。
皮质醇特异性的单克隆抗体加入至孔中，经过孵育，与固相抗体结合。
洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的皮质醇和未标记的皮质醇或样本，竞争结合单克隆抗体上有限的结合位点。
在洗涤去除未结合的物质后，加入显色底物，颜色反应的深浅与皮质醇的浓度成反比。
加入终止液终止反应，在450nm波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。
本试剂盒已验证人、小鼠和大鼠血清样本，但其它物种的皮质醇预计也可被检测。
3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。
2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。
3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。
Cortisol中文说明书
用免疫学方法定量测定人血清或血浆中皮质醇（ｃｏｒｔｉｓｏｌ）的含量。电化学发光免疫测 · Ｅｌｅｃｓｙｓ 系统清洗液支架（Ａｄａｐｔｅｒ ｆｏｒ ＳｙｓＣｌｅａｎ） ）货号１１９３３１５９
定试剂，适用于罗氏Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、２０１０和Ｅ１７０（Ｅｌｅｃｓｙｓ模块）免疫测定分析仪。 · Ｅｌｅｃｓｙｓ １０１０反应杯（Ａｓｓａｙ Ｃｕｐ） 货号１１７０６８２９
与其它糖皮质类固醇激素一样，皮质醇由共同前体胆固醇在肾上腺皮质区合成而来。 在外周血中，９０％的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（ＣＢＧ）以及白蛋白结合后进行 运输。 皮质醇最重要的的生理机能是升高血糖，抗炎和免疫抑制作用。 皮质醇的合成和分泌受下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴的负反馈机制的调节。当皮质 醇水平下降时，下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ），使垂体分泌促肾 上腺皮质激素（ＡＣＴＨ），并由ＡＣＴＨ刺激肾上腺合成并分泌皮质醇。皮质醇本身对垂
Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０／２０１０分析仪需要 · Ｅｌｅｃｓｙｓ系统缓冲液（ＰｒｏＣｅｌｌ）货号１１６６２９８８
机器自动稀释，机器会自动计算结果。 正常参考值：
· Ｅｌｅｃｓｙｓ 测量池清洗液（ＣｌｅａｎＣｅｌｌ）货号１１６６２９７０
上午时间 ７－１０ ａ．ｍ． ： １７１－５３６ ｎｍｏｌ／ｌ （６．２－１９．４μｇ／ｄｌ） （ｎ＝１４４） 下午时间 ４－８ ｐ．ｍ． ： ６４－３４０ ｎｍｏｌ／ｌ （２．３－１２．３μｇ／ｄｌ） （ｎ＝１３７） 如有必要，各实验室应自己测定一个正常值范围。
采取校正措施。 计算： 对每一个标本，仪器会自动计算皮质醇含量，单位是ｎｍｏｌ／ｌ，µg／ｄｌ或µg／ｌ。换算 方法 nmol/l x 0.03625 = µg/dl (x 0.3625 = µg/l)
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Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) )货号03027651
各种分析仪均适用的材料
Elecsys标本通用稀释液货号11732277
Elecsys系统清洗液（SysClean）货号11298500
4.仪器和校准
1.分析原理
采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步：20μl标本与生物素化的抗皮质醇抗体和钌（Ru）标记的皮质醇衍生物混匀，分别形成复合物，数量取决于标本中待测物的浓度。生物素化的抗皮质醇抗体一部分与标本中待测物结合，另一部分与Ru标记的皮质醇衍生物结合。
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒。形成的复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。
Elecsys2010、E170和cobas e 分析仪：
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
各种分析仪均适用的情况：
·根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。
5.操作步骤（以E 170为例）
5.1校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。
校准品：
Elecsys皮质醇定标液（Cortisol CalSet）货号11875124
质控品：
Elecsys通用质控品（PreciControl Universal）1和2货号11731416
其他所需材料：
Elecsys2010、cobas e411分析仪需要
Elecsys系统缓冲液（ProCell）货号11662988
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准：
每批皮质醇试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用ElecsysCortisol CalSet定标液定标。
定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：
R1：生物素化的羊抗皮质醇抗体（灰盖），1瓶，9ml。浓度90ng/ml，MES缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。
R2：Ru(bpy)32＋标记的皮质醇-多肽（黑盖），1瓶，9ml。浓度25ng/ml，达那唑（danazol）20mg/ml，MES缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。
批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。
进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
标本在2－8度可稳定5天，－20度可稳定3个月。只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。
注意：由于皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化，应注明采血时间。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素、EDTA或枸橼酸钠抗凝均可。其中用枸橼酸钠抗凝的血浆，测定结果需+10%。
MODULAR ANALYTICS E170分析仪需要
Elecsys系统缓冲液（ProCell M）货号04880340
Elecsys测量池清洗液（CleanCell M）货号04880293
Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141
Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)货号12102137
在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
Elecsys测量池清洗液（Cleaห้องสมุดไป่ตู้Cell）货号11662970
Elecsys添加剂液（SysWash）货号11930346
Elecsys系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）货号11933159
Elecsys 2010反应杯（Assay Cup)货号11706802
Elecsys 2010吸样头（Assay Tip)货号11706799
6.质量控制
Elecsys通用质控品（PreciControl Universal）1和2以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
7.计算方法
对每一个标本，仪器会自动计算皮质醇含量，单位是nmol/l，μg/dl或μg/l。换算方法