31菊花组织培养
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31菊花的组织培养-海南省华东师范大学第二附属中学乐东黄流中学人教版高中生物选修一课件(共22张PPT)
消毒
药剂的消毒效果
植物材料的耐受能力
(4)培养基中生长素用量和细胞分裂素用量的比例会影 响细胞的分化方向，生长素用量与细胞分裂素用量的比 值在________(填图中序号)过程中最低。(5)若干天后发 现有的装置中长出幼苗，有的装置中培养失败还长出很 多杂菌②菌落，试分析可能的原因：
_________________________________________________ ___________________________________。
用培养基的主要成分包括大量元素、微量元素、 ___植__物___细__胞以的及全植能物性激素，并常添加_____作为凝固剂。
(3)图中①表示__________过_____有处机理物，此时既要考虑_____________琼__脂_，
又要考虑______________________，然后才能接种培养。 脱分化
D.植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
【自主学习2】
思考1：植物激素中生长素和细胞分裂素的使用顺
序不同，对使用实顺验序结果有何影响？ 实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂但不 分化
先细胞分裂素， 后生长素
细胞既分裂 也分化
同时使用
分化频率提高
【自主学习2】
思考2：以下培养基出现的现象反应了什么问题？
思考4：在选取菊花茎段时，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？ 细胞细胞分化程度低，细胞分裂能力强，容 易形成愈伤组织
【学以致用】
1.某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染， 为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示 外其他均相同。下列各图表示实验结果，据图可得 出的初步结论是( )
B
课件3：3.1菊花的组织培养
6、下列关于植物组织培养中灭菌操作，错误的是 (B) A．外植体可以用酒精灭菌 B．镊子等器械需酒精灭菌 C．操作前手需酒精消毒 D．培养基需高压蒸汽灭菌
谢谢观看！
成熟组织细胞。
(3)差异：一般细胞分化程度越高，全能性越小； 细胞分化程度越低，细胞全能性越高，如受精卵> 卵细胞>体细胞。 (4)表现全能性的条件： ①离体条件； ②无菌操作(防止杂菌污染)；
③适宜物质的诱导和调节(激素主要是生长素、细 胞分裂素等)； ④种类齐全、比例适合的营养物质； ⑤温度、酸碱度、光照等条件的控制。
(2)有机营养 ①氨基酸：如甘氨酸、丝氨酸及酪蛋白水解的氨基 酸，作为主要有机氮源。 ②维生素类：常用维生素C、维生素B1、维生素B6、 维生素H等，作为早期的生长因子。 ③琼脂除固化培养物外，还有吸附能力。
(3)植物生长调节物质 植物生长调节物质起关键作用的是生长素、细胞 分裂素；二者的比例与使用先后顺序均影响细胞 的分裂和分化。 (4)pH、温度、光照 不同的植物对各种条件的要求往往不同。菊花的 细胞培养适宜条件：pH在5.8左右，温度控制在 18～22℃，每日用日光灯照射12h。
2．实验操作中的注意事项 (1)防止外植体带菌。 ①选择好外植体采集时期和采集部位。外植体采集 以春秋为宜，优先选择地上部分作为移植体，阴雨 天勿采，晴天下午采，采前喷杀虫剂、杀菌剂或套 塑料袋。 ②在室内或无菌条件下进行预培养。 ③外植体严格消毒。做消毒效果实验，多次消毒和 交替消毒。
(2)保证培养基及接种器具彻底灭菌。 ①分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口。 ②检查封口膜是否有破损。 ③扎瓶口要位置适当、松紧适宜。 ④保证灭菌时间和高压锅内温度。 ⑤接种工具用前彻底灭菌。 ⑥工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌。
3-1菊花的组织培养2
1. 细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较 明显，一般接种后1－2天即能发现。主 要是大肠杆菌和链球菌
2. 真菌污染： 菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显， 伴有不同颜色的孢子接种后3－10天才 能发现。主要是霉菌污染。
正常苗
污染苗
三、污染途径
1.外植体带菌
2.培养基及接种 器具灭菌不彻底
3.接种操作时带入
D
【例5】植物组织培养是指 A．离体的植物器官或细胞培育成 愈伤组织 B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞 培养成完整植物体 D．愈伤组织形成高度液泡化组织
C
5.接种工具用前彻底灭菌
6.工作服、口罩、帽子等布质品定期 进行湿热灭菌
（四）保证环境的清洁
1.污染瓶经高压灭菌后再清洁
2.接种环境定期熏蒸消毒、紫外灯照射 或用臭氧灭菌和消毒
3. 定期对培养室消毒、防止高温
植物细胞培养 离 体 组 织 或 细 胞
植物组织培养过程
生长素<细 胞分裂素
愈 脱分化 芽 伤 再分化 生长素≈ 组 根 细胞分 织 生长素>细
制备MS固 体培养基
外植体 消毒
接种
培养
栽培 移栽
【一】制备MS固体培养基
1、配制各种母液：将各种成分按配 方比例配制成的浓缩液。使用时根 据母液的浓缩倍数，计算用量，并 加蒸馏水稀释。
2、配制培养基：
① 配制培养液：用蒸馏水定容 ② 调PH ③培养基的分装 在菊花组织培养中，可以不添加 植物激素，原因是菊花茎段组织 培养比较容易。 3、灭菌：采取的灭菌方法是高压 蒸汽灭菌。
（一）防止外植体带菌 2. 室内或无菌条件下进行预培养
（一）防止外植体带菌 3. 外植体消毒
（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌
2. 真菌污染： 菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显， 伴有不同颜色的孢子接种后3－10天才 能发现。主要是霉菌污染。
正常苗
污染苗
三、污染途径
1.外植体带菌
2.培养基及接种 器具灭菌不彻底
3.接种操作时带入
D
【例5】植物组织培养是指 A．离体的植物器官或细胞培育成 愈伤组织 B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞 培养成完整植物体 D．愈伤组织形成高度液泡化组织
C
5.接种工具用前彻底灭菌
6.工作服、口罩、帽子等布质品定期 进行湿热灭菌
（四）保证环境的清洁
1.污染瓶经高压灭菌后再清洁
2.接种环境定期熏蒸消毒、紫外灯照射 或用臭氧灭菌和消毒
3. 定期对培养室消毒、防止高温
植物细胞培养 离 体 组 织 或 细 胞
植物组织培养过程
生长素<细 胞分裂素
愈 脱分化 芽 伤 再分化 生长素≈ 组 根 细胞分 织 生长素>细
制备MS固 体培养基
外植体 消毒
接种
培养
栽培 移栽
【一】制备MS固体培养基
1、配制各种母液：将各种成分按配 方比例配制成的浓缩液。使用时根 据母液的浓缩倍数，计算用量，并 加蒸馏水稀释。
2、配制培养基：
① 配制培养液：用蒸馏水定容 ② 调PH ③培养基的分装 在菊花组织培养中，可以不添加 植物激素，原因是菊花茎段组织 培养比较容易。 3、灭菌：采取的灭菌方法是高压 蒸汽灭菌。
（一）防止外植体带菌 2. 室内或无菌条件下进行预培养
（一）防止外植体带菌 3. 外植体消毒
（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌
【高中生物】高中生物知识点：菊花的组织培养
【高中生物】高中生物知识点：菊花的组织培养菊花的组织培养：1.植物组织培养(1)原理：植物细胞具有全能性。
（2）方法：愈伤组织培养（固体培养基）和细胞悬浮培养（液体培养基）。
(3)基本过程① A代表一个孤立的组织、器官或细胞。
植物细胞具有全能性是它能被培养成D细胞的根本原因。
②b表示愈伤组织，它与a相比分化程度低，全能性高。
③ 如果a是花药，D是单倍体植株。
如果用秋水仙碱处理，可以获得染色体加倍的植株(4)操作流程MS固体培养基的制备：① 各种母液的配制→ 培养基的制备→ 绝育↓②培养基由大量元素、微量元素、有机成分组成③ 在菊花的组织培养基中，植物激素不可添加，因为它容易在短时间内培养外植体的消毒：用70％的酒精和0.1％的氯化汞溶液对外植体进行消毒↓接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种6-8块外植体。
外植体↓ 接种与细菌接种相似。
操作步骤相同，都需要无菌操作。
培养：接种后的锥形瓶应诙放在无菌箱中进行培养，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照↓移栽：将生根的苗从锥形瓶中移至消过毒的珍珠岩或蛭石中生活一段时间，苗健壮后再移至土中↓栽培2.示例：菊花组织培养（1）菊花的选材：未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
（2）过程：知识点拨：1.影响植物组织培养的因素：①不同植物组织培养的难易程度差别很大。
② 激素调节。
2、肉汤培养基以有机营养为主，ms培养基则需提供大量无机营养。
知识发展：1、植物激素与组织培养生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、去分化和再分化的关键激素。
它们的功能和特点如下：①在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。
② 结果因使用顺序而异，如下所示：使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素它有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞分裂和分化同时使用分化频率增加③用量比例不同，结果也不同（2）在组织培养中，合成激素被用来代替天然激素，因为植物中有相应的酶分解天然激素，但没有相应的酶分解合成激素。
31菊花的组织培养
制芽的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑
制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日 用日光灯照射12h.
20
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂素>
离
生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
31
（四）培养
1、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色.
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
28
29
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种.
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4 块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分 利用培养基中的营养成分和光照条件.
D.愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液 泡化的、成无定形状态的薄壁细胞.
8
人参的愈9 伤组织
菠萝的愈10伤组织
11
12
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日 用日光灯照射12h.
20
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂素>
离
生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
31
（四）培养
1、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色.
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
28
29
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种.
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4 块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分 利用培养基中的营养成分和光照条件.
D.愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液 泡化的、成无定形状态的薄壁细胞.
8
人参的愈9 伤组织
菠萝的愈10伤组织
11
12
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
精选高中生物同步课件：3.1 菊花的组织培养(2)(人教版选修1)
菊花的组织培养
一、植物组织培养的概念
指植物的离体部分（包括任何器官、 组织、细胞或原生质体），在人工控制的 培养基及环境条件（温度及光照）下，得 以生长和分化成完整植株的一种无菌培养 技术。
又称：植物离体培养
植物组织培养原理：
植物细胞的全能性
概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成 完整个体的潜能。
原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有 的全套遗传物质
二、植物组织培养的基本过程
阅读32页解决下列问题：
基因的选择性表达
1. 什么叫分化？其实质是什么? 2. 什么叫脱（去）分化、再分化？ 3. 愈伤组织的细胞有什么特点？ 4. 如何控制细胞的脱分化与去分化？
·
二、植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
3、不同植物激素使用顺序
使用顺序
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
同时使用
细胞既分裂也分化 分化频率提高
4、不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
2019/8/27
最新中小学教学课件
thank
you!
2019/8/27
最新中小学教学课件
结果
促根分化， 抑芽形成
促芽分化， 抑根形成
促进愈伤组织生长
思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？
生长素 / 细胞分裂素
高 利于根和愈伤组织的形成 适中 利于根芽的分化
5、pH、温度、光照（菊花组培）
pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h
一、植物组织培养的概念
指植物的离体部分（包括任何器官、 组织、细胞或原生质体），在人工控制的 培养基及环境条件（温度及光照）下，得 以生长和分化成完整植株的一种无菌培养 技术。
又称：植物离体培养
植物组织培养原理：
植物细胞的全能性
概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成 完整个体的潜能。
原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有 的全套遗传物质
二、植物组织培养的基本过程
阅读32页解决下列问题：
基因的选择性表达
1. 什么叫分化？其实质是什么? 2. 什么叫脱（去）分化、再分化？ 3. 愈伤组织的细胞有什么特点？ 4. 如何控制细胞的脱分化与去分化？
·
二、植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
3、不同植物激素使用顺序
使用顺序
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
同时使用
细胞既分裂也分化 分化频率提高
4、不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
2019/8/27
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2019/8/27
最新中小学教学课件
结果
促根分化， 抑芽形成
促芽分化， 抑根形成
促进愈伤组织生长
思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？
生长素 / 细胞分裂素
高 利于根和愈伤组织的形成 适中 利于根芽的分化
5、pH、温度、光照（菊花组培）
pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h
生物：3.1《菊花的组织培养》
普通高中课程标准人教版 选修一专题三 植物的组织培养技术
课题一
菊花的组织培养
大自然中存在很多有趣的植物无性生殖方式
1902年，德国植物学家预言：植物的体细胞在 一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在的发 育成植株的能力。
1958年，美国科学家斯图 尔德的实验结果引起生物学界 的震动。它表明:已经高度分化 的植物细胞依然具有发育成完 整植株的潜能
课 堂 小 结：
一、基础知识 1、植物组织培养的基本过程 （1）概念：细胞分化、细胞的全能性、脱分化、再分化、愈伤组织、外植体 （2）植物组织培养的基本过程。 2、影响植物组织培养的因素 （1）外植体的选择； （2）培养基； （3）无菌技术操作； （4）其他因素（pH、温度、光照等）。 二、实验操作：1.制备MS固体培养基 2.外植体消毒 3.接种 4.培养 5.移栽 6.栽培 三、结果分析与评价 四、课题延伸
六、实验操作
（二）外植体消毒（菊花茎段：生长旺盛嫩枝）项目 Leabharlann 序材流水料
冲洗
处理方法
处理 时间
1
2
3 4 5 6 7
少许洗衣粉
流水 无菌吸水纸 70% 的酒精 无菌水 无菌吸水纸
软刷轻轻刷洗
冲洗 吸干外植体表面的水分 摇动2～3次 清洗 吸干外植体表面的水分 6～7s 20 min
8
9
0.1% 氯化汞溶液
丛芽培养基上培养 丛状苗
生根培养基上培养：生出根
六、实验操作
（五）移栽（注意试管苗的适应外部环境的过程） 1.打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日； 2.用流水清洗根部的培养基； 3.移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间； 4.幼苗长壮后再移栽到土壤中。
课题一
菊花的组织培养
大自然中存在很多有趣的植物无性生殖方式
1902年，德国植物学家预言：植物的体细胞在 一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在的发 育成植株的能力。
1958年，美国科学家斯图 尔德的实验结果引起生物学界 的震动。它表明:已经高度分化 的植物细胞依然具有发育成完 整植株的潜能
课 堂 小 结：
一、基础知识 1、植物组织培养的基本过程 （1）概念：细胞分化、细胞的全能性、脱分化、再分化、愈伤组织、外植体 （2）植物组织培养的基本过程。 2、影响植物组织培养的因素 （1）外植体的选择； （2）培养基； （3）无菌技术操作； （4）其他因素（pH、温度、光照等）。 二、实验操作：1.制备MS固体培养基 2.外植体消毒 3.接种 4.培养 5.移栽 6.栽培 三、结果分析与评价 四、课题延伸
六、实验操作
（二）外植体消毒（菊花茎段：生长旺盛嫩枝）项目 Leabharlann 序材流水料
冲洗
处理方法
处理 时间
1
2
3 4 5 6 7
少许洗衣粉
流水 无菌吸水纸 70% 的酒精 无菌水 无菌吸水纸
软刷轻轻刷洗
冲洗 吸干外植体表面的水分 摇动2～3次 清洗 吸干外植体表面的水分 6～7s 20 min
8
9
0.1% 氯化汞溶液
丛芽培养基上培养 丛状苗
生根培养基上培养：生出根
六、实验操作
（五）移栽（注意试管苗的适应外部环境的过程） 1.打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日； 2.用流水清洗根部的培养基； 3.移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间； 4.幼苗长壮后再移栽到土壤中。
菊花组织培养操作流程及注意事项
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③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
（三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射20分钟
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养
2、愈伤组织的继代培养
继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养
A. 操作者双手
-----------酒精
B. 外植体
------酒精、次氯酸钠
C. 培养基
-------高压蒸汽灭菌
D. 接种用的解剖刀，镊子等
-----酒精、酒精灯灼烧
E. 接种室
-----------紫外灯
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等
C、有机物、植物激素
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营 养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长 必须的大量元素和微量元素两大类。
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌 （二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
不需要光
需要光
四、实验操作（注意无菌）
制备MS固 体培养基
外植体消毒
不要倒插 接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培养
栽培
移栽
将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活 一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中
植物组织培养过程中，哪些可能带菌？如何灭菌？
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素
生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
（3）植物组织培养 细胞离体
①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他
外界条件
②原理:
细胞的全能性
③相关概念:
外植体：从活植物体上切下进行培养的那部 分细胞、组织或器官
脱分化：
再分化：
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
（三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射20分钟
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养
2、愈伤组织的继代培养
继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养
A. 操作者双手
-----------酒精
B. 外植体
------酒精、次氯酸钠
C. 培养基
-------高压蒸汽灭菌
D. 接种用的解剖刀，镊子等
-----酒精、酒精灯灼烧
E. 接种室
-----------紫外灯
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等
C、有机物、植物激素
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营 养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长 必须的大量元素和微量元素两大类。
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌 （二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
不需要光
需要光
四、实验操作（注意无菌）
制备MS固 体培养基
外植体消毒
不要倒插 接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培养
栽培
移栽
将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活 一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中
植物组织培养过程中，哪些可能带菌？如何灭菌？
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素
生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
（3）植物组织培养 细胞离体
①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他
外界条件
②原理:
细胞的全能性
③相关概念:
外植体：从活植物体上切下进行培养的那部 分细胞、组织或器官
脱分化：
再分化：
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择