一株许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道乳酸菌的分离鉴定及特性分析
发酵肉制品中乳酸菌的分离鉴定及菌种性能的研究
发酵肉制品中乳酸菌的分离鉴定及菌种性能的研究
葛钰瑛;李焕荣;傅力;董圣鹏
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2008(029)012
【摘要】从自然发酵肉制品中分离乳酸菌并对其进行生化试验鉴定,对得到的乳酸菌进行了耐盐、耐亚硝酸盐、产酸能力、生长曲线及抑菌试验.通过分离和鉴定得到5株乳酸菌,3株为乳酸杆菌,2株为乳酸球菌;它们对食盐、亚硝酸盐均具有较好的耐受性.在6%的NaCl、80 kg/mg～150 kg/mgNaNO2溶液中能生长;对蛋白质,脂肪无分解作用.乳酸杆菌和乳酸球菌对大肠杆菌均有抑制作用,且杆菌的抑制作用大于球菌;乳酸杆菌与乳酸球菌的生长曲线和产酸特性不同,杆菌比球菌生长快,pH值下降快,所需的发酵时间比球菌短.5株乳酸菌都可作为肉制品的发酵剂.【总页数】4页(P23-26)
【作者】葛钰瑛;李焕荣;傅力;董圣鹏
【作者单位】新疆农业大学食品科学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学食品科学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学食品科学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学食品科学学院,新疆,乌鲁木齐,830052
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.云南自然发酵酸菜液中乳酸菌的分离鉴定及其发酵性能研究 [J], 奎梦漪;薛桥丽;康娇;胡永金
2.发酵肉制品中乳酸菌分离鉴定技术的研究 [J], 卢士玲;吴桂春;李开雄
3.发酵肉制品中乳酸菌的分离鉴定技术的研究 [J], 卢士玲;吴桂春;李开雄
4.泡菜中乳酸菌优良菌株的分离鉴定及发酵性能的研究 [J], 吴蕊;田洪涛;孙纪录;马晓燕;王佳
5.发酵肉制品中乳酸菌菌种筛选研究 [J], 刘丽莉;杨协力
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
带鱼肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵液抗菌性质研究
带鱼肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵液抗菌性质研究许本宏;林俊芳;叶志伟;郭丽琼;陆雅琴;林金德【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2018(037)002【摘要】从带鱼肠道中分离筛选到1株具有广谱抗菌活性的菌株JFL15,其发酵液对嗜水气单胞菌、美人鱼发光杆菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌、铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、查氏弧菌均有较强抑菌作用.通过形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析以及系统发育进化分析,菌株JFL15与暹罗芽孢杆菌的同源性最高,达98.05%,初步鉴定为暹罗芽孢杆菌.对暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液进行研究发现,暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液对酶、温度、酸碱度和紫外线均不敏感,且发酵产物储存较长时间后仍具有较强抑菌活性.%A strain with broad -spectrum antimicrobial activity,named JFL15,was isolated from the gas-trointestinal tract of hairtail(Trichiurus haumela)in Guangzhou,China,whose fermented liquids showed strong antimicrobial activities against 15 pathogens in aquaculture including Aeromonas hydrophila,Esch-erichia coli,Edw ardsiella tarda,Pseudomonas aeruginosa,Photobacterium damsela,V ibrio alginolytic-us,V.harveyi,V.parahaemolyticus,V.vulnif icus and V.chagasii.The strainJFL15 was identified as Bacillus siamensis base on the morphological,and physiological biochemical characteristics together with similarity analysisof 16S rDNA sequences.The fermentation liquor of strain JFL15 was foundto be stable to enzymatic hydrolysis,high temperature(up to 100 ℃),pHrange from 3 to 9 and ultraviolet radiation, and the antimicrobial activity was maintained in the liquor stored for 28 days at 4 ℃.【总页数】8页(P193-200)【作者】许本宏;林俊芳;叶志伟;郭丽琼;陆雅琴;林金德【作者单位】华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】S917.1【相关文献】1.真菌广谱拮抗菌GQ-17的鉴定、发酵液性质研究及发酵条件优化 [J], 闫建芳;刘秋;赵柏霞;刘志恒;齐小辉;刘长建;周济廷2.侧孢短芽孢杆菌B8发酵液中抑菌物质理化性质研究 [J], 赵秀香;张春波;赵柏霞;李晓菲;吴元华3.一株具有抗菌活性耐盐芽孢杆菌B-11的分离鉴定及发酵工艺优化 [J], 张帅;邱鹏;龙秀锋;侯燕燕;鲁凤娟;张鹤铭;田永强4.解淀粉芽孢杆菌AF1发酵液的抗菌活性与抗菌机理 [J], 杨艳红;余瑛;胡永强;余溪;李青青5.蜡样芽孢杆菌拮抗菌株的筛选鉴定及其发酵液抗菌活性分析 [J], 王洁;龚国利;闵建红;李慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
1株海洋乳酸菌的鉴定及生物学特性的初步研究
1株海洋乳酸菌的鉴定及生物学特性的初步研究赵鸭美;刘林;安静莹;钟敏;胡雪琼;刘颖【摘要】对从南海海域沙虫(Sipunculus nudus)肠道分离到的1株海洋乳酸菌ZH-101,通过形态学及生理生化特性实验,并结合16S rRNA序列同源性分析,将其鉴定为棒状乳杆菌扭曲亚种(Lactobacillus coryniformis subsp,torquens).采用双层牛津杯琼脂扩散法测定其发酵上清液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、单核增生李斯特菌、副溶血性弧菌、黑曲霉6种指示菌的抗菌活性并对该菌做了部分生长特性研究.结果表明,其发酵液对食品中常见的腐败菌、致病菌有良好的抑制作用,该菌株最适生长温度为30℃,最适pH为6.0,培养6h后进入对数期,18h后生长进入稳定期.【期刊名称】《北京联合大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(027)002【总页数】5页(P59-63)【关键词】乳杆菌;分离鉴定;抑菌活性;生物学特性【作者】赵鸭美;刘林;安静莹;钟敏;胡雪琼;刘颖【作者单位】广东海洋大学食品科技学院,广东省水产品加工与安全重点实验室,广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江524088【正文语种】中文【中图分类】Q93-3310 引言乳酸菌作为一种益生菌广泛应用于食品行业中，它能抑制或杀死一些食品腐败菌和致病菌，改善食品风味，调节人体肠道菌群的生态平衡，有利于身体健康［1］。
近几年不断报道，一些乳酸菌在代谢过程中产生一种或多种具有抑菌活性的多肽或前体多肽即细菌素，具有抗菌性强、抑菌谱广、安全无毒等特点，是开发天然食品防腐剂的重点研究方向［2］。
我国南海海域广阔，海洋生物资源丰富、种类繁多，特殊的海洋生存环境使海洋生物具有与陆生生物不同的生理性状，并产生许多结构新颖、作用特殊的生物活性物质，是寻找乳酸菌新种和具有特殊功能的生理活性物质的重大来源［3-5］。
本研究对从南海海滩沙泥中挖出的沙虫(Sipunculus nudus)肠道中分离得到的一株细菌进行多相鉴定，对其发酵液进行了抑菌活性实验，并对它的生物学特性进行了初步研究。
两株海水鱼肠道芽孢杆菌的分离鉴定及特性分析
摘 要：为获 取 具 有 益 生 特 性 的 芽 孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ）应 用 于 养 殖 生 产，从 野 生 蓝 点 马 鲛 （Ｓｃｏｍｂｅｒｏｍｏｒｕｓ ｎｉｐｈｏｎｉｕｓ）和许氏平-（Ｓｅｂａｓｔｅｓｓｃｈｌｅｇｅｌｉｉ）肠道内分离筛选出两株芽孢杆菌，分别命名为 ＹＢ１和 ＹＨ２，其革兰 氏染色均呈阳性，基于形态学观察、生理生化特征分析及 １６ＳｒＤＮＡ序列比对，鉴定 ＹＢ１为蜡样芽胞杆菌 （ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＹＢ１），ＹＨ２为壁芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｍｕｒａｌｉｓＹＨ２）。分析了温度、ｐＨ和 ＮａＣｌ含量（ｗ／ｖ％）对 ＹＢ１和 ＹＨ２生长的影响，选取蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶特性培养基检测了 ＹＢ１和 ＹＨ２的产酶特性，并通过腹 腔注射的方式测定了 ＹＢ１和 ＹＨ２对许氏平-和大菱鲆（Ｓｃｏｐｈｔｈａｌｍｕｓｍａｘｉｍｕｓ）的安全性。结果显示：ＹＢ１适 宜的生长条件为温度 １５～３５℃、ｐＨ５～９、ＮａＣｌ含量 ０～２％，最适生长条件为温度 ３５℃、ｐＨ７、ＮａＣｌ含量 ０； ＹＨ２适宜的生长条件为温度 １５～４５℃、ｐＨ５～９、ＮａＣｌ含量 １％ ～３％，最适生长条件为温度 ３０℃、ｐＨ５、ＮａＣｌ 含量 ２％；ＹＢ１和 ＹＨ２均具有产淀粉酶和蛋白酶的特性；ＹＢ１在浓度≤１×１０８ｃｆｕ·ｍＬ－１时对大菱鲆和许氏平 -均是相对安全的，ＹＨ２在浓度≤１×１０８ｃｆｕ·ｍＬ－１时对大菱鲆是相对安全的。研究表明：ＹＢ１和 ＹＨ２具有 作为有益菌应用于海水鱼养殖的潜力，可作为候选菌株开发为芽孢杆菌微生态制剂。
加了 枯 草 芽 孢 杆 菌 的 饲 料 投 喂 大 黄 鱼 （Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓｃｒｏｃｅａ），提高了大黄鱼的增重率，调 节了鱼体非特异性免疫，减少了疾病的发生。因 此，芽孢杆菌在海水鱼养殖中的应用可促进其产 业的健康和可持续发展［２］。
一株乳酸菌GF103的分离鉴定及体外益生效果评价_董晓丽
9期
董晓丽等： 一株乳酸菌 GF103 的分离鉴定及体外益生效果评价
1833
2 g，乙酸钠 5 g，磷酸氢二钾 2 g，硫酸镁 0． 1 g，硫 酸锰 0． 05 g，吐 温 80 1 mL ，用 去 离 子 水 定 容 至 1 000 mL ，pH 为 6． 4，121 ℃ 灭菌 20 min。
应用琼脂扩散的牛津杯法筛选具有抑菌活力 的乳酸菌。将 肉 汤 培 养 基 中 加 入 琼 脂 后，溶 解 均 匀，高压灭菌，冷却到 50 ℃ 左右，每 20 mL 培养基 加入 20 μL 新鲜培养的指示菌（ 108 CFU / mL ） ，混 匀倒入培养皿冷却。用灭菌的镊子将无菌的牛津 杯轻 轻 的 放 入 培 养 皿 中，在 牛 津 杯 中 分 别 加 入 80 μL 单株 乳 酸 菌 培 养 液，另 一 个 牛 津 杯 中 加 入 80 μL 无菌的 M RS 液体培养基作对照，37 ℃ 培养 24 h。筛选出能够抑制指示菌的乳酸菌培养液，编 号为 GF103。其菌株称为乳酸菌 GF103。 1． 4 菌株的分子生物学鉴定
动物营养学报 2012，24（ 9） ： 1832-1838 Chinese Journal of Animal Nutrition
doi： 10． 3969 / j． issn． 1006-267x． 2012． 09． 030
一株乳酸菌 GF103 的分离鉴定及体外益生效果评价
董晓丽1 张乃锋1 周 盟1，2 屠 焰1 刁其玉1* 聂明非1
1 材料与方法
1． 1 菌株及培养基 菌 株 来 源： 采 集 于 北 京 市 大 兴 种 猪 场 附 近
土壤。 M RS 液 体 培 养 基： 大 豆 蛋 白 胨 10 g，牛 肉 膏
动物肠道乳酸菌的分离鉴定技术研究进展
Ｐｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎｅ
动 物 肠 道 乳 酸 茵 的 分 离 鉴 定 技 术研 究进 展
，陈亚 冰 ， 李 梁 彦 彦 ，兰道 亮 ，林 宝 山 ，黄 侣 键 。
早 应 用 于 微 生 态 制 剂 的 菌 种 。乳 酸 菌 （ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ
１ 乳 酸 菌 的分 离 培 养
目前用 于 动物肠 道 内容物 中乳 酸 菌分 离 的培 养
基不 多 ， 但 用于 乳酸 菌分 离 的培 养 基有 很 多 ， 如番 茄
汁琼 脂培养 基是 一种 传统 的用 于分 离 乳酸 杆 菌 的培 养基 ， 此 种 培养基 由于 含有 一 定 量 的番 茄 汁 ，为 乳
到乳 酸菌 属 的生 化鉴 定 的通 用 方 法 ， 列 举 出 几 种 乳
带来 负 面影 响 。饲 料 中长期使 用抗 生 素 引起 的 环境
污染、 药 物残 留、 抗药性、 内源性 感 染 等一 系列 负 面 效 应给 动物健 康带 来 巨大 的威 胁 ， 所 以加 速 开发 、 推 广 和应用 有机 无公 害 的添加 剂势 在必 行 。微 生 态制
酸菌 分子 生物 学 鉴定 的方 法 ， 为动 物 肠 道 乳 酸 菌 的 分离 鉴定 系统 的建立 提供 了线 索 。
剂 是近 年来 出现 的绿 色 添加 剂 之 一 ， 它 可 以直 接 补 人 外源性 有益 菌 ， 调节 动物 自身微 生 态平 衡 ， 抑 制杀 灭 有害 菌 ， 增 强机 体免疫 力 等功效 ， 其 中乳酸 菌 是最
一株高产酸乳酸菌的分离、鉴定及高密度发酵研究
本 研究 从 ３ ５日龄 健康 仔猪 新 鲜粪 便 中筛 选 分 离 出多株 产酸 菌株 ，经过 一 系列 菌株性 能 的测 定 、
菌体形态观察 、 生理 生 化 鉴 定 后 得 到 一 株 产 酸性 能 优 良的乳 酸菌 Ｒ Ｓ Ｊ 一 ５ 。通过后 续 乳酸 菌高 密度厌
氧 发 酵 研 究 ，发 酵 液 中乳 酸 菌 活 菌 数 达 １ ５ ８
者 将 其应 用 到仔 猪养 殖 中 ， 对仔 猪 的腹 泻 预 防及促 进 生 长 有 良好 的效 果 ， 提高 了仔 猪 的成 活 率 ， 增 加 养 猪 的经 济收 益 。 另外 ， 国外研 究表 明 ， 从 仔 猪粪便 中分 离 得 到 的乳 酸 菌 耐受 性 好 、 抗 逆性 强 ， 抑 菌 效 果 良好 ， 在 仔 猪 腹 泻 防治 、 促 生 长等 益 生 作 用 明显 优 于 其它 菌源 的乳 酸 菌 。 因此 ， 猪 源性 乳 酸菌 具有
１ ． １ ． １ 抑 菌试 验指 示菌
沙 门 氏菌 ， 猪 场分 离 病 原 菌 ， 由广 东 海 纳 川 生 物 科技 股 份有 限公 司分 离 ； 大肠 杆 菌 ｋ ８ ８购 自中 国 兽 医微 生物 菌种 保 藏管 理 中心 。 １ ． １ ． ２试剂 与 培养基 试剂 ： 细 菌微 量 生 化 反 应 管 （ 广 东 环 凯 微 生 物
Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ ，乳 酸 钙含 量 ８ ５ ｍｇ ／ ｍＬ ， ｐ Ｈ ４ ． ２ ，对 大 肠杆 菌、 沙 门 氏菌 具 有 较强 抑 制 作 用 ， 探 索 了发 酵 工艺 的可行 性 ， 为 液体 饲料 （ 乳 酸菌 发 酵液 ） 大规 模 发酵 生 产提 供参 考 。
１ 材 料 与方 法
察、 生理生化鉴定试验、 糖醇发酵试验 ， 确 定其 为嗜 酸 乳 杆 菌 。 利用５ ０ Ｌ发 酵罐 接 种 Ｒｓ 卜 ５菌株 厌 氧 发 酵 ３ ６ ｈ ， 发 酵 液 活 茵数
许氏平鮋消化管上皮细胞及消化腺组织学和组织化学
许氏平鮋消化管上皮细胞及消化腺组织学和组织化学
李霞;王霞
【期刊名称】《大连水产学院学报》
【年(卷),期】2003(18)4
【摘要】对许氏平Sebastesschlegeli(Hilgendorf)消化管中的上皮细胞及消化
腺进行了组织学及组织化学的研究。
经光学显微镜和扫描电镜观察,口咽腔、舌和
食道黏膜表面为复层扁平细胞,含有杯状细胞和味蕾,上皮细胞表面具微脊(微皱襞)。
食道下段复层扁平细胞中夹有单层柱状细胞。
胃黏膜表面为单层柱状细胞,细胞表
面具顶板。
胃贲门和盲囊部有丰富胃腺,盲囊底部和幽门部无胃腺。
肠黏膜表面为
单层柱状细胞,小肠段杯状细胞丰富,幽门盲囊上皮细胞结构同小肠。
另外,还研究了肝脏、胰腺和胆囊的结构。
【总页数】5页(P241-245)
【关键词】许氏平鼬;消化系统;上皮细胞;消化腺;组织学;组织化学
【作者】李霞;王霞
【作者单位】大连水产学院生命科学与技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q954.6;Q959.468
【相关文献】
1.许氏平鮋精巢的形态结构与发育组织学 [J], 杨艳平;史宝;温海深;何峰;李吉方;史丹;陈彩芳;张葭人;金国雄;陈晓燕
2.许氏平鲉消化管上皮细胞及消化腺组织学和组织化学 [J], 李霞;王霞
3.许氏平鮋配合饲料的研究进展及产业发展现状 [J], 李宝山;王际英;王成强;郝甜甜;
4.基于体长标准的大长山人工鱼礁区许氏平鮋资源评估 [J], 薛国进; 尹增强; 程前; 魏艺鸣; 李九奇
5.唐山海洋牧场许氏平鮋胃含物分析 [J], 潘鑫伟; 冯超; 尹增强
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一株许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道乳酸菌的分离鉴定及特性分析王腾腾;韦秀梅;常城;韩慧宗;姜海滨【摘要】为筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌用于微生态制剂开发,本研究自野生许氏平鲉肠道内共分离出35株细菌,从中筛选出1株乳酸菌YH1,其革兰氏染色呈阳性,且可发酵脱脂乳产生凝固、无气泡、呈酸性现象,基于形态学观察、生理生化和16S rDNA序列鉴定乳酸菌YH1为食窦魏斯氏菌.分析了酸碱度、温度和NaC1含量对食窦魏斯氏菌YH1生长的影响;选取金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌、假交替单胞菌和哈维氏弧菌等多种病原指示菌,以琼脂扩散法测定YH1培养12h产物的抑菌活性;并采用肌肉注射和腹腔注射两种方式对YH1的动物安全性进行检测.实验结果显示,食窦魏斯氏菌YH1适宜的生长条件为pH5.7-8.8、温度20-40℃,最适生长条件为pH7.2-8.4,温度35℃,在MRS培养基中添加NaC1会抑制YH1的生长;食窦魏斯氏菌YH1的无菌培养产物可显著抑制金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌、假交替单胞菌、哈维氏弧菌等病原指示菌的生长;食窦魏斯氏菌YH1在108CFU/mL及以下浓度对许氏平鲉是相对安全的.以上研究表明了食窦魏斯氏菌YH1具有广谱抑菌性和动物安全性,为其应用于水产养殖业奠定了理论基础.%To screen wide-spectrum bacteriostatic activity for probiotics application,a lactic acid bacteria strain Weissella cibaria YH1 was recognized among 35 bacterial strains isolated from the intestine of wild Sebastes schlegelii.Morphological observation,physiological and biochemical characteristic analyses,and 16S rDNA sequencing were applied.Skim milk was fermented into coagulation with this gram-positiveYH1 without bubbling,and the supernatant was acidic.The effects ofpH,temperature,and NaC1 content on the growth of strain YH1 were analyzed.Some indicator pathogens(Staphylococcus aureus,Aeromonas hydrophila,Vibrio alginolyticus,Vibrio Parahaemolyticus,Edwardsiella tarda,Vibrio anguillarum,Pseudoalteromonas sp,and Vibrio harveyi) were used to measure the bacteriostatic activity of the strain product in agar diffusion method.Meanwhile,animal safety of strain YH1 was tested by intramuscular and intraperitoneal injections to S.schlegelii.Results show that YH1 can survive in range of pH 5.7-8.8 and 20-40℃,and best at 7.2-8.4 and 35℃.The growth of YH1 was inhibited by adding NaC1 to MRS medium.The agar diffusion assay revealed that the product of YH1 inhibited the growth of all the indicator pathogens mentioned above.YH1 was safe to S.schlegelii as the survival rate post-injection reached 100％.Therefore,YH 1 could inhibit the growth of wide-spectrum bacteria,and shall be developed for more applications in aquaculture.【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2017(048)001【总页数】7页(P94-100)【关键词】乳酸菌YH1;食窦魏斯氏菌;许氏平鲉;鉴定;特性【作者】王腾腾;韦秀梅;常城;韩慧宗;姜海滨【作者单位】上海海洋大学水产与生命学院上海201306;山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台 264006;上海海洋大学水产与生命学院上海201306;山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台264006;山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台264006;山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台264006【正文语种】中文【中图分类】S917.1乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一类不运动、无芽孢、能利用碳水化合物发酵并产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的统称(张刚, 2007)。
因其具有绿色安全、无毒副作用、无残留的特点, 在海水鱼养殖业中具有广阔的应用前景。
章蔚(2012)发现用分离获得的明串珠菌属乳酸菌投喂黑鲷幼鱼, 可以提高幼鱼肠道菌群多样性、促进幼体肠道的生长发育; Gatesoupe等(1994)以乳杆菌强化的活体轮虫作为大菱鲆幼体的食物, 证实了乳酸菌的使用可以提高幼鱼成活率; 王福强(2005)用鼠李糖乳杆菌P15投喂牙鲆稚鱼, 达到了降低水中和牙鲆消化道中弧菌数量、提高成活率、促进生长的效果。
以上研究证明, 乳酸菌可以促进海水鱼类生长、提高成活率, 在海水鱼养殖业的应用有望减少抗生素使用, 促进海水鱼养殖业健康和可持续发展。
许氏平鲉 (Sebastes schlegelii)是我国黄渤海区域习见的鱼类之一, 因其肉质鲜美、营养丰富、抗逆性强、生长迅速, 已成为北方沿海网箱养殖和人工放流的重要经济鱼类。
随着养殖规模的扩大, 病害问题日益突出, 许氏平鲉养殖业的发展受到制约。
从许氏平鲉肠道中分离乳酸菌等益生菌, 对于研制有效的微生态添加剂, 提高许氏平鲉抗病能力具有重要的现实意义。
目前国内外对许氏平鲉的研究主要集中在繁殖生物学(冯东岳等, 2003)、发育生物学(杨艳萍等,2012; 蔺玉珍等, 2014; 马丽曼, 2014)等方面, 对其肠道微生物的研究非常有限, 肠道乳酸菌分离鉴定和特性分析的研究更未见报道。
本研究首次从野生许氏平鲉肠道内分离获得了一株乳酸菌, 采用 16S rDNA基因序列分析法对其进行了分类鉴定, 并对其生长特性、抑菌特性及动物安全性进行了研究, 旨在为筛选能够提高许氏平鲉免疫力和抗病能力、促进其生长的乳酸菌提供理论依据, 从而为研发适用于许氏平鲉养殖业的微生态制剂奠定基础。
1 材料与方法1.1 实验动物海捕野生许氏平鲉体长 17.51cm, 购于烟台市迟家农贸市场, 用于乳酸菌的分离。
健康许氏平鲉体长9.87±1.73cm, 由烟台泰华海珍品有限公司提供, 用于乳酸菌的安全性检测实验。
1.2 细菌分离纯化用 70%的酒精擦拭鱼体腹部表面, 在无菌条件下解剖, 剪下中肠段; 去除肠道内容物, 以无菌生理盐水冲洗2次后, 用解剖刀刮取肠道内壁的黏液, 加入到无菌生理盐水中, 涡旋振荡摇匀后均匀涂布于MRS固体培养基。
30°C无氧条件下培养至出现菌落,再重复平板划线分离出单菌落。
挑取单菌落 30°C扩繁后保种于甘油中。
1.3 细菌鉴定1.3.1 菌落形态观察及生理生化特征鉴定将保种的菌株接种于 MRS培养基中,培养24h后观察菌落形态、颜色等。
挑取菌落进行革兰氏染色和脱脂乳试管凝固试验。
将培养到指数期的菌株经戊二醛(2.5%)固定、磷酸缓冲液(pH7.4)漂洗、酒精梯度脱水和叔丁醇重悬后制作玻片, 通过扫描电镜观察其形态特征; 以梅里埃 API 50CHL试剂条进行生理生化测试, 对分离获得的细菌进行初步鉴定。
1.3.2 细菌 16S rDNA基因序列分析采用 16S rDNA基因序列分析的方法对初步鉴定的细菌进行分子鉴定。
扩增引物序列为: 8F-5′AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3′, 1492R-5′GGCTACCTTGTTACGACTT3′。
反应体系为50μL, 其中包括: 正、反向引物(10mmol/L)各2μL, 2μL 分离菌菌液, 0.4μL Taq 酶,5μL10×PCR Buffer (Mg2+), 4μL dNTPs, 34.6μL ddH2O。
序列扩增反应条件为: 94°C 5min; 94°C 30s,55°C 30s, 72°C 2min, 30 个循环; 72°C 10min。
PCR 产物经 10g/L琼脂糖凝胶电泳检测后, 送至英潍捷基(上海)贸易有限公司北京测序实验室进行测序。
测序结果用BLAST软件与GenBank核酸数据库中所收集的相关种属的16S rDNA序列进行同源性分析。
1.4 生长特性分析1.4.1 pH对生长的影响取100μL培养至指数期的菌悬液接种于终pH值分别为3.2、4.2、4.9、5.7、6.5、7.2、8.4、8.8、9.1、9.4、9.6、10.3 的 MRS 培养基中, 30°C培养24h后检测600nm的光密度, 并测定培养基的最终pH值。
每个实验组设三个平行。
采用SPSS软件包单因素方差分析法(one-way ANOVA)中的Duncan多重比较检验法进行数据分析, 再利用Origin 8.0软件作图。
1.4.2 温度对生长的影响取100μL培养至指数期的菌悬液接种到MRS培养基中, 分别置于5、10、15、20、25、30、35、40、45和50°C 下培养 24h, 检测600nm的光密度。