温度对许氏平鲉性腺分化的影响及其机制
许氏平鲉的室内工厂化育苗技术
许氏平鲉的室内工厂化育苗技术李田田;陈令明;刘峰【期刊名称】《水产养殖》【年(卷),期】2017(038)011【总页数】2页(P38-39)【作者】李田田;陈令明;刘峰【作者单位】日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800【正文语种】中文许氏平鲉（Sebastes schlegeli），又称黑石鲈、黑鮶鱼、黑寨鱼等，属鲉形目平鲉属，体灰褐色，腹面灰白色，体侧有不规则小黑斑，各鳍灰黑色，肉食性，卵胎生，产苗季节4—5月间，适宜水温12～16℃。
许氏平鲉是一种分布于西北太平洋的暖温性底层鱼类，栖息于近岸岩礁海区，常见于东海、黄海海域，是我国北方主要增养殖品种和重要经济鱼类，是渔业部门增殖放流的重要鱼种之一。
本文在前期人工育苗研究成果的基础上，进一步完善了室内工厂化育苗技术，现将该技术简介如下。
1 鱼池条件应选择离水源近，水质良好，进、排水方便的地方建池。
采用的室内水泥池，一般单池面积26 m2，水体 30 m3，长 6.5 m、宽 4 m、高 1.35 m，水深 1.15 m。
进水口在短边中点位置，高于水面10 cm，排水口在另一端池底一角。
鱼池上方2m空中拉防晒网，保证光照控制在2 000 lx以内。
2 准备工作2.1 清池消毒将池中积水排净，清除藻体和污渍，并使用高锰酸钾消毒，反复冲刷干净，晾晒7 d左右备用。
2.2 制作网具换水网箱长0.6 m、宽0.6 m、高1.3 m，分别准备200目、120目和20目的网用于针对不同生长时期的鱼苗换水。
3 亲本选择选择深水网箱养殖4～5龄的雌鱼，体长要求在40～50 cm，体质量超过1 000 kg，并且应保证体态健康，体色正常，体表完好，没有损伤，腹部膨大、饱满。
4 鱼苗产出在该地4月下旬，室内水温达到许氏平鲉产苗适宜温度15℃，此时每个鱼池放置5～6尾亲鱼，鱼苗产出达到培育密度时及时将亲鱼捞出，放入其他鱼池，鱼苗产量每池约10万尾，体长5.8 mm，培育密度约3 300万尾/m3，期间每隔一天投喂一次小杂鱼，罗茨鼓风机不间断均匀充气，光照控制在1 800 lx以内。
许氏平鲉规模化苗种繁育提高成活率的几项措施
2018.1灭菌处理后下池，投喂小虾、轮虫应使用5‰食盐水消毒3～5分钟。
套养池，一般不需投喂，只是在生物饵料不足的情况下进行补充。
(2)水质调控：整个饲养过程中水体溶氧最低保持在6毫克/升以上。
每口池塘每2亩配备1千瓦增氧机(或微孔增氧设施)。
春末和夏季每天12―15时开机增氧。
7―8月份，每天后半夜须勤开增氧机。
为保持水质清新，要适时注意加水换水。
饲养期间水体透明度要求保持在40厘米左右。
定期查看(测定)水质指标，抽检水体溶氧、氨氮、亚氮等指标，溶解氧保持6～8毫克/升，pH 为6.8～8.5，水温12～28℃，氨氮≤0.05毫克/升，亚硝酸氮≤0.01毫克/升。
正常情况下，每3～4天换1次水，换水量最多不超过1/5。
注换水时，随时跟踪水源水温，池水温差控制在2℃以内。
夏季随着气温升高或养殖后期，增加换水次数，应改为每1～3天注换水1次，日换水逐渐增加到1/4，同样控制温差在2℃以内。
养殖后期如能巧妙地利用刀鲚的自然属性，保持一定速度的微流水，则对提高刀鲚的养殖品味更具效果。
正常情况下，要定期泼洒微生物制剂调控水质，一般每7～10天使用有益生物菌1次。
(3)巡池：每天早、中、晚各巡池1次。
每半月镜检1次发病塘口，按需跟踪检查，每天检测氨氮、亚硝酸盐指标1次。
每月进行1次疾病预防，杀灭有害病菌和寄生虫。
建立水产养殖生产记录档案。
江苏靖江市江水产技术指导站朱爱琴顾树信戴玉红展翠芬邮编214500许氏平鲉俗称黑鲪、黑头，是我国北方海域重要经济鱼类。
近年来，由于过度捕捞和环境变化，自然资源量持续下降，为了补充自然水域种群数量、恢复渔业资源，山东、江苏等沿海省份都开始了许氏平鲉的增殖放流工作，这就需要培育规模化的人工苗种，另外，面积持续扩大的许氏平鲉海上网箱养殖，近几年由于野生种苗寄生虫病害严重，养殖户也都转而使用人工苗种，因此，许氏平鲉苗种繁育规模不断扩大。
但在实际生产中单位水体出苗量低，苗种自残行为的发生率高等仍困扰着育苗厂家。
许氏平鲉人工育苗中的常见问题及对策
许氏平鲉人工育苗中的常见问题及对策陈令明;李田田;刘英霞;张海宁;于美波;魏鉴腾【期刊名称】《水产养殖》【年(卷),期】2018(039)011【总页数】2页(P29-30)【作者】陈令明;李田田;刘英霞;张海宁;于美波;魏鉴腾【作者单位】日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;国家海洋局北海分局北海信息中心,266033;日照市海洋与渔业研究所,山东日照276800;中国科学院兰州化学物理所青岛研发中心,266000【正文语种】中文许氏平鲉（Sebastes schlegelii），隶属于鲉形目（Scorpaeniformes），鲉科（Scorpaenidae），鲉属（Sebastes），是一种冷温性近海底层岩礁肉食性经济鱼类，因肉质鲜美，山东沿海将其美誉为黑石斑鱼，在渤海、黄海和东海较为常见，具有环境适应能力强、生长速度快、养殖方便且病害少等优点而被广大养殖户青睐。
日照市海洋与渔业研究所连续多年超额完成了许氏平鲉的增殖放流任务，育苗经验丰富，出苗率高，维护了日照近海生态平衡。
本文通过总结前人经验，并结合本单位育苗实践，本着经济节约和效益最大化的原则，探讨许氏平鲉工厂化育苗过程中经常遇到的问题及应对措施。
1 科学选取饵料，合理安排投喂许氏平鲉的适口饵料种类、投喂量和投喂频率，需要根据鱼苗的不同生长时期来确定。
由于许氏平鲉的幼鱼存在补偿生长的生理现象，因而应避免喂食不足。
冒树泉等[1]研究发现投喂频率明显影响许氏平鲉消化酶活性，合理安排投喂频率可以避免饵料不足导致的互残行为，促进生长，提高饲料利用率而节省成本。
因此，具体投喂量和频次在前期摸索的基础上，需根据实际摄食后有无饵料残渣及残渣多少来不断调整，避免不足或过量。
仔鱼期（0—24日龄）许氏平鲉的营养获得方式从内源性营养变成外源性营养，应及时投喂开口饵料以避免鱼苗因饥饿而死亡，注意刚产出两天内不需投喂，之后要及时投喂经强化的轮虫，12 d后投喂经强化的丰年虫，14 d后添加配合饲料，每天定时定量投喂，饲料应合理选择，脂肪含量不宜过高，30 d后开始投喂大卤虫。
许氏平鲉养殖的不利因素的佐证材料
许氏平鲉养殖的不利因素的佐证材料养许氏平鲉这玩意儿，听上去是个挺好的生意，可要真做了，你才知道其中的辛酸与难处。
说实话，养殖业这块，尤其是这种比较娇贵的鱼，真不是谁都能玩得转的。
有时候光是光顾着喂鱼，都能把人折腾得够呛。
先别急着点头，我们先聊聊其中的那些不太好看的问题，别看它外表鲜艳、肉质细腻，养起来可一点都不简单。
反正说了这么多，话说回来，真要开始搞这个养殖的，你得掂量掂量自己到底能不能扛得住。
水质这个问题就让人头疼。
许氏平鲉是对水质要求特别高的，水质不好的话，鱼儿就容易生病，养殖的效率也会下降。
要是水温、溶氧这些都没有掌握好，鱼儿活不长，生长速度也慢。
你得时刻监控水质，水浑了点、氧气低了点，鱼儿就可能不高兴，甚至得生病。
所以养它得时刻小心，不能让水温出现一点问题，风吹日晒都可能导致水质变差，整个池塘也跟着遭殃。
你看，好端端的鱼儿，没多长时间就生病了，真是让人痛心疾首，得不偿失。
然后就是它的饲料。
我们养鱼可不能偷懒，饲料得选对了，才能让鱼长得又好又健康。
许氏平鲉可是吃得很挑剔的，想要它吃得开心，必须得有合适的饲料。
要是你喂的东西不合适，它吃不下去，生长就慢，生病率还高。
哎呀，弄不好还得花钱买药，简直是掉进了“饲料生病药费”的恶性循环。
更别说饲料的质量得跟上，市场上那些便宜的饲料看似便宜，喂了它效果差，反而让鱼生病，简直是浪费钱。
选个合适的饲料就跟找对象一样，一开始不注意，最后后悔得想撞墙。
不得不提到饲养技术。
许氏平鲉可是个“娇气”的家伙，养它得有点技术活。
你不能像养普通的鱼一样随便扔点饲料进去，撒撒水就行。
它吃的量、吃的时间都得有讲究。
你看你那池塘里，成群的鱼儿们可能一天三顿，早晚各一次，怎么让它们吃得好，不浪费也是一门学问。
如果你不注意这些细节，鱼儿吃不饱，或者吃了不合适的饲料，不但长得慢，甚至会引发其他问题。
你这可是养的许氏平鲉，不是草鱼，不能随便糊弄。
说完这些，还得提一下天气和环境问题。
揭示鱼类中温度与性别的表观遗传学机制
PLoS Genet.：揭示鱼类中温度与性别的表观遗传学机制作者：mumu来源：生物谷2011-12-31 0:12:5112月29日，据《每日科学》报道，一项由西班牙国家研究委员会（CSIC）海洋科学研究所领导、基因组调控中心（CRG）研究人员共同合作的研究，发现了鱼类中温度和性腺性别之间的表观遗传学机制。
在雌鱼中，高温会增加性腺芳香酶启动子的DNA甲基化。
环境温度对性别决定有影响。
有些物种，如大西洋银边鱼，其性别决定主要取决于温度。
而另外一些物种，其性别决定已写在其DNA内，但温度仍然能够颠覆这种遗传"指令"。
之前有关欧洲鲈鱼（一种鱼，其性别决定取决于遗传因素和环境因素的共同作用）的研究表明，从一个正常性别比例的群体开始--即等比例的雄性和磁性个体，只需要在早期发育的一个关键时期通过增加水温，即可得到一个全是雄性个体的群体。
最有趣的现象是，温度在性腺未分化的某个时刻影响最大，而不是性腺开始形成。
为什么会发生这种情况，是什么使温度能颠覆遗传因素，至今，都是个由来已久的难题。
现在，一项由西班牙国家研究委员会（CSIC）领导的研究解开了谜底。
由巴塞罗那CSIC海洋科学研究所Francesc Piferrer教授领导的团队，描述了由温度升高诱导触发芳香化酶基因沉默的机制。
芳香化酶是一种能将雄激素转变为雌激素的酶，它在所有非哺乳类脊椎动物卵巢发育中至关重要。
如果没有芳香化酶，就不会有雌激素；没有雌激素，卵巢就不可能发育。
这项研究，将发表于本期PLoS遗传学期刊上。
早期效应在实验中，科学家将2组欧洲鲈鱼幼鱼在它们生命的第一周培养在不同的温度（常温和高温）中。
结果表明，高温增加了芳香化酶启动子（cyp19a）的DNA甲基化，这反过来又驱动了它的沉默，因为其转录活性被抑制了。
暴露于高温的这组，那些基因上是雌性只部分的受了影响的雌鱼，最终仍发育为雌性。
然而，还有其他一些基因上是雌性但含有高水平的DNA甲基化的雌鱼，最终发育成了雄性，因为它们的芳香化酶被抑制了。
许氏平鲉 Myomaker 通过调控成肌细胞融合促进肌肉肥大生长的调控机制
许氏平鲉 Myomaker 通过调控成肌细胞融合促进肌肉肥大生长的调控机制于倩文;黄可佳;张全启;贺艳【期刊名称】《中国海洋大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2024(54)1【摘要】为探究Myomaker在硬骨鱼肌肉生长过程中调控作用,本研究以肌肉具有无限生长能力的许氏平鲉(Sebastes schlegelii)为研究对象,证明Myomaker在其肌肉生长过程中发挥重要作用。
许氏平鲉myomaker基因全长5386 bp,编码序列长870 bp,编码289个氨基酸。
胚胎整体原位杂交实验结果表明,myomaker的表达始于体节期,信号主要集中在体节位置,而在孵化前期和仔鱼期信号主要集中在头部和躯干前部。
用myomaker过表达质粒投喂仔鱼30 d后,myomaker表达量显著升高,且过表达组小面积肌纤维(500~1000μm 2)数目显著少于对照组,而大面积肌纤维(>1000μm 2)数目显著多于对照组。
之后停止投喂myomaker过表达质粒,继续培养90 d,过表达组大面积肌纤维(>5000μm 2)占比仍大于对照组,这说明Myomaker在促进许氏平鲉肌肉肥大生长方面发挥了重要作用。
此外,体外细胞实验证明许氏平鲉Myomaker可以促进小鼠C2C12成肌细胞发生融合,这说明Myomaker促进许氏平鲉肌纤维面积增大可能是通过调控成肌细胞融合实现的。
本研究结果丰富了Myomaker调控非模式动物肌肉生长发育的资料,为进一步加深对大体型硬骨鱼类肌肉无限生长调控分子机理的理解奠定了基础。
【总页数】12页(P67-78)【作者】于倩文;黄可佳;张全启;贺艳【作者单位】中国海洋大学海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室;中国海洋大学三亚海洋研究院海南省热带水产种质重点实验室;青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室【正文语种】中文【中图分类】S917.4【相关文献】1.摄食促进物质对许氏平鲉摄食和生长的影响2.Myomaker和Myomerger调控成肌细胞融合的分子机制3.许氏平鲉肌肉生长发育的初步研究4.许氏平鲉MyoD1s基因的鉴定及其调控成肌细胞分化功能的初步研究5.GnIH/GnIHR调控卵胎生许氏平鲉交配行为相关基因表达的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
山东省许氏平鲉产业链发展现状分析与对策建议
《河北渔业》2021年第5期(总第329期)O调查与分析DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2021.05.005山东省许氏平鲂产业链发展现状分析与对策建议宋祖德1,袁廷柱1,王学现'(1.长岛综合试验区海洋经济促进中心，山东烟台265800;2.长岛综合试验区海洋与渔业监督监察大队，山东烟台265800)摘要：为充分了解山东省许氏平輪(Sebastodes schlegeli)产业发展现状，先后到日照、青岛、威海、烟合等地对许氏平餉苗种繁育、增殖放流、养殖、销曹、养殖设备研发、饲料使用等情况开展实地调研。
针对许氏平细产业链的各个环节，从现状出发，分析产业发展存在的间题，提出推广应用人工繁育良种、构建多元化养殖模式、加强水产动物疫病防控体系建设、推进产业链企业经营管理模式现代化等对策建议。
关键词：许氏平M(.Sebastodes schlegeli);产业链；现状分析；对策建议许氏平(Sebastodes schlegeli)又称黑鳍,俗称黑鱼、黑寨、黑老婆等，属冷温性近海底层鱼类,分布于北太平洋西部，是中国黄渤海区习见的经济种类山。
因它具有肉质细嫩、味道鲜美、繁殖能力与适应性强、泪游范围小、自然越冬等优点，已成为我国北方网箱养殖、资源增殖放流与休闲海钓的重要经济鱼类⑵。
许氏平鲫养殖始于上世纪90年代末的长岛，随着长岛等地许氏平餉网箱养殖业迅猛发展，带动了苗种繁育、饲料研发、大型深水网箱研发、销售加工等产业链各环节快速发展。
但随着许氏平鲫养殖规模的不断扩大，受养殖环境、放养密度、鱼苗来源、饵料投喂等诸多因素影响，病害频发、死亡率升高、养殖效益下降等问题逐步显现，制约了产业的持续健康发展。
为充分了解山东省许氏平鲫产业发展现状，笔者先后到日照、青岛、威海、烟台等地对许氏平鲫苗种繁育、增殖放流、养殖、销售、养殖设备研发、饲料使用等情况开展实地调研，以期从现状出发,分析产业发展存在的问题,提出对策建议。
许氏平鲉网箱养殖系统菌群结构及其多样性的周年变化规律
许氏平鲉网箱养殖系统菌群结构及其多样性的周年变化规律【摘要】本研究通过对许氏平鲉网箱养殖系统菌群结构及其多样性的周年变化规律进行分析，发现了在不同季节和环境条件下，菌群结构和多样性存在着显著的变化。
环境因素如温度、盐度等对菌群结构具有影响，季节性变化也是导致菌群多样性变化的重要原因。
研究总结了菌群结构与多样性的周年变化规律，并展望了未来的研究方向，为进一步优化养殖系统、提高产量和质量提供了重要参考。
这对于推动水产养殖业的发展，提高养殖效率具有积极的意义。
【关键词】许氏平鲉、网箱养殖系统、菌群结构、多样性、环境因素、季节性变化、周年变化规律、结论、研究展望1. 引言1.1 研究背景许氏平鲉网箱养殖系统菌群结构及其多样性的周年变化规律引言淡水养殖业是中国渔业的重要组成部分，而平鲉是一种重要的淡水养殖鱼类。
随着养殖规模的不断扩大，养殖系统中的微生物群落结构对养殖环境和养殖品质有着重要影响。
目前对于养殖系统中微生物群落的了解还相对有限，尤其是在菌群结构及其多样性随时间变化的规律性方面缺乏系统研究。
对许氏平鲉网箱养殖系统中菌群结构及其多样性的周年变化规律进行系统研究具有重要的理论和应用价值。
通过深入了解养殖系统中不同季节、不同环境条件下菌群的变化规律，可以为养殖生产提供合理的养殖管理策略，有助于减少疾病发生、提高养殖效率，同时也可以为养殖系统的可持续发展提供科学依据。
1.2 研究意义鱼类养殖在我国已经有着悠久的历史，是我国重要的渔业生产方式之一。
而随着人口的增加和生活水平的提高，对鱼类的需求也在不断增加。
如何提高渔业生产效率，降低养殖成本，保护水生生物的生态环境，就成为了当前渔业研究的重要课题之一。
目前对于网箱养殖系统中微生物菌群结构及其多样性的研究还比较缺乏，对于该系统中微生物组成、功能特点以及其变化规律仍知之甚少。
对于网箱养殖系统中微生物菌群结构及其多样性的研究具有重要的理论和应用价值。
通过深入研究网箱养殖系统中微生物的结构、功能及其变化规律，可以为提高渔业生产效率、优化养殖环境、降低养殖成本提供重要的理论支持，为我国渔业的发展做出贡献。
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温度对许氏平鲉性腺分化的影响及其机制张思敏;王孝杰;李吉方;温海深;吕里康【摘要】本研究以许氏平鲉为实验对象,设置3组不同温度,即高温组(24 ℃)、对照组(20℃)和低温组(16 ℃),利用组织切片技术、酶联免疫法(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)等技术探究温度对许氏平鲉性腺分化的影响及其潜在机制.结果显示,在40 dpb时,24℃下性腺发育最快,16℃下最慢,24℃、20℃和16℃下雌性率分别为70.0％、42.9％和33.3％.24℃和20℃下,E2在较高水平持续时间较长,T 水平在30～35 dpb时急剧降低,16℃下的E2水平迅速下降,35dpb时T仍处于较高水平,说明在性腺分化期间,温度较高时,E2水平较高,T水平较低,性腺偏雌性发育;反之,性腺偏雄性发育.在24℃下,35～40 dpb时的cyp19a1a mRNA的表达显著上调,可能与高温导致性腺分化偏雌性发育有关;在16℃下,30～50 dpb时ERβ2 mRNA的表达显著下调,说明ERβ2的表达被抑制可能与性腺偏雄性发育有关;24℃和20℃下,foxl2 mRNA的表达在25～35 dpb时处于较高水平,而低温组在30 dpb时表达水平开始上升,说明foxl2在性腺分化早期的高表达水平可能与卵巢分化的速率有关;在30～50 dpb,sox3、sox9和dmrt1的表达水平变化总趋势基本一致,说明三者之间的表达有一定的联系,可能与精巢的分化速率有关.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2019(043)007【总页数】12页(P1569-1580)【关键词】许氏平鲉;温度;性腺分化【作者】张思敏;王孝杰;李吉方;温海深;吕里康【作者单位】中国海洋大学,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】Q132.1;S965.3鱼类的性腺分化包括两个方面：细胞学和解剖学(组织学)。
解剖学方面，性腺分化的标志包括是否有卵巢腔的形成，是否出现输精管、微血管的位置、原始性腺的大小和形状以及原始生殖细胞(primordial germ cell, PGC)数目等[1-2]。
在硬骨鱼类的性腺分化中，一般卵巢先分化，精巢后分化。
卵巢分化的主要标志是卵巢腔的形成，同时也是解剖学上性腺分化开始的标志。
一般的，将生殖细胞减数分裂的开始作为细胞学上性腺分化的标志，但很多鱼类发育到生殖细胞减数分裂这一时期历时较长[3]。
作为低等脊椎动物的鱼类，其性别决定与分化除了受遗传型性别决定(genetic sex determination, GSD)外，还存在环境型性别决定(environmental sex determination, ESD) [4]。
影响鱼类性别分化的环境因子主要包括温度、光周期、pH值、盐度、种群密度等[5]。
其中温度是最主要的影响因子，也是人们研究较多的一种。
据报道，鱼类的温度依赖型性别决定(temperature-dependent sex determination, TSD)可以划分为三种类型[6]：一是在高温下产生雄性较多，低温产生雌性较多，大部分鱼类均属于此种类型，比如舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和金鱼(Carassius auratus)等[7-9]；第二种则与之相反，比如斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)和鲫等[10-11]，在高温下产生雌性较多，低温产生雄性较多；三是在高温和低温下，产生的均为单性雄性，中间温度性比为1∶1，比如牙鲆(Paralichthys olivaceus)和半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)等[12-13]。
鱼类的性别分化及发育以遗传因素为基础，同时受到外界环境以及自身内分泌调节的影响，三者共同作用，因此鱼类的性别决定机制复杂多变[14]。
目前，鱼类的性别决定机制的研究逐渐成为热点，其中性腺分化相关基因的研究主要集中在芳香化酶基因、sox9、dmrt1基因上，ERα、ERβ2、AR等核受体基因，foxl2、sox3、amh和Tra2等基因的相关报道也逐渐增多[15]。
本研究在卵胎生许氏平鲉(Sebastes schlegelii)性腺分化时期进行不同温度处理实验，利用组织学切片技术观察其性腺分化与发育情况，探究了温度对许氏平鲉性腺分化的影响。
同时，通过测定性类固醇激素水平和性别分化相关基因的表达情况，探究了不同温度对性腺分化影响中的潜在机制。
旨在为卵胎生鱼类性腺分化的研究提供一定的理论依据，同时为环境调控鱼类性腺分化技术的研发提供一定的资料，并对许氏平鲉养殖生产提供一定的理论指导。
1 材料与方法1.1 实验对象本实验所用许氏平鲉仔稚鱼来自山东东营利津县双瀛水产苗种有限责任公司。
1.2 实验设计取自然条件下养殖的21日龄 (day post birth, dpb)许氏平鲉仔鱼进行实验，设置3组，分别为高温组(24 °C)、对照组(20 °C)和低温组(16 °C)。
每天升高或降低1 °C，4 d内逐渐升温或降温至设定温度，其他条件不变。
每天投喂卤虫无节幼体，30 dpb时投喂卤虫无节幼体+配合饲料；40 dpb以后投喂配合饲料。
25～50 dpb取样(实验鱼全长为8.6～37.3 mm)，每隔5 d取样1次，每次随机取20尾鱼测量全长，随机取10尾于波恩氏液中，全鱼固定保存，取10尾于液氮中快速冷冻，-80 °C保存，备用。
1.3 组织切片及观察许氏平鲉仔鱼全鱼经过波恩氏液固定24 h后，经梯度酒精脱水，二甲苯透明、浸蜡，石蜡包埋，待石蜡凝固后修整蜡块，LEICA-RM201型切片机连续切片，切片厚度为7 μm，全鱼纵切，展片，38 °C烘箱烘干，进行苏木精-伊红染色(H.E染色)，中性树脂封片，晾干。
显微镜下观察并拍照，同时测量性腺和PGC的大小，统计性别比例。
1.4 许氏平鲉仔稚鱼雌二醇(E2)和睾酮(T)含量的测定由于许氏平鲉仔稚鱼太小，无法抽取血液，故采用全鱼组织匀浆用于激素测定。
每个时期5尾，3个平行，每1尾鱼为一个样本进行检测。
利用酶联免疫法(ELISA)测定许氏平鲉仔稚鱼全鱼组织匀浆中的E2和T含量，该试剂盒回收率为95%～104%，与其他相似物质无明显交叉反应。
本实验所用试剂盒来源于上海酶联生物科技有限公司。
利用酶标仪(SoftMax Prot 6.5-1软件)在450 nm波长下测定吸光度(OD值)，通过拟合标准曲线计算许氏平鲉仔稚鱼全鱼组织匀浆中E2和T的浓度。
1.5 许氏平鲉全鱼总RNA的提取和cDNA文库的构建运用Trizol法提取许氏平鲉全鱼总RNA，每个时期5尾，利用核酸测定仪测定全鱼总RNA的浓度，以备反转录。
同时进行琼脂糖凝胶电泳，检测RNA的完整性。
取0.5～1.0 μL的总RNA(根据所得到的RNA浓度计算而定)，使用PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒(TaKaRa，日本)去除基因组DNA，并反转录为cDNA，-80 °C保存备用。
1.6 许氏平鲉仔稚鱼性别分化相关基因表达分析利用Primer 5软件设计引物，所用的基因序列cyp19a1a(FJ594995.2)、ERβ2 (HQ452829.1)、foxl2(JN998083.1)均来源于GenBank，ERα、sox9、amh、sox3和dmrt1的基因序列均来源于许氏平鲉转录组数据(NCBI：SRR4409372)。
设计成功的引物由华大基因Oligo进行合成，引物序列如表1所示。
对样品cDNA进行4倍梯度稀释，每个时期5尾鱼的cDNA混为一个样本，设置3个平行，进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)。
反应体系(共20 μL)：SYBR Premix Ex Taq 10 μL、上下游引物各0.4 μL、cDNA模板2.0 μL、ddH2O 6.8 μL。
上机程序，预变性：95 °C，30 s；PCR反应：95 °C，5 s；X °C(X为目的基因或内参基因的退火温度，本实验中，amh和ERα退火温度为60 °C，ERβ2、sox9和dmrt1为58 °C，cyp19a1a、foxl2和sox3为56 °C)30 s，共40个循环；熔解曲线生成：95 °C，15 s；60 °C，1 min；95 °C，15 s为1个循环。
建立标准曲线，以β-actin为内参基因，根据2-ΔΔCt法计算得到性腺分化相关基因mRNA的相对表达量。
表 1 基因表达分析的特异性引物Tab. 1 Primer sequences for mRNA expression analysis引物名称primers核苷酸序列sequence(5′—3′)cyp19a1a Forward：ACCTGGACAGTTTGGCTCA Reverse：GAGGCAGTCCAAGGTAAGG ERβ2 Forward： GCCACGGACCTCTAACCT Reverse：GACTTCCTCCTCTGACCTCTT foxl2 Forward：CAAGAAAGGTTGGCAGAA Reverse：GTAGGACATCGGAGTGGG ERα Forward： CCTGACGCAGAGCAAGCA Reverse：GAGTCCAGAGGAGCAGAGTA sox9 Forward： AGAGGCTCCTTCCATCCG Reverse：AGCACGCCAGACTCAGAC amh Forward：AGCCTCACCGTGTCCCTA Reverse：TCCCGTGTTCGTTCAAGTC sox3 Forward： CTGCTGCGTGGTGGTGTA Reverse：CCTCATCAGCACCATAGCA dmrt1 Forward： TGGAGGCTATCATCACGG Reverse：CAGGCAACTCTTCATTCTTA β-actin Forward： TGGAGGCTATCATCACGGReverse：CAGGCAACTCTTCATTCTTA1.7 数据处理实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，探究不同时间点间和各组间数据的差异显著性。