高密度脂蛋白胆固醇HDL

高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定1.第1页页首内容

血清高密度胆固醇（HDL-C）测定（直接法）

天津市宝坻区人民医院检验科

操作规程文件号：CZGC/SH/043

第四版

共3 页

本规程每2年复审一次

复审日期：2013年5月1日

复审人：陈玉良（签名）

规程编写者：崔树明

审批者：陈玉良

批准日期：2013年5月6日

实施日期：2013年5月10日

文件分发部门和/或个人：检验科

医务科；保管者：王文志（签名）

院长办公室；保管者：刘会芹（签名）

院档案室；保管者：刘会芹（签名）

检验科；主任：陈玉良（签名）

临床化学检验室：崔树明（签名）

2.原理

本方法是双试剂测定，第一种试剂包含聚合物和多聚阴离子，它们附着在LDL，VLDL 和乳糜微粒的表面。这些脂蛋白甚至在清洁剂存在的情况下都是稳定的，清洁剂是作为第二种试剂的一部分被添加进去的，另外一部分是胆固醇试剂剩下的成分。另一方面，HDL颗粒在聚合物和多聚阴离子存在的情况下是不稳定的，它们被清洁剂溶解。因此，只有HDL-C作用于胆固醇测定。

胆固醇脂酶

高密度脂蛋白胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸

胆固醇氧化酶

胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+ H2O2

过氧化物酶

H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT-------------﹥醌亚胺+H2O

3.样本采集与处理

3.1受检者（体检对象或病人）的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻断剂、免役抑制剂、某些降压药、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象应做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季

节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不做剧烈运动。

3.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如：站立5min可使血脂浓度提高5％，15min提高16％，故在采血前至少应静坐5min。一般从肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％-15％。采血试管采用真空采血管。

3.3样本类型：采用无溶血的血清。如用血浆，宜采用EDTANa2（1mg/ml）抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3％。EDTA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。

3.4 样本处理：血标本应尽快送检验室。室温下放置30-45min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。若不能及时检测，置于洁净试管中加塞后4℃保存，可稳定4天。

4 试剂

4.1 试剂：本室使用日本积水公司生产的液体双试剂试剂盒，试剂为浅粉红色透明液体，直接使用。批号为KB573。

4.2 试剂组成：

试剂主要成分如下：

MES缓冲液（PH6.5）100 mmol/L

胆固醇氧化酶≥0.2U/mL

胆固醇脂酶≥0.15 U/mL

过氧化物酶≥0.62 U/mL

DSBmT 0.25mmol/L

4氨基安替比林0.5mmol/L

多聚阴离子>0.02 %

清洁剂>0.2 %

其中含有保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 不要吸入。吞服有害。

4.3 试剂的储存与稳定性：未开封的试剂于2-8℃保存，稳定至有效期。

4.4 校准血清：BECKMAN公司提供的多项定标液，产品批号为0115。为冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。临用前用5ml去离子水复溶，放置30min，混匀待完全溶解后使用。复溶的血清2-8℃可稳定4天。

4.5 质控品：RONDOX公司提供，LECEL-2及LEVEL-3，产品批号为759UN及551ue。冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。使用前用5ml去离子水复溶，30分钟后轻轻混匀，待完全溶解后使用。复溶后的血清2-8℃可稳定4天。每天随样品一起测定，测定值应在允许范围内。

5 仪器

奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪

6操作

6.1 AU2700开机

6.1.1.检查W1、W2清洗液及稀释液有足够量，不足时补充；

6.1.2.打开水机水源的自来水阀门，按水机前面板的（POWER ON）键，开启水机；6.1.3.按分析仪前面板的（POWER ON）键，开启分析仪主机；

6.1.4.确认打印机为开机并处于联机状态，开启中文机；

6.1.5.确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足时添加，并在

系统状态下的试剂状态检查试剂。

6.2.开始分析

6.2.1.将兰架第一位置放水，黄架相应位置放入校准液；

6.2.2.将兰架、黄架、白色标本架放入样品台上；

6.2.3.用鼠标点击在屏幕最上方（开始分析）图标；

6.2.4.点击屏下方（EXIT）图标，退到主屏幕。

6.3分析参数

样品体积 2.3ul 温度37℃

试剂1体积132ul 方法终点法

试剂2体积25ul 单位mmol/L

波长520nm 定标方式AB

读点0-27 0-10

7 计算：

无须手工计算，结果自动以mmol/L打印。

报告结果：

异常结果的处理程序：

根据仪器参数的参考范围会打印异常标志，以“H”、“L”表示，“H”表示高于正常，“L”表示低于正常。

报告格式：

以自动打印的报告单报告

8 操作性能

8.1 准确度：不准确度≤4％。