变色栓菌产锰过氧化物酶的条件优化
不同处理方式对毛竹篼纤维素及木质素酶活的影响
不同处理方式对毛竹篼纤维素及木质素酶活的影响李美群;孟勇;杨明;艾文胜;涂佳;胡伟;肖飞【摘要】Through promote corruption reagents,mechanicaltreatment,covering manner with the newly cutting bamboo stump,the results showed that in the degradation process filter paper enzyme,the cotton cellulose enzyme and CMC enzyme activity supreme values was 154.24 ×103 ,368.88 ×103 ,57.85 ×103 U /kg,respectively,and minimum values was 56.65 ×103 ,70.34 ×103 ,28.76 ×103 U /kg,respectively.Lignin peroxidase enzyme,lacca-se and manganese peroxidase enzyme activity supreme values was 0.13 ×103 ,6.07 ×103 ,159.07 ×103 U /kg,re-spectively,and minimum values was 0.001 ×103 ,0.200 ×103 ,0.760 ×103 U /kg,respectively.In the degradation process of bamboo stump,the whole cellulase activity in order was cotton cellulose enzyme,filter paper enzyme and CMC enzyme activity;the lignin enzymes activity in order was manganese peroxidase,laccase and lignin peroxidase enzyme activity.While the different parts of bamboo stump of the cellulose activity and lignin enzyme activity were complex and changeable.Total CMC enzyme activity and total filter paper enzyme activity were significantly positive correlation.The influence of covering treatments on total lignin enzyme activity was largest.%对新砍伐的毛竹篼进行促腐剂、机械、覆盖方式等处理，得出降解过程中滤纸酶活、棉花酶活、CMC 酶活最高值分别为154.24×103、368.88×103、57.85×103 U ／kg，最低值分别为56.65×103、70.34×103、28.76×103 U ／kg；木质素过氧化物酶活、漆酶酶活、锰过氧化物酶活最高值分别为0.13×103、6.07×103、159.07×103 U ／kg，最低值分别为0.001×103、0.200×103、0.760×103 U ／kg。
锰过氧化物酶的固态发酵及其对染料的脱色作用
锰过氧化物酶的固态发酵及其对染料的脱色作用本研究采用固态发酵方法培养锰过氧化物酶，并研究其对染料的脱色作用。
结果显示，经过固态发酵培养后，锰过氧化物酶的活性得到了明显提高。
在对亚甲基蓝、孔雀蓝和甲基橙三种染料进行脱色实验时，锰过氧化物酶展现出了高效的脱色能力，其中对亚甲基蓝的脱色率达到了92%以上。
同时，本研究还探究了固态发酵条件对锰过氧化物酶活性和脱色能力的影响，并发现适宜的温度和pH值对于锰过氧化物酶的生长和活性具有重要作用。
关键词：锰过氧化物酶；固态发酵；染料脱色；活性；温度；pH 值Introduction：锰过氧化物酶（MnP）是一种重要的酶类，在生物降解、环境净化等领域具有广泛的应用。
传统的MnP生产方法多采用液态发酵，但该方法存在着一些问题，如培养周期长、环境污染等。
因此，固态发酵作为一种新兴的MnP生产方法备受关注。
同时，MnP也被广泛应用于染料脱色领域，其脱色效果好、操作简便、对环境友好等特点使其成为一种重要的染料脱色剂。
Materials and Methods：本研究选用木屑和麦麸作为MnP固态发酵的培养基，通过调节温度和pH值等条件来控制MnP的生长和活性。
同时，选用亚甲基蓝、孔雀蓝和甲基橙三种染料进行脱色实验，测定其脱色率。
Results：经过固态发酵培养后，MnP的活性得到了明显提高，其中在温度为30℃、pH值为5.5的条件下表现最佳。
在脱色实验中，MnP表现出了高效的脱色能力，对亚甲基蓝、孔雀蓝和甲基橙三种染料的脱色率分别达到了92%、84%和76%以上。
Conclusion：本研究通过固态发酵方法成功培养出MnP，并证明其在染料脱色领域具有良好的应用前景。
同时，本研究还探究了适宜的生长条件对于MnP活性和脱色能力的影响，为MnP的生产和应用提供了参考。
产酶条件优化实验
产酶条件优化实验
产酶条件优化实验是一种常用的方法，用于确定最佳的培养条件以提高酶的产量。
以下是一些常见的优化实验方法：
1. 培养基成分优化：通过调整培养基中的碳源、氮源、无机盐等成分的浓度和比例，来寻找最适合酶产量的组合。
2. 培养条件调控：包括温度、pH值、培养时间、初始菌液浓度等的调节，以找到适合酶活性和细胞生长的最佳条件。
3. 添加辅助物质：有些辅助物质如酶诱导剂、共诱导剂等可以促进酶的合成和分泌，通过添加适当的浓度来增加酶的产量。
4. 营养补充：通过添加适量的酵母提取物、维生素、微量元素等来增加细胞代谢活性，从而提高酶的产量。
5. 发酵工艺优化：对发酵参数如搅拌速度、通气量、发酵方式等进行调整，以提高产酶效果。
需要根据具体的产酶菌株和酶的类型进行实验设计和优化，建议在科学研究机构或者相关实验室进行操作以确保安全和可靠性。
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
霞品研究与开发
Ｆｏ ｄＲｅｅ ｒ ｈ Ａｎ ｖ ｐ ｎｔ ｏ ｓａ ｃ ｄＤｅ ｄｏ ｍｅ
２１ ０ １年 ６月
第３ 卷 期 １ ２ 第６ １ ９
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
李 鑫玲 ’孙晓菲 ’孟楠 ’ 卜 ， ， ， 美玲 ’刘进 。
（． １河南科 技大学 食 品与生物 工程学 院 ， 河南 洛阳 ４ １０ ； ． 岛啤酒 （ ７０３ ２青 太原 ） 有限公司 ， 山西 太原 ０ ０ ３ ） ３０ ２
４ 结 语
Ｃ ｏｅｅ ［ ． ｕｒｉｎＲ ｓａｃ ， ０ ，６ ５ ６ ５ ０ ｒ ａ ｔｎｓＪ Ｎ ｔ ｔ ｅｅｒｈ ０ ６２ ： ５ — ６ １ ｉｏ ２ 【】 Ｊｎ ａ Ｍ． ｏｄ ＇－ ｕｉ＇ ｅ ｎ ｒ ｏｏｅ ｕ ｕ ｅＣ ｓ ｏ ３ ａｎｔ Ｒ ｌａ Ｇ ｔ ｒ ｚａｄＭａ ａＤ ｌｒｓＬ ｑ ｅｄ ａｔ ． ｎ ｅｒ ｉ ｒ
摘 要 ： 土壤样本 中分 离出一株具有较 高活力 的产脂肪酶 菌株 ， 步确定为假 单胞菌属。对该 脂肪 酶产 酶条件进 从 初
行 优 化 ， 佳 碳 源为 糊精 、 最 氮源 为 硫 酸铵 ， 适发 酵 温度 为 ３ ， 最 ０℃ 最适 起 始 ｐ 为 ７ 。 Ｈ ． ０
关键词 ： 脂肪酶 ； 假单胞菌属 ； 产酶条件
６・ Ｏ
芎。 ０ 墓４ 。 ０
赡 ３０ ．
速搅 拌均匀 ， 高压灭菌倒板前再用磁力搅拌器混匀 ； 种
子培养 基 （ ： 萄糖 ２ ，Ｎ ２ ．， Ｐ ４ ．， ％）葡 ． （ Ｈ ） ０ ０ ＫＨ Ｏ ０１ ０ ｓ ５ 橄榄油 １ ， Ｓ ７ ． ， 白胨 ２５ ｐ ．； 酵 ． ＭｇＯ ・Ｈ ００ ５ 蛋 ０ ０ ．，Ｈ ７ 发 Ｏ 培养基（ ： 白胨 ２ ， ％）蛋 ． 蔗糖 ０ ， ０ ． 橄榄油 １ ，Ｎ ４￣ ４ ５ ． （ Ｈ ） Ｏ ０ Ｓ
锰过氧化物酶的表达和白腐菌降解木质素机制中的锰调节
锰过氧化物酶的表达和白腐菌降解木质素机制中的锰调节FREDERIC H. PERIE AND MICHAEL H. GOLD俄勒冈科学技术研究所,化学和生物科学系木质素是一种复杂的、异质的，分子中含有氧代苯丙醇或其衍生物结构单元的高聚物。
占植物纤维组分的20%~30%。
白腐担子真菌主要是负责引发木材分解木质素。
在白腐菌降解木质素培养条件下，研究得最透彻的是白腐担子菌，它可以产生两种胞外酶，分别是锰过氧化物酶（MnP）和木素过氧化物酶（LiP），沿同一H202生成系统，构成木质素降解系统的主要组成部分。
白腐真菌分泌过氧化物酶和氧化酶显然是独特的组合。
云芝和Phlebia 辐射每产生一个或多个漆酶在。
平菇 sajor-凤尾菇分泌一种芳基醇氧化酶（5），一漆酶，和几个过氧化物酶（13）。
Bjerkendera夜蛾分泌一种芳基醇氧化酶（29），和Rigidoporus 木质 SUS 显然分泌漆酶和锰过氧化物酶一（14）。
以前报告显示，Dichomitus squalens （猪苓 anceps）下各种条件，有效地降级自然从白桦木质素（2），白杨（30），和云杉木（8）和从小麦，大麦，和葡萄吸管（43）。
至扩大我们的的木质素降解酶的理解英文内容- orated 各白腐真菌，我们已进行了任务确定和特征外OXI- 的酶与格 D。
squalens及其调控。
在这种报告中，我们探讨D的能力squalens降解木质素合成在各种条件。
此外，我们演示该木质素的条件下这种微生物表达漆酶（34）和一个锰过氧化物酶和表达的锰过氧化物酶是由锰监管。
与此相反，既不外唇也不藜芦醇氧化酶的活性在检测文化根据各种各样的条件下生长。
材料与方法有机体。
Dichomitus squalens（喀斯特）里德（猪苓 anceps派克）（CBS 432.34）由F. Zadrazil获得和维持在马铃薯葡萄糖，酵母提取物琼脂斜面。
菌丝夹连接为很容易观察到，indicat - ING的分离物保持在dikaryotic 状态（12， 35）。
环境生物学和生态学
Ｐ ｅ ｉ ｍ ｃｓｌａ ｉｕ Ｐ ／ ａ ｃ ｏ ｙ ｅ ｌｃｎ ｓｌ Ｃ 张延新（ ｌ ｉ 山东农业大学植物 保护学院． 山东， 泰安 ２ ） ７０ ， １１ 刘开启 …／ ８ ／ 植物保护学报． 一
２ ０ ．２３． ３ ～３ ２ ０ ５３ （）一３ ３ １
变色栓菌产锰过氧化物酶 的条件优化 ＝ ｅｏ ｔ ｚ － Ｔｈ ｐ ｉ ａ ｍｉ
ｔｏ ｆｍ ａ ｇ ｎ ｓ ｅ ｏ ｉ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉｎｂ ｒ ｍ ｅｅ ｅ — ｉｎｏ ｎ ａ ｅ ｅｐ ｒ ｘｄａ ｅｐ ｏ ｕ ｔｏ ｙ Ｔ ａ ｔｓｖ ｒ
采用紫外线等方法对淡 紫拟青霉菌 ＩＣ菌株进行了 Ｐ 诱变选育， 以便进一步提高其防效及 应用价值 。表 １ ３ 参
Ｑ８７ １ ２ ０ ０ １ ７ ０６３０ ５
添加核苷对肝素黄杆菌发酵产肝素酶的影响 ＝ ｆ ｃ ｏ Ｅｆ ｔ ｆ ｅ
ａ ｄｉｉ ｎ ｎ ｃ ｅ ｔｄ ｓｏｎ ｈ ｐ ｒ ｎａ ｅ ｐｒ ｄｕ ｔｏ ｙ Ｆｌ — ｄ ｔｏ ｕ ｌｏ ｉ ｅ ｅ ａ ｉ ｓ ｏ ｃ ｉ ｎ ｂ ａ
２ ７ 参
Ｑ８ ７ １ ２ ０ ０ １ ７ ０６ ３ ０ ２
研究了多种培养基组分及培养条件对变色栓苗产锰 过氧化物酶（ Ｐ ｆ影响。当培养基 中果糖浓度为 ２ ｇＬ Ｍｎ ）（ ｌ １ ０／ ， 酒石酸铵浓度为 １ｍ ｌ ， ｍｏ Ｌ吐温 ８ 浓度为 １ ｇＬＭｇ Ｏ － ０ ／ ０ ． ／， Ｓ ４ Ｏ ７ ： ０ ３ ／， Ｈ Ｏ为 ． ｇ 最终 ｐ ４ Ｌ Ｈ为 ４５５ ０ 三 角瓶 装液量为 ．，０ ｍＬ １ ０ ， 种量 为 １ 片 （８ ｍＬ接 ０ ０ ｆｍｍ） 茼苔， 培养温度 为 ３ ℃， ０ 转速为２ ０ ｍ ｎ Ｍｎ 的活力有 了很大程度的提高， ８ ｄ ｉ 时， Ｐ 最高 酶活力可达 ２２ ０ ／ 。图 ３ ５ ８ ，７ Ｕ Ｌ 表 参
木质层孔菌产锰过氧化物酶条件的优化及酶学性质研究
木质层孔菌产锰过氧化物酶条件的优化及酶学性质研究崔艳红;韩庆功;常魁珍;魏龙龙;张贝贝;胡志明
【期刊名称】《饲料工业》
【年(卷),期】2012()12
【摘要】试验选用白腐真菌中能产生较高锰过氧化物酶的菌株——木质层孔菌,采用单因子试验分析了木质层孔菌产锰过氧化物酶的最佳培养条件,并对其部分酶学作用特性进行了研究。
试验结果表明,木质层孔菌产锰过氧化物酶的最佳培养条件是:最佳培养温度为35℃;最佳碳源是小麦秸粉,最佳氮源是胰蛋白胨;最佳培养时间是192 h。
锰过氧化物酶作用的最适反应温度是52℃;最适pH值是4.5;金属离子Zn2+和Ca2+对锰过氧化物酶的活性有促进作用;Mg2+对锰过氧化物酶的活性影响不是很大;Cu2+、Fe2+和Ag+对锰过氧化物酶活性具有抑制作用,其中Fe2+的抑制作用最强。
【总页数】5页(P55-59)
【关键词】锰过氧化物酶;产酶条件;酶学特性
【作者】崔艳红;韩庆功;常魁珍;魏龙龙;张贝贝;胡志明
【作者单位】f河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
【相关文献】
1.木质层孔菌产锰过氧化物酶条件的优化 [J], 陈聪;曹福祥;龙绛雪;董旭杰
2.木质层孔菌诱导漆酶及部分酶学性质研究 [J], 崔艳红;韩庆功;胡志明;张贝贝;常魁珍;魏龙龙
3.木质层孔菌产锰过氧化物酶条件的优化 [J], 董旭杰;曹福祥;龙绛雪
4.木蹄层孔菌产锰过氧化物酶的碳氮源优化及酶学性质 [J], 尚洁
5.真菌产生的锰过氧化物酶和漆酶研究Ⅱ．一株产锰过氧化物酶的担子菌──血红密孔菌K－2352 [J], 周金燕;张发群
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锰过氧化物酶产生菌的发酵优化及酶学性质研究
锰过氧化物酶产生菌的发酵优化及酶学性质研究Screening,Cultivation and crude enzyme characterization of manganeseperoxidase from white rot fungus吴会广1蔡宇杰1苑博华1廖祥儒1张大兵2WU Hui-guang1CAI Yu-jie1YUAN Bo-hua1LIAO Xiang-ru1ZHANG Da-bing2(1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122；2.江苏汉邦科技有限公司，江苏淮安223001)(1.The Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,School of Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu214122China;2.Hanbon Science&Technology Co.Ltd.,Huaian,Jiangsu223001,China)摘要：采用愈创木酚初筛平板从无锡惠山、龙山等地筛选出6株阳性菌株，通过摇瓶复筛从中得到一株产MnP活性较高的菌株SYBC-M3；同时进行了部分发酵产酶条件的研究；在此基础上，对得到的MnP进行了粗酶的部分酶学性质研究。
结果表明，当培养基中豆粕20g/L、蛋白胨10g/L、Tween-200.5g/L、Mn2+1.5mmol/L，起始pH5.0时，MnP的活力有了较大程度的提高，可达1,775U/L；其最适作用温度55℃，最适pH5.0；同时其温度和pH稳定性也较好。
pH 9.0下24h还可保持90％以上的活性。
关键词：白腐真菌；锰过氧化物酶；筛选；培养基优化；酶学性质Abstract:6fungi were screened positive in guaiacol-containing PDA plates from nature.Then we obtained a high yield producing manganese peroxidase(MnP)strain SYBC-M3by fermenting the6 positive strains.Then we studied primitively the effects of different fermentation conditions on MnP production by SYBC-M3.Moreover,we also researched the properties of MnP.The results showed that the optimal carbon source was soybean meal,and the optimal nitrogen source was peptone:The optimal temperature and pH were55℃and pH5.0,respectively.Furthermore,the thermal and pH stability of MnP were pretty good.It had a high activity by maintaining in pH9.0for24h. Keywords:White rot fungus;Manganese peroxidase;Screening;Optimization of fermentation; Properties锰过氧化物酶（manganese peroxidase，MnP，E.C:1.11.1.13）属氧化还原酶,是真菌分泌的一种糖基化细胞外蛋白,MnP是一种含铁血红素的糖基化过氧化物酶,在Mn2+和H2O2存在时,MnP能氧化分解芳香环多聚体,被认为是木质素降解的关键酶之一[1~3]，由引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌产生。
土壤中木质素降解菌株的筛选及产酶条件优化
王进军，韦慧仙，鲍 飞，等．土壤中木质素降解菌株的筛选及产酶条件优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（１６）：２１０－２２２．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．１６．０２９土壤中木质素降解菌株的筛选及产酶条件优化王进军，韦慧仙，鲍 飞，于 昊（扬州大学环境科学与工程学院，江苏扬州２２５１２７） 摘要：筛选能高效降解农业废弃物中的主要成分———木质素的菌剂，探究其产酶特性并优化产酶条件。
采用涂布平板法分离纯化得到６８株菌种，采用ＰＤＡ－愈创木酚培养基显色试验、ＰＤＡ－苯胺蓝脱色试验、ＰＤＡ－氯化锰显色试验进行初筛，测定Ｌａｃ、Ｌｉｐ、Ｍｎｐ活性复筛。
通过内转录间隔区（ＩＴＳ）测序法鉴定目标菌株。
基于单因素试验和响应面法对菌株产酶能力（培养时间、温度、溶解氧及培养基条件等）进行研究和优化。
结果表明，分离的６８株菌种经筛选ＭＪ１菌株为目标菌株，分子生态学鉴定其为蓝状菌属真菌Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓｓｉａｍｅｎｓｉｓ。
单因素试验得出菌株的最佳产Ｌａｃ、Ｍｎｐ时间为６ｄ，产Ｌｉｐ时间为１０ｄ，最佳产酶培养温度为３０℃，摇床转速为１２０ｒ／ｍｉｎ，接菌量为２％，ｐＨ值为５。
响应面优化后确定最佳产酶条件为培养温度３０．１１℃，接菌量１．６６％，ｐＨ值５．２２，此最优条件下Ｌａｃ、Ｌｉｐ、Ｍｎｐ３种酶的活性分别为１１０．４１、１１８．３３、２１８．４Ｕ。
提示菌株ＭＪ１在优化后的产酶条件下制得的菌剂能够促进农业废弃物的高效降解，为生物法大规模降解木质素提供参考，也为后续其他相关研究奠定基础。
关键词：木质素；产酶条件；酶活；响应面优化；单因素试验 中图分类号：Ｓ１８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２３）１６－０２１０－１２收稿日期：２０２２－１０－２７基金项目：国家自然基金面上项目（编号：８１８７３８７７）；教育部留学回国人员科研启动基金（编号：２０１５１０９８）；扬州大学高层次人才科研启动基金；扬州大学“青蓝工程”项目。
白腐菌木质素降解酶及其在木质素降解过程中的相互作用
白腐菌木质素降解酶及其在木质素降解过程中的相互作用唐菊;段传人;黄友莹;孙达;胡江【摘要】木质素是一类不易降解的生物物质,在自然界中,白腐真菌对木质素的降解能力最强.白腐真菌降解木质素主要依靠分泌的三种酶:木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac).对白腐真菌分泌的三种木质素降解酶在性质、分布等方面进行了比较,系境地介绍三种木质素降解酶的催化作用,并阐述其在木质素降解过程中的相互作用.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】5页(P32-36)【关键词】木质素过氧化物酶(Lip);锰过氧化物酶(MnP);漆酶(Lac);木质素;降解【作者】唐菊;段传人;黄友莹;孙达;胡江【作者单位】重庆大学生物工程学院,重庆400030;重庆大学生物工程学院,重庆400030;重庆大学生物工程学院,重庆400030;重庆大学生物工程学院,重庆400030;重庆大学生物工程学院,重庆400030【正文语种】中文木质素是针叶树类、阔叶树类和草类植物的基本化学组分之一，由类苯丙烷单元组成，是一类复杂的芳香聚合物。
木质素结构复杂，单元结构之间多为醚键和C-C 键，十分稳定，不易降解[1] 。
木质素作为植物的组成部分之一，在造纸制浆工业中通常是作为废弃物被直接排放到环境中，由于自然界缺乏对其有效的自净能力，对环境造成了严重的负担，因此对木质素的降解研究受到广泛关注。
在自然界中能够有效降解木质素的微生物包括多种真菌、放线菌及细菌，而能够彻底将木质素分解的主要是真菌类，其中白腐菌是降解木质素能力最强的一类真菌。
白腐菌是一类能够在缺乏营养的木质上生长，并能够将植物的木质组织(纤维素、半纤维素和木质素等)全部降解，引起木质白色腐烂的真菌，这类真菌能够分泌一种或多种木质素降解酶，将木质素降解成为其生长所必需的碳源，从而把木质素降解成CO2和H2O。
木质素降解酶主要包括了3种酶：木质素过氧化物酶(lignin peroxidase，LiP)、锰过氧化物酶(mangnase peroxidase，MnP)、漆酶(laccase，Lac)[2，3] ，这 3 种木质素降解酶均能单独降解木质素，也能两两联合，或者3种酶一起作用对木质素进行降解。
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微生物学通报
２００５年３２（５）
变色栓茵产锰过氧化物酶的条件优化４
张连慧１’２刘卫晓１葛克山２钱世钧ｈ ４
（中国科学院微生物研究所北京１０００８０）１ （中国农业大学食品科学与营养工程学院北京１０００８３）２
摘要：研究了多种培养基组分及培养条件对变色栓菌产锰过氧化物酶（ＭｎＰ）的影响。当 培养基中果糖浓度为２０９／Ｌ，酒石酸铵浓度为１０ｍｍ彤Ｌ，吐温８０浓度为１．０９／Ｌ，ＭｇＳＯ。· ７Ｈ２０为Ｏ．４３９／Ｌ，最终ｐＨ为４．５，５００ｍＬ三角瓶装液量为ｌｏｏｍＬ，接种量为１０片
过滤发酵液，纯水洗涤菌体３遍，然后将菌体在８０℃条件下烘干至恒重，称重。
２结果与讨论
２．１乃谊ｍ嘲ｓ ｌ，Ｐ瑙站Ｄ如ｒ的产：酶曲线
３０℃条件下，采用产酶基础培养基培养， 测定锰过氧化物酶活力随时间的变化。
结果见图１，锰过氧化物酶第７ｄ达到产酶高
７００
峰，酶活力达５８２Ｕ／Ｌ。由此确定培养７ｄ为 ，．）６００
表２不同氮源对ＭｎＰ形成的影响
２．５ ｐＨ值对锰过氧化物酶形成的影响
用酒石酸钠缓冲液调节基础培养基的ｐＨ值，考察ｐＨ对ｚｋ删∞抛瑙ｉ∞如ｒ锰过氧
化物酶形成的影响。由表３可看出ｐＨ值为４．５时，ＭｎＰ活力最高。在较低的ｐＨ值条 件下，菌体生长情况较好，ｐＨ值高于５．４时，菌体生长情况受到抑制，但产酶量下降
并不明显。不同的白腐菌产酶最佳ｐＨ值并不在一个稳定的范围。％嬲ｓｃｆｅｒＤ也嗍泌
产酶的最佳ｐＨ值为６．４，接近中性∞Ｊ。
万方数据
２００５年３２（５）
微生物学通报
ｐＨ值
表３ ｐＨ值对ＭｎＰ形成的影响
３．５
３．８
４．１
４．５
４．８
５．１
５．４
５．７
囊◆察◆臻 ｃｏｆｏｒ锰过氧化物酶形成的影响（包括产酶培养晕４ｎｎ【●Ｉ＿＿Ｉｌ ｎ几ｎ
（掷ｍｍ）ｉｎ １００ｍＬ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ５００ｍＬ ｓｈａｋｅ ｎａｓｋ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １０９／Ｌ ｆｍｃｔｏｓｅ，１０ｍｍｏＬ／Ｌ咖ｍｏｎｉｕｍ ｔ肛
昀ｔｅ，１．０∥Ｌ ｔｗｅｅｎ ８０，Ｏ．４３ ｇ／Ｌ ＭｇＳ０４·７Ｈ２０，ｐＨ ４．５，ｍ锄ｇａｎｅｓｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ａｃｄＶｉｔｙ ｒｅａｃｈｅｄ ２，２７０Ｕ／Ｌ
在以Ｏ．０１ｍｏＬ／Ｌ酒石酸铵为氮源的产酶基础培养基中添加１％（ｗ／ｖ）的不同碳 源。结果见表１，从表１可看出７亿桃￡∞抛塔如如ｒ锰过氧化物酶形成的最佳碳源为果糖， 这与有些文献的报道ＭｎＰ形成的最佳碳源为葡萄糖一。明显不同。不同果糖浓度条件下 菌体生长情况相似，可以看出菌体的生长情况与产酶情况不呈一致性变化。进一步研 究果糖浓度对产酶的影响。果糖浓度为２％（ｗ／ｖ）时，菌体的产酶量较高，可达１， ４５５Ｕ／Ｌ。果糖浓度再升高时，ＭｎＰ活力反而有下降趋势，且下降幅度较大。当果糖浓 度达６％（ｗ／ｖ）时，酶活力仅达１４５ ｕ／Ｌ，这说明高浓度的碳源抑制ＭｎＰ的形成。
时，ＭｎＰ活力下降较明显，这说明装液量太高，溶氧达不到要求，对菌体产酶不利。
万方数据
·１０２·
患
液中的Ｍ９２＋及微量元素液中的Ｍ９２＋）。从图２蟑３００¨Ｉ ｌ－＾ｌＬ ｌＩ ｌＩ ｌＩ．１’唧
可以看出，在Ｍ９２＋浓度较低的情况下，ＭｎＰ活 墨２叫¨●Ｉ●ｌｌ ｌ●ｌ●Ｉ＿ＩＩ一１ ２违
力较高，ＭｇｓＯ。·７Ｈ：ｏ浓度为Ｏ．４３∥Ｌ（产酶
。ＬＪ＿ＪＬ ｌＩＪ ＩＬ ＬＩＪ ＬＩＪ皿ＬＩＪ ｎ一
７ｋｎ蜘唧３洳ｈ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅ艉ｃｔ ｏｆ ｄｉ雎ｒｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｎ ｍａＩｌｇ粕ｅｓｅ ｐｅｍ】【ｉｄａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉ∞ｂｙ
ｗ∞咖ｄ－
ｏｆ‰玎蝴钾糟泐ＺＤｒ ｉｅｄ．Ｗｈｅｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｗ鹅ａｔ ３０℃，２８０ｒ／ｍｉｎ ｆｏｒ ７ ｄａｙｓ，ｗｉ山ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌＯ ｐｉｅｃｅｓ
考查其它各因素对酶活力影响的适宜时间。 不同的白腐菌产酶的高峰期不一致，有的在 ３０ｄ后酶活力达到高峰ＨＪ，也有的在１２周后 达到产酶高峰期”ｊ。菌种的产酶高峰期与培 养基的成分有很大关系Ｍ Ｊ。
５ ５００
收４００ 妲３００ ％２００ 苫ｌｏｏ
Ｏ
２．２温度对锰过氧化物酶形成的影响
将ｚ忆ｍｅｆｅｓ秽ｅ邝洳ｆｏｒ接种于产酶基础培
’’通讯作者 Ｔｅｌ：８６缶２６５１５９８，Ｆ“：８６－６２６５１５９８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉａｌｌｓｊ＠ｓｕｎ．ｉｍ．ａｃ．ｃｎ 收稿日期：２００４－１２Ｊ０９。修回日期：２００４—１２－２７
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２００５年３２（５）
微生物学通报
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木质素的降解研究提供一定参考。
１材料与方法
１．１实验材料 １．１．１ 菌种：变色拴菌（ｚ钇靴姗馏瑙泐衙）由本实验室筛选并保存。 １．１．２培养基：（１）综合ＰＤＡ培养基；（２）产酶基础培养基（Ｌ４）：葡萄糖ｌｏ．０９， ＫＨ２Ｐ０４ ２．０９，Ｍ萨０４·７Ｈ２０ ０．５９，ＣａＣｌ２·２Ｈ２０ ０．１９，琥珀酸１．１８９，酒石酸铵１．８４９， ＶＢｌ（１００ｍｇ／Ｌ）１０ｍＬ，微量元素溶液７０ｍＬ，吐温８０ Ｏ．５ｍＬ，ｐＨ值为５．０；微量元素 混合液（Ｌ。１）：ＭｇＳ０４·７Ｈ２０ ３．０９，ＭｎＳ０４·Ｈ２０ ０．５９，ＮａＣｌ １．０９，Ｆｅｓ０４·７Ｈ２０ Ｏ．１９， ＣｏＣｌ２０．１９，ＺｎＳ０４·７Ｈ２０ ０．１９，ＣｕＳ０４·５Ｈ２０ ０．１９，ＫＡＬ（Ｓ０４）２·１２Ｈ２０ １０ｍｇ，Ｈ３８０３
活力并不突出。这说明Ｍｎ２＋对菌体的生长 很有利，但对菌体产酶并无重要影响。此实 验结果与Ｍａｎｉｎｅｚ实验结果一致＂ｏ。也有部
图） Ｍｎ２＋浓度对锰过氧化物酶形成的影响 ●酶活力，口菌体干重
分白腐菌产生ＭｎＰ受Ｍｎ２＋影响较大，随Ｍｎ２＋浓度的增加，产酶量增大＂Ｊ。还有研究
报道，当Ｍｎ２＋浓度达到一定值时，过多地提高Ｍｎ２＋浓度并不会提高ＭｎＰ的产量旧Ｊ。 ２．８吐温８０对锰过氧化物酶形成的影响
（由８姗）菌苔，培养温度为３０℃，转速为２８０ｒ／ｍｉｎ时，ＭｎＰ的活力有了很大程度的提高，
最高酶活力可达２，２７０Ｕ／Ｌ。 关键词：变色栓菌，锰过氧化物酶，Ｍｎ“浓度 中图分类号：Ｑ９３ 文献标识码：Ａ 文章编号：０２５３＿２６５４（２００５）０５删）９８一０５
７ｒｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａ６０ｎ ｏｆ Ｍａｎｇａｎｅ∞Ｐｅｒｏｘｉｄａ辩Ｐｒｏｄｕｃｔｉ蚰ｂｙ彻ｍ鳓晒ｌ，郇泐ｚＤ，’
１０ｍｇ，Ｎａ２Ｍ００４·２Ｈ２０ １０ｍｇ。
１．２主要仪器设备 ７２１分光光度计：上海第三分析仪器厂；电热恒温培养箱：湖北省黄石市医疗器械
厂；热恒温水浴锅：北京医疗设备厂。 １．３培养方法
５００ｍＬ三角瓶中装液体培养基１００ｍＬ，接入７日龄平板菌种１０片（书８ｍｍ）， ２８０ｒ／ｍｉｎ于３０℃恒温振荡培养。 １．４酶活力的测定方法 １．４．１粗酶液的制备：经检测确定锰过氧化物酶为胞外酶，所以取上述液体培养的试 样ｌＯ，０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液即为粗酶液。 １．４．２ 测定方法ｐ Ｊ：在０．１ｍｏＬ／Ｌ的酒石酸钠缓冲液（ｐＨ４．５）内加人０．１ｍｍｏＬ／Ｌ Ｈ：０２和１ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｎＳＯ。，以２，６一二甲氧基酚（ＤＭＰ）为底物，再加入酶液３０℃水浴 ５ｍｉｎ，测定其吸光值（入＝４６９ｎｍ）在单位时间内的变化，上述各试剂浓度均为终浓 度。１个酶活力单位（Ｕ）：是指在上述条件下，每分钟催化１¨ｍｏｌ ＤＭＰ氧化所需的酶 量。 １．５茵体干重的测定
图１
锰过氧化物酶的生成曲线
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养基，不同温度下２８０ｒ／ｍｉｎ振荡培养７ｄ，测定ＭｎＰ活力。实验结果表明ｚ忆础泐钾ｒｓｉ． ∞ｆｏｒ在３０℃～３５℃条件下，锰过氧化物酶的产量较高，３０℃条件下会更高一些。温度 低于３０℃或高于３５℃，锰过氧化物酶的产量降低。这说明中温条件下适合ｚ＇ｒ０撇姗钾ｒ． ｓ记Ｄｈ产ＭｎＰ。根据实验结果可确定３０℃是ｎ口靴凇睨瑙洳ｈ产酶的适宜温度。 ２．３碳源对锰过氧化物酶形成的影响
２．７ Ｍｎ２＋浓度对锰过氧化物酶形成的影响
１６００
本实验考察产酶基础培养基中添加不同 宴：；磊
浓度的Ｍｎ２＋对ＭｎＰ形成的影响。结果如图妄１０００
３，从图３可看出，在不含Ｍｎ２＋的培养条件罾：ｕｕ
下，菌体生长情况较差，但ＭｎＰ的活力却是窆４００
最高，可达１４８４Ｕ／Ｌ，在Ｍｎ２＋含量较高的
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培养条件下，菌体生长情况较好，但ＭｎＰ
表１不同碳源对ＭｎＰ形成的影响
２．４氮源对锰过氧化物酶形成的影响 在以ｌ％（ｗ／ｖ）葡萄糖为碳源的产酶基础培养基中，添加不同的氮源，无机氮源
终浓度均为Ｏ．０１ｍｏＬ／Ｌ，有机氮以质量浓度计，具体浓度见表２。结果见表２，从表２ 可看出，以酒石酸铵和Ｐｅｐｔｏｎｅ ａｎｄ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ为氮源均有较高的产酶量，酒石酸铵稍 高一些，所以确定最佳氮源为酒石酸铵。单独以ｐｅｐｔｏｎｅ为氮源，虽菌体的生长情况很 好，但产酶量并不高。由于有资料显示，白腐真菌在限氮的条件下产酶量较高¨Ｊ，所 以进一步研究了酒石酸铵浓度对产酶的影响。在６～１０ｍｍｏＬ／Ｌ的条件下，ＭｎＰ的活力 均较高，１０ｍｍｏＬ／Ｌ时最高。该菌在１～４ｍｍｏＬ／Ｌ较低的氮源条件下产酶量并不高，这 说明限氮并非锰过氧化物酶合成所必需。最终确定酒石酸铵浓度为１０ｍｍｏＬ／Ｌ。
浓度的吐温８０对产酶有一定的抑制作用。 ２．９装液量对产酶的影响
本文是通过改变５００ｍＬ三角瓶内液体培养基的量来考察装液量对菌种７ｈ批协睨ｒ—
ｓ泐跏产锰过氧化物酶的影响，接种量随培养基的量作相应的改变。在装液量较低（４０ ～１００ｍＬ）的情况下即溶氧较充足的情况下，ＭｎＰ活力较高，当培养基的量高于１００ｍＬ
本实验室已筛选到一株可产锰过氧化物酶的白腐菌丁ｈ撇￡∞钾瑙如。如ｒ，为提高其产 酶能力，本文研究了多种培养条件对ｚｋ舢协钾邢洳ｚｏｒ产锰过氧化物酶的影响，以便为