抗菌药物敏感性试验 PPT课件
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药物敏感试验 PPT课件
细菌耐药概念
多重耐药（MDR）: 指细菌同时对三种以上结构
不同（作用机制不同）抗菌药物耐药，如头孢菌 素、喹诺酮类、氨基糖苷类；
泛耐药（ PDR）:细菌对本身敏感的所有药物耐
药； 超级细菌:并非科学概念，一般指PDR与部分MDR，
没有确切定义，以下细菌属于此列：
MRSA/VRSA; VRE; MDR-PA,PDR-AB; ESBL(+)+AmpC(+) 肠杆菌 产碳青霉烯酶肠杆菌（产KPC酶、包括产NDM-1细菌）
MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 VRSA： 耐万古霉素金黄色葡萄球菌 VRE： 耐万古霉素肠球菌 ESBLs： 超广谱β-内酰胺酶 KPC酶： 产碳青霉稀酶的一种KPC型 NDM-1：Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶
下面就以上几种情况分别解读
与临床沟通中常见问题
1、我们想用的药物在药敏试验中 没有做？
3、某些细菌对某类抗生素天然耐药， 则不需要做药敏试验。
4、试验的药物代表一类药，而不是一 种药。
解读注意事项
5、对葡萄球菌一代比三代头孢治疗效 果好。
6、有些药物不适用于单独使用，仅用 于联合用药，如利福平。
7、因为是体外药敏试验，有些药体外 试验敏感，可能临床治疗无效。
8、同一菌株可能出现亚种，导致连续 药敏结果不吻合。
12.明显稀便，培养结果为何正常？
大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙 门菌感染，致病性大肠杆菌我们没有鉴定 血清。
怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养。
可能病毒感染(轮状病毒)。
小结
耐药菌，尤其是多重耐药菌的出现， 使临床抗感染治疗面临着困物种类上 为临床提供参考（经验治疗）；可以 指导临床个体化治疗。
与临床沟通中常见问题
《解读药敏报告》课件
药敏报告的重要性
指导临床用药
药敏报告为临床医生提供了致病微生物对各种抗菌药物的敏感性和耐药性信息，有助于医生选择 合适的药物。
提高治疗效果
通过药敏报告，医生可以选择对致病微生物敏感的抗菌药物，提高治疗效果，缩短病程。
控制耐药性的产生
药敏报告有助于医生及时发现和防止耐药性的产生，保护抗菌药物的有效性。
患者情况
一位65岁男性，因尿路感染住院 治疗。
病原体
耐万古霉素肠球菌。
药敏报告
显示该菌对多种抗生素耐药。
治疗过程
采用替加环素治疗，同时根据药 敏报告调整剂量和疗程。
THANKS
告并合理选用敏感药物。
加强与实验室的沟通合作
03
临床医生和实验室之间应加强沟通合作，及时反馈和解决药敏
试验中出现的问题。
05
实际案例分享
案例一：耐药菌感染治疗失败
01
患者情况
一位70岁女性，因
肺部感染住院治疗
02
。
耐药菌株
肺炎克雷伯菌，对 多种抗生素耐药。
04
结果
患者死亡，诊断为
03
多重耐药菌株感染
02
药敏报告解读步骤
确定病菌种类
01
确定病菌种类是解读药敏报告的第一步，因为 不同病菌对药物的敏感性不同。
02
通过查看报告中的细菌名称或编号，可以确定 感染的病菌类型。
03
了解病菌种类有助于医生选择合适的药物进行 治疗。
判断是否耐药
耐药性是指病菌对某些药物产 生抵抗力，导致药物无法有效 杀死或抑制病菌的生长。
04
药敏报告的局限性及未来展 望
药敏报告的局限性
01
培养基的局限性
抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件
8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均 匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待 平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板 上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育 过夜，取出观察结果。
2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方 式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使 菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上 平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结 果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作 方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量 控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗 微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这 种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金 葡），混匀，胶布封口，37°C培养。
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
抗微生物药物和敏感性试验-精品医学课件
物体表面，用浸湿无菌生理盐水的棉拭子在规格板内来回 涂抹10次，然后在平板上进行涂布接种。 计算公式为：
菌落数（CFU）/ cm2 = 菌落数/ 采样面积
2.压印法
用直径5cm的特制平皿（Rodac平皿），倾注于16.5ml琼 脂后可使培养基高出平皿口1~2mm，凝固后将平皿上的琼 脂直接压贴于物体表面10~20s，接触面积为19.63平方厘米。
2.对居住环境、特殊病房、实验室、无菌车间等场所空气质量 的细菌学评价。
实验目的
掌握医院感染的微生物监测方法
目的与要求
器材与试剂
器材与试剂
普通琼脂平板（直径90mm及60mm)、无菌生理盐水、无菌 棉拭子等。
步骤与方法
一、空气中细菌含量的检测
1.检测对象：医院各个科室的空气，手术室、新生儿室、产房、 烧伤病房、重症监护室等空气污染的检测，应成为医院感染 管理中特别关注的重点。
2. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转 挤去后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板 60度,最后沿平板内缘涂抹1周。
3. 平板置室温下3-5分种后，用纸片分离器或无菌镊 将含药纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于 24mm,纸片距平板内缘应大于15mm。（纸片选 择参照实验书p39）
药敏实验与医院感染的检测
一、抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
纸片琼脂扩散法
经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实验 室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和Bauer 所建立的纸片琼脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法纸 片琼脂扩散法)
实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板 上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片 周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范围内 测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌 圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。
菌落数（CFU）/ cm2 = 菌落数/ 采样面积
2.压印法
用直径5cm的特制平皿（Rodac平皿），倾注于16.5ml琼 脂后可使培养基高出平皿口1~2mm，凝固后将平皿上的琼 脂直接压贴于物体表面10~20s，接触面积为19.63平方厘米。
2.对居住环境、特殊病房、实验室、无菌车间等场所空气质量 的细菌学评价。
实验目的
掌握医院感染的微生物监测方法
目的与要求
器材与试剂
器材与试剂
普通琼脂平板（直径90mm及60mm)、无菌生理盐水、无菌 棉拭子等。
步骤与方法
一、空气中细菌含量的检测
1.检测对象：医院各个科室的空气，手术室、新生儿室、产房、 烧伤病房、重症监护室等空气污染的检测，应成为医院感染 管理中特别关注的重点。
2. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转 挤去后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板 60度,最后沿平板内缘涂抹1周。
3. 平板置室温下3-5分种后，用纸片分离器或无菌镊 将含药纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于 24mm,纸片距平板内缘应大于15mm。（纸片选 择参照实验书p39）
药敏实验与医院感染的检测
一、抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
纸片琼脂扩散法
经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实验 室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和Bauer 所建立的纸片琼脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法纸 片琼脂扩散法)
实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板 上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片 周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范围内 测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌 圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。
药敏试验(扩散法)操作方法PPT课件
（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是 必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合 MIC可以方便地制定用药方案。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
细菌培养鉴定及抗菌药物敏感试验PPT课件
头孢羟氨苄）
• 环丙沙星：二代喹诺酮类（氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟沙星即氟 酸）
• 红霉素：大环内酯类 • 呋喃妥因（坦丁）：硝基呋喃类（目前由于更有效的低毒的喹诺酮类应用已受限） • 庆大霉素：氨基糖苷类 • 庆大霉素增效：氨苄西林、青霉素或万古霉素和氨基糖苷类抗生素联合有无协同作用 • 亚胺培南：碳青霉烯类（美洛培南、必安培南、帕尼培南） • 左旋氧氟沙星：第三代喹诺酮类（司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星） • 利奈唑胺：恶唑烷酮类 • 苯唑西林：耐酶青霉素（甲氧西林、萘夫西林、氯唑西林、氟氯西林） • 青霉素： • 哌拉西林/他唑巴坦：脲基组青霉素（美洛西林、阿洛西林哌拉西林）及β-内酰胺酶抑
制剂 • 利福平： • 链霉素增效：氨苄西林、青霉素活万古霉素和氨基糖苷类抗生素联合有无协同作用 • 辛内吉：奎奴普汀-达福普汀 • 复方新诺明：SMZ/TMP磺胺甲恶唑(SMZ)与甲氧苄啶(TMP)的复方制剂 • 四环素：对四环素S可推测多西环素和米诺环素S，但四环素R/I二者也可以S • 万古霉素：糖肽类（替卡拉宁）
• 肠球菌属：氨基糖苷类（除高浓度筛选外）、头孢菌素 类、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑（复方新诺明） 耐药
• 鼠疫耶尔森菌：β-内酰胺类抗微生物药 • 鲍曼不动杆菌或无硝不动杆菌：所有氨基青霉素或Ⅰ、
Ⅱ代头孢或氯霉素，这两菌对以上抗生素天然耐药。 • 洋葱伯克霍尔德菌：氨基糖苷类抗生素或亚胺培南，该
• 2 .耐甲氧西林的凝固酶阴性的葡萄球菌（MRSCN）： 耐药机制与MRSA相同，多重耐用性比MRSA更为严 重。
17
3. 超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科（ESBL）：肠杆菌科的 大肠埃希氏菌，肺炎克雷伯菌，产酸克雷伯氏菌， 可以产生质粒介导的β-内酰胺酶，从而对β-内酰胺 类抗生素，特别是第三代头孢和氨曲南等耐药，但 是通常对于含有β-内酰胺酶抑制剂的复合药物如阿 莫西林/克拉维酸，氨苄西林/舒巴坦，头孢哌酮/舒 巴坦等敏感，对于四代头孢可能敏感或耐药，对亚 胺培南敏感，由于这种耐药机制有质粒介导，可以 在不同细菌之间传播，故其检出率逐渐升高。除了 上述几种细菌外在其他肠杆菌科甚至铜绿假单胞菌 中均有发现，目前看来，复方β-内酰胺类药物头孢 哌酮/舒巴坦（舒普深），哌拉西林/他唑巴坦（特 治星）效果较好，而阿莫西林/克拉维酸，氨苄西林 /舒巴坦的耐药性较高。
• 环丙沙星：二代喹诺酮类（氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟沙星即氟 酸）
• 红霉素：大环内酯类 • 呋喃妥因（坦丁）：硝基呋喃类（目前由于更有效的低毒的喹诺酮类应用已受限） • 庆大霉素：氨基糖苷类 • 庆大霉素增效：氨苄西林、青霉素或万古霉素和氨基糖苷类抗生素联合有无协同作用 • 亚胺培南：碳青霉烯类（美洛培南、必安培南、帕尼培南） • 左旋氧氟沙星：第三代喹诺酮类（司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星） • 利奈唑胺：恶唑烷酮类 • 苯唑西林：耐酶青霉素（甲氧西林、萘夫西林、氯唑西林、氟氯西林） • 青霉素： • 哌拉西林/他唑巴坦：脲基组青霉素（美洛西林、阿洛西林哌拉西林）及β-内酰胺酶抑
制剂 • 利福平： • 链霉素增效：氨苄西林、青霉素活万古霉素和氨基糖苷类抗生素联合有无协同作用 • 辛内吉：奎奴普汀-达福普汀 • 复方新诺明：SMZ/TMP磺胺甲恶唑(SMZ)与甲氧苄啶(TMP)的复方制剂 • 四环素：对四环素S可推测多西环素和米诺环素S，但四环素R/I二者也可以S • 万古霉素：糖肽类（替卡拉宁）
• 肠球菌属：氨基糖苷类（除高浓度筛选外）、头孢菌素 类、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑（复方新诺明） 耐药
• 鼠疫耶尔森菌：β-内酰胺类抗微生物药 • 鲍曼不动杆菌或无硝不动杆菌：所有氨基青霉素或Ⅰ、
Ⅱ代头孢或氯霉素，这两菌对以上抗生素天然耐药。 • 洋葱伯克霍尔德菌：氨基糖苷类抗生素或亚胺培南，该
• 2 .耐甲氧西林的凝固酶阴性的葡萄球菌（MRSCN）： 耐药机制与MRSA相同，多重耐用性比MRSA更为严 重。
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3. 超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科（ESBL）：肠杆菌科的 大肠埃希氏菌，肺炎克雷伯菌，产酸克雷伯氏菌， 可以产生质粒介导的β-内酰胺酶，从而对β-内酰胺 类抗生素，特别是第三代头孢和氨曲南等耐药，但 是通常对于含有β-内酰胺酶抑制剂的复合药物如阿 莫西林/克拉维酸，氨苄西林/舒巴坦，头孢哌酮/舒 巴坦等敏感，对于四代头孢可能敏感或耐药，对亚 胺培南敏感，由于这种耐药机制有质粒介导，可以 在不同细菌之间传播，故其检出率逐渐升高。除了 上述几种细菌外在其他肠杆菌科甚至铜绿假单胞菌 中均有发现，目前看来，复方β-内酰胺类药物头孢 哌酮/舒巴坦（舒普深），哌拉西林/他唑巴坦（特 治星）效果较好，而阿莫西林/克拉维酸，氨苄西林 /舒巴坦的耐药性较高。
药敏试验结果解读及临床应用ppt课件
17
葡萄球菌耐药特征
葡萄 球菌
天然耐药
获得性耐药
氨曲南，奈啶酸 替莫西林，多粘菌素 头孢他啶
青霉素耐药，约95％
社区获得性感染：甲氧西林耐药<10% 医院获得性感染：甲氧西林耐药40%-
80％
万古霉素耐药，非常罕见
18
《国家抗微生物治疗指南》葡萄球菌
19
葡萄球菌关键药敏试验
非皮肤软组织感染
苯唑西林
• 泛耐药的铜绿假单胞菌/鲍曼不动杆菌日益增多， 治疗泛耐药假单胞菌可能有效的药物：多粘菌素B （E）、米诺环素，多西环素、替加环素（铜绿假 单胞菌天然耐药）、大剂量舒巴坦
45
大肠埃希菌血流
感染，治疗？
大肠埃希菌引起 的单纯性膀胱炎，
治疗？
阴沟肠杆菌引起的
脑膜炎，治疗？
抗生素 头孢哌酮/舒巴坦 氨苄青霉素 头孢噻肟（凯福隆） 头孢西丁 头孢他啶（复达欣） 头孢唑啉 庆大霉素 亚胺培能（泰能） 头孢吡肟 美罗培南 呋喃妥因 环丙沙星 复方磺胺
嗜麦芽窄食 单胞菌
同不动杆菌，对碳青霉烯、头孢哌酮，替 卡西林，氨基糖苷耐药，
对甲氧苄啶耐药，但对复方磺胺类敏感
37
《国家抗微生物治疗指南》非发酵菌
38
常见非发酵菌感染与抗菌药物 合理应用
铜绿假单胞菌
青霉素类：替卡西林、哌拉西林 氨基糖苷：吉他霉素、妥布霉素 三代头孢：头孢哌酮、头孢他啶 亚胺培南、环丙沙星、氨曲南 根据药敏，一般联合用药
体内药物浓度： 不同部位、不同 时间是不同的
关键：感染部位 药物浓度超过MIC 的时间和剂量？ 6
口服
可供吸收药物
给药剂量
剂型崩解，药物溶出
生物利用度
吸收
葡萄球菌耐药特征
葡萄 球菌
天然耐药
获得性耐药
氨曲南，奈啶酸 替莫西林，多粘菌素 头孢他啶
青霉素耐药，约95％
社区获得性感染：甲氧西林耐药<10% 医院获得性感染：甲氧西林耐药40%-
80％
万古霉素耐药，非常罕见
18
《国家抗微生物治疗指南》葡萄球菌
19
葡萄球菌关键药敏试验
非皮肤软组织感染
苯唑西林
• 泛耐药的铜绿假单胞菌/鲍曼不动杆菌日益增多， 治疗泛耐药假单胞菌可能有效的药物：多粘菌素B （E）、米诺环素，多西环素、替加环素（铜绿假 单胞菌天然耐药）、大剂量舒巴坦
45
大肠埃希菌血流
感染，治疗？
大肠埃希菌引起 的单纯性膀胱炎，
治疗？
阴沟肠杆菌引起的
脑膜炎，治疗？
抗生素 头孢哌酮/舒巴坦 氨苄青霉素 头孢噻肟（凯福隆） 头孢西丁 头孢他啶（复达欣） 头孢唑啉 庆大霉素 亚胺培能（泰能） 头孢吡肟 美罗培南 呋喃妥因 环丙沙星 复方磺胺
嗜麦芽窄食 单胞菌
同不动杆菌，对碳青霉烯、头孢哌酮，替 卡西林，氨基糖苷耐药，
对甲氧苄啶耐药，但对复方磺胺类敏感
37
《国家抗微生物治疗指南》非发酵菌
38
常见非发酵菌感染与抗菌药物 合理应用
铜绿假单胞菌
青霉素类：替卡西林、哌拉西林 氨基糖苷：吉他霉素、妥布霉素 三代头孢：头孢哌酮、头孢他啶 亚胺培南、环丙沙星、氨曲南 根据药敏，一般联合用药
体内药物浓度： 不同部位、不同 时间是不同的
关键：感染部位 药物浓度超过MIC 的时间和剂量？ 6
口服
可供吸收药物
给药剂量
剂型崩解，药物溶出
生物利用度
吸收
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结果：
ห้องสมุดไป่ตู้
测试菌（或质控菌）不出现肉眼可见生长的
最低药物浓度为该药对测试菌（质控菌）的
MIC。
注意事项：
培养基、接种细菌的菌量、抗菌药物纸片的质
量、孵育温度和观察时间、操作是否规范等均
能影响本试验的结果。
为保证结果的可靠性，需同时采用相应标准菌
株同时进行药敏试验作为质量控制的方式。
抗菌药物敏感性试验
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：4学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人
实验目的和要求
掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作
方法等、结果判断、意义及质量控制；
熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、
操作方法、结果判断及意义等；
了解稀释法的质量控制。
实验内容
常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测
方法介绍。
纸片扩散法。
肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药 检测方法介绍
纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test）
E试验法（E test）
还是中介（intermediate，I）。
表1
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果
抑菌圈直径(mm) 相应MIC值 (μg/ml)
纸片含药量 抗菌药物 青霉素 苯唑西林 10U 1μg
耐药
≤28 ≤10
中介
— 11～12
敏感
≥29 ≥13
耐药
β-内酰胺酶
敏感
≤0.12 ≤2
≥4
万古霉素
庆大霉素 红霉素
范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该
药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory
concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
含药纸片
抑菌圈
方法：
菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于
做不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定
量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度 （MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。
方法：
试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排，
质控菌排）每排13支编号。另取3支试管，分别
标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和
“质控菌生长对照”等对照。
抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至 13管，稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。 肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照
联合药物敏感试验
特殊耐药菌及耐药酶的表型检测
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周
围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度
30μg
10μg 15μg
—
≤12 ≤13
—
13～14 14～22
≥15
≥15 ≥23
—
≥8 ≥8
≤4
≤4 ≤0.5
克林霉素
磺胺药
2μg
1.25/23.75μg
≤14
≤10
15～20
11～15
≥21
≥16
≥4
≥8/152
≤0.5
≤2/38
三、肉汤稀释法
原理：
以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素
管：分别加入MH肉汤2ml。
方法：
菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml； 加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低 到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照 管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照 管加质控菌液。 孵育：35º C 24h观察结果。
生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准； 涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多 余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转 平板60º ，最后沿平板内缘涂抹1周；
贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子
将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；
孵育：35º C 16-18h，量取抑菌圈直径。
结果判读：
用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI
（Clinical and Laboratory Standards
Institute）标准判读结果；
报告：细菌对该抗生素是 敏感（susceptible，S）； 耐药（resistant，R）；