新生隐球菌的致病机理PPT课件
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白色念珠菌和新型隐球菌病ppt课件
肺新型隐球菌病所占的比例少于15%,远比中
枢神经系统新型隐球菌点 4.2临床症状及体征 4.3实验室依据
-
8
5.1对症治疗 5.2病原治疗
5.治疗
-
9
6.预防
6.1控制传染源 6.2切断传播途径 6.3保护易感人群
-
10
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
传染病学
主讲人：
-
1
白色念珠菌和新型隐球菌病
本节重难点： 一、白色念珠菌、型隐球菌 二、流行病学：传染源、传播途径、易感人群、
流行病特征 三、临床表现： 四、诊断： 五、治疗： 六、预防：
-
2
1.病原学
白色念珠菌病原体：念珠菌体呈圆形或卵圆
形，直径约4-6pm，革兰阳性，发芽繁殖， 又称芽生孢子。菌体能发育伸长成假菌丝，
-
12
增生性念珠菌病等。鹅口疮最为常见，
-
6
新型隐球菌病
潜伏期为数周至数年不等。
3.3中枢神经系统新型隐球菌病
以新型隐球繭脑膜炎最常见。患者起病缓
慢，病初症状不明显，常有头痛，可位于前
额、双侧颞部、枕后或眼眶后，多为胀痛或
钝痛，呈间歇性。伴低热或不发热。
3.4肺新型隐球菌病
新型隐球菌主要通过肺进入人体，但是，
-
5
3.临床表现
白色念珠菌
3.1皮肤念珠菌病
念珠菌感染皮肤皱褶处，如腋窝、腹股沟
下、会阴部、肛门周围，自觉瘙痒，表现为
界限淸晰的皮肤红斑及糜烂，周围敗在丘疹
、水疱和脓疱，呈卫星状分布。
3.2黏膜念珠菌病
口腔念珠菌病为最常见的浅表性念珠菌病。
包括急性假膜性念珠菌病（鹅口疮）、念珠
新生隐球菌课件
新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）
分布：鸽粪；人类体表、口腔、粪便
形态特征：圆形的酵母样细胞
外周有一层肥厚的胶质样荚膜
繁殖方式：芽生，无假菌丝
菌落：酵母型菌落
荚膜多糖：A、B、C、D四个血清型
临床分离株：A、D型
致病性
隐球菌病（cryptococcosis）
感染：外源性（多数）
内源性（少数）
致病物质：荚膜多糖
感染途径：呼吸道
所致疾病：肺部感染
播散感染：最易侵犯CNS，预后不良
微生物学检查法
1.直接镜检
墨汁涂片见圆形菌体、透明的肥厚荚膜
2.分离培养
培养：沙保弱培养基
菌落：酵母型菌落，蜡样光泽，乳白、
奶油色，后桔黄色
镜检：圆形或卵圆形菌体，无假菌丝
3.其他检查法
尿素酶试验、胶乳凝集试验、荧光抗体
新生隐球菌菌落新生隐球菌形态
（1000×）。
新生隐球菌的致病机理41页PPT
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
新生隐球菌的致Байду номын сангаас机理
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
隐球菌病ppt课件
服）联合氟胞嘧啶（100mg/kg.d，分4次口服）（B-III) ◆不推荐鞘内注射AmBd，并且通常没有必要（C-III) ◆持续感染以及复发的患者，建议测定最初分离菌株的MIC
46
治疗隐球菌病并发症
• 复发
◆重新开始诱导治疗（参见“持续感染”）（B-III) ◆测定复发菌株的敏感性（参见“持续感染”）（B-III) ◆补救的巩固治疗（B-III)
53
54
55
56
57
• 初始诱导治疗采用氟康唑，可能会发生原 发及继发性耐药，建议检测MIC（B-III)
• 孢子呈圆形或椭圆形，直径4-6um ，个别 可达20um
• 菌体外围形成荚膜（具致病性，不被墨汁 所染色）
• 不形成菌丝及假菌丝，芽殖，不产生子囊 孢子
• 荚膜的主要成分荚膜多糖
◆确定血清型 ◆与其毒力、致病性及其免疫性相关
5
经由腰椎穿刺的脑脊液,包围新型隐球菌的白色荚膜使新型隐球 菌突出,它的中央是一圆的白的核。这里可见两个隐球菌。
11
中枢神经系统隐球菌病
• 数周或数月后可出现颅内压增高症状，如 颈项强直，脑膜刺激征阳性；
• 各种眼部征象25% （有视力模糊、眩晕、 复视、畏光、眼球麻痹、震颤、弱视等）。 常伴眼底水肿及视网膜渗出性改变。
12
中枢神经系统隐球菌病
• 10%无症状表现； • 15%有神经系统体征出现； • 10%--40%无神经系统症状表现； • 20%检测脑脊液无异常； • 25%产生脑膜刺激症状； • 40%有精神改变； • 65%有发热； • 75%有头痛。
– 慢性毒性
• 最严重的是肾损伤，大剂量时可致肾小管坏死、钙化。
– 可以补充钠盐如用生理盐水输注，并定期监测肾功能以及水 电解质平衡
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治疗隐球菌病并发症
• 复发
◆重新开始诱导治疗（参见“持续感染”）（B-III) ◆测定复发菌株的敏感性（参见“持续感染”）（B-III) ◆补救的巩固治疗（B-III)
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• 初始诱导治疗采用氟康唑，可能会发生原 发及继发性耐药，建议检测MIC（B-III)
• 孢子呈圆形或椭圆形，直径4-6um ，个别 可达20um
• 菌体外围形成荚膜（具致病性，不被墨汁 所染色）
• 不形成菌丝及假菌丝，芽殖，不产生子囊 孢子
• 荚膜的主要成分荚膜多糖
◆确定血清型 ◆与其毒力、致病性及其免疫性相关
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经由腰椎穿刺的脑脊液,包围新型隐球菌的白色荚膜使新型隐球 菌突出,它的中央是一圆的白的核。这里可见两个隐球菌。
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中枢神经系统隐球菌病
• 数周或数月后可出现颅内压增高症状，如 颈项强直，脑膜刺激征阳性；
• 各种眼部征象25% （有视力模糊、眩晕、 复视、畏光、眼球麻痹、震颤、弱视等）。 常伴眼底水肿及视网膜渗出性改变。
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中枢神经系统隐球菌病
• 10%无症状表现； • 15%有神经系统体征出现； • 10%--40%无神经系统症状表现； • 20%检测脑脊液无异常； • 25%产生脑膜刺激症状； • 40%有精神改变； • 65%有发热； • 75%有头痛。
– 慢性毒性
• 最严重的是肾损伤，大剂量时可致肾小管坏死、钙化。
– 可以补充钠盐如用生理盐水输注，并定期监测肾功能以及水 电解质平衡
新型隐球菌脑膜炎PPT课件
有并发症
对于有神经系统并发症的 患者，需延长诱导治疗至6周， 其中包括LF-AmB治疗至少4周。 然后开始氟康唑巩固治疗8周
治疗
ABLC， AmB脂 质复合体
器官移植受者
LFAmB， AmB含 脂制剂
中枢神经系统感染
AmB脂质体或ABLC联合氟 胞嘧啶诱导治疗至少2周，序 贯氟康唑口服治疗8周，然后 氟康唑口服治疗6～12个月。 如果诱导治疗未包含氟胞嘧 啶，LFAmB诱导治疗至少4～6 周，高真菌负荷量和复发的 患者，可以给予AmB脂质体
辅助检查
胸CT及ECG 血
头MR
右基底节区 脑梗塞
双肺感染 ECG：左室肥 大伴劳损
血沉：64mm/h 血红蛋白： 110g/l B型钠尿： 297pg/ml
THANK
YOU
SUCCESS
2019/4/15
脑脊液
24/9
未找到新型隐球菌
找到新型隐球菌
30/9
30/9
HIV+,梅毒+
病情进展及转归
LOGO
新型隐球菌脑膜炎
神经内科3
涂丽
主要内容
1 2 3
病原学与流行病学
发病机制 临床表现与实验室检查
4
诊断与治疗
Company Logo
新型隐球菌脑膜炎
病原学
新型隐球菌属于隐球菌属，该属种类较多 ，自然界广泛分布，鸽粪中大量存在，也存 在于人体的体表、口腔、粪便中
圆形酵母样细胞，外周有肥厚胶质样荚膜， 墨汁染色后可在黑色的背景中见到圆形或卵 圆形透亮菌体，芽生繁殖
其荚膜由多糖构成，根据其抗原性可分A、B 、C、D四个血清型，临床多见A和D型
传播途径
鸽粪水果 土壤等
新生隐球菌的致病机理
在宿主细胞内的生存和繁殖
生存
新生隐球菌进入细胞内后，能在细胞内特定的微环境中生存 并适应。
繁殖
新生隐球菌在细胞内以二分裂的方式进行繁殖，并可形成假 菌丝。
逃逸宿主免疫防御机制
免疫逃避
新生隐球菌能通过多种机制逃逸宿主 的免疫防御，如抑制吞噬细胞活性、 抑制炎症反应等。
免疫原性
新生隐球菌具有较低的免疫原性，使 宿主难以产生有效的免疫应答。
鉴别诊断
其他真菌感染
新生隐球菌感染需要与其他真菌感染进 行鉴别诊断，如念珠菌、曲霉菌等。
ห้องสมุดไป่ตู้
VS
其他疾病
新生隐球菌感染需要与其他可能导致类似 症状的疾病进行鉴别诊断，如结核病、脑 膜炎等。
05
新生隐球菌的抗药性和 治疗策略
抗药性的现状和产生机制
抗药性现状
新生隐球菌对传统抗真菌药物的抗药性越来越普遍，导致治疗难度增加，患者死亡率上升。
重度感染
03
重度感染者可能出现呼吸急促、紫绀、低血压等严重症状，甚
至可能导致死亡。
诊断方法
血液检查
血液检查可以检测新生隐球菌抗原和抗体，有助于早 期诊断。
脑脊液检查
对于疑似中枢神经系统感染的患者，脑脊液检查可以 检测新生隐球菌抗原和抗体。
组织病理学检查
通过活检或手术获取病变组织，进行组织病理学检查， 可以确诊新生隐球菌感染。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
改进治疗策略
针对新生隐球菌的抗药性，需要改进现有的 治疗策略，包括开发新的抗真菌药物、优化 现有药物的用药方案以及提高药物的靶向性 等。
展望
随着对新生隐球菌致病机理的深入了解，未 来有望开发出更加有效的治疗方法，为患者 带来更好的治疗前景。同时，加强抗药性监 测和耐药机制研究对于控制新生隐球菌的传 播和抗药性发展也具有重要意义。
隐球菌临床推广ppt
手术治疗
对于部分严重感染或药物治疗无效的患者，可能需要通过手术来清除感染灶或 进行引流。手术治疗通常作为辅助治疗手段，与药物治疗联合使用。
存在问题与局限性
01
药物副作用
抗真菌药物在长期使用过程中可能导致一系列副作用，如肝毒性、肾毒
性、胃肠道反应等，影响患者的生活质量和治疗效果。
02
药物耐药性
随着抗真菌药物的广泛使用，部分隐球菌逐渐产生耐药性，导致治疗效
完善相关法规和政策支持
制定隐球菌相关法规
建立健全隐球菌相关法规，为 隐球菌的临床推广提供法律保 障。
加大政策支持力度
出台相关政策，鼓励医疗机构 和医生积极开展隐球菌的临床 研究和推广工作。
完善医保政策
将隐球菌相关疾病纳入医保范 围，减轻患者经济负担，提高 患者就医积极性。
加强患者宣传教育工作
01
推动医学科技进步
80%
促进医学研究
隐球菌作为一种重要的病原菌， 其临床推广有助于促进相关医学 领域的研究和发展。
100%
推动新技术应用
随着隐球菌临床治疗的推广，将 推动新技术在医学领域的应用和 发展，如基因测序技术、生物信 息学等。
80%
提高医学诊疗水平
通过隐球菌的临床应用和推广， 将有助于提高医学诊疗水平和医 疗服务质量，为更多患者提供更 好的医疗服务。
分类
隐球菌主要分为新生隐球菌和格特隐球菌两种。其中，新生隐球 菌是最常见的致病菌种，可引起全身各部位的感染，而格特隐球 菌则主要引起肺部和中枢神经系统感染。
发病原因及机制
发病原因
隐球菌病的发生与个体免疫力密切相关。免疫力低下的个体，如艾滋病患者、糖 尿病患者、长期使用免疫抑制剂的患者等，更容易感染隐球菌。此外，环境因素 如气候、地理位置等也可能影响隐球菌病的发生。
对于部分严重感染或药物治疗无效的患者，可能需要通过手术来清除感染灶或 进行引流。手术治疗通常作为辅助治疗手段，与药物治疗联合使用。
存在问题与局限性
01
药物副作用
抗真菌药物在长期使用过程中可能导致一系列副作用，如肝毒性、肾毒
性、胃肠道反应等，影响患者的生活质量和治疗效果。
02
药物耐药性
随着抗真菌药物的广泛使用，部分隐球菌逐渐产生耐药性，导致治疗效
完善相关法规和政策支持
制定隐球菌相关法规
建立健全隐球菌相关法规，为 隐球菌的临床推广提供法律保 障。
加大政策支持力度
出台相关政策，鼓励医疗机构 和医生积极开展隐球菌的临床 研究和推广工作。
完善医保政策
将隐球菌相关疾病纳入医保范 围，减轻患者经济负担，提高 患者就医积极性。
加强患者宣传教育工作
01
推动医学科技进步
80%
促进医学研究
隐球菌作为一种重要的病原菌， 其临床推广有助于促进相关医学 领域的研究和发展。
100%
推动新技术应用
随着隐球菌临床治疗的推广，将 推动新技术在医学领域的应用和 发展，如基因测序技术、生物信 息学等。
80%
提高医学诊疗水平
通过隐球菌的临床应用和推广， 将有助于提高医学诊疗水平和医 疗服务质量，为更多患者提供更 好的医疗服务。
分类
隐球菌主要分为新生隐球菌和格特隐球菌两种。其中，新生隐球 菌是最常见的致病菌种，可引起全身各部位的感染，而格特隐球 菌则主要引起肺部和中枢神经系统感染。
发病原因及机制
发病原因
隐球菌病的发生与个体免疫力密切相关。免疫力低下的个体，如艾滋病患者、糖 尿病患者、长期使用免疫抑制剂的患者等，更容易感染隐球菌。此外，环境因素 如气候、地理位置等也可能影响隐球菌病的发生。
内科学_各论_疾病：隐球菌病_课件模板
糖 明显减低 多数在20～40mg/dl 正常
蛋白质
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
诊断：
菌 无
隐球菌抗原检测 阳性 阴性 阴性
脑电图 弥漫性异常 弥漫性异常
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
诊断：
皮肤隐球菌病借损害特征、病理及真 菌培养而与粉刺、传染性软疣、皮肤结核、 孢子丝菌病或恶性肿瘤相鉴别。
2.肺部隐球菌病 应与肺炎双球菌引 起的大叶性肺炎、肺结核及肺念珠菌病、 肺曲霉病等肺部感染疾病相鉴别。
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
乳白色，日久呈粘液 状。
根据其荚膜抗原 性的不同，新型隐球 菌有A、B、C和D四个 血清型。国内以A型 居多，次为B型和D型， 未见C型。荚膜抗原 能溶解在脑脊液、血 清及尿中，可用特异
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
株为强。 【发病机制】 存在于土壤及鸽粪中的隐球菌，可随
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
治疗：
有血小板及白细胞减少。 ③电解质紊乱：其中低钾血症最多。 ④静脉炎：见于多次注射后的静脉。
孕妇禁用本药。 (2)两性霉素B脂质体：减少了与人体
细胞膜上胆固醇的结合，却增加了对真菌 外膜上麦角固醇的结合，且脂质体中的两 性霉素B缓慢释放进人体内，故降低了两 性霉素B的毒副作用
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
也可在血管周围间隙中增殖并在灰质内形 成许多肉眼可见的囊肿，囊肿内充满隐球 菌。
皮肤病变有肉芽肿及胶质性损害两种 类型，后者的组织反应较少，内含大量隐 球菌。
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
蛋白质
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
诊断：
菌 无
隐球菌抗原检测 阳性 阴性 阴性
脑电图 弥漫性异常 弥漫性异常
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
诊断：
皮肤隐球菌病借损害特征、病理及真 菌培养而与粉刺、传染性软疣、皮肤结核、 孢子丝菌病或恶性肿瘤相鉴别。
2.肺部隐球菌病 应与肺炎双球菌引 起的大叶性肺炎、肺结核及肺念珠菌病、 肺曲霉病等肺部感染疾病相鉴别。
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
乳白色，日久呈粘液 状。
根据其荚膜抗原 性的不同，新型隐球 菌有A、B、C和D四个 血清型。国内以A型 居多，次为B型和D型， 未见C型。荚膜抗原 能溶解在脑脊液、血 清及尿中，可用特异
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
株为强。 【发病机制】 存在于土壤及鸽粪中的隐球菌，可随
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
治疗：
有血小板及白细胞减少。 ③电解质紊乱：其中低钾血症最多。 ④静脉炎：见于多次注射后的静脉。
孕妇禁用本药。 (2)两性霉素B脂质体：减少了与人体
细胞膜上胆固醇的结合，却增加了对真菌 外膜上麦角固醇的结合，且脂质体中的两 性霉素B缓慢释放进人体内，故降低了两 性霉素B的毒副作用
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
病因：
也可在血管周围间隙中增殖并在灰质内形 成许多肉眼可见的囊肿，囊肿内充满隐球 菌。
皮肤病变有肉芽肿及胶质性损害两种 类型，后者的组织反应较少，内含大量隐 球菌。
内科学疾病部分：隐球菌病>>>
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9
Mouse model of cryptococcosis
10
血脑屏障模式图
11
病原体穿越血脑屏障的方式
1
2
3
ECM
1: 细胞内侵袭 2: 细胞旁通过－打开紧密连接 3: 木马机制：通过巨嗜细胞穿越
病原体 巨嗜细胞 血脑屏障 紧密连接
12
检测新生隐球菌通过血脑屏障的体外模型
新生隐球菌
血液侧 脑侧
20
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
小鼠大脑皮质Bcl-2在 不同时相点的比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 凋亡细胞比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 Bax比较
21
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
22
初步结论
新生隐球菌入血后到达血脑屏障， 通过相关细胞因子如IL-6和VEGF等作用引起 脑微血管内皮细胞的凋亡， 紧密连接开放，细胞间隙增大，并可能使血脑 屏障完整性被破坏， 穿越血脑屏障，感染宿主脑组织
CHANGZHENG HOSPITAL, SHANGHAI
1
隐 球 菌 病 的 致 病 菌
2
C
C.
3
MATa X MATa
Life Cycle
Mature basidia
a
Conjugation
Dikaryotic hyphae
4
Cryptococcosis: Route of infection and dissemination
7
新生隐球菌致病机理中 几个关键问题
新生隐球菌是如何穿过血脑屏障后进入中枢 神经系统的？ 为什么新生隐球菌易于感染中枢神经系统？ 新生隐球菌进入机体的途径是否只有吸入肺 部后入血一个？
8
新生隐球菌通过血脑屏障的机制研究
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立血脑屏障 模型，观察新生隐球菌对HUVEC的影响 新生隐球菌静脉感染C57BL/6小鼠后，检测 大脑皮质内新生隐球菌感染情况，大脑皮质 内细胞凋亡及大脑皮质中特异蛋白的表达
紧密连接胞质附着蛋白 ZO-1 血管渗透因子VEGF
IL-6
HUVEC 紧密连接相关蛋白表达
19
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
大脑皮质透射电镜 A：C group B：24h C：72h D：C group E：24h F：72h
大脑皮质PAS染色 A：C group B：CTX group C：0.5h D：2h E：6h F：12h G：24h H：72h
实验组蛋白二维凝胶电泳图谱
对照组蛋白二维凝胶电泳图谱
26
实验组与对照组细胞蛋白表达差异
共找到可信差异表达蛋白点19个 5个蛋白点仅在对照组细胞中表达 3个蛋白点仅在实验组细胞中表达 10个蛋白点在实验组细胞中表达降低 1个蛋白点在实验组细胞中表达升高
27
差异表达蛋白点肽指纹谱鉴定
S100A10 Prx Ⅰ Prohibitin (PHB) HSP27 Malate dehydrogenase CacyBP PSA7_HUMAN cofilin
Filterinsert
HBMEC 单层 半通透膜
13
新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
新生隐球菌侵袭血脑屏障EC细胞的凋亡率
14
新生隐球菌侵袭血脑屏障透射电镜
A: 对照组 B: 0.5h C: 0.5h D: 0.5h E: 0.5h F: 6h G: 6h H: 12h
Brain
Blood stream
5
隐球菌病
病原菌: 易感因素 :
感染途径 : 易感器官： 预后 :
分布 :
新生隐球菌
HIV, 淋巴瘤, 激素治疗, 器官移植 原发性CD4 淋巴细胞减少 吸入，皮肤，胃肠道？ 脑、肺、皮肤、骨和关节
未治疗的脑膜炎死亡率为100% 世界范围
6
新生隐球菌的毒性因子
荚膜 黑素 磷脂酶 37 ℃下生长良好
28
隐球菌嗜中枢性可能的相关机制
增强细胞骨架活动能力，促进细胞胞吞胞吐活动 减少HUVEC对氧应激的耐受能力，细胞损伤增 加，增殖能力下降 促进细胞凋亡 影响了HUVEC正常的细胞内信号转导过程 抑制细胞能量代谢
29
皮肤隐球菌感染的研究
小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型的建立 宿主免疫状态、隐球菌变种和荚膜与皮肤 隐球菌感染的关系 小鼠隐球菌皮肤感染后是否发生播散 人角质形成细胞株－HaCat体外与新生 隐球菌相互作用
15
新生隐球菌侵袭血脑屏障EC扫描电镜结果
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
16
HUVEC Bcl-2(抑凋亡基因)的表达被抑制
A：对照组 B：2h C：6h：D：12h
17
HUVEC Bax (凋亡基因)的表达被启动
A：对照组 B：2h C：6h：D：12h
18
新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响
23
隐球菌脑膜炎发病机制
新生隐球菌的跨膜作用 穿越脑微血管内皮细胞紧密连接 脑微血管内皮细胞凋亡 其它相关因子导致的通透性的增加
24
新生隐球菌嗜中枢性的研究
利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与 血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋 白质谱的变化 筛选差异表达蛋白，并在基因的转录层 面进行验证
25
血管内皮细胞总蛋白差异表达谱
30
31
小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型
传染性软疣样皮损 溃疡
结节样皮损
PAS染色
32
小鼠隐球菌感染后的血行播散
免疫抑制与免疫正常小鼠各个脏器及血液真菌培养 均为阴性 免疫抑制小鼠血清乳胶凝集试验阳性 乳胶凝集试验是目前比较成熟的技术，在去除试验 本身因素影响后，其阳性率接近100％ 免疫严重受损的患者，皮肤局部创伤后大剂量接种 隐球菌还是可能引起播散性的隐球菌感染
10%
5%
0%
0.5
1
2
4
时间：h
cap64 B3501 ATCC32609
新生隐球菌对角质形成细胞活力的影响
30
25
20
15
10
5
0
0.5
1
2
时间：h
cap64 B3501 ATCC32609 空白对照 killed-B3501
通过率
调亡率：％
新生隐球菌对角质形成细胞的时间通过率
33
隐球菌皮肤致病性中的影响因素
免疫抑制的作用可以使隐球菌感染皮损出现 时间提前，感染加重。 无荚膜株与父代有荚膜株在皮肤的致病力方 面没有明显差别 两个变种之间的致病力没有显著差别
34
新生隐球菌对角质形成细胞的时间粘附率
35%
30%
25%
20%
15%
Mouse model of cryptococcosis
10
血脑屏障模式图
11
病原体穿越血脑屏障的方式
1
2
3
ECM
1: 细胞内侵袭 2: 细胞旁通过－打开紧密连接 3: 木马机制：通过巨嗜细胞穿越
病原体 巨嗜细胞 血脑屏障 紧密连接
12
检测新生隐球菌通过血脑屏障的体外模型
新生隐球菌
血液侧 脑侧
20
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
小鼠大脑皮质Bcl-2在 不同时相点的比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 凋亡细胞比较
不同时相点的小鼠大脑皮质 Bax比较
21
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
22
初步结论
新生隐球菌入血后到达血脑屏障， 通过相关细胞因子如IL-6和VEGF等作用引起 脑微血管内皮细胞的凋亡， 紧密连接开放，细胞间隙增大，并可能使血脑 屏障完整性被破坏， 穿越血脑屏障，感染宿主脑组织
CHANGZHENG HOSPITAL, SHANGHAI
1
隐 球 菌 病 的 致 病 菌
2
C
C.
3
MATa X MATa
Life Cycle
Mature basidia
a
Conjugation
Dikaryotic hyphae
4
Cryptococcosis: Route of infection and dissemination
7
新生隐球菌致病机理中 几个关键问题
新生隐球菌是如何穿过血脑屏障后进入中枢 神经系统的？ 为什么新生隐球菌易于感染中枢神经系统？ 新生隐球菌进入机体的途径是否只有吸入肺 部后入血一个？
8
新生隐球菌通过血脑屏障的机制研究
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立血脑屏障 模型，观察新生隐球菌对HUVEC的影响 新生隐球菌静脉感染C57BL/6小鼠后，检测 大脑皮质内新生隐球菌感染情况，大脑皮质 内细胞凋亡及大脑皮质中特异蛋白的表达
紧密连接胞质附着蛋白 ZO-1 血管渗透因子VEGF
IL-6
HUVEC 紧密连接相关蛋白表达
19
新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究
大脑皮质透射电镜 A：C group B：24h C：72h D：C group E：24h F：72h
大脑皮质PAS染色 A：C group B：CTX group C：0.5h D：2h E：6h F：12h G：24h H：72h
实验组蛋白二维凝胶电泳图谱
对照组蛋白二维凝胶电泳图谱
26
实验组与对照组细胞蛋白表达差异
共找到可信差异表达蛋白点19个 5个蛋白点仅在对照组细胞中表达 3个蛋白点仅在实验组细胞中表达 10个蛋白点在实验组细胞中表达降低 1个蛋白点在实验组细胞中表达升高
27
差异表达蛋白点肽指纹谱鉴定
S100A10 Prx Ⅰ Prohibitin (PHB) HSP27 Malate dehydrogenase CacyBP PSA7_HUMAN cofilin
Filterinsert
HBMEC 单层 半通透膜
13
新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
新生隐球菌侵袭血脑屏障EC细胞的凋亡率
14
新生隐球菌侵袭血脑屏障透射电镜
A: 对照组 B: 0.5h C: 0.5h D: 0.5h E: 0.5h F: 6h G: 6h H: 12h
Brain
Blood stream
5
隐球菌病
病原菌: 易感因素 :
感染途径 : 易感器官： 预后 :
分布 :
新生隐球菌
HIV, 淋巴瘤, 激素治疗, 器官移植 原发性CD4 淋巴细胞减少 吸入，皮肤，胃肠道？ 脑、肺、皮肤、骨和关节
未治疗的脑膜炎死亡率为100% 世界范围
6
新生隐球菌的毒性因子
荚膜 黑素 磷脂酶 37 ℃下生长良好
28
隐球菌嗜中枢性可能的相关机制
增强细胞骨架活动能力，促进细胞胞吞胞吐活动 减少HUVEC对氧应激的耐受能力，细胞损伤增 加，增殖能力下降 促进细胞凋亡 影响了HUVEC正常的细胞内信号转导过程 抑制细胞能量代谢
29
皮肤隐球菌感染的研究
小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型的建立 宿主免疫状态、隐球菌变种和荚膜与皮肤 隐球菌感染的关系 小鼠隐球菌皮肤感染后是否发生播散 人角质形成细胞株－HaCat体外与新生 隐球菌相互作用
15
新生隐球菌侵袭血脑屏障EC扫描电镜结果
A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h
16
HUVEC Bcl-2(抑凋亡基因)的表达被抑制
A：对照组 B：2h C：6h：D：12h
17
HUVEC Bax (凋亡基因)的表达被启动
A：对照组 B：2h C：6h：D：12h
18
新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响
23
隐球菌脑膜炎发病机制
新生隐球菌的跨膜作用 穿越脑微血管内皮细胞紧密连接 脑微血管内皮细胞凋亡 其它相关因子导致的通透性的增加
24
新生隐球菌嗜中枢性的研究
利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与 血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋 白质谱的变化 筛选差异表达蛋白，并在基因的转录层 面进行验证
25
血管内皮细胞总蛋白差异表达谱
30
31
小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型
传染性软疣样皮损 溃疡
结节样皮损
PAS染色
32
小鼠隐球菌感染后的血行播散
免疫抑制与免疫正常小鼠各个脏器及血液真菌培养 均为阴性 免疫抑制小鼠血清乳胶凝集试验阳性 乳胶凝集试验是目前比较成熟的技术，在去除试验 本身因素影响后，其阳性率接近100％ 免疫严重受损的患者，皮肤局部创伤后大剂量接种 隐球菌还是可能引起播散性的隐球菌感染
10%
5%
0%
0.5
1
2
4
时间：h
cap64 B3501 ATCC32609
新生隐球菌对角质形成细胞活力的影响
30
25
20
15
10
5
0
0.5
1
2
时间：h
cap64 B3501 ATCC32609 空白对照 killed-B3501
通过率
调亡率：％
新生隐球菌对角质形成细胞的时间通过率
33
隐球菌皮肤致病性中的影响因素
免疫抑制的作用可以使隐球菌感染皮损出现 时间提前，感染加重。 无荚膜株与父代有荚膜株在皮肤的致病力方 面没有明显差别 两个变种之间的致病力没有显著差别
34
新生隐球菌对角质形成细胞的时间粘附率
35%
30%
25%
20%
15%