Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法
安捷伦液相色谱使用问题与解决方案
安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案一．什么原因导致液相色谱仪压力过高？可能的原因：1. 排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。
2. 压力上限设置太低。
3. 压力传感器堵塞。
4. 建议的措施：1. 打开排气阀。
如果压力依然很高，则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。
2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。
3. 检查系统内的堵塞部位。
（如下所述）要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障：将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。
①. 如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。
A 如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。
请进行更换。
B 如果压力仍然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。
②. 如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。
如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。
A 如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。
请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。
B 如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。
二．改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。
最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。
在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。
对于内径为 4.6mm 的色谱柱，10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时，塔板数最多三．如何避免峰拖尾和峰分叉？与色谱柱相关的原因及处理方法1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱2 色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片3 色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙4 保护柱失效;处理方法:更换保护柱5 样品分布差;处理方法:改进色谱柱进口的设计6 与色谱柱无关的原因：柱外体积大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲液浓度）改变。
安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案
安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答气相色谱仪解决方案在利用安捷伦气相色谱仪测测定物质时，常常回碰到一些问题，导致试验不能正常进行，下面我们来看看这些问题该怎么去解决一、有什么方法能替代液液萃取？固相微萃取、加速溶剂提取、微波萃取都是现在开展比较广泛的前处理方法二、色谱柱老化一般怎么处理好一些？1、程序升温老化效果较好，多做几个来回；2、柱子确定要接上载气；3、不要接检测器一端；4、紧密柱子zui高使用温度，应在低于此温度20度以下老化三、安捷伦气相色谱仪气相进样溶剂可以选择MtBE吗？与丙酮相比哪个更好呢？可以的，只是要看你的目标物在那个溶剂系统里面溶解性更强些，基质效应更小。
四、pgm是什么意思？Pgm是“program”的缩写，指的是这个柱子在程序升温的情况下可以短时间保持在这个温度。
五、安捷伦气相色谱仪酒类样品进样是顶空进样吗？不愿定，这个要看对酒类中什么样的物质感喜好，假如是沸点较低的挥发性有机物，那用顶空进样就可以得到较好的试验重复性。
六、安捷伦气相色谱仪标样溶于甲醇，进样时用丙酮稀释后，峰拖尾，且基线较高，有什么方法可以改善吗？是用正己烷溶解的？估量是不分流进样，可以调大隔垫吹扫的流量七、ecd一般用什么试剂溶解标样好一些？是不是甲醇乙腈丙酮一类对ecd进样不好不要用电负性较强的溶剂，甲醇、乙腈等的确要尽量少用，但丙酮还好。
八、乙酸乙酯对ecd合适吗，还有甲苯、正己烷、环己烷，虽然正己烷对ecdzui合适，但好多农药标样在正己烷溶解度低，只能溶解在强极性溶剂中，在这种情况有需要ecd检测怎么配标样比较好？对于ECD，尽量不要用电负性大的溶剂，但乙酸乙酯算中等极性，在某些情况下还是可以考虑使用的。
九、NPD是不是也对强极性试剂也是不太好？是的，特别是卤族溶剂，简单导致铷珠激发淬灭，所以尽量避开使用。
十、安捷伦气相色谱仪进样溶剂对响应影响不大吗？溶剂对响应的影响紧要体现在对目标物的溶解度上，在对色谱系统污染或损害小的基础上，选择溶解度较大的溶剂。
安捷伦液相色谱仪常见故障排除
安捷伦液相色谱仪常见故障排除液相色谱仪常见故障排除HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案随机性, 污染物积聚冲冲洗柱;净化样品;使用HPLC 级溶剂连续性, 检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000 小时) 基线噪声大偶然性, 外部电气干扰使用LC 系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤滤芯堵塞器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱双峰进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部使用更高负载量的固定相增加色谱柱柱上样品超载内径减少样品量单峰, 存在干扰性组分净化样品;预分离开始出双峰请参见双峰减少接头的数量确保进样器密封垫紧存在未扫的死体积密确保接头正确固定拖尾峰碱性化合物, 硅醇相互作用换成聚合物固定相使用更强的流动相或添加竞争碱(例如，碱性物质, 硅醇相互作用三甲胺硅胶基, 柱降解使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样峰展宽检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器池容积过大使用尽可能小的池容积(系统中无热交for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and the day-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthen source management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadres of the换器)注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相单向阀泄漏更换单向压力波动泵密封垫泄漏更换泵密封微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相压力渐增水/有机系统, 缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性保留超出总渗透体积体积排阻, 特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂柱温不断变化使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求，或等确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 度洗脱流动相起变化个柱容积通过色谱柱减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖流动相组分选择性蒸发好;制备新的流动相保留时间不断变动缓冲能力不足用>20 mM 浓度的缓冲液保证梯度系统输送恒定组成;与手动制在线流动相混合不一致备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状最初几次进样—吸附在活性部位态流速在增加检查泵以确保正确;否则需重调保留时间逐渐缩短柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间解决液流中的漏液现象，更换泵密封垫，流速在减慢检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间保留时间逐渐增加流动相组成在变化确保流动相容器盖好硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料灵敏度问题峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内 for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and the day-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied therating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthen source management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadres of the最初几次进样—样品在样品池或柱中被用浓样品处理样品池/柱吸附自动进样器流路阻塞自动进样器流路阻塞检查流量情况，确保无阻塞现象进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品用内标法在制备样品，优化样品制备方在样品制品时有关的样品流失法柱平衡时间减慢(离长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂子对现象) 液相基线噪音问题的排查思路常见色谱故障——基线噪音液相常见压力问题的原因分析1. 常见色谱故障——压力波动可能的原因:, 溶剂进口过滤芯堵塞, 溶剂未脱气, 泵的密封垫老化, 出口单向阀失效, 主动阀失效最常见的原因是:泵内有气泡for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major projectopportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. 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Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadresof the2. 常见色谱故障——压力过低可能的原因:, 溶剂进口过滤芯堵塞 , 连接管路泄漏或其它备件(泵头密封垫), 溶剂或流速改变, 主动阀失灵, 四元比例阀失灵, 单向出口阀失灵, 色谱柱失效(固定相流失)3. 常见色谱故障——压力过高可能的原因:, 柱子进口过滤芯被污染 , PURGE阀过滤芯被污染 , 色谱柱被污染, 连接管路，尤其是针座毛细管堵塞, 进样器旋转密封阀被堵塞, 进样针或针座被阻塞 for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of developmentof village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. 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Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and theday-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthensource management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadresof the。
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
Agilent-HPLC使用过程中常见问题及解决方法
Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法一、如何处理HPLC 中的盐带来的问题？很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。
建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。
泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。
下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。
1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。
上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。
2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。
且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。
当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。
如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。
如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。
4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界，工作时，它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦，使用一段时间后，会有一定的磨损，因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。
安捷伦气相色谱仪分析中常见故障其排出方法 气相色谱仪解决方案
安捷伦气相色谱仪分析中常见故障其排出方法气相色谱仪解决方案对一位色谱分析工来说,娴熟把握安捷伦气相色谱仪的结构原理及各部分的作用是很紧要的。
安捷伦气相色谱仪的基本构造有两部分，即分析单元和显示单元。
前者紧要包括气源及掌控计量装置﹑进样装置﹑恒温器和色谱柱。
后者紧要包括检定器和自动记录仪。
安捷伦气相色谱仪的常见故障及排出方法一、进样后不杰出谱峰的故障安捷伦气相色谱仪在进样后检测信号没有变化，仪不出峰，输出仍为直线。
碰到这种情况时，应按从样品进样针、进样口到检测器的次序逐一检查。
1、首先检查注射器是否堵塞，假如没有问题，2、再检查进样口和检测器的石墨垫圈是否紧固、不漏气，3、然后检查色谱柱是否有断裂漏气情况，4、最后察看检测器出口是否畅通。
5、检测器出口的畅通是很紧要的，有人在工作中会碰到这样的问题：前一天仪器工作还一切正常，第二天开机后却无响应峰信号。
检查进样口、注射器、垫圈和色谱柱都正常，可就是不出峰，无意中发觉进样口柱头压达不到设定值，总是偏高，这时才怀疑是ECD 检验器出口不畅通。
由于ECD的排放物有确定的放射性，所以ECD 出口是引到室外的。
当时是秋冬之交，雨水进入到ECD排出口之后冻住了，因此造成仪器ECD的出口堵塞，柱头压居高不下，气体在气路中无法流动，也就无法载样品到检测器，所以不出峰。
二、安捷伦气相色谱仪基线问题气相色谱基线波动、飘移都是基线问题，基线问题可使测量误差增大，有时甚至会导致仪器无法正常使用。
1、碰到基线问题时应先检查仪器条件是否有更改，近期是否新换气瓶及设备配件。
2、假如有更换或条件有更改，则要先检查基线问题是不是由这些更改造成的，一般来说，这种变化往往是产生基线问题的原因。
有些人在工作中就碰到过这种情形：新载气纯度不够，换过载气之后，基线渐渐上升（由于载气净化管的原因，基线不是立刻变化的）。
第二天开机之后，基线特别高，并伴有基线猛烈抖动，全部峰都湮没在噪音中，无法检测。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
安捷伦色谱仪使用过程中常见问题和排除
实验室精英前沿项目成果厂商动态行业活动国内国际食品安全生物医药能源环境材料行业数据其它AgilentHPLC使用过程中常见问题及解决方法2008-01-20 11:23原文出处：Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法关键词：agilent安捷伦维护hplc液相色谱一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题？很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。
建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。
泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。
下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。
1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。
上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。
2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。
且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。
当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。
如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。
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Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法一、如何处理HPLC 中的盐带来的问题？很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。
建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。
泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。
下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。
1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。
上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。
2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。
且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。
当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。
如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。
如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。
4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界，工作时，它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦，使用一段时间后，会有一定的磨损，因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。
更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。
有划痕的活塞将导致轻度渗漏，并降低密封垫的使用寿命。
应尽早更换有划痕的活塞。
柱塞密封圈有反相和正相之分，反相密封圈为黑色，石墨Teflon材质；正相呈橘黄色，聚乙烯材质，更适用于正相溶剂。
1100/1200标配的是反相密封圈，正相应用时，需要更换为正相密封圈。
盐溶液对柱塞密封圈的寿命有着很大的影响，使用有盐溶液作为流动相的体系时，要注意盐溶液通道的清洗，千万不能让盐溶液在系统中过夜，常常一个晚上析出的盐粒就会造成系统堵塞，对泵产生较大的损害。
为了延长密封圈和柱塞杆的寿命，在经常使用较高浓度的缓冲盐溶液的情况下，建议安装柱塞清洗附件。
柱塞清洗的原理在于：柱塞泵在工作时，虽然有密封圈密封，但由于毛细作用，还是会有一些流动相渗入到密封圈与柱塞杆之间。
如果流动相中有缓冲盐，当柱塞杆壁上的溶剂挥发掉后，极细小的盐粒留了下来。
这样的盐粒就象砂纸一样磨损着柱塞杆和柱塞密封圈，会大大降低柱塞杆和密封圈的寿命。
柱塞清洗附件是在柱塞杆的中间加入了一个可以有水流过的腔体，通过水不断的流动，就可以带走渗进来的盐溶液，防止了盐粒的析出，保护了柱塞杆和柱塞密封圈。
通常我们往柱塞清洗的水里加入10％的异丙醇，可以减小水的张力，便于清洗液流动，并且抑制长菌。
但有一点要注意的是，装有柱塞清洗附件的泵头，清洗液流量可以很小（如没分钟几滴），但一定不要让清洗通道里干涸，如果水流光了，应该尽快换上新的溶液。
否则会减少柱塞杆和密封圈的寿命。
5.主动阀的维护主动阀是流动相进入泵体的门户。
如果我们发现流量为零，流量不稳，或泵压波动特别大，常常都是因为主动阀漏或是堵了。
主动阀里面装有一个小的单向阀芯，我们将其取下，在异丙醇内超声清洗一下，一般能解决这样的问题。
如果超声不能解决问题的话，可以更换该阀芯。
对于经常使用缓冲盐体系的用户，手头常备一个这样的阀芯是非常有用的，往往可以及时解决问题，大大的降低停机带来的损失。
6．出口阀的维护出口阀内部也有，如果有盐粒或其它杂质渗入其中，也会造成出口阀的堵或漏，常常表现为压力的异常波动。
通常我们可以用异丙醇或60度左右的热水冲洗系统，如果无效，在异丙醇中超声清洗它常常会解决这样的问题。
三、保留时间重现性不好，可能的原因有哪些？保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性，导致实验无法进行。
引起这种现象因素很多，建议检查以下几个方面：- 确认流动相是新鲜配置的，比例没有错误。
- 确认色谱柱是好的。
- 检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌，没有被堵塞。
- 如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。
- 仔细观察柱前压的变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有问题，请更换新的色谱柱试试。
- 如果是压力不稳定，一定会影响保留时间。
四、柱前压不稳定，压力上下波动的常见原因？引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡，建议用以下的方法排除。
- 如果系统没有配置脱气机（二元泵），溶剂一定要经常超声脱气。
- 脱气机的效率不够，特别是用甲醇/水的系统最容易发生。
可以将A，B通道串联；C，D 通道串联用来延长脱气的时间，效果非常明显。
主动阀阀芯污染。
可以将阀芯取下，用甲醇超声清洗。
五、为什么排气阀里的过滤芯经常堵塞？如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高，请仔细检查一下换下来的过滤芯。
正常情况下，一个过滤芯可以使用6个月左右，如果经常更换就有问题。
- 如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的，请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了，是否使用了柱塞清洗装置。
缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。
- 如果过滤芯的颜色是乳白色的，非常干净。
说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。
请检查一下是否使用了过期的溶剂（水，有机溶剂），或质量不好的溶剂。
请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水（推荐：娃哈哈纯净水）。
如果流动相经过了滤膜过滤，请确认是否使用了正确的，优质的滤膜。
建议先不要使用滤膜过滤流动相，看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。
- 如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗，该通路会生长藻类，藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体，藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。
如果发生了这种情况，建议用60度的热水清洗溶剂瓶，并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。
建议一定要用棕色瓶存放缓冲溶液，避光，并且定期清洗溶剂瓶。
六、峰面积或峰高重现性不好，偏差大，可能的原因有哪些？如果HPLC系统配有自动进样器，这种情况主要是自动进样器的问题。
- 首先确认柱前压是稳定的，保留时间的重现性好。
- 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下(默认值是200ul/min)。
如果样品粘度较大，降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。
- 如果进样针或针座有轻微的堵塞，对进样精度的影响也非常大。
- 如果是手动进样器，请确认一定要使用Agilent配的标准进样针，且进样器的废液出口要与进样口水平，避免虹吸的影响。
如果是满Loop进样，建议注射5倍Loop的进样体积。
七、自动进样器的针头或针座经常堵塞，如何处理？- 如果针头或针座经常堵塞，请检查使用的进样瓶隔垫。
质量不好和已经破损的隔垫易产生很多碎屑。
进样时，这些细小的碎屑很容易将针头，针座堵塞。
使用Agilent的正规隔垫并且经常更换旧的隔垫就可以避免这类问题。
- 如果样品是经过离心处理的，是用针头吸取上清液进样, 请将针头进样位置提高。
- 如果针头或针座发生了堵塞，可以用以下简单的办法处理：通过Chemstation诊断界面的更换针头，针座的程序将其取下，反接到泵的出口，用反吹的办法将其疏通。
大部分是可以顺利解决的。
八、紫外检测器（DAD，VWD）信号波动大，噪音大，光强度检测通不过，如何处理？引起这种问题的因素很多，要一步一步排除，直到找到问题真正原因。
- 确定柱前压稳定；溶剂（高纯度的有机溶剂，水）使用正确，流动相脱气良好；- 检查检测器的氘灯是否已经到了使用寿命，是否更换过新的氘灯。
- 用异丙醇清洗整个系统，更换过滤芯，排除污染源。
- 清洗流动池和有关的透镜（需要工程师去现场服务）九、HPLC出“鬼峰”，如何排除？HPLC出“鬼峰” 大部分发生在反相体系（甲醇，乙腈，水），是溶剂被污染造成的。
还有一种原因是进样系统有残留。
- 先运行一个空白梯度洗脱的方法，从100%水过渡到100%有机溶剂，如果“鬼峰”出现，可以判断是水被污染了（水中有藻类Algae的污染）。
如果是使用纯水机制作的水，这种现象是最常见的。
建议用户更换“娃哈哈” 纯净水。
- 进样系统有残留很容易判断，建议加强或改善洗针程序，延长冲洗Loop的时间。
十、如何查看灯的使用时间或用新灯后如何重置"0"?在ChemStation 软件的“诊断”级别中，单击检测器图标。
就会看到一个下拉菜单，选择<显示模块详细信息>，然后会看到一个记事簿和扳手图标。
单击此图标会看到另一个下拉菜单。
选择<维护记事簿项>，然后选择“维护消息”项,查看灯的实际累加使用时间。
如要换灯,选灯已更换，ChemStation 软件会提示您重新设置计数器。