高效液相色谱分离苯、二甲苯
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高效液相色谱法分离苯、甲苯
实验目的:
1. 了解高效液相色谱仪器的组成部分。
2. 掌握高效液相色谱仪器的使用方法及软件操作方法。
3. 掌握分离样品的流动相的配置方法。
实验仪器介绍:
高效液相色谱仪的组成如下图:
A 色谱泵:本实验室色谱泵型号:Waters 1525 Binary HPLC Pump 其组成部分如下图:
B 进样器:本实验室进样器型号:Waters 2707 Autosampler
其组成部分如下图:
侧面图如下:
自动进样器有三种进样模式:
充满定量环:具有最高的进样体积精度
不充满定量环针头溢出:具有最大的灵活性不充满定量环:具有零样品的损失
使用过程:
C 检测器型号:Atltech ELS
D 2000 ES
其组成部分如下图:
蒸发光散射检测器的原理:首先将柱洗脱雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射监测池中得到监测。
1.LCD(液晶显示):在仪器使用中液晶显示的主窗口为操作窗口。操作窗口列出了仪器
的状态和参数,如方法的名称,漂移管温度,气体流量,撞击器位置,增益,信号输出,满量程输出设置,和操作错误总数(如发生)。液晶屏也显示所有相关的子窗口:方法窗口,参数设置窗口,和诊断窗口。
2.数字键盘:触摸键盘提供0-9 数字,“*”,和“Enter ”键调整仪器参数。
3.窗口键:前面板上有四个圆形触摸窗口键。每个窗口键的功能是基于屏幕。如果该键在
当前窗口中是可执行的,当前的功能会显示在该键上方的窗口屏幕上。
液相色谱法分离苯与甲苯
原理:试样中苯、甲苯用甲醇溶解,以甲醇+水为流动相,使用C18柱为填充的不锈钢柱和紫外检测器,对试样中的苯、甲苯进行高效液相色谱分离和外标法定量。
试剂和溶液
苯、甲苯(色谱纯)
甲醇(色谱纯)
水(新蒸二次蒸馏水)
仪器
高效液相色谱仪:具有可变波长紫外检测器
色谱柱:250 mm * 4.6 mm(id),不锈钢柱,内装C18 填料,粒径 5 μm
超声波清洗器
微孔过滤器:滤膜孔径为0.45 μm
分析步骤
高效液相色谱操作条件
流动相:甲醇+水=70+30(V / V ),使用前经0.45 μm 滤膜并超声脱气。
柱温:室温。
流速:1.0 ml/min
检测波长:254 nm
进样量:10 μL
标准溶液配制
称取色谱纯苯、甲苯各0.05g(精确至0.0001 g)于50 ml 容量瓶中,此溶液质量浓度C(苯、甲苯)为1.00 mg/ml,用甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀备用。标准曲线的制备
分别吸取苯、甲苯标准溶液0.5、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 ml,置于50 ml 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,配置成分别含苯、甲苯10.00 μg/ml、20.00 μg/ml、30.00 μg/ml、40.00μg/ml、50.00μg/ml、60.00μg/ml的标准溶液,用0.45μm 滤膜过滤,滤液待用。
在上述色谱条件下,待仪器基线稳定后注入标准系列溶液,记录色谱峰面积,以苯、甲苯的质量浓度(μg/ml)为横坐标,相应的色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
试验的测定
在与测定标准系列溶液相同的条件下注入待测溶液,根据色谱峰的保留时间定性,记录色谱峰面积,并从标准曲线查的苯、甲苯的浓度。
结果的表示
苯、甲苯质量分数X(%)按下式计算:
X=(C*V*10-6/m)*100
m ----试样的质量,g
v------ 试样定容体积,ml
C------由标准曲线查出的试样溶液中苯、甲苯的浓度,μg/ml