柠檬酸钠缓冲液使用方法及注意事项
柠檬酸钠缓冲液在原位杂交中的作用
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柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液(钠离子0.2molL,pH2.2)
北京雷根生物技术有限公司
柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液(钠离子0.2mol/L,pH2.2)
简介：
柠檬酸钠又称枸橼酸钠，在工业上可以作为螯合剂，在医药行业可作为抗凝剂。
在生物学上，柠檬酸钠多与柠檬酸配合作为柠檬酸盐使用，柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液在免疫组化过程中可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
Leagene 柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液(钠离子0.2mol/L,pH2.2)是柠檬酸、氢氧化钠、盐酸按照不同比例混合而得。
组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、根据实验具体要求操作。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号
名称 R00530
Storage 柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液(钠离子0.2mol/L,pH2.2)
500ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) DC0032
Masson 三色染色液 DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 DF0135
多聚甲醛溶液(4% PFA) NA0030
Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE) PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性) PW0111
Super ECL Plus 超敏发光液 TC0699 植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)。
常用pH缓冲液配置方法及注意事项
经常使用pH缓冲溶液的配制和pH值之阿布丰王创作一、经常使用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（包管试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。
3．按附表的比例，配制成分歧pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
常用pH缓冲液 缓冲液缓冲范围
资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值•常用pH缓冲溶液的配制和pH值常用pH缓冲溶液的配制和pH值一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
•（三）0.15Mol/L PB 液Na 2HPO 4·2H 2O 分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含26.7g/L 。
Na 2HPO 4·12H 2O 分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含53.7g/L 。
NaH 2PO 4·H 2O 分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含20.7g/L 。
常用pH缓冲液缓冲液缓冲范围
资料常用pH缓冲溶液的配制和pH值•常用pH缓冲溶液的配制和pH值一、常用溶液的配制一溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯保证试剂,Guaranteed reagent,G．R．、分析试剂Antalytical reagent,A．R．化学纯Chemical pure,C．P．和实验试剂Laboratory reagent,L．R．等等;工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等;2．药品称量要精确;3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH 在~之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水;４．配好后的溶液,应立即除菌处理如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质,以防杂菌生长;二1/15Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾KH2PO4,A．R．,用蒸馏水溶解后,倾入1 000ml容量瓶内,再稀释至刻度1 000ml;2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠Na2HPO4,.或者Na2HPO4·2H2O 用蒸馏水溶解后,放入1 000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度1 000ml;3．按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液;•三L PB液Na2HPO4·2H2O分子量= L溶液含L; Na2HPO4·12H2O分子量= L溶液含L; NaH2PO4·H2O分子量= L溶液含L; NaH2PO4·2H2O分子量= L溶液含L;四L PB缓冲液L Na2HPO4·2 H2O溶液LNa2HPO4·12 H2O溶液含LLNaH2PO4·H2O溶液含LNaH2PO4·2 H2O溶液含L欲配L PB缓冲液则在L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可;欲配制PBS液时,则在溶液中加％的NaCl溶液即可;五无钙镁离子磷酸缓冲盐水PBSL PHNaClKClNa2HPO4如为Na2HPO4·12H2O,则为KH2PO4将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用;此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物;六硼酸盐缓冲液Borate saline buffer1．硼酸Ｈ3BO3L硼酸：硼酸加水至1 000ml;2．硼砂Na2B4O7L硼砂：硼砂加水至1 000ml;七巴比妥缓冲液1．离子强度L巴比妥缓冲液巴比妥钠蒸馏水 3 000mlHClN HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水⑴ 将巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水;⑵ 加 N HCl 55ml;⑶ 用HCl调节pH到,并加蒸馏水至4 265ml;2． L巴比妥缓冲液巴比妥巴比妥钠加蒸馏水至 13． L巴比妥缓冲液巴比妥巴比妥钠加蒸馏水 1八L醋酸盐缓冲液见表附表5九三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液Tris—HCl缓冲液不同pH,LL三羟甲基氨基甲烷加х,加水稀释至100ml见下表三羟甲基氨基甲烷Tris分子量=L三羟甲基氨基甲烷：,加水至1 000ml;：取,加水至1 000ml;•十L 碳酸盐缓冲液NaHCO3Na2CO3溶于蒸馏水中即得;不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降;最好小量配制;十一甘油磷酸缓冲液1．配制磷酸缓冲液L Na2HPO4NaH2PO4混合即可2．9份甘油与1份磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液;用途：用于免疫荧光试验;十二Hank’s液1．贮存液NaClKClNa2HPO4·12 H2OKH2PO4葡萄糖％酚红液双馏水加至115℃高压灭菌15min,冰冻保存;2．工作液贮存液 1份双馏水 9份115℃高压灭菌15min;临用时用灭菌的％NaHCO3液调pH值至左右溶液呈橙红色;十三萘钠氏试剂Nessler’s reagent配方1：氯化汞碘化钾20％NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方2：碘化汞碘化钾 8g蒸馏水 50ml完全溶解后过滤,加20％NaOH 50ml;用途：检测溶液中氨离子;十四阿氏Alsever’s液葡萄糖柠檬酸钠氯化钠蒸馏水 100ml溶解后,以10%柠檬酸调节pH至,过滤,分装,10磅10min灭菌,4℃保存;十五青、链霉素混合液简称S．P．液或双抗液青霉素40万U 5支链霉素200万μg 1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10℃~-20℃冰箱保存备用1万单位μg/ml;临用时,按1%的量加入营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml;十六洗液清洁液配方1：重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加;此为强洗液;盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全;洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用;如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用;配方2：浓硫酸 50%蒸馏水 50%重铬酸钾 5%此为中等强度洗液;配方3：重铬酸钾 100g蒸馏水 1 000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸 100ml此液为弱洗液,为棕红色;使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效;缓冲液名称及常用浓度缓冲pH范围主要物质分子量MES 2吗啉代乙磺酸Bis-TrisHEPESPIPESMOPSTricineTEA 三乙醇胺甘氨酸-盐酸缓冲液L 甘氨酸Mr=邻苯二甲酸-盐酸缓冲液L 邻苯二甲酸氢钾Mr=磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液磷酸氢二钠Mr=柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液柠檬酸Mr=柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液L 柠檬酸Mr= 柠檬酸钠Mr= 乙酸-乙酸钠缓冲液L 乙酸钠Mr= 乙酸Mr=邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液邻苯二甲酸氢钾Mr= 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液L磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液1/15 molL磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液L巴比妥钠-盐酸缓冲液18℃巴比妥钠Mr=Tris-盐酸缓冲液L 25℃三羟甲基氨基甲烷TrisMr=甘氨酸-氢氧化钠缓冲液L 甘氨酸Mr=硼砂-氢氧化钠缓冲液L 硼砂Na2B4O710H2O Mr=碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液L 碳酸钠Mr= 碳酸氢钠Mr= 碳酸钠-氢氧化钠缓冲液L磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液氯化钾-盐酸缓冲液L 氯化钾Mr=氯化钾-氢氧化钠缓冲液L 氯化钾Mr=。
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)使用说明书
2
杭州昊鑫生物科技股份有限公司
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柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液(40×)
柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液(40×) 细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-
link)，遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结 果。
柠檬酸钠 去交联试
和 EDTA
剂等
SDS 等
柠檬酸钠等
抗原修复 温度
95-100℃
95-100℃ 95-100℃
95-100℃
室温
80℃
石蜡切片 修复效果
+++
++
+++
++++
+
+
冰冻切片 修复效果
++
+
++
+++
+++
+
漂片修复 效果
++
+
++
+++
+
+++毒性无毒无毒无毒微量毒性
无毒
无毒
使用便捷 程度
中等
中等
中等
中等
高
中等
注：“+”表示抗原修复效果较好，“++” 表示抗原修复效果好，“+++” 表示抗原修复效
果很好。
对于冰冻切片优先推荐 HCY073；对于漂片优先推荐 HCY074；对于石蜡切片，可以考虑选购 HCY057、HCY056、HCY072 和 HCY058。HCY058 的效果最佳。上表中的抗原修复效果是总体的效 果，但对于特定的抗原和特定类型的样品，各种抗原修复液的效果不一定和上表的标注完全一 致。当发现抗原修复效果不够理想时，可以考虑尝试不同类型的其它抗原修复液。
ph=4的缓冲溶液配制方法
ph=4的缓冲溶液配制方法缓冲溶液是一种能够维持溶液pH值相对稳定的溶液。
在实验室和许多生物学、化学和医学研究中，配制pH=4的缓冲溶液是非常常见的。
下面将介绍一种常见的方法来配制pH=4的缓冲溶液。
配制pH=4的缓冲溶液需要选择一个具有适当pKa值的酸和它的共轭碱，以便在溶液中维持所需的pH值。
常见的用于配制pH=4的缓冲溶液的酸包括柠檬酸、琥珀酸、乙酸等，这些酸具有适当的pKa值，使其能够在pH=4时处于酸性状态。
下面是一种用柠檬酸和柠檬酸钠配制pH=4缓冲溶液的方法：1.准备所需的实验器材和试剂，包括一定量的柠檬酸和柠檬酸钠，去离子水等。
2.准备一定体积的去离子水，将其加入一个干净的容器中。
3.使用天平称取所需量的柠檬酸。
根据所需浓度和溶液体积，确定所需的柠檬酸量。
4.将柠檬酸加入容器中的水中，并搅拌均匀。
保持搅拌直到溶液完全溶解。
5.使用天平称取所需量的柠檬酸钠。
根据所需浓度和溶液体积，确定所需的柠檬酸钠量。
6.将柠檬酸钠加入溶液中，并再次搅拌均匀。
保持搅拌直到溶液完全溶解。
7.使用pH计测量溶液的pH值。
如果溶液的pH值不是4，则需要调整。
8.调整溶液的pH值。
可以使用酸或碱来调整溶液的pH值。
根据具体情况，可添加少量的盐酸或氢氧化钠等来进行调整。
9.继续搅拌溶液，直到达到所需的pH=4。
10.使用pH计再次测量溶液的pH值，确保溶液的pH为4。
11.将溶液转移到干净的容器中，并用适当的密封方式保存。
以上是一种用柠檬酸和柠檬酸钠配制pH=4缓冲溶液的方法。
根据实验需要，还可以选择其它适当的酸和碱来调整和配制pH=4缓冲溶液。
常用pH缓冲液配置方法及注意事项
常用pH缓冲溶液的配制和pH值一、常用溶液的配制（一)溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂,Guaranteed reagent,G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．)和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．)等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等.2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5～7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水.４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质)，以防杂菌生长。
（二)0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9。
08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4,A。
R.）9。
47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml)。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
（三)0.15Mol/L PB液Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358。
22 0。
15Mol/L溶液含53。
7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20。
7g/L.NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23。
4g/L。
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柠檬酸钠缓冲液使用方法及注意事项
货号：C1010
规格：1L/2L
保存：室温密封保存，有效期12个月。
产品说明：
细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。
所以要求在进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。
从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。
柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L，pH6.0是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。
抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。
当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。
按照每个片子需要10ml抗原修复液计算，1L抗原修复液可以用于100个样本的抗原修复。
使用方法：
本产品是干粉形式，使用前用去离子水或蒸馏水按产品规格溶解至1L 或2L，即可使用。
1.对于石蜡切片：
a.脱蜡：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min →95％乙醇1次，3-5min→90%乙醇1次，3-5min→75％乙醇1次，
3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min。
b.抗原修复：将切片浸泡在柠檬酸修复液中，95-100℃加热约15min (加热时间可以控制在10-20min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和
目的蛋白自行摸索)。
柠檬酸修复液使用前需预热到95-100℃。
加热可以
使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。
如果使用微波炉加热，需注意
避免暴沸和过多的水分蒸发。
随后大约在20-30min内冷却至室温。
用免疫
染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5min。
随后即可进行封闭等后续的免疫
染色步骤。
2.对于冰冻切片：
用免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
将切片浸泡在柠檬酸修复液中，95-100℃加热约15min(加热时间可以控制在10-20min内，最佳的加热
时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。
柠檬酸修复液使用前需预热到95-100℃。
加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。
如果使用
微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。
随后大约在20-30min内
冷却至室温。
用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5min。
随后即可进
行封闭等后续的免疫染色步骤。
3.对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。
注意事项：
1.抗原修复过程可以使用索莱宝的的抗原修复盒进行操作。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。