分子生物学实验常用缓冲液的配制方法
分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法
分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。
-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。
-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。
(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。
-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。
-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。
(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。
- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。
-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。
(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。
- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。
-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。
2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。
- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。
(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。
-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。
-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。
(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。
分子生物学常用母液的配置方法
分子生物学常用母液的配置方法（1）0.5M EDTA，PH=8.0往175ml超纯水中加入46.525克Na2EDTA 2H2O,然后加入10克的NaOH,在磁力搅拌器上溶解,用酸度计测量PH值,根据PH值决定再次加入NaOH的量,直至调节PH值至8.0，然后定容至500ml，灭菌后贮存备用。
（2）1M Tris-Hcl, PH=8.0在160ml超纯水中加入24.2克的Tris碱，然后用浓盐酸调PH值至8.0（约需8.4ml的浓盐酸），最后用超纯水定容至200ml。
（用酸度计测PH值）。
灭菌后贮存备用。
（3）TE缓冲液（10mM Tris-Hcl, PH=8.0；1 mM EDTA，PH=8.0）配置100 ml溶液需加入：①1M Tris-Hcl, PH=8.0 1.0ml②0.5 M EDTA，PH=8.0 0.2 ml③超纯水98.8 ml灭菌后贮存备用。
(4) 5M Nacl称146克Nacl 溶于400 ml 超纯水中,然后用超纯水定容至500 ml。
(5) 3.0 NaAc,PH=5.2称24.6克乙酸钠,溶于70 ml超纯水中,然后用冰乙酸调PH值至5.2,最后定容至100 ml。
（6）5M KAc在50 ml 超纯水中溶49.1克的KAc，然后定溶至100 ml。
(7) 2％CTAB提缓冲液(用于DNA提取)①1M Tris-Hcl, PH=8.0 20 ml 100 mM②0.5 EDTA，PH=8.0 8 ml 20 mM③5M Nacl 56 ml 1400 mM加入CTAB 4克,水浴(65℃)或用磁力搅拌器加热溶解,冷却至室温后定容至200 ml。
灭菌后备用。
(8)氯仿/异戊醇(24:1)氯仿96 ml异戊醇4 ml(9)SDS法提取DNA缓冲液（现用现配）配40 ml （最后定容至40 ml）母液量终浓度①1M Tris-Hcl, PH=8.0 4ml 100 mM②0.5 EDTA，PH=8.0 4ml 50 mM③5M Nacl 1.2 ml 150 mM④10％SDS 8 ml 2％(V/W)⑤巯基乙醇30～800μl 0.07～2％（v/v）(10) 10％SDS 溶于80 ml 无菌超纯水中，然后定溶至100 ml。
常用缓冲液配方及缓冲范围
常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种水溶液，其中含有在酸性或碱性条件下能够保持pH稳定的化学物质。
缓冲液广泛应用于生物化学、分子生物学、生物技术和医学等领域的实验和研究中。
下面是一些常用的缓冲液配方及其应用范围。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是一种中性缓冲液，常用于生物化学和分子生物学实验。
它的配方通常为：- 10 mM Tris base-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至7.4Tris缓冲液可用于DNA和RNA的电泳、酶反应、细胞培养等实验中。
2.PBS缓冲液PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物学缓冲液，具有缓冲能力强和与生物体液成分相似的特点。
它的配方通常为：-137mMNaCl-2.7mMKCl-10mMNa2HPO4-2mMKH2PO4-向溶剂中调整pH至7.4PBS缓冲液可用于细胞培养、免疫荧光染色、蛋白质凝胶电泳等实验中。
3.TAE缓冲液TAE（三乙酸缓冲液）是一种常用的核酸电泳缓冲液，其配方为：- 40 mM Tris base-20mM醋酸-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至8.0TAE缓冲液可用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳，如聚丙烯酰胺凝胶电泳（）和琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液是一种常用的酸性或碱性缓冲液。
它的配方基于Tris缓冲液，在Tris缓冲液基础上调整pH的方法是在配方中加入稀盐酸或稀氢氧化钠。
例如，对于Tris-HCl缓冲液的配方为：- 50 mM Tris base-向溶剂中加入HCl调整pH至所需的值（通常为7.2至9.0）Tris-HCl缓冲液可用于酶反应、蛋白质组学研究、PCR等实验中。
这只是一些常用的缓冲液配方，根据不同实验需求和物质稀释要求，还有其他许多缓冲液的配方。
对于缓冲液的选择，关键在于根据实验要求选取适当的缓冲体系，并对缓冲液中所需的化学物质浓度、pH值等进行精确调整。
各种缓冲液的配制方法
各种缓冲液的配制方法缓冲液（Buffer）在生物化学和分子生物学实验中起到了至关重要的作用，它可以维持溶液的稳定性，调节pH值，同时还提供所需的离子环境。
这是一个关于不同类型缓冲液的配制方法的综合指南。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是实验室中最常用的缓冲液之一、以下是Tris缓冲液的配制方法：- 配制0.1 M Tris缓冲液（pH 7.4）：a. 在100 mL去离子水中加入12.11 g Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）粉末。
b.用盖住容器的滤纸纸带覆盖容器，并将其放在磁力搅拌器上。
c.用盖住容器的锡纸覆盖容器，加热至溶解。
搅拌以加速溶解过程。
d.继续搅拌，使其冷却至室温。
e.使用0.1MHCl或0.1MNaOH调节pH值至7.4，直到所需的pH值稳定。
f.用去离子水稀释至总体积100mL。
2.PBS缓冲液PBS缓冲液是生物学实验中常用的缓冲液之一、以下是PBS缓冲液的配制方法：-配制10×PBS缓冲液：a.在1L去离子水中加入80gNaCl，2gKCl，14.4gNa2HPO4，2.4gKH2PO4b.使用10MNaOH或10MHCl调节pH值至7.4c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×PBS缓冲液：a.取10×PBS缓冲液100mL，用去离子水稀释至总体积1L。
3.TAE缓冲液TAE缓冲液常用于琼脂糖凝胶电泳。
以下是TAE缓冲液的配制方法：-配制50×TAE缓冲液：a. 在1 L去离子水中加入242 g Tris base，57.1 mL 0.5 M EDTA，100 mL冰醋酸。
b.用10MNaOH或10MHCl调节pH值至8.3c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×TAE缓冲液：a.取50×TAE缓冲液20mL，用去离子水稀释至总体积1L。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液常用于DNA或RNA的酶切反应。
分子生物学实验常用试剂配制
分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。
(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。
(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。
(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。
(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。
将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。
凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。
(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。
(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。
常见缓冲液的配方
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
各种缓冲液配制方法
各种缓冲液配制方法缓冲液是一种用于调节溶液的pH值的溶液，常用于实验室中的生物化学和分子生物学实验中。
根据所需的pH范围和实验目的，可以使用不同的缓冲液配制方法。
以下是一些常见的缓冲液配制方法：1.磷酸盐缓冲液（PBS）磷酸盐缓冲液是一种常见的生物学实验中使用的缓冲液。
它的制备方法如下：-取一个容器，加入8克氯化钠（NaCl），0.2克磷酸二氢钠（NaH2PO4），和1.44克磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
-加入适量的去离子水，搅拌溶解。
-将溶液转移到一个容量为1升的烧杯中。
-用去离子水补足体积至1升，并用1升体积瓶准确稀释至1升。
2. Tris缓冲液Tris缓冲液适用于pH 7-9范围内的实验。
制备方法如下：- 取一个容器，加入121.14克Tris（羟甲基氨基甲烷）。
-加入适量的去离子水，搅拌溶解。
-将溶液转移到一个容量为1升的烧杯中。
-用去离子水补足体积至1升，并用1升体积瓶准确稀释至1升。
3.醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液适用于pH3-5范围内的实验。
制备方法如下：-取一个容器，加入20毫升醋酸钠三水合物（NaC2H3O2·3H2O）。
-加入6毫升醋酸。
-加入适量的去离子水，搅拌溶解。
-将溶液转移到一个容量为1升的烧杯中。
-用去离子水补足体积至1升，并用1升体积瓶准确稀释至1升。
4.磷酸缓冲液磷酸缓冲液适用于pH2-8范围内的实验。
制备方法如下：-取一个容器，加入0.126克磷酸二氢钾（KH2PO4）。
-加入0.680克磷酸二氢钠（Na2HPO4）。
-加入适量的去离子水，搅拌溶解。
-将溶液转移到一个容量为1升的烧杯中。
-用去离子水补足体积至1升，并用1升体积瓶准确稀释至1升。
5.碳酸氢盐缓冲液（HEPES缓冲液）HEPES缓冲液适用于pH6-8范围内的实验。
-取一个容器，加入10克HEPES。
-加入适量的去离子水，搅拌溶解。
-将溶液转移到一个容量为1升的烧杯中。
-用去离子水补足体积至1升，并用1升体积瓶准确稀释至1升。
各种缓冲液的配制方法
各种缓冲液的配制方法缓冲液是一种用于调节溶液酸碱度（pH值）的溶液，它可以稳定溶液的pH值，满足实验的需要。
不同实验需要使用不同pH值的缓冲液，因此配制方法也会有所不同。
下面将介绍常见的几种缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液：磷酸盐缓冲液是最常用的一种缓冲液，在生物化学和分子生物学实验中广泛应用。
配制方法：-0.2M磷酸盐酸（pH2.5）：用稀磷酸（H3PO4）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.2M磷酸盐盐（pH2.5）：用0.2M磷酸钠（Na2HPO4）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的磷酸盐缓冲液。
2.乙酸缓冲液：乙酸缓冲液常用于酶催化反应的研究和生物制剂的稳定。
配制方法：-0.1M乙酸酸（pH3.6）：用浓烧碱（CH3COOH）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.1M乙酸盐（pH3.6）：用0.1M乙酸钠（CH3COONa）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的乙酸缓冲液。
3.碳酸氢盐缓冲液：碳酸氢盐缓冲液常用于生命科学实验中。
配制方法：-0.1M碳酸酸（pH6.0）：用稀碳酸（H2CO3）溶液调节酸度至所需pH 值。
-0.1M碳酸盐（pH6.0）：用0.1M碳酸氢钠（NaHCO3）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的碳酸氢盐缓冲液。
4. Tris缓冲液：Tris缓冲液是一种多用途的缓冲液，在生物化学和分子生物学研究中广泛应用。
配制方法：- 0.1 M Tris酸（pH 8.0）：用三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液调节酸度至所需pH值。
- 0.1 M Tris盐（pH 8.0）：用0.1 M Tris盐溶液调节碱度至所需pH值。
- 混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的Tris缓冲液。
配制缓冲液时需要准备所需浓度的酸液和盐液，然后根据所需pH值逐渐调整酸度和碱度至目标值。
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浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度，Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5(1.8乘10的-5次方)，PKa=-lgKa=4.75,将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我 们配制 时会使C(HAc)=0.1mol/L,或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L,则C(NaAc)=0.56mol/L称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克 量取冰醋酸体积为0.1*1000/ 17.5=5.7mL。将称好的
醋酸—醋酸钠缓冲液(PH4.5)
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.6)
取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml,
即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH6.0)
取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
17.82
5.6
11.60
8.40
2.8
3.17
16.83
5.8
12.09
7.91
3.0
4.11
15.89
6.0
12.63
7.37
3.2
4.94
15.06
6.2
13.22
6.78
3.4
5.70
14.30
6.4
13.85
6.15
3.6
6.44
13.56
6.6
14.55
5.45
3.8
7.10
12.90
6.8
(ml)
0.2mol/LNaH2PO
(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPO
(ml)
0.2mol/LNaH2PO4
(ml)
5.8
8.0
92.0
7.0
61.0
39.0
6.0
12.3
87.7
7.2
72.0
28.0
6.2
18.5
81.5
7.4
81.0
19.0
6.4
26.5
73.5
7.6
87.0
13.0
6.6
25.00
100.00
5.8
43.10
25.00
100.00
6.0
45.40
25.00
100.00
6.2
47.00
25.00
100.00
0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶
于水中，稀释至500ml。
磷酸缓冲液(0.2mol/L)
PH
0.2mol/LNa2HPO
17.2
4.4
11.4
8.6
6.4
2.0
18.0
4.6
10.3
9.7
6.6
1.4
18.6
4.8
9.2
10.8
柠檬酸.H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸钠.2HO,分子量=294.12;0.1mol/L溶液含29.4 g/L
醋酸缓冲液(0.2mol/L,18C)
25.00
100.00
4.2
3.65
25.00
100.00
4.4
7.35
25.00
100.00
4.6
12.00
25.00
100.00
4.8
17.50
25.00
100.00
5.0
23.65
25.00
100.00
5.2
29.75
25.00
100.00
5.4
35.25
25.00
100.00
5.6
39.70
1.40
4.4
3.70
6.30
5.6
9.10
0.90
4.6
4.90
5.10
5.8
9.40
0.60
NaAC.3 HO,分子量=136.09 0.2mol/L溶液含27.22g/L
(1)醋酸盐溶液的配制：
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.6)
取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.7)
Na2HP6 2H2O,分子量=178.05 0.2mol/L溶液含35.61g/L
柠檬酸.H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.1mol/L）
PH
0.1mol/L柠檬酸
（ml）
0.1mol/L柠檬酸
钠（ml）
37.5
62.5
7.8
91.5
8.5
6.8
49.0
51.0
8.0
94.7
5.3
Na2HPO4.2 H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/L
醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，
也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪 费试剂。
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaOH(ml)
0.2mol/L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(ml)
4.0
0.40
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60〜80ml，至溶液 从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.8)
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。
0.1mol/L柠檬酸钠
(ml)
3.0
18.6
1.4
5.0
8.2
11.8
3.2
17.2
2.8
5.2
7.3
12.7
3.4
16.0
4.0
5.4
6.4
13.6
3.6
14.9
5.1
5.6
5.5
14.5
3.8
14.0
6.0
5.8
4.7
15.3
4.0
13.1
6.9
6.0
3.8
16.2
4.2
12.3
7.7
6.2
2.8
各种缓冲液的配制方法
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
0.2mol/LNa2HPO
(ml)
0.1mol/L柠檬酸 钠(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPC4
(ml)
0.1mol/L柠檬酸钠
(ml)
2.2
0.4
19.6
5.2
10.72
9.28
2.4
1.24
18.76
5.4
11.15
8.85
2.6
2.18
15.45
4.55
4.0
7.71
12.29
7.0
16.47
3.53
4.2
8.28
11.72
7.2
17.39
2.61
4.4
8.82
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7.4
18.17
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4.6
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PH
0.2mol/LNaAC(ml)
0.2mol/LHAC(ml)
PH
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