实验室常用试剂、缓冲液的配制

合集下载

实验室常用试剂缓冲液的配制方法

实验室常用试剂缓冲液的配制方法

实验室常用试剂的配制方法2×SDS gel-loading buffer10×PBS10×SDS-PAGE电泳液10×转膜液细胞裂解液□组分浓度 50mM Tris-HCl(pH6.8),100mM DTT,2%SDS,0.1%Bromophenol blue,10%Glycerol□配制量 10ml□配制方法 DTT 0.1572g,Bromophenol blue 0.01g,Tris-HCl(1M pH6.8) 500ul,10% SDS 2ml,Glycerol 1ml,超纯水定容至10ml。

分装后于4度保存。

□组分浓度 NaCl 8%,KCl 0.2%,Na2HPO4.12H2O 2.9%g,KH2PO4 0.2%g□配制量 1L□配制方法称取NaCl 80.0g,KCl 2.0g,Na2HPO4.12H2O29.0g,KH2PO4 2.0g,超纯水定容至1L。

□组分浓度 Tris 250mM,甘氨酸 2M,SDS 1%□配制量 1L□配制方法称取Tris 30.3g,甘氨酸 144.0g,SDS 10.0g,超纯水定容至1L。

□组分浓度 Tris 250mM,甘氨酸 2M□配制量 1L□配制方法称取Tris 30.3g,甘氨酸 144.0g,超纯水定容至1L。

注意:1×转膜液的配制为100ml 10×转膜液,200ml甲醇定容至1L。

□组分浓度 NaCl 150mM,NP-40 0.5%,Tris-HCl 10mM,PMSF 0.1mM, aprotimin 2ug/ml, NaN3 0.02%□配制量 100ml□配制方法称取17mgPMSF溶于1ml甲醇,2mg aprotimin溶于10ml水配制成200ug/ml的储存液备用;称取NaCl 0.88g,NaN3 20mg,加入NP-40 0.5ml,Tris-HCl(1M pH7.2) 1ml,溶有PMSF的甲醇1ml,aprotimin储存液1ml,混匀溶解后超纯水定容至100ml。

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。

pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。

实验常用试剂缓冲液的配制方法

实验常用试剂缓冲液的配制方法

实验常用试剂缓冲液的配制方法
一、常用试剂和试剂配置
1、氯仿。

将1L 99.7%纯度的氯仿加入水中,调节pH值至7.4,溶解
即可得到0.5mol/L的氯仿溶液。

2、二氧化碳水。

将100mL弱碳酸氢氧化钠溶液(NaHCO3,0.5mol/L)加入1L水中,经过气泡交换,可制得CO2水。

3、磷酸盐缓冲液。

将200mL磷酸盐溶液(K2HPO4,0.5mol/L)加入800mL水中,调节pH值至7.2,搅拌均匀,即可得到0.2mol/L磷酸盐缓
冲液。

4、EDTA标准溶液。

将25.0g EDTA·4Na(C10H14N2O8Na2)加入
1000mL水中,热溶解,调节pH值至7.0,搅拌均匀,得到0.2mol/LEDTA
标准溶液。

5、肌酐标准溶液。

将10.0g肌酐(C10H13N3O8)=14.2H2O)加入
1000mL的水中,搅拌,调节pH值至7.4,搅拌均匀,即可得到0.1mol/L
的肌酐标准溶液。

二、缓冲液的配置
1、弱酸缓冲液。

将3.0mL 0.2mol/L磷酸钠溶液(Na2HPO4)加入到
97mL 0.2mol/L磷酸钙溶液(Ca(H2PO4)2)中,搅拌均匀,即可得到
0.2mol/L的弱酸缓冲液。

2、弱碱缓冲液。

将3.0mL 0.2mol/L磷酸氢氧化钠溶液(NaH2PO4)
加入到97mL 0.2mol/L碳酸氢钙溶液(Ca(HCO3)2)中,搅拌均匀,即可
得到0.2mol/L的弱碱缓冲液。

3、弱盐缓冲液。

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多,根据实验需求,可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。

以下是一些常见的试剂和缓冲液配方,以及其用途和制备方法。

1. 磷酸缓冲液(Phosphate buffer)磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中,用于控制溶液的pH值,适用于酸性和碱性条件下。

常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。

2. 氯化钠溶液(Sodium chloride solution)氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一,通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。

可以制备不同浓度的氯化钠溶液,常见的配方为0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。

3. 碳酸氢盐缓冲液(Bicarbonate buffer)碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中,用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。

一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。

4. Tris缓冲液(Tris buffer)Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液,可以调节到不同的pH值。

常见的配方为50 mM Tris缓冲液(pH 7.4),需要用Tris(三氯甲烷磺酸,Tris-HCl)和盐酸来制备。

5. PBS缓冲液(Phosphate-buffered saline)PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液,具有稳定pH值和离子浓度的特点。

常见的配方为10mMPBS缓冲液(pH7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。

6. 甘氨酸缓冲液(Glycine buffer)甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中,用作电泳缓冲液和传递缓冲液。

常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液(pH8.3),需要用甘氨酸和盐酸来制备。

7. BSA溶液(Bovine serum albumin solution)BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质,用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl(pH8.8)□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA (pH 7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500 mM EDTA(pH8.0)20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

常用的45种缓冲溶液的配制

常用的45种缓冲溶液的配制

常用的45种缓冲溶液的配制1.乙醇-醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5mol/L醋酸溶液15.0ml,加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L 氢氧化铵溶液调节pH值至3.7,用水稀释至1000ml,即得。

2.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解,并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。

3.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解,用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1,加水稀释至100ml,即得。

4.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g,再加水溶解使成1000ml,调节pH值至9.0,即得。

5.乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g,加水溶解后,加浓氨溶液4.2ml,再用水稀释至250ml,即得。

6.巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml,用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4,滤过,即得。

7.巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml,即得。

8.巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g 加水适量,加热溶解后并入上述溶液中。

然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8,再用水稀释至500ml,即得。

9.甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2mol/L甲酸溶液25ml,加酚酞指示液1滴,用2mol/L氢氧化钠溶液中和,再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25~3.30,即得。

10.邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10g,加水900ml,搅拌使溶解,用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml,混匀,即得。

实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

实验室常用缓冲液、试剂的配制方法#1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)# 组份浓度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调整所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,由于Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每上升1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#10timeTE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)#组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,匀称混合。

3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

#1.5 M Tris-HCl (pH8.8)#组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调整pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,由于Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每上升1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#3 M 醋酸钠(pH5.2)#组份浓度:3M 醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调整pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。

#Buffer#组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量:1 L配制方法:1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

各种缓冲液配制方法

各种缓冲液配制方法

各种缓冲液配制方法不同缓冲液的缓冲范围pH缓冲液是化学实验室中常用的一种试剂,可以帮助维持溶液的酸碱度。

下面介绍三种常用缓冲液的配制方法和缓冲范围。

一、甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05 mol/L)配制方法:取X毫升0.2 mol/L甘氨酸和Y毫升0.2 mol/L 盐酸,加入适量的水稀释至200毫升。

缓冲范围:pH值在2.2至3.6之间,X和Y的取值见上表。

二、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液(0.05 mol/L)配制方法:取X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾和Y毫升0.2 mol/L盐酸,加入适量的水稀释至20毫升。

缓冲范围:pH值在2.2至3.8之间,X和Y的取值见上表。

三、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制方法:根据上表中的数据,取相应的0.2 mol/L和0.1 mol/L的Na2HPO4和柠檬酸,加入适量的水稀释至20毫升。

缓冲范围:pH值在2.2至8.0之间,具体取值见上表。

以上缓冲液的配制方法和缓冲范围可根据实验需要进行调整和改变。

在实验过程中,正确选择缓冲液可以提高实验的成功率和准确性。

以下是已经修改好的文章:柠檬酸的浓度可以用毫升表示,其浓度数据如下:9.28 mL8.85 mL8.40 mL7.91 mL7.37 mL6.78 mL6.15 mL5.45 mL4.55 mL3.53 mL2.61 mL1.83 mL1.27 mL0.85 mL0.55 mL对于Na2HPO4,其分子量为141.98,0.2 mol/L的溶液需要28.40 g/L。

而Na2HPO4·2H2O的分子量为178.05,0.2 mol/L的溶液需要35.61 g/L。

最后,Na2HPO4·12H2O的分子量为358.22,0.2 mol/L的溶液需要71.64 g/L。

对于C6H8O7·H2O,其分子量为210.14,0.1 mol/L的溶液需要21.01 g/L。

以下是柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液的相关数据:pH: 2.2.3.1.3.3.4.3.5.3.5.8.6.5钠离子浓度(mol/L): 0.20.0.20.0.20.0.20.0.35.0.45.0.38柠檬酸(g) 氢氧化钠(g) 盐酸(mL)C6H8O7·H2O NaOH 97% HCl (浓)210 210 210210 245 285266 84 8383 144 186156 160 116106 45 68105 126最终体积(L):10使用时可以每升中加入1克酚。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

031*-2./4,+58679giaifi [`eg]\_debe^h \ZgZbe^edb`d]:mwwtYOOyyyNwioiuiNjsqNjr.1/{30,z +|2}-4*~Q c gunvM_\p Jt_WNTL WNVLXNPK:I JRNS7GDO :H:8b~:;:8:M JRNS QK :H 4^R U;8t 3L A99POg /}T8Yclw\1yU <8[?`~t 3-C9ix ;AD gQG O U=8u 1E j 2P :HU>8m >m B,{qY 7>]dUSF Z I61E |0P7>q N ijQG O Y H<JRNS 1E gQG O:>kg_ra G peY >k +5m:VY 1E gQG O e L vh989<nf =UQNU c gunvM_\pJt_XNXK:8>IJRNS7GDO :H:8b~:A:8@M JRNS QK :H 4^R U;8t 3L A99POg /}T8Yclw\1yU <8J-C9ixQG OP A8AU =8u 1E j 2P :HU>8m >m B,{qY 7>]dUSF Z I61E |0P7>q N ijQG OY H<JRNS1E gQG O:>kg_ra G peY >k +5m:VY 1E gQG O e L vh989<nf =UQP;g][xllku Jt_WNTL WNVL XNPK:99PI J RNS7GDO6:9PI FEJ B :H:8~.?*1E Y QK :H 4^R U;8@4^R t 3L A99POg /}T8Yz M soU <8u 1E j 2P :HqYm >m B,{U =87>]dUS c <EB Jt_UNRK031*-2./4,+5867:nrfrlr _ejnb`dijgjcq `^n^gjc jigeib;v ++}]WW ---V +rxr~rVs|zVs{k_m _,uut~57;SE FM@R062;SE C@R054SE FM 6BHG 806SE CB 6HG 85D52,8;;rr i m^5D h n p \62?h n p t b b <44SR B X4|z i /U{l _*\72Dt I H |y VB i F}k ;28i [ft bX4|z y _P G `k 5D\82]5]G F1f i q 5m :\yW j fx H?K?YOONW p7Mu K 4|i a DN i 2d K O p x /5SE @M@R 6b 429SE EP@R 6\YX h >KP54E 9|,544SR52,8;;25P 9|,m^544]644SR h n p i t b b 74SR B X4|z {l _*\62t X4|z y _P G `k 544SR\72n \42661S AR `A 31\82D W O3^q 5m :\yW j 9|,v\V U *i }T y H ]5]G F1\n~w *Ud`yJE<C52n \a :j <K ypu P h o T oV97d B i 7Dth >r 2\^U |i 9F l J \>]AP h o T-Ve d lj d i [q En \\/j O[q En \~-o T i ~-o T p Ed 5:4^J P,Bth >3X v a 0C L h*9i gAL h*92Z Q=|M /wBI <l@l JF>b AF>Bz 7C \Y 7io TB o 8J AF>[JF>B +W p 3tN i 6C 0v n \]o 8B o T ,B U |i 9F l J \62}~yW jo TZ k C p U iv 2Z Q It{e i}~j [=s *qPg /C \}]}~0[d.X2p ,B i _o T|4`B L Y {4[\<8zV :iv \S e b z :E i s \S 5\72o T N d j Y3d |C VB -x ;AF>U K ^]n >i Y 7n \o T T p E J o T ,B N d nP VB i ;A ;2<T f io T N d }~ON a ;j_P h o T [x :^164^i 7j B o T-~-z ~\8u _p W 1B o T t <d q 5;R m nP ;A q 5i [f d :<^z `p n o T/U ^*\`t b .m +*g<1IYQTURQTURh kr I H 425/\\hc 9o Qs i a r [JF>B B y 1Y Un rq +w4|B c -cr i /j Y P -j d i ]w^O r m t ]n >\a t b C ,oB 5E LWQX1B@RgVB<24Zi n\65{l R {l59U q i .m nP /UU ~f i 3Xf ~z >\b t [}~z u a\c t b C ,oB 425E LWQX1B@RgVB<24Zi n \65{l R {l59U q i .m nP /UU ~f i 3Xf ~z >\d t [}~z u ci g 2|?{U f ~z >\e n \VB r j Z]]n >B VB i <^;2<\f y o Tm^}d w 6O p 8^q ^m :\<C9GB9ML=SZ\]Z[]YT52{G j 8a |M M p 3X ?k o j ++n \o T 3@Q 3X85g69=68=5Z\@Q 2n ?k o s C v ]w^P>_]n >BU 4i L X85f]w^@30+`.p 1=B SJ \62K n ON j y LWQX1B@R N d o T _C ,oB @Q 3X85g68=5h kc 0c f i R b }d w 6O p 8^m :\YXR SpWoT mam031*-2./4,+58679aeZe_e TY^aVUX]^[^Wd USaS[^W^][Y]V:hrroRNNtttMrejepeMfnlMfmP ]]e^X*::A;7~}}HG~{x-0}HG .v P8LF ~}}R*}}HG 9y 4Y M T:A;71rj^M `xf 0V E u ~5[w 4Y J {PQ*{\-0E :A;7>?d N on 3b4YM VZnZqWQ +{a:A;7;/1rlV D.v P8p 1B e 2K ~}}HGQ ,{p 1BOCK9y 2+M lV 7<X_QPMQ ]XUk*{-:73G ~}}HG~{I /0{,HGc .v P8M n 3*~{.HGc *A:T ~~{.:PVs HmkQ *{7<X_QQ \]eUk-9:A3G ~8~{\-*1*{*E :A3G LF ~84Y M Vn 3G 0}}HGc .v P8lqW 1rQ *{n .v P8p 1B e 2K~8lV 6xg]>hQ +{i<i @}tlV,SX_QPOJ KcNbL Wksfnqg*}v w @|?x 6GOBJMD ~}}HG~{\-*}E 6GOBJMD LF ~}}R*}}HG 4Y M Vn 3G 0}HGc .v P8lVqW 1rQ *{n .v P8p 1B e 2K ~}}HGQ +{i <i @}tlV,SX_Q`nksrinm Q KG?DCEL*-H9>LFM z 73GTK70{}xy ~}H954>2y -}H96GOBJMD ~8~{x -=z 1B V LF ~84Y M Q*{i <i @}tlV,SX_Q+{5D,|-}HGc=JGONFJI RM n 3*HGc<:AMD 2T*}HE |HGPQ`nksrinm QQ KG?DCEL031*-2./4,+58679ce[eae TZ_cWUY^_\_Xd UScS\_X_^\Z^W:gppnRMMrrrLpeieoeLfmkLfl bmjqphml sssJG?DCEK{426-:u }4.1{.661}xx >=yw Md|fw\G 2.}xx >=rK 3Czw]q{xx >=mc 5x[_IoaC {w ]mc 5x^o +Up 1}xx >=C |w X{X *hb[G |EJQCNLP ]WVcS JnYQLNKxw}40/8-y 3ywMl y +~wy ;59z 0/8-D z 1z 6G 2.y 3rK 3C zw ]q /+xx >=Smc 5xGOV_IC {w -5961T`?101+wx F /zx ;5961BC 4,H?101+wx sG0/8-LjznoaC|w ]mc 5x^o +Up 1y 3C }w udVN}W[GX{X *hbC ~w v{JQCO ]Vccy 4/88zx >=yw Ml {wx ,;/88G]qR }x >=yec~YiCzw ]zx >=S xwxy 4596-:F?1}wz BGoa[t -xwzz 6>gkZgPbC {w udVN}W[G vzx EJQCON k]Sc`yx >4-87zx >=yw Ml yzy >;59z -87D {1z 6G]qR }x >=yec~YiC zw ]zx >=S z}>48@<A v 1.=F?1+wx BG_IoaC {w udVN}W[G vzx EJQC。

相关文档
最新文档