组织裂解液和细胞裂解液的配制
细胞组织裂解(提蛋白)方法
第一种方法蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。
我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内。
将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。
上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。
70v浓缩，150v分离第二种方法裂解液配方：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。
在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1,增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。
建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。
IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的,所以IEF前一定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下，把一些结缔组织给离心掉（150g既可）然后再加裂解液。
裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋白的浓度。
用这个方法最好经丙酮沉淀一次比较好）第三种方法建议最好加完裂解液后再用超声波破碎，我做肝脏蛋白提取时一般采取400W工作10秒，间歇10秒，次数15次，一次结束后大约30分钟再重复上述步骤一次（因为不同的样品用一根超声柱子，可能会导致污染，所以一定要用双蒸水冲洗干净，再用70%乙醇洗一下，再用水洗一次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是用10ml蛋白裂解液来匀浆3克的组织，最终用考马斯亮兰染色法测得的蛋白浓度大概为30~50 ug/ul测595 OD值时，设定一个只用水的空白，把所有测得的值都减去这个空白。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。
这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。
以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。
1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。
细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。
2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。
同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。
在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制？
组织裂解液和细胞裂解液如何配制？一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） 0.1mmol/L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/L(0.7μg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽） 0.3μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100μl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
组织裂解液
1.组织裂解液(500ml)：1MTris.Cl (PH=8) 25ml;0.5M EDTA(PH=8) 100ml; 2M Nacl 25ml;加入这三者后再加双蒸水定容至450ml,再进行高压灭菌，等冷却后再加入10%SDS(PH=7.2) 50ml（SDS不能高压灭菌）配成500ml组织裂解液。
2.1M Tris.Cl (PH=8)：称取60.57g Tris溶于400ml双蒸水，用Hcl调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
3.0.5M EDTA:称取EDTA.Na2.2H2o 93.05g溶于400ml双蒸水中，用氢氧化钠调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
4.10% SDS称取SDS50g,溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
5.2M Nacl:称取Nacl58.44g，溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
您好！这周已经过去了，在这里向你汇报下这个礼拜的工作情况及甲基化实验的一般思路。
本周工作情况：1.帮洪渊做了PCR实验，有关SOX9的，其中有两个有问题，做完洪渊拿去测序。
2.帮助徐盼提取RNA(十一期间抚州采的样）26个样3.对肝、脾、肾、膀胱、大脑、小脑（赵雪艳的样）进行匀浆，准备做ELISA试验。
甲基化实验：目的：转FSHb基因猪甲基化水平是否异常，对转基因猪有什么影响（对于具体目的有点不清楚）方法：转FSHb基因阴性猪与阳性猪甲基化水平进行对比实验思路：1.对转FSHb基因阴性猪与阳性猪脏器（心肝脾肺肾等，选取有关脏器还是？）做甲基化水平检测。
2.选取不同日龄（同一猪）进行甲基化水平检测，看随日龄的增加，甲基化水平发生怎样变化（正相关或负相关）？3.转FSHb基因猪外源FSHb基因甲基化异常（高甲基化，导致FSHb基因沉默，功能缺失）与转入外源基因后是否引起内源基因甲基化异常（某些功能异常）？4..转FSHb基因猪发生低甲基化还是高甲基化？过表达还是基因沉默？5.外源基因整合位点甲基化水平？6.启动子区域甲基化？7.CPG岛不易发生甲基化，转基因猪会否发生高甲基化？实验操作：1.DNA的提取及亚硫酸氢盐转化基因组 DNA（ EZ DNAMethylation-Gold TM Kit 试剂盒处理）2.使用数据库寻找CPG岛，设计亚硫酸盐测序 PCR引物，做MS-PCR3.PCR 扩增产物回收、连接、转化和测序鉴定4.提取mRNA，验证甲基化异常对转录的影响5.做蛋白有关实验，进一步验证甲基化异常对蛋白表达的影响（是否导致基因沉默，造成功能缺失）问题：1.某些数据库的使用及分析软件的应用2.是对基因组进行甲基化水平检测还是部分染色体基因进行甲基化检测或者与FSH基因有关进行甲基化检测3.目前思路还不是很清晰，有点理不顺，还有点混乱。
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)
实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。
二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。
轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。
（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。
保温过程中不时摇动，混匀反应液。
液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。
4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。
12000rpm 5分钟，两相分层。
用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。
（小心一点，不要吸入蛋白层。
如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。
12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。
三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。
细胞组织裂解(提蛋白)方法
第一种方法蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。
我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内。
将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。
上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。
70v浓缩，150v分离第二种方法裂解液配方：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。
在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1,增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。
建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。
IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的,所以IEF前一定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下，把一些结缔组织给离心掉（150g既可）然后再加裂解液。
裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋白的浓度。
用这个方法最好经丙酮沉淀一次比较好）第三种方法建议最好加完裂解液后再用超声波破碎，我做肝脏蛋白提取时一般采取400W工作10秒，间歇10秒，次数15次，一次结束后大约30分钟再重复上述步骤一次（因为不同的样品用一根超声柱子，可能会导致污染，所以一定要用双蒸水冲洗干净，再用70%乙醇洗一下，再用水洗一次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是用10ml蛋白裂解液来匀浆3克的组织，最终用考马斯亮兰染色法测得的蛋白浓度大概为30~50 ug/ul测595 OD值时，设定一个只用水的空白，把所有测得的值都减去这个空白。
如何配置细胞裂解液
如何配置细胞裂解液
组织裂解液（全细胞蛋提取）：
1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧胆酸钠0.25%
4：NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6：PMSF 1 mmoL/L
7：Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：150 mmoL/L Nacl 1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
如何配置细胞裂解液 如何配置细胞裂解液 组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:tris-hcl 50mmol/l ph 7.4 2: nacl 150 mmol/l 3:去氧胆酸钠0.25% 4:np-40或triton-x-100 1% 5: edta 1 mmol/l 6:pmsf 1 mmol/l 7:aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入. 细胞裂解液:1:np-40裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 50 mmol/l tris(ph8.0) 2:ripa裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 0.5%脱氧胆酸钠 0.1%sds 50 mmol/l tris( ph8.0) 下载文档原格式( word原格式 ,共1页)
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组织裂解液和细胞裂解液如何配制?一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的 PBS 在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
方法三•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2.溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性推荐RIPA buffer:. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系· 150 mM NaCl 等渗体系· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂· 5 µg/ml Aprotinin （抑肽酶）蛋白酶抑制剂· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂· 1% Tr iton x-100 破坏细胞·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2.溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性推荐RIPA buffer:. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系· 150 mM NaCl 等渗体系· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂· 5 µg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂· 1% Triton x-100 破坏细胞·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制，－20℃保存，用前混合。
蛋白酶抑制剂较贵，如果你的经费有限，可以仅用PMSF试一试，能出结果就可以。
•用于普通的 Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40 裂解液。
如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液,例如RIPA裂解液(强、中)或 SDS裂解液。
RIPA裂解体系： 150 mmoL/L Nacl， 1.0% NP-40或Triton-x-100 ，0.5%脱氧胆酸钠， 0.1% SDS， 50 mmoL/L Tris ( ph8.0)。
一、组织裂解液配制组织裂解液配方：`7M Urea(60. 06) 4.2042 g2M thiourea(76.12) 1.5224 g100mM DTT 0.1543 g4% CHAPS 0.4 g0.5mM EDTA 0.00146 g40Mm Tris 0.0485 g2%(v/v) NP-40 0.2 ml1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml5mM PMSF用前加 0.00871 g2%pharmalyte 0.2ml共10ml分装成400µl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）注：已配好分装成400µl/每管可供应用不需另配！！！细胞裂解液配方：6M Urea(60. 06) 1.8018 g2M thiourea(76.12) 0. 7613 g65mM DTT 0.050 g4% CHAPS 0.2 g40Mm Trisbase 0.02425 g共5ml分装成200µl/每管（可应用于50-100ml培养瓶的细胞裂解）细胞裂解液：组织裂解液配方：7 mol/L 尿素、 7M Urea(60.06) 4.2042g2 mol/L硫脲、2M thiourea(76.12) 1.5224 g2%NP-40、 2%(v/v) NP-40 0.2 ml1% Triton X-100、 1%(v/v) TritonX-100 0.1 ml65 mmol/L DTT、 0.1003g 100mM DTT 0.1543 g 5 mmol/L PMSF、 5mM PMSF用前加 0.00871 g4%CHAPS、 4% CHAPS 0.4g40 mmol/LTris、 40Mm Tris 0.0485 g 2% pharmalyte（pH3-10）、2%pharmalyte 0.2ml0.5mM EDTA0.00146 g25 mg/L DNase I、7 mg/L RNase A、20 mg/L aprotinin、20 mg/L leupeptin、2 mmol/L Na3VO4、Phosphatase Inhibitor Cocktail 1Phosphatase Inhibitor Cocktail 21ml水化液配方：8M Urea(60.06) 0.48048 g2% CHAPS 0.02 g痕量溴酚兰 0.4 µl1%的痕量溴酚兰（10mg+1000µl双蒸水）450µl水化液加DTT 0.00135mgor 400µl水化液加DTT 0.00126mg各种细胞裂解液的功用都分别是什么，SDS ，NP-40 ，TritonX-100有何作用SDS ，NP-40 ，TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。
SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。
NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。
但是去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素，建议参考《分子克隆》来做。