时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程
时间分辨荧光免疫分析技术
1984年， Hemmila确定了DELFIA(Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoroimmunoassay)这种时间分辨免疫分析技术方案,从而使DELFIA成 为Wallac的专利技术
国外仪器（Wallac公司<PerkinElmer>） 国内其他公司生产的仪器(上海新波、广州丰华等) 达瑞抗体公司自主研发的仪器及软件（DR-M6601）
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Wallac AutoDELFIA 1235
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半自动 VICTOR2 1420
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时间分辨荧光免疫分析技术
达瑞抗体
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标记免疫学分析技术发展历程
免疫荧光分析(Coons, 1941) 放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960) 酶免ELISA (Engvall, 1971) 金标免疫分析(Faulk和Taylor, 1971) 化学发光免疫分析(Arakawa， 1977) 时间分辨荧光免疫分析(Soini和Hemmila，1979) 电化学发光免疫分析(Leland, 1990) 液相芯片(美国Luminex公司, 1997)
小分子抗原竞争抑制示意图
固相包被二抗 + 一抗
孵育
+
+
孵育 Eu
待测抗原
铕标抗原
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实验一时间分辨荧光免疫分析法检测乙肝病毒血清20120406
实验一 时间分辨荧光免疫分析法检测
乙肝病毒血清标志物
目的要求
掌握时间分辨荧光免疫分析的检测原理。 了解时间分辨荧光免疫分析仪的构造、工作原
理。 采用时间分辨荧光免疫分析仪检测乙肝病毒血
清标志物的操作过程。
一、实验原理
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA，Time Resolved Fluorescent Immunoassay），又称解离增强镧系荧光免 疫分析（DELFIA，Dissociation Enhancement Lanthamide Fluoro Immunoassay），是以镧系元素为 标记物和时间分辨荧光测量相结合，建立的一种新的非放射 性微量检测技术。
不要碰到小孔边缘），并加贴封条。
11. 置于振荡仪上缓慢振荡，室温孵育5分钟。 12. 在时间分辨免疫分析仪上检测荧光（在半小时内完成）。 使用专用软件根据荧光强度计算各标志物浓度。
结果判断
1. 浓度值≥0.2ng/ml的样品判断为阳性，否则为阴性。 2. 浓度值＞ 150ng/ml的样品应稀释。 3. A点计数＜5000，F点计数＞1,000,000。 4. 剂量反应曲线的线性相关系数r＞0.9800 5. 典型的剂量反应曲线。 6.待测样本中HBsAg含量的检测
时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程
时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程一、产前筛查定义及其原理产前筛查（Prenatal Screening)是指通过经济、简便和较少创伤的检测方法，从孕妇群体中发现怀有某些先天缺陷胎儿的高危孕妇，以便进而进行诊断，以最大限度地减少异常儿的出生。
血清学标志物产前筛查已成为非侵入性产前诊断的重要方法。
目前产前筛查的两种主要疾病是唐氏综合征（Down’s Sydrome，DS；又称21三体综合征）和胎儿神经管缺陷（Neural Tube Defects，NTDs），也包括一部分18三体综合征。
产前筛查可以在妊娠早期（7～13周）或中期（14～21周）进行。
目前用于产前筛查的血清学标志物有：甲胎蛋白（AFP）、游离β-）、妊娠相关血浆蛋白（PAPP-A）、绒毛膜促性腺激素（F-β-hCG）、游离雌三醇（uE3抑制素A（inhibin A）等。
产前筛查实验测量通用评价指标为中位值倍数（MOM），正常妊娠特定的MOM=标本检测浓度/相应孕周中位值浓度。
产前筛查系统由体外诊断试剂、检测仪器和筛查分析软件组成。
检测仪器配合体外诊断试剂检测出孕妇血清中标记物（AFP、F-β-hCG、PAPP-A等）的浓度，将检测数据及孕妇相关因素输入筛查分析软件中，即可得出唐氏综合征（DS）和神经管缺陷（NTD）筛查的结果。
由于目前的技术水平的限制，产前筛查技术都不能做到筛查100%正确。
假阴性病例因此会误诊，假阳性病例一般在产前诊断实验时被纠正。
二、唐氏综合征的产前筛查唐氏综合征是人类最常见的一种染色体病，发病率约1/800～1/600，男性多于女性。
1866年英国医生Langdom Down 首次对此病进行临床描述，因此命名称为Down，s Syndrome，简称DS。
1959年Lejeune首先发现本病的病因是多了一条21号染色体，故又将其命名为21三体综合征。
唐氏综合征的主要临床表现：严重智力低下、愚型面容，约50%伴有先天性心脏病、小头畸形等发育异常。
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。
它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。
从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。
在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。
对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。
（一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪开/关程序1 开机1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。
1.2 打开计算机显示器。
1.3 启动计算机。
1.4 运行系统软件：Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。
Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。
在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。
2 开机后准备1.1 清洗液准备1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。
1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。
1.2 样品处理器准备1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。
拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。
1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。
简述时间分辨荧光免疫测定的基本原理
简述时间分辨荧光免疫测定的基本原理时间分辨荧光免疫测定，听起来高大上吧？其实它的原理就像一场精彩的侦探游戏，特别有趣。
这种方法主要是利用荧光的特性，通过时间上的分辨来探测特定的物质，比如某种抗原。
想象一下，我们在黑暗的房间里用手电筒找东西，手电的光亮与阴影的交替就像我们在寻找目标一样。
这里的“时间分辨”就是告诉我们光亮和阴影出现的时刻，帮助我们找出那隐藏在黑暗中的小秘密。
我们得了解荧光是怎么一回事。
它就是一种物质吸收光之后，再发出不同颜色光的现象，像一颗星星在夜空中闪烁。
当我们把标记有荧光物质的抗体加入到样本中时，抗体就像小侦探一样，奔向目标抗原，紧紧抓住不放。
这个过程简直像是小猫追小鼠，一旦抓住，荧光物质就会发光，变得特别显眼。
你想想，咱们一闪一闪的光亮就是小侦探给我们发出的信号。
而时间分辨的魅力就在于，它不仅仅看光亮有多强，还要看光亮是多早、多晚出现的。
这就像你在等朋友，不同的人到达的时间不一样，第一位到达的总是最早，最后到的可能有点迟。
这种时间上的差异能帮助我们更加精准地分析样本中到底含有什么物质。
这种方法的敏感度特别高，甚至可以检测到极少量的目标分子，简直就是细微之处见真章。
如果说荧光是主角，那么时间分辨就是它的绝佳搭档。
通过特殊的仪器，我们可以精确测量荧光信号出现的时间，这样就能排除背景噪声的干扰，得到更干净、清晰的结果。
想象一下，一场音乐会，主唱声音洪亮，但如果伴奏乐器的杂音太多，听起来就会让人受不了。
时间分辨就是在帮助我们过滤那些“杂音”，让主唱的声音更加动听。
说到这里，可能有人会问，这种方法有什么实际应用呢？广泛得很呢！在医学领域，比如早期诊断某些疾病，甚至在食品安全检测中，它都能派上大用场。
就像一个超级英雄，无处不在，保护着我们的健康。
比如说，检测血液中的特定抗体，这可是早发现早治疗的好帮手。
再来聊聊这个方法的优势吧。
敏感度高，能检测到很低浓度的物质，简直是微量分析的好帮手。
时间分辨让结果更加可靠，能够减少假阳性或假阴性的出现，避免了许多不必要的麻烦。
时间分辨荧光免疫测定
时间分辨荧光免疫测定
以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、
仪器组件等的本底荧光干扰，以及激发光源的杂射光的影响，使灵敏
度受到很大限制。
时间分辨荧光免疫测定（timeresolvedfluorescenc eimmunoassay，TR-FIA）是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。
其基本原理是以镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧
光物质有长荧光寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本
底荧光完全衰退后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。
TR-FIA的测定原理见
图17-4。
以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图17-5。
其中增强液
的作用是使荧光信号增强。
因为免疫反应完成后，生成的抗原－抗体
－铕标记物复合物在弱碱性溶液中，经激发后所产生的荧光信号甚弱。
在增强液中可至pH2～3，铕离子很容易解离出来，并与增强液中的β-
二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物，大大有利于荧光测量。
图17-4 TR-FIA测定原理示意图
图17-5 双抗体夹心法TR-FIA反应程序示意图
所用检测仪器为时间分辨荧光计，与一般的荧光分光光度计不同，采用脉冲光源（每秒闪烁1000次的氙灯），照射样品后即短暂熄灭，
以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再测定样品发
出的长镧系荧光。
检测灵敏度可达0.2～1ng/ml。
全自动新生儿筛查时间分辨荧光免疫分析仪
附件一：全自动新生儿筛查时间分辨荧光免疫分析仪一、仪器功能1、原装进口，有SFDA产品注册证。
2、采用时间分辨荧光免疫技术，有配套试剂盒与新筛相关的指标，如TSH、17α-OHP。
3、能开展铕Eu（613nm）、钐Sa（645nm）等镧系元素中的单标记和多标记进行检测，及配套滤光片。
4、仪器为全自动操作，样品检测项目可自动进行组合，连续操作，每批可进行≥1152个检测。
5、具有8种不同的试剂位，一个样本可同时检测8个项目。
6、对同一样品1秒钟能检测1000次。
7、微孔板、试剂都具有条形码识别器。
8、恒温温育，保持温度25℃。
9、洗板机：24针洗板机，全自动吸液和冲洗，温育后自动清洗，通过压力传感器检测液体状态。
10、增强液加样器：管路自动冲洗、加样200ul，容量50ul精确度CV≤1%。
11、双试剂加样器：两个试剂加样器，试剂加样器容量0~1000ul，精确度CV≤1%，为防止交叉污染，加样头可废弃。
12、取片器：用于自动吸取血片，每板处理时间不超过3分钟。
13、时间分辨荧光计：氙灯光源，1us脉冲光源，每板测量时间3.5min，具有双激发光滤光片转换器和发射光滤光片自动转换器，滤光片为高精度的，滤光片包括：Europium（613nm），Samarium（645nm）。
二、工作站1、随机安装电脑工作站中文数据管理软件；2、实验的分析系统软件可建立工作表、可对样本编辑；3、软件与主机内部连接，实现全自动离机操作。
自动程序编排，自动指示装载试剂和微孔板附件二：荧光免疫分析仪技术参数1. 设备名称：荧光免疫分析仪2. 技术参数：(1)原装进口，有SFDA产品注册证。
(2)具备两种分析检测技术：时间分辨法、荧光法，适用于产前筛查与新生儿疾病筛查(3)临床检测项目：A．可开展血清样本检测项目：双标记AFP/Free-hCGβ、PAPP-A、Free-hCGβ、uE3、甲状腺检测项目。
B．可开展干滤纸血片样本检测项目：TSH、T4、PKU、17-αOHP、G6PD、ToxoIgM、IRT等；(4)具有两套光源系统：持续光源、闪烁光源。
(SOP)时间分辨荧光免疫分析实验操作指南
时间分辨荧光免疫分析实验操作指南以及注意事项第一节时间分辨反应过程图TRFIA的操作要点优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证TRFIA检测结果准确可靠的必要条件。
下面列出TRFIA各个操作步骤的注意要点，严格遵照规定操作.1、样本的采取和保存TRFIA测定的样本一般为血清。
不能使用含抗凝剂EDTA和柠檬酸的样本，因为二者可以螯合铕，使测定值降低。
血清样本可按常规方法采集,溶血和脂血样本可能会影响测值。
样品在2℃-8℃可以保存3-5天，如果需要长期保存，请－20℃保存，避免反复冻融。
冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，宜轻缓充分混匀，避免气泡，可上下颠倒混和。
不要把样本保存在室温，室温放置48小时可能会导致结果不稳定。
2、试剂的准备整个实验过程应尽量在干净无尘的环境下进行实验前应检查试剂盒的出厂日期以确定试剂盒是否过期，一般自产品检验合格出厂日期起有效期为一年。
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
TRFIA中用的去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的去离子水。
从冰箱中取出的试验用试剂应待其温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
试剂盒中的标准品或铕标试剂若是冻干的状态，第一次开盒做实验在加去离子水溶解标准品或铕标后，请不要立刻开始使用，静置10分钟左右待其溶解完全后再开始。
板条若未能一次用完，剩余板条用塑料袋（内有干燥剂）封口后密封保存。
TRFIA受反应温度的不恒定、操作误差以及铕标记物的稳定性等因素的影响，不同日期的荧光值会有所波动，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
3、加样在TRFIA中一般有3次加样步骤，即加样本，加铕标记物，加增强液。
加样时应将所加物加在微孔板的底部，避免加在孔壁上部，不可溅出，不可产生气泡。
加样本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。
加不同的样本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。
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时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程一、产前筛查定义及其原理产前筛查（Prenatal Screening)是指通过经济、简便和较少创伤的检测方法，从孕妇群体中发现怀有某些先天缺陷胎儿的高危孕妇，以便进而进行诊断，以最大限度地减少异常儿的出生。
血清学标志物产前筛查已成为非侵入性产前诊断的重要方法。
目前产前筛查的两种主要疾病是唐氏综合征（Down’s Sydrome，DS；又称21三体综合征）和胎儿神经管缺陷（Neural Tube Defects，NTDs），也包括一部分18三体综合征。
产前筛查可以在妊娠早期（7～13周）或中期（14～21周）进行。
目前用于产前筛查的血清学标志物有：甲胎蛋白（AFP）、游离β-）、妊娠相关血浆蛋白（PAPP-A）、绒毛膜促性腺激素（F-β-hCG）、游离雌三醇（uE3抑制素A（inhibin A）等。
产前筛查实验测量通用评价指标为中位值倍数（MOM），正常妊娠特定的MOM=标本检测浓度/相应孕周中位值浓度。
产前筛查系统由体外诊断试剂、检测仪器和筛查分析软件组成。
检测仪器配合体外诊断试剂检测出孕妇血清中标记物（AFP、F-β-hCG、PAPP-A等）的浓度，将检测数据及孕妇相关因素输入筛查分析软件中，即可得出唐氏综合征（DS）和神经管缺陷（NTD）筛查的结果。
由于目前的技术水平的限制，产前筛查技术都不能做到筛查100%正确。
假阴性病例因此会误诊，假阳性病例一般在产前诊断实验时被纠正。
二、唐氏综合征的产前筛查唐氏综合征是人类最常见的一种染色体病，发病率约1/800～1/600，男性多于女性。
1866年英国医生Langdom Down 首次对此病进行临床描述，因此命名称为Down，s Syndrome，简称DS。
1959年Lejeune首先发现本病的病因是多了一条21号染色体，故又将其命名为21三体综合征。
唐氏综合征的主要临床表现：严重智力低下、愚型面容，约50%伴有先天性心脏病、小头畸形等发育异常。
目前对DS尚未有治疗方法，因此通过产前筛查找出高危孕妇，对其进行产前诊断是防止患儿出生的重要手段。
1.以孕妇年龄作为筛查指标最早用于DS的筛查指标为孕妇年龄。
早期研究发现，DS的发病率随孕妇年龄增高而增高，1977年Hook和Chambers报道了孕妇年龄在20～30岁之间，发病率呈线性增加，而在33岁左右呈对数增加，孕妇年龄为35岁时，发病率约1/384，40岁时约1/110，比30岁时增加了8倍，如图1。
一般认为35岁以上的孕妇是DS的高危人群，是要进行羊膜腔穿刺的指征。
但深入研究统计发现，若仅以孕妇年龄≥35岁作为筛查指标，DS的检出率约20%，而约80%的胎儿DS是在年龄小于35岁的孕妇人群中。
因此，不少国家的筛查机构指出“DS 产前筛查应面向所有孕妇而不考虑年龄”。
仅用孕妇年龄指标不够全面，应结合应用孕妇血清标志物指标或超声波形态学联合筛查诊断。
图1 孕妇年龄与胎儿发生唐氏综合征风险的关系2. 以孕妇血清标志物为筛查指标1984年英国Merkatz等最先发现怀有DS胎儿的孕妇血清AFP含量降低，这在产前筛查史上是一个划时代的进步，建议将AFP作为35岁以下孕妇胎儿DS的筛查指标。
这一发现很快被其它实验室证实，1987年Bargot发现怀有DS胎儿的孕妇血清中的hCG的水平是正常孕妇的2倍，以孕妇年龄再结合血清中hCG检测，DS的筛查率可达到63%。
1988年，Canick等发现怀有DS胎儿的孕妇血清的水平比正常孕妇低25%。
同年，伦敦Bartholomews医院Wald提出AFP、中uE3ß-hCG、uE三联的筛查方法。
1994年美国妇产科学院向全美医学界正式推荐这3一组合，并得到广泛应用，一直至今。
在上世纪90年代，有学者还相继发现PAPP-A、inhibin A、糖原抗原125（CA-125）等与孕妇怀DS胎儿有关。
也将逐步应用到DS的产前筛查中。
甲胎蛋白（AFP）是胎儿血清中最常见的蛋白质，1956年由Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种甲种球蛋白。
早孕期由卵黄囊产生，晚孕期由胎儿肝脏大量产生。
胎儿血中的AFP经排尿进入羊水并通过胎盘屏障渗入母血。
孕10周即可在母血中测出AFP，孕11～20周AFP浓度呈线性升高，32～34周（有文献为28～32周）达到高峰，以后逐渐下降，分娩后几天降为0。
且孕早期以AFP单项筛查胎儿染色体异常无意义，因此母血中AFP的检测在孕中期14～20周进行。
正常孕妇血中AFP含量变化见图2与表1。
当孕妇胎儿患DS时，由于胎儿生长发育迟缓，组织器官发育不全，肝脏、胎盘的功能不良，合成AFP能力降低，致使孕中期母血清AFP水平下降（一般<0.5MOM，有的以<0.4MOM或<0.7MOM为标准）。
但当胎儿出现开放性神经管缺损或腹壁缺损时，破坏了阻止AFP外溢的胎儿屏障，使胎儿体内高浓度的AFP释放，渗透入母体循环，引起母体血清中的AFP显著升高。
因此，AFP也可作为神经管畸形的筛查指标。
参考：马云宝，顾军，何雪云.医学特种检测的临床应用，第1版.北京：原子能出版社，1-2.图2 正常妊娠母血中AFP含量变化趋势表1 正常妊娠母血清AFP含量参考值（ug/L）摘自：方群.妇产科检验诊断学，第1版.北京：人民卫生出版社，62.绒毛膜促性腺激素（hCG）是胎盘的合体滋养层分泌的一种糖蛋白，为胎盘中最重要的激素，由α和β亚基组成，两个亚基可彼此结合，也可游离于血液中。
孕妇血清中的hCG主要以完整的形式存在，游离形式的β-hCG（F-β-hCG）占总hCG的1～8%。
妊娠期母血清中β-hCG水平呈双峰曲线，第1峰于妊娠12周前后（一般8～10周或9～12周），15周后出现生理性下降，20～32周维持低而平稳水平，26周达最低。
第2峰于妊娠37周，明显低于第1峰，至妊娠足月时稍有下降。
在妊娠11周内，血清β-hCG的含量与孕龄密切相关，随妊娠进展呈直线上升，孕龄每增加1天，β-hCG平均增加1.53IU/ml（hCG约每1.3天上升2倍，如未达到此水平，此次妊娠可能是输卵管妊娠—宫外孕，应动态观察），分娩后急剧下降，产后4天降至1 IU/ml，产后9天基本消失。
正常妊娠母血清hCG含量见表2与表3。
胎儿患DS时，胎盘重量低于正常水平，组织器官发育不全，肝脏、胎盘的功能不良，因此孕妇血清中hCG浓度下降要比怀正常胎儿的孕妇晚3周左右，致使孕中期（约20周左右）母血清中的hCG浓度呈高水平状态，怀DS儿孕妇血清中游离的β-hCG浓度比正常孕妇至少高2倍（一般>2.5MOM），如图3。
表2 正常妊娠母血清hCG含量参考值（U/L）妊娠期（周）受精后距末次月经 U/L2 4 5~1003 5 200~30004 6 10000~800005~12 7~14 90000~50000013~24 15~26 5000~8000026~38 27~40 3000~15000摘自：周新，涂植光.临床生物化学和生物化学检验，第3版.北京：人民卫生出版社，435.表3 正常妊娠母血清β-hCG含量参考值（mIU/ml）摘自：1.韦振元等.血清β-hCG、HPL和β-hCG/HPL比值对妇产科疾病的临床意义.标记免疫分析与临床，1999，6（1）：9-12.2. 王晓雯等.孕中期各周β-hCG正常值测定及其临床意义.中国优生与遗传杂志，2000，8（2）：62.图3 ß-hCG在正常孕妇和怀有唐氏胎儿孕妇血清中的分布游离雌三醇（uE3）是雌二醇（E2）和雌酮（E1）的代谢产物，在非妊娠女性中浓度很低，而在妊娠后期浓度则明显增加。
只有约9%的E3在血液循环中游离为uE3。
在妊娠后期E3由胎儿肾上腺、胎肝和胎盘大量合成，反映了胎儿和胎盘双方面的功能。
母体血清E3约90%来自此合成途径，少量由母体卵巢前体生成。
E 3生物合成途径的中断将导致母体血清E3低水平。
造成E3途径中断的情况：胎儿宫内发育迟缓、无脑畸形、胎盘硫酸酯酶缺乏、死胎、染色体异常等，缺乏E 3的孕妇分娩期将推迟。
在胎儿正常发育的情况下，其母体内uE3含量自29～34周逐渐上升，35～36周开始快速上升，在41～42周（37～38周或40～41周）达高峰，正常妊娠孕妇uE3参考值见表4与图4。
uE3被用于胎儿DS筛查主要在孕中期，应注意正常妊娠孕妇uE3是孕中期变化最大的指标，必须核对孕周。
在孕妇怀DS胎儿时，母体血清中uE3表现为降低异常（一般<0.7MOM）。
目前uE3已是多标记联合筛查中用得相当普遍的标记物之一。
3引自：徐增秀,徐燕红,彭晓燕,等.正常孕妇血清游离雌三醇动态监测的临床价值.标记免疫分析与临床,2000,7(2): 74-75.图4 正常妊娠孕妇血清uE3含量变化趋势妊娠相关血浆蛋白（PAPP-A）是一种大分子糖蛋白，PAPP-A由胎盘合体滋养层和蜕膜产生，属于α2巨球蛋白，具有激活补体，起免疫抑制的作用（其生物功能目前尚未完全清楚）。
早在1974年Lin等首次报道了孕早期母血中PAPP-A的研究，指出PAPP-A起源于绒毛周围纤维蛋白，其水平随孕周增加而增加。
后来诸多学者分别在孕早期应用PAPP-A结合F-β-hCG（或hCG）作为DS 筛查指标，证实PAPP-A是一种最有意义的标志物。
Wald等及Haddow等在综合归纳了9个国家21个产前筛查诊断中心的研究结果的基础上，用孕妇7种血清标志物以不同组合作筛查指标进行比较，结果显示，PAPP-A诊断DS效果较满意，特别是结合F-β-hCG组合时阳性检出率可达60%，其中假阳性率仅为5%。
Zimmermann等检测了1151例21三体和18三体患者的PAPP-A水平，中位数的倍数分别是0.51和0.08 ，结果显示PAPP-A可作为妊娠DS胎儿产前筛查一个独立的标志物。
孕早期就可以在母体血清中检测到PAPP-A（单胎受精后32天，双胎受精后21天即可在孕妇血清中检测到），随着妊娠进展，母体PAPP-A水平升高，到妊娠足月时达到高峰，此时母血PAPP-A浓度是羊水的10倍，产后6周即测不到。
而整个妊娠期间，胎血中测不道PAPP-A，这是因为PAPP-A分子量大，不能透过胎盘进入血循环。
PAPP-A具有以下优点：在孕早期阶段，母血中即可测到。
当其他妊娠蛋白水平开始下降时，母血PAPP-A水平仍在升高，它是唯一的一种在母血中浓度最高，羊水中次之，胎血中不含有的妊娠蛋白。
由于DS胎儿的器官包括胎盘均发育不全，胎盘合体滋养层功能下降，合成PAPP-A减少，因此怀有DS胎儿的孕妇，其血清中PAPP-A一般低于0.25MOM～0.51MOM。