单克隆抗体制备技术的最新进展及应用
人源化单克隆抗体研究进展
人源化单克隆抗体研究进展人源化单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和力的生物药物，通过杂交瘤技术将鼠源单克隆抗体的可变区与人类抗体的恒定区进行交换，以减少免疫原性，提高治疗效果。
近年来，随着科技的不断进步，人源化单克隆抗体研究取得了显著的进展，为肿瘤、自身免疫性疾病、神经系统疾病等治疗领域提供了新的思路和方法。
研究现状：人源化单克隆抗体方法、成果与不足人源化单克隆抗体研究主要包括抗体库的建立、抗体筛选和优化、以及抗体生产等多个环节。
目前，研究人员已成功建立了多种人源化单克隆抗体，并应用于临床试验，取得了一定的疗效。
例如，针对肿瘤治疗的人源化单克隆抗体药物能够特异性地识别肿瘤细胞，并通过激活免疫反应来杀死肿瘤细胞。
然而，人源化单克隆抗体研究仍存在一定的不足之处，如抗体药物的免疫原性、毒副作用等问题需要进一步解决。
研究方法：人源化单克隆抗体研究实验设计与数据分析人源化单克隆抗体研究的实验设计主要包括建立人源化抗体库、筛选和优化抗体，以及进行药效和毒理试验等。
在实验过程中，需要采集和处理大量的实验数据，并进行深入的统计分析和比对，以获得抗体的最佳配对组合和最佳治疗剂量等参数。
成果和不足：人源化单克隆抗体研究的成果与不足人源化单克隆抗体研究在肿瘤、自身免疫性疾病、神经系统疾病等多个治疗领域取得了显著的成果。
例如，针对肿瘤治疗的人源化单克隆抗体药物已经成功应用于临床试验，并显示出较好的疗效和安全性。
在自身免疫性疾病和神经系统疾病治疗领域的人源化单克隆抗体药物也在研发和试验阶段。
然而，人源化单克隆抗体研究仍存在一定的不足之处，如抗体药物的免疫原性、毒副作用等问题需要进一步解决。
同时，抗体药物的生产成本较高，限制了其在临床上的广泛应用。
尽管人源化单克隆抗体研究取得了一定的成果，但仍存在许多问题需要进一步解决。
未来，研究人员需要进一步探索人源化单克隆抗体的作用机制和优化方法，以获得更高效、安全、低成本的药物。
同时，需要加强抗体药物的工艺研究，提高生产效率和降低生产成本。
单克隆抗体的应用与研究
单克隆抗体的应用与研究单克隆抗体是一种特殊的抗体，由单个克隆的浆细胞所分泌。
相比多克隆抗体，单克隆抗体具有更好的特异性和稳定性，因此在医学、生物学、分子生物学等领域有广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的研究进展和应用。
一、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备可以分为三个步骤：免疫原制备、免疫动物及其免疫和细胞融合和筛选。
首先需要制备免疫原，这个免疫原通常是目标抗原或者抗体对其特异性的区域片段。
如果是目标抗原，通常要首先纯化得到。
其次，需要为制备单克隆抗体的动物进行免疫。
一般是选择小鼠等实验动物，将免疫原注射到动物身体内，让它们产生特异性抗体。
之后，需要从这些动物体内获取免疫细胞，即B淋巴细胞。
最后，需要使用细胞融合技术通过融合免疫B细胞和癌细胞，来获取产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
这些细胞能够长期分泌具有特异性的抗体，并形成混合瘤。
通常，这些细胞的混合物需要进行严格的筛选和鉴定，以确保其产生的抗体都是特异性单克隆抗体。
二、单克隆抗体的应用1. 诊断和治疗单克隆抗体在临床上的应用越来越广泛。
例如，它们可以用于诊断和治疗晚期癌症。
新兴的单克隆抗体医学治疗（Monoclonal Antibody Therapy，MAT）被评价为一种有希望的抗癌治疗方法，特别是在血液系统的癌症治疗方面。
由于单克隆抗体的特异性，可以通过将它们与药物或放射性同位素结合，使它们更好地治疗癌症。
2. 分子生物学在分子生物学领域，单克隆抗体经常用来在Western blotting和其他分析技术中检验目标蛋白质的存在。
单克隆抗体还可用于免疫共沉淀、免疫沉淀、染色和免疫组化等实验中。
3. 生物分子检测单克隆抗体也广泛应用于药品研究和开发，例如用于高度灵敏的免疫印迹，以检测蛋白质、肽和DNA序列等生物分子。
此外，单克隆抗体还用于流式细胞术、细胞分选、病毒、菌和细胞诊断。
三、单克隆抗体的未来单克隆抗体作为一种新型的生物技术，其应用领域正在不断拓宽。
单克隆抗体药物的研究进展及临床应用_综述_
单克隆抗体药物的研究进展及临床应用_综述_ 单克隆抗体药物的研究进展及临床应用综述1：引言1.1 背景1.2 目的2：单克隆抗体的概述2.1 抗体的基本结构和功能2.2 单克隆抗体的定义和特点3：单克隆抗体的研究进展3.1 单克隆抗体的制备方法3.1.1 高亲和力的单克隆抗体制备方法3.1.2 人源化单克隆抗体制备方法3.2 单克隆抗体的改良和优化3.2.1 重组单克隆抗体的改良3.2.2 人源化单克隆抗体的改良3.3 单克隆抗体的选择和验证3.3.1 亲和力筛选3.3.2 特异性验证3.4 单克隆抗体的结构与功能研究3.4.1 结构分析3.4.2 功能研究3.5 单克隆抗体的药物开发3.5.1 注射剂制备3.5.2 经口给药剂型的制备3.5.3 缓控释剂型的制备3.5.4 接合物制备4：单克隆抗体的临床应用4.1 抗癌药物4.1.1 HER2阳性乳腺癌的治疗4.1.2 EGFR阳性非小细胞肺癌的治疗 4.1.3 CD20阳性淋巴瘤的治疗4.2 自身免疫性疾病治疗4.2.1 类风湿关节炎的治疗4.2.2 炎症性肠病的治疗4.3 其他临床应用5：结论5.1 单克隆抗体药物的研究进展5.2 单克隆抗体药物的临床应用前景附件：[附件名称]（可以相关研究文献、数据、图片等）法律名词及注释：1、专利法：指规定了对发明创造的保护范围的法律法规。
2、药品注册法：指规定药品注册和监督管理的法律法规。
3、临床试验管理规定：指规定了临床试验的监督与管理要求的法律法规。
4、知识产权保护条例：指规定了对知识产权进行保护的法律法规。
单克隆抗体的制备及应用实验原理
单克隆抗体的制备及应用实验原理1. 简介单克隆抗体是指由单一B细胞克隆扩增得到的抗体，在医学研究和生物制药等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法及其在实验中的应用原理。
2. 单克隆抗体的制备方法单克隆抗体的制备需要经历以下几个步骤：2.1 免疫原的选择免疫原的选择是单克隆抗体制备的第一步。
通常选择与所需抗体结构最为相似的蛋白质作为免疫原，可以是纯化的蛋白质、重组蛋白、细胞表面抗原等。
2.2 免疫动物的免疫选择适当的免疫动物，常见的包括小鼠、大鼠、兔子等。
将免疫原与免疫佐剂混合注射到动物体内，触发免疫反应，使得免疫动物产生特异性抗体。
2.3 细胞融合将免疫动物的脾细胞和癌细胞进行融合，常用的癌细胞包括骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞等。
通过融合方法，使得脾细胞和癌细胞融合成为杂交瘤细胞。
2.4 杂交瘤细胞的筛选与培养对融合后的杂交瘤细胞进行筛选，常用的方法包括喷洒法、限稀稀释法等。
筛选出具有单克隆性的杂交瘤细胞后，进行培养、扩增。
2.5 单克隆抗体的纯化将培养得到的杂交瘤细胞进行离心、洗涤等操作，得到含有目标抗体的上清液。
通过柱层析、电泳等方法，对上清液进行纯化，最终得到单克隆抗体。
3. 单克隆抗体的应用实验原理单克隆抗体在实验室中有多种应用，包括免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等。
以下将介绍单克隆抗体在这些实验中的应用原理：3.1 免疫组化免疫组化是一种检测组织或细胞中特定抗原表达情况的方法。
通过与组织或细胞中特定分子结合，单克隆抗体可以为我们提供目标抗原的定位和分布情况。
3.2 免疫印迹免疫印迹是一种检测特定蛋白质表达情况的方法。
通过将蛋白质转移到膜上，并与特异单克隆抗体结合，可以用于检测目标蛋白质的存在与定量。
3.3 流式细胞术流式细胞术是一种用于分析和鉴定细胞表面标记物的方法。
通过与特定抗原结合，单克隆抗体可以进行标记，并通过流式细胞仪进行检测和分析。
3.4 免疫沉淀免疫沉淀是一种用于富集目标蛋白质的方法。
单克隆抗体的制备方法与应用
单克隆抗体的制备方法与应用一、前言单克隆抗体是指一种具有高度特异性和亲和力的抗体，其来源于单个B细胞克隆。
相比多克隆抗体，单克隆抗体更加纯净、稳定和可靠，因此在生物医学研究、诊断和治疗等方面有着广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法与应用。
二、单克隆抗体的制备方法1. 免疫动物首先需要选取适当的动物进行免疫，通常选择小鼠或大鼠。
在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
2. 免疫原选择选择合适的免疫原是制备单克隆抗体的关键步骤。
常见的选择包括蛋白质、多肽、细胞表面分子等。
在选择时需要考虑到其特异性、稳定性和可重复性等因素。
3. 免疫程序在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
接着，将免疫原注射到动物体内，通常需要多次免疫以增强免疫效果。
在免疫过程中需要对动物进行监测，例如采集血样检测抗体水平。
4. 融合细胞的制备在获得足够的抗体后，需要从动物体内采集B细胞并与骨髓瘤细胞进行融合。
常用的骨髓瘤细胞包括SP2/0和NS0等。
5. 单克隆抗体筛选通过限稀法或单一细胞分离法等方法将融合细胞分离为单个克隆，并通过ELISA、免疫印迹等方法筛选出特异性较高的单克隆抗体。
接着对筛选出的单克隆抗体进行扩增和纯化等处理。
三、单克隆抗体的应用1. 生物医学研究单克隆抗体在生物医学研究中有着广泛的应用，例如作为特定蛋白质或分子的检测工具、用于药物开发和治疗等。
2. 诊断单克隆抗体在诊断方面也有着重要的应用，例如用于肿瘤标志物的检测、病原体的检测等。
3. 治疗单克隆抗体在治疗方面也有着广泛的应用，例如用于治疗癌症、自身免疫性疾病等。
其中一些单克隆抗体已经被批准为药物并用于临床治疗。
四、总结单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和力的抗体，在生物医学领域中有着广泛的应用。
其制备方法包括适当动物选择、合适免疫原选择、多次免疫程序、融合细胞制备和单克隆抗体筛选等步骤。
单克隆抗体在医疗领域中的应用研究
单克隆抗体在医疗领域中的应用研究单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）是一种以单个细胞克隆为基础制备的、能够高度特异性结合某一特定抗原的抗体分子。
自1975年首次制备出第一种mAb以来，该技术已广泛应用于生物医学领域，成为目前最为热门的医学研究方向之一。
单克隆抗体具有高度特异性、高度稳定性，从而大大增强了其在医疗领域的应用价值。
1. 单克隆抗体的制备和研究进展单克隆抗体的制备基于克隆技术和体外免疫化学技术，通常需要进行以下步骤：1）选取某一抗原，注射到动物体内引起免疫反应，收集动物的淋巴细胞；2）体外激活淋巴细胞，将其融合到特定的细胞系中，以获得混合型瘤细胞；3）将混合型瘤细胞进行单克隆化培养，筛选出单克隆细胞；4）将单克隆细胞培养大量扩增，从而制备出具有高度特异性的单克隆抗体。
单克隆抗体在医疗领域中的重要性越来越引人注目。
近年来，科学家们对单克隆抗体的研究开展了广泛的应用探索。
例如，在乳腺癌、肺癌、胃癌、头颈癌、结肠癌等多种人类恶性肿瘤中，单克隆抗体已经成为一种非常重要的治疗策略。
此外，单克隆抗体还可以被用于抗病毒、抗菌、抗疟等疫苗设计和生物传感器制备等方面。
2. 单克隆抗体在治疗肿瘤中的应用单克隆抗体在治疗肿瘤方面被广泛应用，其最大的优势是能够非常特异地结合肿瘤细胞表面的分子靶点。
这种特异性不仅可以降低发生严重的副作用，提高治疗效果，同时可以减少对正常细胞的损伤。
以trastuzumab针对HER2在乳腺癌治疗中的应用为例，其可以结合HER2在肿瘤细胞上的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长。
患者的生存期和生存质量都可以在使用该抗体药物之后得到改善。
海拔嗅（bevacizumab）和tecentriq（atezolizumab）在非小细胞肺癌等肿瘤治疗中也被广泛应用，取得了显著的疗效。
3. 单克隆抗体在生物传感器中的应用除了治疗肿瘤，单克隆抗体在生物传感器中的应用也备受关注。
生物传感器是一种能够高度灵敏检测环境中特定分子的装置，其中单克隆抗体的作用在于特异性地识别特定分子。
单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景
4.单克隆抗体的最新进展
4.1 噬菌体抗体库技术 基本原理：是用基因工程技术克隆人抗体 基本原理 可变区的全套基因，然后将克隆的基因插 入噬菌体编码衣壳蛋白的基因中，建立噬 菌体抗体，从而使该异源分子呈现于 噬菌体表面
制备方法： 制备方法：
将抗原包被在固项介质上， 将抗原包被在固项介质上，加入待筛选的噬菌体颗粒与 固定的抗原结合，获取结合的抗体， 固定的抗原结合，获取结合的抗体，将未结合的抗体洗 脱，从噬菌体库中筛选出针对特定抗原的特异性抗体的 可变区
2.1 单克隆抗体在预防方面应用 2.2 单抗在临床治疗方面的应用
纯抗体治疗，“生物导弹”治疗
2.3 单克隆抗体在蛋白提纯中的应用
单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因而能够从复杂系统 中识别出单个成分。只要得到针对某一成分的单克隆抗体，利用它 作为配体，固定在层析柱上，通过亲合层析即可从复杂的混和物中 分离、纯化这一特定成分。
热点和难点：如何提高抗体的生产效率， 同时保持其优良特性，且能同时解决免疫 原性
优点
库容量大，更容易筛选到目标分子 不需要考虑细胞毒性 避免了体内体外操作的转换，具有建库周 期短，筛选简便
此外，还有RNA-多肽融合技术， 转 此外，还有 基因小鼠制备全人抗体， 嵌合抗体等 单克隆抗体制备技术
6.展望
由于鼠源性单抗的免疫源性导致机体产生 一系列的急性反应，使药物的功效降低， 因此单抗的人源化 单抗的人源化是单抗药物的发展趋向 单抗的人源化
用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去感染宿主菌， 用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去感染宿主菌，使 该噬菌体颗粒得到扩增， 该噬菌体颗粒得到扩增，将抗体可变区与恒定区组合得 到具有完整功能的全人单克隆抗体
优点：
单克隆抗体药物的研究进展及临床应用_综述_
单克隆抗体药物的研究进展及临床应用_综述_单克隆抗体药物的研究进展及临床应用_综述_
一、引言
A.背景
1.单克隆抗体的定义和特点
2.单克隆抗体作为药物的优势和应用前景
B.目的和意义
1.总结单克隆抗体药物的研究进展
2.探索单克隆抗体在临床应用中的潜力
二、单克隆抗体的研发及生产
A.单克隆抗体的获取方法
1.高通量筛选技术
2.胞外抗体库技术
3.免疫化学技术
B.单克隆抗体的生产工艺
1.生物反应器中的细胞培养
2.抗体的纯化与鉴定
3.抗体稳定性的研究
三、单克隆抗体药物的研究进展
A.抗体与疾病治疗的相关研究
1.肿瘤治疗领域
2.自身免疫性疾病治疗领域
3.感染性疾病治疗领域
B.抗体的改进和优化
1.重链抗体的优化
2.补体相关改进
3.递送系统的改进
四、单克隆抗体药物的临床应用
A.上市的单克隆抗体药物
1.抗肿瘤单克隆抗体药物
2.抗炎症单克隆抗体药物
3.其他疾病治疗领域的单克隆抗体药物
B.临床应用中的挑战与机遇
1.副作用与安全性问题
2.个体差异对单克隆抗体药物疗效的影响
3.临床试验的规范与管理
五、未来展望
A.单克隆抗体药物的发展趋势
B.单克隆抗体在个性化医疗中的应用潜力
六、结论
附件：
本文所涉及的法律名词及注释：
A.《药品注册管理办法》：指中国国家药品监督管理局颁布的药品注册管理相关法规。
B.《药物临床试验管理办法》：指中国国家药品监督管理局颁布的药物临床试验管理相关法规。
C.《药品生产质量管理规范》：指中国国家药品监督管理局颁布的药品生产质量管理相关法规。
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单克隆抗体制备技术的最新进展及应用作者姓名：程鹏王彤指导教师：王国卿单位名称：生物研究所专业名称：生物工程东北大学2013年6月单克隆抗体制备技术的最新进展及应用摘要单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具，其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用, 在人类和动植物的免疫学诊断方面至今仍有着无可代替的重要作用。
本论文综述了单克隆抗体的制备技术，包括嵌合抗体、噬菌体展示技术、核糖体展示技术、基因工程抗体等。
这些技术将有效解决单克隆抗体的鼠源性等问题。
最后对单克隆抗体在临床医学和疾病的诊断与治疗等领域的广阔应用前景及存在的不足作了概述。
关键词：单克隆抗体；人源抗体；制备技术；应用目录单克隆抗体制备技术的最新进展及应用.......................................................................................... I I 摘要 ......................................................................................................................................... I I 第一章引言 .. (1)第二章单克隆抗体制备技术 (3)2.1嵌合单克隆抗体抗体 (3)2.2噬菌体展示技术 (3)2.3核糖体展示技术 (4)2.4RNA-多肽融合技术 (4)2.5转基因小鼠制备全人抗体 (5)第三章单克隆抗体的应用 (6)3.1单克隆抗体在预防方面应用 (6)3.2单克隆抗体在预防方面应用 (6)3.2.1 作为免疫抑制剂 (6)3.2.2 作为生物治疗的导向武器即所谓的“生物导弹” (7)3.3 单克隆抗体在蛋白提纯中的应用 (7)3.4 单克隆抗体在临床诊断及检测中的应用 (8)第四章结束语 (10)第五章展望 (11)注释 (12)参考文献 (13)第一章引言1975 年德国科学家 Kohler 和英国科学家 Mil－stein 利用杂交瘤技术将产生抗体的 B 淋巴细胞同骨髓瘤细胞融合，成功的建立了单克隆抗体制备技术[1]，由于单克隆抗体在生命科学领域的巨大贡献，此技术获得 1984 年的诺贝尔医学和生理学奖，此后单克隆抗体迅速广泛地应用于生物学和医学的各个领域；1994年 Winter 等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步，该技术是按人工设计所重新组装的新型抗体分子，使不经免疫既可获得任何一种动物（包括人）的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。
单克隆抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系;生产出针对复杂生物混合物中的特定分子的抗体,可用于分离、分析及纯化该特定分子抗原;其试剂可用于临床诊断和治疗,或用于以单抗为弹头的“生物导弹”药物等。
单克隆抗体技术的基本原理为：小鼠受到外界抗原刺激后可诱发免疫反应，产生相应的抗体，这一职能是由 B 淋巴细胞来承担的；肿瘤细胞在体外培养的条件下可以无限传代，是“永久”的细胞。
把小鼠的骨髓瘤细胞与经免疫过的小鼠的脾细胞在聚乙二醇等介导下发生融合，融合后的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，一方面可以分泌特定的抗体,另一方面也具备了肿瘤细胞无限增殖的能力, 可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖, 从而分泌大量单克隆抗体。
但单克隆抗体技术自问世以来，在临床应用方面进展缓慢，主要原因是目前单克隆抗体大多是鼠源性的，而鼠源单抗应用于人体治疗时存在诸多问题：鼠源单抗在人体中常不能有效激活补体和Fc受体相关的效应系统；被人体免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody, HAMA)反应[2]；且在人体循环系统中很快被清除。
因此，在保持对特异抗原表位的高亲和力的基础上实现人源化和全人化的改造，减少异源抗体的免疫原性成为单抗研究的重点。
此外，传统杂交瘤技术还存在制备周期较长，成本较高，杂交瘤细胞不稳定和抗性会丢失等缺陷。
近年来，随着分子生物学技术的发展，出现了嵌合单克隆抗体和由转基因小鼠、噬菌体展示技术、核糖体展示技术及共价展示技术所制备的单克隆抗体。
这些技术可有效解决传统杂交瘤技术所存在的问题，为单克隆抗体的应用提供更广阔的空间。
第二章单克隆抗体制备技术2.1 嵌合单克隆抗体抗体嵌合单克隆抗体产生于1980年代中期，是应用DNA重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组，再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达。
根据所用的载体质粒标记基因产物，选用适当的抗生素或试剂进行筛选，再用与传统杂交瘤技术相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗体的细胞株。
但这种抗体仍保留了原来鼠源抗体约 30%左右的鼠源性，可诱发人抗小鼠反应(HAMA)。
为了进一步提高嵌合抗体的人源化，在嵌合抗体的制备过程中又引进了重构抗体技术和表面重塑技术[3-4]以提高抗体的人源化。
1980年代中后期，科学家对嵌合抗体进一步改进后，抗体基因只有互补性决定区(complementarity determining reign, CDRs)[5]是鼠源成分，其余均为人基因序列，这实现了抗体的高度人源化。
嵌合抗体不但具有与鼠源单抗相同的特异性、亲和力和产量，而且可根据不同的需要接上不同亚类的人恒定区基因来改变抗体的功能,使用更加灵活。
第一个人源化单抗rituxan是一个抗CD20的人鼠嵌合型单抗，在非何杰氏恶性淋巴瘤患者的治疗中取得了良好的疗效。
目前，嵌合单克隆抗体基本主宰着治疗性单抗的商品市场，截止到2003年初，共有9个单克隆抗体被美国FDA 授予生物药许可证,都是人鼠嵌合抗体或人源化的抗体类型。
虽然CDR仅占整个嵌合抗体分子的5%以下，但仍有鼠源成分的存在，并未完全解决鼠抗体的免疫原性问题，而且人源化过程繁复且费用昂贵，大量的反复试验不可避免。
2.2 噬菌体展示技术噬菌体展示技术建立在噬菌体外壳具有表达抗体蛋白片段能力的基础上。
这项技术的基本原理是：用基因工程技术克隆人抗体可变区的全套基因，然后将克隆的基因插入噬菌体编码衣壳蛋白的基因中，建立噬菌体抗体文库。
这样在噬菌体表面表达特定抗体片段，而在噬菌体核心DNA中则含有该抗体片段的基因。
噬菌体库包括多种抗体可变区的基因序列，一些噬菌体抗体文库已经含有达到1011种不同的噬菌体抗体。
抗体的具体制备方法是将抗原包被在固项介质上,加入待筛选的噬菌体颗粒与固定的抗原结合,获取结合的抗体，将未结合的抗体洗脱，从噬菌体库中筛选出针对特定抗原的特异性抗体的可变区。
用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去感染宿主菌，使该噬菌体颗粒得到扩增。
将抗体可变区与恒定区组合得到具有完整功能的全人单克隆抗体。
噬菌体展示技术的最大优点是一旦噬菌体库建立后,就可以根据需要直接从文库中筛选得到针对目标抗原的特异性抗体，通常只需要23周的时间，大大缩短了单克隆抗体的制备周期。
当抗体分离出来时，噬菌体系统同时也提供了设计抗体亲和性及其应用的模式。
但是该技术也存在一定的缺陷，由于受表达系统的限制，抗体库的库容不足以支持获得稀有的抗体，而且对噬菌体或表达宿主的生长或功能产生抑制作用的抗体也难以获得。
2.3 核糖体展示技术核糖体展示技术是一种完全在体外合成蛋白质分子并进行选择与进化的新技术。
转基因小鼠和噬菌体展示技术均依赖于细胞技术和体内基因的表达，所建库的容量和分子多样性片段的连接处,嘌呤霉素就会进入核糖体的酰氨化位点,并在肽酰转移酶的作用下与多肽之间形成稳定的酰胺键。
所得到的多肽-嘌呤霉素-mRNA复合物与核糖体分离后可直接进行筛选。
多肽-嘌呤霉素-mRNA复合物较mRNA -核糖体-蛋白复合物更为稳定,实验证明mRNA -核糖体-蛋白复合物可以在4e条件下完整保存10天左右,并允许剧烈的亲和筛选,足以筛选到高亲和性的抗体。
由于该技术采用共价偶联的方法,因此也被称为共价展示技术。
2.4 RNA-多肽融合技术RNA-多肽融合技术也被称为 mRNA 展示技术或体外病毒技术。
利用核糖体展示技术在筛选过程中,由于核糖体是相对分子量为2 000 000的大分子,而一个典型的肽库或抗体库中可供选择的分子大小一般都小于100 000。
这样在核糖体大分子和被展示的小分子之间由于空间位阻可能会产生一些不可预知的变化,导致目标分子的丢失。
由Phylos公司开发的RNA-多肽融合技术基本克服了这一缺点。
RNA-多肽融合技术是将mRNA的3’末端和抗体蛋白质的羧基端借助嘌呤霉素分子共价连接在一起。
具体方法是抗体库中的DNA转录出RNA后,在mRNA的3’端共价连接一个嘌呤霉素标记的DNA片段,作为合成的衔接物。
在体外无细胞翻译系统中转录时,核糖体在mRNA分子上移动合成多肽。
当到达mRNA分子末端时,核糖体停止在mRNA与DNA片段的连接处,嘌呤霉素就会进入核糖体的酰氨化位点,并在肽酰转移酶的作用下与多肽之间形成稳定的酰胺键。
所得到的多肽-嘌呤霉素-mRNA复合物与核糖体分离后可直接进行筛选。
多肽-嘌呤霉素-mRNA复合物较mRNA -核糖体-蛋白复合物更为稳定,实验证明mRNA -核糖体-蛋白复合物可以在4e条件下完整保存10天左右,并允许剧烈的亲和筛选,足以筛选到高亲和性的抗体。
由于该技术采用共价偶联的方法,因此也被称为共价展示技术。
2.5 转基因小鼠制备全人抗体转基因小鼠的 Ig 基因是用人的相应基因替代，产生对人免疫系统非异种抗体，这种影响人抗体的策略是改造小鼠的体液免疫系统，将人 Ig 基因微位点转入小鼠，产生能分泌人 Ig 的转基因小鼠。
这样可省去对抗体分子重构时在基因水平的复杂性，保留了完整的 Ig 类别转换和亲和力成熟的自然机理。
这种转基因小鼠的不足之处在于基因片段较小，仅 30 kb 左右，因此这种抗体在面对抗原多样性时，其抗体应答显得单薄而不足[6]。
此后，Green 等[7]人利用基因打靶技术将编码人抗体轻重链的基因片段大约 18 Mb 的 DNA 全部转到自身抗体基因位点已被灭活的小鼠基因组中，再经过繁育筛选，建立了稳定的转基因小鼠品系。
这样得到的转基因小鼠对特异的抗原能产生高亲和力的人源抗体。
再用传统的杂交瘤技术，将表达特异抗体的转基因小鼠 B 细胞和骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞系，产生人源抗体。
第三章单克隆抗体的应用单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。
这些优点使它一问世就受到高度重视，并广泛应用于生物学、医学、农业、食品、环境等众多领域，其在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断、预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的作用。