单克隆抗体的制备流程
单克隆抗体的制作流程
单克隆抗体的制作流程一、前期准备工作1. 确定目标抗体：根据研究需求确定需要制备的单克隆抗体。
2. 筛选免疫原：选择适合的免疫原，如蛋白质、多肽、细胞等。
3. 动物选择：选择适合的动物，如小鼠、大鼠、兔子等。
4. 免疫计划设计：设计出合理的免疫计划，包括免疫剂量、次数、间隔时间等。
二、免疫过程1. 免疫原制备：将所选的免疫原纯化或合成后进行检测和确认。
2. 免疫动物注射：将免疫原与佐剂混合后注射到动物体内，按预定计划进行多次注射。
3. 血清采集：在最后一次注射后采集动物血清，检测抗体滴度是否达到预期水平。
三、杂交细胞制备1. 细胞系选择：选择适合的细胞系如SP2/0或NS0等。
2. 细胞培养：将细胞系培养至稳定生长状态，并进行筛选和确认。
3. 细胞融合：将免疫小鼠脾细胞与SP2/0或NS0细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。
4. 杂交瘤筛选：利用HAT培养基对杂交瘤进行筛选，筛选出产生单克隆抗体的杂交瘤。
四、单克隆抗体制备1. 单克隆细胞培养：将单个杂交瘤细胞进行单克隆分离和培养。
2. 单抗酶标法检测：利用ELISA等技术检测单克隆抗体的特异性和亲和力。
3. 大规模培养：将筛选出的单克隆细胞进行大规模培养，得到足够多的单克隆抗体。
4. 纯化和鉴定：通过亲和层析、离子交换层析等技术对单克隆抗体进行纯化，并进行质量鉴定。
五、应用1. 体外实验应用：如ELISA、Western blotting等技术中作为检测试剂使用。
2. 体内实验应用：如流式细胞术、组织切片染色等技术中作为荧光标记或特异性结合试剂使用。
3. 临床应用：如治疗肿瘤、自身免疫性疾病等方面的治疗药物。
六、总结单克隆抗体的制备流程包括前期准备工作、免疫过程、杂交细胞制备、单克隆抗体制备和应用等环节。
其中，前期准备工作和免疫过程是制备成功的关键，而单克隆抗体制备需要经过多次筛选和鉴定才能得到高质量的单克隆抗体。
单克隆抗体在医学和生命科学领域有着广泛的应用前景，对于推动科学发展具有重要意义。
单克隆抗体的制备方法
单克隆抗体的制备方法
单克隆抗体的制备方法主要包括以下几个步骤：
1. 免疫兔或小鼠：首先选择一个目标抗原，这可能是一种蛋白质、多肽或其他分子。
然后，将该抗原注射到实验动物（通常是免疫兔或小鼠）的体内，以刺激其免疫系统产生抗原特异性的抗体。
2. 細胞樹突瘤：在动物体内产生抗体后，从其体内提取淋巴细胞，通常是从脾脏或骨髓中获得。
然后，将这些淋巴细胞融合到特定的癌细胞（如骨髓瘤细胞）中，形成融合细胞，称为淋巴瘤细胞。
3. 杂交瘤筛选：将淋巴瘤细胞培养在富含饲养基的培养皿中，使其成长为一种混合的细胞群。
然后，利用对抗体特异性的检测方法，如ELISA或流式细胞术，筛选出对目标抗原具有高亲和力和高特异性的单克隆抗体产生的杂交瘤细胞。
4. 单克隆抗体培养和纯化：将筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞进行扩增培养，并采用特定培养基和条件，如添加低髓酸和高髓酸补充物，以增加单克隆抗体的产量。
随后，通过离心、净化和纯化等步骤，从培养物中分离和纯化出单克隆抗体。
5. 验证和应用：对制备的单克隆抗体进行验证，包括测定其亲和力、特异性和功能等方面。
然后，将其应用于各种实验和临床研究领域，如免疫组织化学、免
疫印迹、流式细胞术和免疫疗法等。
需要注意的是，单克隆抗体的制备过程较为繁琐和耗时，并且存在一定的技术挑战。
因此，近年来还出现了许多其他方法来制备单克隆抗体，如基因工程技术和体外抗体筛选技术等，可以更快速和高效地得到目标单克隆抗体。
多克隆抗体单克隆抗体的制备流程
多克隆抗体单克隆抗体的制备流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程单克隆抗体是一种由单一克隆的B细胞产生，具有针对特定抗原的高度特异性和亲和力的抗体。
制备单克隆抗体的过程主要包括以下几个步骤：免疫原制备、小鼠免疫、混合细胞瘤制备、细胞筛选与分克隆。
首先，制备免疫原。
根据需要制备一种抗原，可以是纯化的蛋白质、多肽或合成的多肽。
这个抗原通常具有特异性，可用于激发B细胞产生特异性抗体。
其次，选择小鼠免疫。
通常选择小鼠作为免疫动物，因为小鼠的免疫系统较为适合。
给小鼠注射免疫原，激发其免疫反应。
为了增强免疫效果，通常在小鼠体内使用佐剂，如完全弗氏佐剂。
然后，制备混合细胞瘤。
在小鼠接种一段时间后，从其脾脏或骨髓中取出淋巴细胞。
然后通过融合淋巴细胞和骨髓瘤细胞，如骨髓瘤SP2/0，获得混合细胞瘤。
接下来，细胞筛选与分克隆。
将混合细胞瘤悬浮液均匀地滴于含有选择性培养基的平板上，通过稀释法，保证每个细胞得到充分的空间生长。
经过适当的培养时间后，细胞形成单个克隆。
最后，对每个克隆细胞进行培养与鉴定。
收集克隆细胞，经过一段时间的培养，获得充足的抗体。
而后，对培养液中的抗体进行鉴定，采用ELISA和免疫组化方法来确认是否产生了特定抗原的单克隆抗体。
在单克隆抗体制备的过程中，需要注意以下几点：首先，免疫原的制备应保证其纯度和有效性；其次，小鼠对免疫原的免疫应注意适当的剂量和接种时机；再者，混合细胞瘤的制备要控制好融合细胞的比例，避免细胞瘤的过度生长；最后，细胞的培养与鉴定是确保获得高质量单克隆抗体的关键环节，要进行仔细的监测和筛选。
总之，单克隆抗体的制备过程是一个复杂而精细的过程，需要在实验操作中严格控制各个步骤，以确保获得高质量、高特异性的单克隆抗体。
这些单克隆抗体不仅可以应用于科学研究领域，还可以用于临床诊断和治疗。
单克隆抗体制备流程
单抗制备流程1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序,逐一介绍其实验方法。
一、细胞融合前准备(一) 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果.下面以细胞性抗原为例的免疫方案:初次免疫1×10７／0。
5ml ip (腹腔内注射)↓2~3周后第二次免疫1×10７／0。
5ml ip↓3周后加强免疫(融合前三天) 1×10７／0.5ml ip或iv（静脉内注射)↓取脾融合2。
可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂，常用佐剂:福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态.商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│（一般0.8～1ml 0.2ml／点)↓3周后第二次免疫剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip│（ip剂量不宜超过0。
5ml)↓3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip│ (5～7天后采血测其效价，检测免疫效果)↓2~3周后加强免疫，剂量50～500μg为宜,ip或iv↓3天后取脾融合目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。
杂交瘤法制备单克隆抗体的过程
杂交瘤法制备单克隆抗体的过程引言：单克隆抗体在生物医学研究和临床应用中起着重要作用。
其中，杂交瘤法是制备单克隆抗体的一种常用方法。
本文将详细介绍杂交瘤法制备单克隆抗体的过程。
1. 选择免疫原制备单克隆抗体的第一步是选择合适的免疫原。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖蛋白或其他生物大分子。
选择免疫原时需要考虑其抗原性、纯度和稳定性。
2. 免疫动物免疫将选择好的免疫原注射到小鼠等免疫动物体内，激发其免疫系统产生抗体。
免疫过程中需要进行多次免疫，以增加抗体的产生。
通常，第一次免疫后，需要在一定时间间隔内进行多次增强免疫，以提高抗体的效价。
3. 细胞融合免疫动物产生的抗体是多克隆抗体，其中含有多种抗体细胞。
为了制备单克隆抗体，需要将这些抗体细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
4. 杂交瘤细胞筛选杂交瘤细胞的筛选是制备单克隆抗体的关键步骤。
一般采用HAT （杂交瘤培养液，含有一种离子交换剂、一种抗代谢药物和一种抗生素）培养基进行筛选。
由于骨髓瘤细胞具有无限生长的能力，而免疫细胞不具备，因此只有杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活和繁殖。
5. 单克隆抗体鉴定通过ELISA（酶联免疫吸附测定）或其他方法，对杂交瘤细胞进行单克隆抗体的鉴定。
常用的方法包括Western blotting、免疫组化和流式细胞术等。
鉴定合格的单克隆抗体可以进行进一步的扩增和纯化。
6. 单克隆抗体扩增通过体外培养，将单克隆抗体扩增至足够的量。
扩增过程中需要对培养条件进行优化，以提高抗体的产量和纯度。
7. 单克隆抗体纯化通过柱层析、亲和层析、离子交换层析等方法，对扩增后的单克隆抗体进行纯化。
这些方法能够去除杂质，提高抗体的纯度和活性。
8. 单克隆抗体应用纯化后的单克隆抗体可以应用于生物医学研究和临床治疗中。
其应用包括免疫组织化学、免疫荧光、免疫沉淀、免疫电泳等多个方面。
结论：杂交瘤法是制备单克隆抗体的重要方法之一。
通过选择免疫原、免疫动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞筛选、单克隆抗体鉴定、扩增和纯化等步骤，可以制备出高纯度和高活性的单克隆抗体。
制备单克隆抗体的过程
制备单克隆抗体的过程
嘿，你知道制备单克隆抗体是多么神奇的一件事儿吗？这就好像是一场精心编排的舞蹈！
首先，得找到合适的抗原，这就好比是为这场舞蹈挑选出最闪亮的主角。
然后，把抗原注射到小鼠体内，让小鼠的免疫系统认识它，这就像是给小鼠发出了一个特别的邀请。
接下来，小鼠的免疫系统开始行动啦！B 淋巴细胞被激活，它们就像是一群充满活力的舞者，开始尽情展现自己的本领。
然后呢，把这些产生抗体的 B 淋巴细胞提取出来，这可不容易哦，得小心翼翼，就像从一堆宝藏中挑选出最珍贵的宝石。
这时候，另一个关键角色登场了，那就是骨髓瘤细胞！把 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合在一起，哇，这简直就是一场奇妙的结合，如同两颗星星碰撞出耀眼的火花！
融合之后，可不是就万事大吉了哦。
还得进行筛选，把那些真正融合成功的细胞挑选出来，这可需要一双敏锐的眼睛，就像在茫茫人海中找到那个对的人。
筛选出来的细胞，就开始大量培养啦！它们不断生长、分裂，就像是一片生机勃勃的花园，绽放出美丽的花朵。
然后，对这些细胞进行鉴定，确保它们能产生我们需要的单克隆抗体。
这就像是给这些花朵贴上属于它们的独特标签。
最后，收获这些宝贵的单克隆抗体，那感觉，真的是太棒啦！就像是收获了满满的果实，充满了喜悦和成就感！
制备单克隆抗体的过程，不就是一场充满挑战和惊喜的冒险吗？它需要耐心、细心和智慧，每一个步骤都至关重要，缺一不可。
这真的是太神奇，太让人着迷了！难道不是吗？我们能够利用这个技术，为医学、生物学等领域带来那么多的帮助和突破，这是多么了不起的事情啊！。
杂交瘤法制备单克隆抗体的过程
杂交瘤法制备单克隆抗体的过程杂交瘤法是一种常用的制备单克隆抗体的方法，其基本过程包括四个步骤：免疫原制备、小鼠免疫、脾细胞与肿瘤细胞的融合、单克隆抗体筛选与鉴定。
首先，免疫原制备是制备单克隆抗体的关键步骤之一、免疫原即所要制备单克隆抗体的目标抗原。
免疫原的选择应根据研究目的和要求进行，如对特定蛋白质、细胞表面分子等的免疫。
免疫原制备一般包括两个步骤：蛋白纯化和蛋白改性。
对于蛋白纯化而言，可以通过胶体电泳技术或柱层析技术等方法获得纯化的蛋白质。
对于蛋白改性而言，可以通过蛋白质偶联剂的使用，将蛋白质与载体相结合。
其次，小鼠免疫是为了获得特异性抗体。
将制备好的免疫原注射到小鼠体内，激发其免疫系统产生抗原特异性抗体。
为了增强免疫效果，一般需要多次免疫，同时还可以使用辅助剂和佐剂来提高免疫效果。
然后，脾细胞与肿瘤细胞的融合是为了制备杂交瘤。
在免疫小鼠体内产生特异性抗体后，需要收集小鼠的脾脏，分离脾细胞。
肿瘤细胞一般采用无髓腔瘤细胞系，如SP2/0或NS1等。
通过使用聚乙二醇等融合剂，将脾细胞和肿瘤细胞融合，从而获得杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞中的每个细胞包含有来自小鼠脾细胞的抗体产生能力和来自肿瘤细胞的无限生长能力。
最后，单克隆抗体的筛选与鉴定是为了获得特异性的单克隆抗体。
杂交瘤细胞在发育培养基中进行培养，筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞克隆，并进行克隆扩增。
筛选方法一般包括ELISA、免疫荧光细胞分选等。
通过克隆扩增后，可以进行进一步的鉴定与验证，如免疫沉淀、西方印迹等方法。
总结起来，杂交瘤法制备单克隆抗体的过程包括免疫原制备、小鼠免疫、脾细胞与肿瘤细胞的融合、单克隆抗体筛选与鉴定。
通过这些步骤，可以获得高特异性的单克隆抗体，为科研和临床应用提供有力的工具。
2.杨霞,赵蕊.杂交瘤制备单克隆抗体技术[J].生物技术通报,2024(3):170-173.。
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单克隆抗体的制备流程
（一）动物的选择与免疫
1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排
污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种
BALA/C小鼠。
2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb
至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原
的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐
剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～
1ml,0.2ml/点）
↓3周后
第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不
宜超过0.5ml）
↓3周后
第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价）
↓2～3周
加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射）
↓3天后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①
将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗
原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞
因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，
免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
初次免疫 1×107/0.5ml ip
↓2～3周后
第二次免疫 1×107/0.5ml ip
↓3周后
加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv
↓
取脾融合
（二）细胞融合
1．细胞融合前准备
（1）骨髓瘤细胞系的选择：
骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一
品系小鼠腹腔内产生大量McAb。
（2）饲养细胞：在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖，若加入其它活
细胞，则可促进这些细胞生长繁殖，所加入的这种细胞数被称为饲养细胞。在制备McAb
的过程中，许多环节 需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，
加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞（较为常用）、小鼠脾
脏细胞或胸腺细胞。也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放射线照射后作为饲养细胞。饲养
细胞的量为一般为2×104或105细胞/孔。
2．细胞融合的步骤
（1）制备饲养细胞层：一般选用小鼠腹腔巨噬细胞。
与免疫小鼠相同品系的小鼠，常用BALB/C小鼠，6～10周
↓
拉颈 处死，浸泡在75%酒精内，3～5min
↓
用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜
↓
用无菌注射器注入5～6ml预冷的培养液（严禁刺破肠管）
↓
反复冲洗，吸出冲洗液
↓
冲洗液放入10ml离心管，1200rpm/分离5～6min
↓
用20%小牛血清（NCS）或胎牛血清（FCS）的培养液混悬，调整细胞数至1×105/ml
↓
加入96孔板，100μl/孔
↓
放入37℃ CO2孵箱培养
（2）制备免疫脾细胞
最后一次加强免疫3天后小鼠拉颈处死
↓
无菌取脾脏，培养液洗 一次
↓
脾脏研碎，过细胞筛
↓
离心，细胞用培养液洗2次
↓
计数
↓
取108脾淋巴细胞悬液备用
（3）制备骨髓瘤细胞
取对数生长骨髓瘤细胞离心
↓
用无血清培养液洗2次
↓
计数，取得×107细胞备用
（4）融合
①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml离心管中用无
血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm,8min;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响
聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。
②90s内加入37℃预温的1ml 45%PEG（分子量4000）溶液，边加边轻微摇动。37℃水
浴作用90s。
③加37℃预温的不完全培养液以终止PEG作用，每隔2min分别加入1ml、2ml、3ml、
4ml、5ml和6ml。
④离心，800rpm, 6min。
⑤充上清，用含20%小牛血清HAT选择培养液重悬。
⑥将上述细胞，加到已有饲养细胞层的96孔板内，每孔加100μl。一般一个免疫脾脏
可接种4块96孔板。
⑦将培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养。
（三）选择杂交瘤细胞及抗体检测
1．HAT选择杂交瘤细胞 脾细胞和骨髓瘤细胞经PEG处理后，形成多种细胞的
混合体，只有脾细胞与骨髓细胞形成的杂交瘤细胞才有意义。在HAT选择培养液中培养时，
由于骨髓瘤细胞缺乏胸苷激酶或次黄嘌呤鸟嘌呤核糖转移酶，故不能生长繁殖，而杂交瘤细
胞具有上述两种酶，在HAT选择培养液可以生长繁殖。
在用HAT选择培养1～2天内，将有大量瘤细胞死亡，3～4天后瘤细胞消失，杂交细
胞形成小集落，HAT选择培养液维持7～10天后应换用HT培养液，再维持2周，改用一般
培养液。在上述选择培养期间，杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时，即可开始检测特异性抗
体，筛选出所需要的杂交瘤细胞系。在选择培养期间，一般每2～3天换一半培养液。
2．抗体的检测 检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的
筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
常用的方法有：（1）放射免疫测定（RIA）可用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。（2）
酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于可溶性抗原、细胞和病毒等McAb的检测。（3）免疫荧
光试验适合于细胞表面抗原的McAb的检测。（4）其它如间接血凝试验、细胞毒性试验、
旋转粘附双层吸附试验等。
（四）杂交瘤的克隆化
杂交瘤克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。因为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆
不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括
抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体（特异性抗体）分泌细胞和其它无关抗体的
分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开就需要克隆化。克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的
杂交克隆尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌的细胞所抑制，因为抗体非
分泌细胞的生长速度比抗体分泌的细胞生长速度快，二者竞争的结果会使抗体分泌的细胞丢
失。即使克隆化过的杂交瘤细胞也需要定期的再克隆，以防止杂交瘤细胞的突变或染色体丢
失，从而丧失产生抗体的能力。
克隆化的方法很多，最常用的是有限稀释法
1．有限稀释法克隆
（1）克隆前1天制备饲养细胞层（同细胞融合）。
（2）将要克隆的杂交瘤细胞从培养孔内轻轻吹干，计数。
（3）调整细胞为3～10个细胞/ml。
（4）取头天准备的饲养细胞层的细胞培养板，每孔加入稀释细胞100μl。孵育于37℃、
5%CO2孵箱中 。
（5）在第7天换液，以后每2～3天换液1次。
（6）8～9天可见 细胞克隆形成，及时检测抗体活性。
（7）将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。
（8）每个克隆应尽快冻存。
（五）杂交瘤细胞的冻存与复苏
1．杂交瘤细胞的冻存
细胞冻存液：50%小牛血清；40%不完全培养液；10%DMSO（二甲基亚砜）。
冻存液最好预冷，操作动作轻柔、迅速。冻存时从室温可立即降至0℃后放入-70℃超
低温冰箱，次日转入液氮中。
2．细胞复苏方法
将玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在1min内使冻存的细胞解冻，将细胞
用完全培养液洗涤两次，然后移入头天已制备好的饲养层细胞的培养瓶内，置37℃、5%CO2
孵箱中培养，当细胞形成集落时，检测抗体活性。
（六）单克隆抗体的大量生产
大量生产单克隆抗体的方法主要有两种：
（1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方
法产量低，一般培养液内抗体含量为10～60μg/ml,如果大量生产，费用较高。
（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。
①实体瘤法：对数生长期的杂交瘤细胞按1～3×107/ml接种于小鼠背部皮下，每处注射
0.2ml,共2～4点。待肿瘤达到一定大小后（一般10～20天）则可采血，从血清中获得单克
隆 抗体的含量可达到1～10mg/ml。但采血量有限。
②腹水的制备：常规是先腹腔注射0.5ml Pristane (降植烷)或液体石蜡于BALB/C鼠，1～
2周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可产生腹水。