杂交瘤细胞
筛选出杂交瘤细胞的方法
筛选出杂交瘤细胞的方法嘿，咱今儿就来聊聊筛选出杂交瘤细胞的那些事儿！你知道不，这筛选杂交瘤细胞就像是在一大群人里找出那个最特别的明星一样。
咱得有好法子，才能精准地把它给揪出来。
首先呢，咱可以用个叫做“选择性培养基”的宝贝。
这就好比是给细胞们设了个关卡，只有那些符合特定条件的杂交瘤细胞才能在这个关卡里存活下来。
其他的细胞呢，就只能拜拜啦！你说这是不是很妙啊？那些不合适的细胞就像是滥竽充数的家伙，一下子就被淘汰掉啦。
然后呢，还有一种方法，叫“有限稀释法”。
这就好像是把一群人分成一个个小组，然后慢慢地去找出那个最厉害的小组。
通过不断地稀释和培养，就能把那些单个的、优秀的杂交瘤细胞给分离出来。
这可真是个细致活啊，就跟咱挑珍珠似的，得一颗一颗地仔细看。
再有啊，咱还可以通过检测细胞产生的抗体来筛选。
这就好比是看谁能拿出最厉害的法宝一样，只有能产生特定抗体的杂交瘤细胞才是我们要找的宝贝呀！这检测的过程可不能马虎，得瞪大了眼睛好好看呢。
你想想啊，要是没有这些好方法，咱怎么能从那么多细胞里找出那颗最闪亮的星星呢？这就跟在茫茫人海中找真爱似的，不容易啊！但只要咱有耐心，有方法，就一定能把它给找到。
比如说，要是咱随便弄弄，不认真去筛选，那岂不是会把一些滥竽充数的细胞也当成宝贝啦？那可不行，那会影响后续的实验效果的呀！所以说啊，这筛选杂交瘤细胞可真是个技术活，也是个细心活。
咱在做这个的时候，一定要认真对待，不能马虎。
就像盖房子一样，基础得打好，不然房子可就不结实啦。
这筛选出的杂交瘤细胞就是我们后续研究的基础呀，可得重视起来。
总之呢，筛选杂交瘤细胞的方法有很多，但每一种都需要我们用心去对待。
只有这样，我们才能从众多细胞中选出那颗最璀璨的明珠，为我们的研究和应用打下坚实的基础。
你说是不是这个理儿呢？咱可不能小瞧了这小小的细胞，它们里面可是藏着大大的奥秘呢！。
杂交瘤细胞
杂交瘤技术杂交瘤技术（hybridoma technique）即淋巴细胞杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术。
它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。
克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）（1975）证明，骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体，这种技术通称为杂交瘤技术。
这一技术的基础是细胞融合技术。
骨髓瘤细胞在体外可以连续传代，而脾细胞是终末细胞，不能在体外繁殖。
如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体或因子的淋巴细胞融合，则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性，又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力，同时也克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点，融合的细胞称为淋巴细胞杂交瘤。
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。
这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。
被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。
在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。
其原理从下列3个主要步骤阐明。
(一)细胞的选择与融合建立杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异的单克隆抗体，所以融合细胞一方必须选择经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。
脾是B细胞聚集的重要场所，无论以何种免疫方式刺激，脾内皆会出现明显的抗体应答反应。
融合细胞的另一方则是为了保持细胞融合后细胞的不断增殖，只有肿瘤细胞才具备这种特性。
·选择同一体系的细胞可增加融合的成功率。
多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，所以是理想的脾细胞融合伴侣。
使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤，使细胞易于相互粘连而融合在一起。
最佳的融合效果应是最低程度的细胞损伤而又产生最高频率的融合。
筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学检测方法，用于检测细 胞表面抗原或分泌型抗原。该方法的基本原理是将特异性抗 体与酶结合，然后与细胞表面抗原或分泌型抗原结合，最后 通过酶反应显色来检测抗原的存在。
克隆化培养
克隆筛选
通过有限稀释法或流式细胞术等 方法，将杂交瘤细胞克隆化培养 ，以获得单克隆杂交瘤细胞。
培养条件
提供适宜的培养条件，如适宜的 培养基、温度、气体等，以保证 杂交瘤细胞的生长与繁殖。
抗体检测与筛选
抗体筛选
通过抗原结合试验进一步筛选出具有 高亲和力和特异性的杂交瘤细胞克隆。
抗体纯化
对筛选出的杂交瘤细胞克隆产生的抗 体进行纯化，以提高抗体的纯度和特 异性。
荧光激活细胞分选法的优点是灵敏度高、分辨率高、操作自动化，适用于大量细 胞的筛选。但是，该方法需要使用
细胞融合
选择合适的骨髓瘤细胞与免疫细胞融合
01
选择具有高免疫反应的骨髓瘤细胞系，如SP2/0、X63-
Ag8.653等，与免疫细胞融合，以产生杂交瘤细胞。
生物制品生产
抗体生产
杂交瘤细胞可以作为生产抗体的重要来 源，用于生产治疗性抗体或诊断试剂。
VS
细胞培养技术
通过筛选高表达量的杂交瘤细胞，可以优 化细胞培养技术，提高生物制品的生产效 率和质量。
05
杂交瘤细胞筛选的挑战与解决方案
克隆不稳定问题
克隆不稳定是指杂交瘤细胞在培养过程中出现生长缓慢、 停滞甚至死亡的现象，导致难以获得稳定表达抗体的细胞 株。
克隆扩大培养与建株
杂交瘤细胞的制备流程
杂交瘤细胞的制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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杂交瘤细胞培养方法
杂交瘤细胞培养方法
杂交瘤细胞培养方法：
1. 杂交瘤的制备：
将骨髓瘤细胞与抗原刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞。
2. 细胞培养：
将杂交瘤细胞接种于含有高浓度鸟嘌呤或潘孔霉素的无血清培养基中进行培养。
3. 无血清培养基的制备：
取无血清培养基中所需的基础培养液（例如：DMEM、RPMI 1640等），添加必要的生长因子、维生素、矿物质和氨基酸等，经过过滤和灭菌处理即可。
4. 细胞培养条件：
培养杂交瘤细胞时，需保持其在适宜的温度、CO2浓度和湿度下生长，通常在37℃、5% CO2气氛下进行培养。
5. 细胞检测：
在培养过程中，需定期检测细胞形态、增殖情况、表达抗原的能力等，以确保细胞的纯度和功能性。
注意事项：
为避免污染和交叉感染，需采取有效的无菌技术和严格的操作规范；同时，在培养过程中应注意细胞的生长情况和营养状况，及时调整培养条件以保证细胞的最佳生长状态。
杂交瘤细胞培养注意事项
杂交瘤细胞培养注意事项1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。
如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。
3. 离心前须加入少量培养液。
细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4. 离心问题：目前主要有两种见解。
一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第2天换液。
因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。
此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。
另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。
我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。
所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术是一种常用的遗传学实验方法，用于研究基因的功能和调控。
其基本原理是将两个不同品系或物种的细胞或组织相互融合，生成杂交细胞或杂交瘤。
这些杂交细胞或瘤细胞会融合两个品系或物种的基因信息，同时保留着两个母细胞的细胞器和细胞质基因。
杂交瘤技术的基本步骤如下：
1.选择母细胞：选择具有所需特性的两个不同来源的细胞或组织作为杂交的母细胞。
一般选择一个无能力生长但含有所需基因的细胞（称为donor细胞）和一个能够快速增殖但缺乏所需基因的细胞（称为host细胞）。
2.处理细胞：将两个细胞进行特定处理，使其融合在一起。
一种常用的方法是使用化学物质（如聚乙二醇）或电脉冲来增加细胞融合的效率。
3.筛选和培养：将融合后的细胞进行筛选，通常是通过添加相应抗生素或培养基来筛选并培养合适的杂交细胞或杂交瘤。
4.分离纯化：通过稀释法或细胞克隆等方法，将杂交瘤细胞分离并纯化，以获得纯的杂交细胞系或杂交瘤。
杂交瘤技术的应用非常广泛，主要用于以下方面：
1.产生单克隆抗体：通过杂交瘤技术，可以融合具有所需抗体的B细胞与快速增殖的癌细胞，得到能够大规模产生特定抗体的杂交瘤细胞系。
2.研究基因功能：将疾病相关的基因或调控元件与高增殖性的癌细胞融合，可以研究相关基因的功能及其在疾病中的作用机制。
3.生产重组蛋白：将所需基因与杂交瘤细胞融合，可以实现大规模生产特定蛋白质，并用于医药和生物工程领域。
总之，杂交瘤技术是一种有效的遗传学实验方法，通过细胞融合的方式结合两种细胞的特性，用于研究基因功能、产生单克隆抗体和生产重组蛋白等多个领域。
杂交瘤细胞的培养方法
杂交瘤细胞的培养方法嘿，咱今儿个就来讲讲杂交瘤细胞的培养方法。
这可真是个神奇的领域呢！你想想啊，杂交瘤细胞就像是一群被精心呵护的宝贝。
要让它们茁壮成长，那可得下一番功夫。
首先呢，得给它们准备一个舒服的“家”，这就是培养环境啦。
温度啦、湿度啦，都得恰到好处，不然它们可不乐意待着呢。
就好像咱人一样，太冷太热都难受，它们也有自己的小脾气。
然后呢，就是营养啦。
它们得吃得饱饱的，才能有力气长大呀。
这就需要合适的培养液，里面各种成分都不能少，这可都是它们的“美味佳肴”。
接着说，培养的过程就像是照顾小婴儿。
得时刻关注着它们的状态，看看有没有啥不对劲的地方。
要是有个头疼脑热的，那可得赶紧想办法解决。
还有啊，细胞们也会有竞争呢。
就像咱在社会上一样，都想争个好位置。
所以得注意观察，让它们都能健康地发展。
培养杂交瘤细胞可不能马虎，每一个环节都得细心对待。
这可不是随便搞搞就能行的事儿。
要是不小心出了差错，那之前的努力可就白费啦，这多可惜呀！你说这杂交瘤细胞的培养，是不是挺有意思的？就像一个小小的世界，有它自己的规则和规律。
咱得好好研究，才能让它们发挥出最大的作用。
咱再想想，要是没有好好培养它们，那很多研究不就没法进行啦？很多疾病的治疗方法不就没办法找到啦？这后果可严重了呀！所以呀，对待杂交瘤细胞的培养，咱可不能掉以轻心。
得认真、仔细、负责任地去做。
这样才能让它们为我们的科学研究和医学事业做出贡献呀！总之呢，杂交瘤细胞的培养可不是一件简单的事儿，但只要我们用心去做，就一定能做好。
让我们一起加油，为了科学的进步而努力吧！。
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变,50代以后的细胞可能发生癌变。
(5)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将
组织分散成单个细胞,以及将贴壁细胞从瓶壁上分
离下来,这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制
现象。
3.应用 (1)生产细胞产品：干扰素、疫苗、单克隆抗体。 (2)检测并判断某毒性物质毒性的大小。 (3)临床医学研究。
拓展提升 动物细胞培养与植物组织培养的比较
(2)存在问题
①成活率低
②克隆动物的健康问题
③克隆动物食品的安全性问题。
对位训练 4.下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用 （ D ） A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇
5.下列有关体细胞核移植技术的说法，不正确的是 （ A ） A.体细胞核移植技术在多种动物中获得了成功， 成功率非常高 B.克隆技术的各个环节有待于进一步改进 C.大多数克隆动物还存在一些遗传和生理缺陷类 的健康问题
冷冻（或超低温、 （5）在细胞培养过程中，通常在________________ 液氮） 条件下保存细胞。因为在这种条件下，细 胞中 酶 的活性降低，细胞 新陈代谢 的速率降低。
（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发
生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当
作 抗原 进行攻击。
考点二
动物体细胞核移植技术与克隆动物
提醒
①CO2作用——调节培养基pH;
②空气中O2作用——细胞有氧呼吸;
③所用装置——CO2培养箱。
(2)原理：细胞增殖。 (3) 动物细胞培养时 , 一般选取幼龄动物的组织、 器官,其细胞的分化程序较低,增殖能力强,有丝分 裂旺盛,容易培养。
(4)在动物细胞培养过程中,一般情况下10代以前
的细胞核型不变,10代以后有些细胞核型发生改
D.克隆动物食品的安全性问题仍然存在争议
2.2.2 动物细胞融合与 单克隆抗体
一、动物细胞融合 二、单克隆抗体
考点三
动物细胞融合与单克隆抗体
1.单克隆抗体的操作流程
2.考点解读 (1)诱导融合的2种细胞名称及作用 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)——产生抗体; 骨髓瘤细胞——无限增殖。 (2)诱导融合与原生质融合的不同方法
1.动物体细胞核移植技术操作流程
2.考点解读
(1)原理：动物细胞核的全能性(不能说动物细胞全 能性)。 (2)卵母细胞选择时期及原因减Ⅱ中期的卵母细胞, 此时具备受精能力,细胞质中合成与分裂分化有关的
物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化,形成重组
胚胎。
(3)选卵细胞做受体细胞原因
①大,易于操作；②卵黄多,营养丰富,为发育提供 充足的营养；③激发重组细胞分裂分化。 (4) 供体细胞：取供体动物的体细胞培养 ,一般选 用传代10代以内的细胞,因为10代以内的细胞一般
B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、
无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌
蛋白
D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶 处理
2.回答下列有关动物细胞培养的问题： （1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长 到细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这 种现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的 细胞层数是 单层（或一层） 。要使贴壁的细胞从瓶 胰蛋白 壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是_______ 酶。 （2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂 停止，进而出现 衰老甚至死亡 的现象；但极少数细 胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生 改变而变成 不死性 细胞，该种细胞的黏着性降低, 细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 减少 。
能保持正常的二倍体核型,保证了供体细胞正常的
遗传基础。
(5) 动物体细胞不能经培养直接发育成完整个体 ,
原因是动物体细胞的全能性受到限制。用体细胞 核移植技术能够得到克隆动物,说明动物体细胞的 细胞核具有全能性。
(6)该过程用到的技术手段：动物细胞培养、动物 细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植。 (7)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本不
（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观 察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不 能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死 细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进 入死细胞内而着色）
。
（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目， 最好选用细胞分裂到 中期的细胞用显微镜进行观察。
2.2.1 动物细胞培养和 核移植技术
一、动物细胞培养 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
高频考点突破
考点一 动物细胞培养技术
1.动物细胞培养的操作流程
2.考点解读 (1)培养条件
①无菌、无毒的环境——无菌处理、加抗生素杀
菌、定期更换培养液。
②营养——葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机 盐和微量元素+血清或血浆等天然成分。 ③温度和pH——(36.5±0.5)℃和(7.2～7.4)。 ④气体环境——95%空气+5%CO2。
项目 动物细胞培养 植物组织培养 相同点 都需无菌条件;都进行有丝分裂 原理 细胞的增殖 细胞的全能性 不 培养 液体培养基,动物血 固体培养基,激素及其 同 基 清及其他营养物质 他营养物质 点 获得细胞或细胞产 快速繁殖、培育无病 目的 物等 毒植株等
对位训练 1.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( D ) A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡 过程中
动物细胞诱导融合的特有方法——灭活病毒诱导。
(3)2次筛选的目的及方法
①在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞
(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细
胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融
合的杂种细胞 ( 杂交瘤细胞 ) 才能生长。这种杂种 细胞的特点是既能迅速大量繁殖 ,又能产生单一的 特异性抗体。 ②经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所
同原因：
①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本。所以
与植物组织培养不同(只来自于一个亲本),克隆动
物遗传物质来自2个亲本。
②在发育过程中可能发生基因突变,染色体变异导
致的变异。
3.应用及存在问题
(1)应用：加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群
繁育、保护濒危物种、克隆器官用于移植等。