杂交瘤细胞
筛选出杂交瘤细胞的方法
筛选出杂交瘤细胞的方法嘿，咱今儿就来聊聊筛选出杂交瘤细胞的那些事儿！你知道不，这筛选杂交瘤细胞就像是在一大群人里找出那个最特别的明星一样。
咱得有好法子，才能精准地把它给揪出来。
首先呢，咱可以用个叫做“选择性培养基”的宝贝。
这就好比是给细胞们设了个关卡，只有那些符合特定条件的杂交瘤细胞才能在这个关卡里存活下来。
其他的细胞呢，就只能拜拜啦！你说这是不是很妙啊？那些不合适的细胞就像是滥竽充数的家伙，一下子就被淘汰掉啦。
然后呢，还有一种方法，叫“有限稀释法”。
这就好像是把一群人分成一个个小组，然后慢慢地去找出那个最厉害的小组。
通过不断地稀释和培养，就能把那些单个的、优秀的杂交瘤细胞给分离出来。
这可真是个细致活啊，就跟咱挑珍珠似的，得一颗一颗地仔细看。
再有啊，咱还可以通过检测细胞产生的抗体来筛选。
这就好比是看谁能拿出最厉害的法宝一样，只有能产生特定抗体的杂交瘤细胞才是我们要找的宝贝呀！这检测的过程可不能马虎，得瞪大了眼睛好好看呢。
你想想啊，要是没有这些好方法，咱怎么能从那么多细胞里找出那颗最闪亮的星星呢？这就跟在茫茫人海中找真爱似的，不容易啊！但只要咱有耐心，有方法，就一定能把它给找到。
比如说，要是咱随便弄弄，不认真去筛选，那岂不是会把一些滥竽充数的细胞也当成宝贝啦？那可不行，那会影响后续的实验效果的呀！所以说啊，这筛选杂交瘤细胞可真是个技术活，也是个细心活。
咱在做这个的时候，一定要认真对待，不能马虎。
就像盖房子一样，基础得打好，不然房子可就不结实啦。
这筛选出的杂交瘤细胞就是我们后续研究的基础呀，可得重视起来。
总之呢，筛选杂交瘤细胞的方法有很多，但每一种都需要我们用心去对待。
只有这样，我们才能从众多细胞中选出那颗最璀璨的明珠，为我们的研究和应用打下坚实的基础。
你说是不是这个理儿呢？咱可不能小瞧了这小小的细胞，它们里面可是藏着大大的奥秘呢！。
杂交瘤细胞
杂交瘤技术杂交瘤技术（hybridoma technique）即淋巴细胞杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术。
它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。
克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）（1975）证明，骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体，这种技术通称为杂交瘤技术。
这一技术的基础是细胞融合技术。
骨髓瘤细胞在体外可以连续传代，而脾细胞是终末细胞，不能在体外繁殖。
如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体或因子的淋巴细胞融合，则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性，又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力，同时也克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点，融合的细胞称为淋巴细胞杂交瘤。
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。
这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。
被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。
在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。
其原理从下列3个主要步骤阐明。
(一)细胞的选择与融合建立杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异的单克隆抗体，所以融合细胞一方必须选择经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。
脾是B细胞聚集的重要场所，无论以何种免疫方式刺激，脾内皆会出现明显的抗体应答反应。
融合细胞的另一方则是为了保持细胞融合后细胞的不断增殖，只有肿瘤细胞才具备这种特性。
·选择同一体系的细胞可增加融合的成功率。
多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，所以是理想的脾细胞融合伴侣。
使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤，使细胞易于相互粘连而融合在一起。
最佳的融合效果应是最低程度的细胞损伤而又产生最高频率的融合。
筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学检测方法，用于检测细 胞表面抗原或分泌型抗原。该方法的基本原理是将特异性抗 体与酶结合，然后与细胞表面抗原或分泌型抗原结合，最后 通过酶反应显色来检测抗原的存在。
克隆化培养
克隆筛选
通过有限稀释法或流式细胞术等 方法，将杂交瘤细胞克隆化培养 ，以获得单克隆杂交瘤细胞。
培养条件
提供适宜的培养条件，如适宜的 培养基、温度、气体等，以保证 杂交瘤细胞的生长与繁殖。
抗体检测与筛选
抗体筛选
通过抗原结合试验进一步筛选出具有 高亲和力和特异性的杂交瘤细胞克隆。
抗体纯化
对筛选出的杂交瘤细胞克隆产生的抗 体进行纯化，以提高抗体的纯度和特 异性。
荧光激活细胞分选法的优点是灵敏度高、分辨率高、操作自动化，适用于大量细 胞的筛选。但是，该方法需要使用
细胞融合
选择合适的骨髓瘤细胞与免疫细胞融合
01
选择具有高免疫反应的骨髓瘤细胞系，如SP2/0、X63-
Ag8.653等，与免疫细胞融合，以产生杂交瘤细胞。
生物制品生产
抗体生产
杂交瘤细胞可以作为生产抗体的重要来 源，用于生产治疗性抗体或诊断试剂。
VS
细胞培养技术
通过筛选高表达量的杂交瘤细胞，可以优 化细胞培养技术，提高生物制品的生产效 率和质量。
05
杂交瘤细胞筛选的挑战与解决方案
克隆不稳定问题
克隆不稳定是指杂交瘤细胞在培养过程中出现生长缓慢、 停滞甚至死亡的现象，导致难以获得稳定表达抗体的细胞 株。
克隆扩大培养与建株
杂交瘤细胞的制备流程
杂交瘤细胞的制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!杂交瘤细胞的制备流程如下：1. 免疫动物：选择合适的动物进行免疫，常用的动物有小鼠、大鼠等。
杂交瘤细胞培养方法
杂交瘤细胞培养方法
杂交瘤细胞培养方法：
1. 杂交瘤的制备：
将骨髓瘤细胞与抗原刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞。
2. 细胞培养：
将杂交瘤细胞接种于含有高浓度鸟嘌呤或潘孔霉素的无血清培养基中进行培养。
3. 无血清培养基的制备：
取无血清培养基中所需的基础培养液（例如：DMEM、RPMI 1640等），添加必要的生长因子、维生素、矿物质和氨基酸等，经过过滤和灭菌处理即可。
4. 细胞培养条件：
培养杂交瘤细胞时，需保持其在适宜的温度、CO2浓度和湿度下生长，通常在37℃、5% CO2气氛下进行培养。
5. 细胞检测：
在培养过程中，需定期检测细胞形态、增殖情况、表达抗原的能力等，以确保细胞的纯度和功能性。
注意事项：
为避免污染和交叉感染，需采取有效的无菌技术和严格的操作规范；同时，在培养过程中应注意细胞的生长情况和营养状况，及时调整培养条件以保证细胞的最佳生长状态。
杂交瘤细胞培养注意事项
杂交瘤细胞培养注意事项1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。
如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。
3. 离心前须加入少量培养液。
细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4. 离心问题：目前主要有两种见解。
一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第2天换液。
因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。
此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。
另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。
我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。
所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术是一种常用的遗传学实验方法，用于研究基因的功能和调控。
其基本原理是将两个不同品系或物种的细胞或组织相互融合，生成杂交细胞或杂交瘤。
这些杂交细胞或瘤细胞会融合两个品系或物种的基因信息，同时保留着两个母细胞的细胞器和细胞质基因。
杂交瘤技术的基本步骤如下：
1.选择母细胞：选择具有所需特性的两个不同来源的细胞或组织作为杂交的母细胞。
一般选择一个无能力生长但含有所需基因的细胞（称为donor细胞）和一个能够快速增殖但缺乏所需基因的细胞（称为host细胞）。
2.处理细胞：将两个细胞进行特定处理，使其融合在一起。
一种常用的方法是使用化学物质（如聚乙二醇）或电脉冲来增加细胞融合的效率。
3.筛选和培养：将融合后的细胞进行筛选，通常是通过添加相应抗生素或培养基来筛选并培养合适的杂交细胞或杂交瘤。
4.分离纯化：通过稀释法或细胞克隆等方法，将杂交瘤细胞分离并纯化，以获得纯的杂交细胞系或杂交瘤。
杂交瘤技术的应用非常广泛，主要用于以下方面：
1.产生单克隆抗体：通过杂交瘤技术，可以融合具有所需抗体的B细胞与快速增殖的癌细胞，得到能够大规模产生特定抗体的杂交瘤细胞系。
2.研究基因功能：将疾病相关的基因或调控元件与高增殖性的癌细胞融合，可以研究相关基因的功能及其在疾病中的作用机制。
3.生产重组蛋白：将所需基因与杂交瘤细胞融合，可以实现大规模生产特定蛋白质，并用于医药和生物工程领域。
总之，杂交瘤技术是一种有效的遗传学实验方法，通过细胞融合的方式结合两种细胞的特性，用于研究基因功能、产生单克隆抗体和生产重组蛋白等多个领域。
杂交瘤细胞的培养方法
杂交瘤细胞的培养方法嘿，咱今儿个就来讲讲杂交瘤细胞的培养方法。
这可真是个神奇的领域呢！你想想啊，杂交瘤细胞就像是一群被精心呵护的宝贝。
要让它们茁壮成长，那可得下一番功夫。
首先呢，得给它们准备一个舒服的“家”，这就是培养环境啦。
温度啦、湿度啦，都得恰到好处，不然它们可不乐意待着呢。
就好像咱人一样，太冷太热都难受，它们也有自己的小脾气。
然后呢，就是营养啦。
它们得吃得饱饱的，才能有力气长大呀。
这就需要合适的培养液，里面各种成分都不能少，这可都是它们的“美味佳肴”。
接着说，培养的过程就像是照顾小婴儿。
得时刻关注着它们的状态，看看有没有啥不对劲的地方。
要是有个头疼脑热的，那可得赶紧想办法解决。
还有啊，细胞们也会有竞争呢。
就像咱在社会上一样，都想争个好位置。
所以得注意观察，让它们都能健康地发展。
培养杂交瘤细胞可不能马虎，每一个环节都得细心对待。
这可不是随便搞搞就能行的事儿。
要是不小心出了差错，那之前的努力可就白费啦，这多可惜呀！你说这杂交瘤细胞的培养，是不是挺有意思的？就像一个小小的世界，有它自己的规则和规律。
咱得好好研究，才能让它们发挥出最大的作用。
咱再想想，要是没有好好培养它们，那很多研究不就没法进行啦？很多疾病的治疗方法不就没办法找到啦？这后果可严重了呀！所以呀，对待杂交瘤细胞的培养，咱可不能掉以轻心。
得认真、仔细、负责任地去做。
这样才能让它们为我们的科学研究和医学事业做出贡献呀！总之呢，杂交瘤细胞的培养可不是一件简单的事儿，但只要我们用心去做，就一定能做好。
让我们一起加油，为了科学的进步而努力吧！。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
A 平行多电极融 合装置示意图
在交流电场中原 生质体排列成念 珠状、发生融合 B 电融合微室示意图 上：俯视图 :下侧面图
电融合设备及原理图
6.2.3 物理法——电融合诱导法
电融合诱导法：
1. 亲本原生质体均匀混合放入融合小室，微电极只有一个小
室，平行电极型有4个小室，两电极间隔3㎜，整个装置放在 一个培养皿中。 2. 微电极型的两个电极的端部同时与两个靠近的原生质体膜 表面接触，5~12mA脉冲电流刺激1~5mS,原生质体在累计几秒 到几十秒时间内暂时收缩，两膜间形成小孔，连接成桥，经 点到面完成连接，最后形成融合体。 3. 经平行电极的1兆赫交流双向脉冲，原生质体极化产生偶极
中，组织块剪碎1mm3大小加入Hanks溶液，低速离 心，留下组织块。 2、组织的消化：胰蛋白酶消化： ①向组织块中加入30~50倍体积的胰蛋白酶液。 ②37℃水浴内消化，每5~10分钟摇一次。 ③Hanks漂洗两次。
④800r/min离心5min，弃上液，加入营养液。
6.2 细胞融合技术与融合细胞的选择
pH、高钙离子液,15分钟后冲洗液冲洗，离心收集原生质
体。 4.计算融合率 融合率=（融合细胞的细胞核总数/视野内全部细胞的 细胞核总数）×100%
6.2.3 物理法——电融合诱导法
是20世纪80年代出现的细胞融合技术。在直流电脉
冲的诱导下，原生质体膜表面的电荷和氧化还原电位
发生改变，使异种原生质体黏合并发生质膜瞬间破 裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜形成融 合体。 优点：融合率高、重复性好、对原生质体伤害 小、装置精巧、方法简便、可在显微镜下观察或录象 融合过程、诱导过程可控性强等。
PEG法诱导原生质体的机制尚不十分清楚，初步分 析可能是由于带有大量负电荷的PEG分子和原生质体 表面的负电荷间在钙离子的连接下形成静电键，促使 异源的原生质体间的黏着而结合。用高钙离子和pH 溶液将与质膜结合的PEG分子进行洗脱，导致电荷平 衡失调并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连 接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。
6.1.3 原生质体的制备与培养
6.1.3.1 原生质体的制备 1.原生质体来源：植物的叶片、根尖、花粉等。
2. 制备原生质体：机械法；酶解法
酶解法：（1） 取材消毒 （2） 酶解制备
（3） 原生质体收集
3. 原生质体的纯化方法 过滤-离心法； 漂浮法； 沉降法和漂浮法结合
6.1.3 原生质体的制备与培养
细胞融合技术主要有：
生物法——仙台病毒法
化学法——PEG结合高Ga2+、pH诱导法 物理法——电融合诱导法 融合细胞的选择： 融合细胞的类型：同核体；异核体；多核体。
常用的选择方法：遗传互补筛选法；抗性互补筛选
法；生长特性筛选法；物理特性筛选法；其他方法
6.2.1 生物法——仙台病毒法
灭活的仙台病毒（HVJ）可促使细胞凝结、使
第六章
细胞融合
(Ceቤተ መጻሕፍቲ ባይዱl fusion)
6.1 概述
细胞融合(cell fusion)又称体细胞杂交（somatic
hybrydization）或细胞杂交（cell hybrydization ）：
在离体条件下用人工方法将不同种或同种不同类型 的单细胞通过无形方式融合成一个杂合细胞,生产 特殊生物制品、分化再生新物种或新品种的技术。 细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。 目前被广泛地应用于单克隆抗体、生物的远缘杂 交、新品种的培育和人类基因图工作（小鼠和人类
6.1.1 细胞融合的意义
细胞融合(cell fusion)：将不同来源的原生质体（动 物细胞）相融合，使之分化再生、形成杂合细胞、新 物种或新品种的技术。 意义：可应用于优先选择改良、克服远缘杂交中的
不亲和障碍、更加广泛地组合起各种植物的优良遗传
性状，从而培养出理想的品种。可以避开生殖细胞的
受精过程，从而在亲缘关系更远的物种间实现基因转
细胞融合）。
6.1 概述
受精：雌雄生殖细胞间的自然融合。
体细胞间的融合现象：Muller（1838）发现脊椎 动物肿瘤细胞的多核现象。其后发现骨髓、肺组织 和各种正常组织及炎症和坏死部位的多核现象。 实验体细胞融合：在细胞培养技术之后。首先
（Lambert）发现体外培养的肿瘤细胞自发融合。
后（Okata,1962）发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤 细胞融合，开创了动物细胞融合的崭新领域。其后 不同动物细胞、植物和微生物原生质体融合技术也 相继发展起来。
6.1.3.2 原生质体培养方法： （1）液体培养法：将纯化后的原生质体悬浮于 液体培养基中培养。 （2） 固体平板法：固体培养基上培养。类似植 物单细胞培养法 （3）双层培养法：在琼脂培养基上部加入一薄 层液体原生质体培养液培养原生质体
6.1.4 动物单个细胞的获得
动物单细胞的获得：
1、组织的获得：处死动物取出组织块，放入小烧杯
6.2.2 化学法—PEG结合高Ga2+、pH诱导
1. 做好两种原生质体的识别标记，如色素、缺陷型抗
性等。 2. 两种原生质体（密度105个∕ml）按1:1等量混合。 3.PEG的分子量为4000~6000，加热融化与Eagle溶液配 成50%。加入PEG后，24℃培育10~20min，缓缓加入高
细胞发生融合（HVJ与细胞膜的受体结合）：
1.两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近
2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞
膜间相互渗透，胞质互相渗透。 3.两个原生质体的细胞核相互融合，融为一体。 4.进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色 体的杂种子细胞。
6.2.2 化学法—PEG结合高Ga2+、pH诱导
移，创造出自然界中所没有的新物种或杂合细胞。还 可创造细胞质杂种。
6.1.2 细胞融合的原理和融合材料
1、 细胞融合的基本原理：不同的原生质体或细胞→融合细 胞→新生物（或杂合细胞）。 两种不同植物的体细胞经纤维素酶、果胶酶消化，除去细胞 壁，得到原生质体（或动物细胞），通过化学或物理方法诱导 其细胞融合形成杂种细胞；以适当的技术进行杂种细胞的分拣 和培养，促使杂种细胞分裂形成细胞团、愈伤组织、直到分化 发育成杂种植株，实现基因在远缘物种间的转移。 2、融合材料 （1） 植物或微生物原生质体的制备 （2） 动物单个细胞的获得 获得步骤： （1） 组织的获得、（2） 组织的消化、（3）原生质体或动 物单细胞的分离。