急性、慢性和亚慢性毒性实验
急性慢性和亚慢性毒性实验
急性毒性试验一经典的急性致死性毒性试验通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量—反应关系并求得LD50LC501、实验动物常用的实验动物是小鼠或大鼠;一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异,则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备,也可仅做雌性动物的LD50试验;小动物每组10只,狗等大动物可每组6只;2、染毒剂量设计首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质;对于新的受试化学物,找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料,并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50LC50值作为受试化学物的预期毒性中值,先用少量动物,以较大的剂量间隔一般按几何级数染毒,找出找出10%~90%或0％~100％的致死剂量范围,然后在这个剂量范围内设几个剂量组;改良寇氏法最好设5个剂量组,每组10只动物,雌雄各半,剂量组要求以等比级数设置;根据以下公式计算出剂量分组：i=lgLD90-lgLD10／n-1 或：i=lgLD100-lgLD0／n-1式中i为组距相邻的两个剂量组对数剂量之差；n为设计的剂量组数;有的毒性较小,此时可不再求其LD50,而应进行限量试验;在用大鼠或小鼠进行试验时,一般用20只动物,雌雄各半;单次染毒剂量一般限定为5g/kg体重,对于食品毒理学试验,限量要求为15g/kg体重;如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡死亡率低于50%,则可得出LD50大于限量的结论;3、观察染毒后一般要求观察14天,依据14天内动物的总死亡情况计算LD50;在实际工作中,依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短;观察内容包括：（1）动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间;（2）动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重;（3）中毒反应症状：临床观察每天至少一次,观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变,呼吸、循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等,特别要注意有无震颤、惊厥、腹泻、嗜睡等现象;神经毒性：惊厥、共济失调和死亡;植物神经兴奋：腹泻或竖毛;（4）病理学检查：解剖进行尸检,观察各器官有无改变,对肉眼观察有变化的脏器需进行组织病理学检查;4、LD50计算（1）霍恩氏法（2）简化寇氏法M = X – iΣp –式中: m— log LD50,X—最高剂量组剂量对数值,p—死亡率用小数表示,Σp—死亡率总和,i—相邻两组剂量对数之差;3直接回归法：死亡频率呈正态分布,则变化曲线为典型的“钟罩”型；死亡频率化为累积死亡频率,反应曲线呈S形；累积死亡频率化为概率单位时,反应曲线呈直线;二急性毒性试验的其他方法1.固定计量法2.急性毒性分级法3.上、下移动法亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法1、实验动物要求选拔两种实验动物,一种为啮齿类,首选是大鼠,另一种为非啮齿类,首选是狗;亚慢性毒性试验一般每个剂量组20只大鼠,或每组4~6只狗;慢性毒性试验每组40只大鼠,狗每组8只或以上;2、染毒途径常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和经皮肤染毒;3、染毒期限工业毒理学—— 3－6个月食品毒理学—— 6个月－1年环境毒理学—— 6个月－1年致癌试验——接近或等于动物的预期寿命4、剂量分组1亚慢性毒性的剂量选择：阴性对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组急性毒性的阈剂量：1/20~1/5 LD50组距：3~10倍,最低不小于2倍2慢性毒性的剂量选择阴性对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组亚慢性阈剂量：1/50~1/5LD50组距：2~5倍,最低不小于2倍5、观察指标（1）中毒症状行为和外观（2）体重：每周称量一次（3）食物利用率试验动物每食入100g饲料所增长的体重克数4实验室检查1血液学检查2尿液检查3血液生化学检查5病理及病理组织学检查对濒死动物进行解剖;试验结束及恢复期结束时,活杀实验动物;1系统解剖：消化道、肺、肝、肾、淋巴腺、眼、皮肤等,记录有无肉眼可见的异常变化;2脏器系数：是指某个脏器质量与体重的比值,又称脏体比值;常以100 g体重或1g体重计;需称量脏器湿重并计算其脏器系数;3组织病理学检查6特异性指标6、结果分析：选择适当的统计学方法进行各剂量组与阴性对照组的比较;。
毒理学——4
24
3．经皮肤染毒 脱毛：化学法脱毛或机械法脱毛 （体表面积的10%）。 染毒：局部涂敷受试物或大鼠、 小鼠浸尾法染毒。
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4．经注射途径染毒
静脉注射或滴注；
腹腔注射； 肌肉注射； 皮下注射； 皮内注射； 椎管内注射
究和将研究结果外推到人提供依据。
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（三）亚慢性毒性试验方法的要点
1. 实验动物的选择
(1) 物种和品系 实验动物对受试物的生物转化、生理生 化、毒性反应与人类相当或相似。
两种实验动物，啮齿类和非啮齿类。
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(2) 性别、年龄和动物数 两种性别，每组雌雄各半；
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适宜容积染毒
① 经口：20ml/kg(空腹动物)； ② 经皮：2ml/kg； ③ 静脉：1ml/kg(5min以上)； ④ 肌肉注射：0.5ml/kg(一个部位)； ⑤ 眼睛：0.01ml/每眼； ⑥ 直肠：0.5ml/kg； ⑦ 阴道：大鼠0.2ml，兔lml； ⑧ 吸入：2mg/L； ⑨ 鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
吞咽胶囊：将受试物装入胶囊中，放至舌 后部，迫使动物咽下。 喂饲：将受试物掺入动物饲料或饮水中供 实验动物自行摄入。
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2．经呼吸道染毒 吸入染毒 静式吸入染毒；
动式吸入染毒。
气管内注入
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静式吸入染毒 方法：将实验动物置于有一定体积的密 闭容器中，加入液态或气态受试物，形成 一定浓度的受试物空气环境进行染毒。 优点：简单、方便、受试物消耗少，适 合于小鼠。 缺点：氧气减少；浓度不稳定；经皮吸 收；不适合稍大动物；挥发性。
保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容
保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容发布日期：2021-04-03浏览次数:1605字号：[大中小]毒理试验的四个阶段和内容1第一阶段：急性毒性试验口服急性毒性：LD50，联合急性毒性，一次性最大耐受性受量试验。
二阶段II：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统畸试验遗传毒性试验的组合应考虑原核和真核细胞的结合原理，体内试验和体外试验。
来自Ames试验或V79/HGPRT基因突变试验、骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验、4.1.2.3或4.1.2.4试验别各选一项。
2.1基因突变试验：首选鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），其次是V79/HGPRT基因突变试验，必要时可另选其它试验。
2.2骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验。
2.3tk基因突变试验。
2.4小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析。
2.5其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴性别隐性致死试验，非程序DNA合成试验。
2.630天喂养试验。
2.7传统致畸试验。
三第三阶段：亚慢性毒性试验-90天喂养试验和繁殖试验殖试验、代谢试验四第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）1、药物的毒性试验分为两类，其一特殊毒性试验，包含致癌、致残、致突变，号称三致试验；作此试验的单位必须是国家指定并认可的；一般单位即使做了也不被国家认可！通常一类创新药必须做的。
无论一个药物的药效如何好，只要含有三致试验的特殊毒性（动物若干代繁殖后，查看），该药物将不会允许上市的。
2、其二，一般毒性试验，通常用老鼠或兔子去做，主要是测定半数致死量；若某个药物的半数致死量是有效使用剂量的2倍以上，通常认为是临床使用安全的，若半数致死量比有效剂量略大一点，那就谁也不敢使用了，万一略微超一点量就会导致患者死亡！。
毒理学实验对比
毒性作用评价
LD50标志着一个化合物毒性的大小，所以常用作急性毒性分级。极毒、剧毒、中等毒、低毒、实际无毒、无毒。 LD50＜人的可能摄入量的１０倍，则放弃； LD50＞１０倍，进入下一阶段
蓄积毒性产生的因素：蓄积毒性作用产生的因素：与接触剂量大小和时间间隔有关；与毒物本身的性质有关（脂溶性还是水溶性，体内的贮存库）；与动物种属的代谢特点有关
①检测外源化学物的致突变性，预测其对哺乳动物和人的致癌性； ②检测外源化学物对哺乳动物生殖细胞的遗传毒性，预测其对人体的遗传危害性。
了解外源化学物及其代谢产物对机体成年哺乳动物的生殖功能和生育力的影响。
通过计数胚胎或胎仔吸收或死亡数，测量胎仔的重量和性别比，检查外观、内脏和骨骼的形态，来识别受试物有无对胚胎或胎仔的致死、致畸或其他毒性作用。
作用机制：一是以DNA为靶点的直接诱变，引起基因突变和染色体畸变；二是不以DNA为靶点的间接诱变，即基因组突变。
①三代两窝生殖试验；②两代一窝和一代一窝生殖试验。
最佳试验方案是对成年动物进行染毒并包括子代从受精卵到性成熟所有生长发育阶段。观察期应贯穿一个完整的生命周期，以检测近、远期效应。最常选用的方案为三阶段试验。
哺乳动物致癌试验：哺乳动物致癌试验是鉴定化学致癌物的标准体内试验。哺乳动物致癌试验用来确定受试物对实验动物的致癌性、剂量-反应关系及诱发肿瘤的靶器官。
实验设计
实验动物、染毒途径、染毒剂量、观察周期、观察指标的选择、计算方法和评价
蓄积系数法、生物半减期法
在遗传毒理学及一些前期的试验难以做出明确评价时需要进行亚慢性毒性试验。在整个亚慢性试验期间，动物均应摄食试验饲料。受试物可掺入饲料中，也可掺入饮水中。不得已时可采用灌胃法进行。
药理毒理学实验
药理毒理学实验
药理毒理学实验是指研究药物对机体生理和病理过程的影响以及药物的毒性和安全性的实验研究。
这些实验常用于药物的开发、评价和监管。
药理学实验常包括以下方面的研究：
1. 药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程；
2. 药物对生理系统和器官的作用机制和效应；
3. 药物对生理参数（如血压、心率、血糖等）的影响；
4. 药物的药效学研究，如测定最小有效剂量、最大耐受剂量等。
毒理学实验主要研究药物对机体引起的毒性反应，包括急性毒性、慢性毒性和亚慢性毒性等。
常用的毒理学实验包括：
1. 急性毒性实验：用于确定药物对动物的一次性剂量引起的毒性反应；
2. 慢性毒性实验：用于评估长期接触药物对动物的毒性效应；
3. 亚慢性毒性实验：用于评估中长期接触药物对动物的毒性效应；
4. 各种毒性指标的测定，如致死剂量、半数致死剂量、致畸性、致癌性等。
药理毒理学实验通常在动物模型中进行，常用的动物包括小鼠、大鼠、猴等。
实验设计需要符合伦理规范，并进行必要的安全措施，以确保实验过程安全且可靠。
值得注意的是，药理毒理学实验虽然可以提供药物效果和毒性的初步评估信息，但实验结果在转化到人类临床应用方面仍需要进行更进一步的研究和验证。
环境毒理学常用实验方法
方法
通常将动物长期暴露于毒物，观察肿 瘤发生情况、类型和恶性程度等指标。
03
细胞培养实验方法
细胞毒性实验
01
02
03
MTT法
通过检测活细胞线粒体中 的琥珀酸脱氢酶来反映细 胞活性，评估毒物对细胞 的毒性作用。
LDH释放法
检测细胞损伤时释放的乳 酸脱氢酶，用于评估毒物 对细胞膜的损伤程度。
中性红摄取法
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数据分析和结果解读
数据统计和分析方法
描述性统计
对数据进行整理、分类、汇总，通过图表展示数据的分布、中心 趋势和离散程度。
推论性统计
通过假设检验、方差分析等方法，推断样本数据所代表的总体特征， 评估不同处理组之间的差异显著性。
多元统计分析
运用主成分分析、聚类分析、判别分析等方法，挖掘数据间的内在 联系和规律，简化数据结构。
研究动物在长时间内暴露于低 剂量毒物后的毒性反应和潜在 危害。
方法
通常将动物长期暴露于低剂量 毒物，观察生长、发育、繁殖 和器官损害等指标。
应用
用于评估毒物的慢性毒性，了 解毒物对机体的长期影响，如 致癌、致畸、致突变等。
致癌性实验
目的
应用
研究动物在长时间内暴露于毒物后是 否诱发肿瘤。
用于评估毒物的致癌性，为环境毒理 学和公共卫生领域提供重要依据。
04
分子生物学实验方法
基因毒性实验
02
01
03
单细胞凝胶电泳（彗星实验）
检测DNA链断裂，评估遗传物质损伤。
基因突变实验
通过观察基因突变频率，评估化学物质的致突变性。
报告基因实验
利用报告基因的表达变化，间接反映目标基因毒性。
蛋白表达实验
动物安全药理实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本研究旨在通过动物安全药理实验，对某新型药物进行安全性评价，包括急性毒性、亚慢性毒性、慢性毒性以及遗传毒性等方面，为该药物的临床应用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验动物：健康昆明小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
2. 药物：某新型药物，纯度≥98%，由某制药企业提供。
3. 试剂与仪器：生理盐水、苦味酸、戊巴比妥钠、注射器、灌胃针、电子天平、手术剪、止血钳、平皿、托盘、烧杯等。
三、实验方法1. 急性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重。
（3）观察指标：观察实验动物在给药后24小时内出现的死亡、中毒症状及体征。
2. 亚慢性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重，连续给药90天。
（3）观察指标：观察实验动物在给药期间及停药后30天内出现的死亡、中毒症状及体征，并进行血液学、血液生化、脏器系数等指标检测。
3. 慢性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重，连续给药6个月。
（3）观察指标：观察实验动物在给药期间及停药后30天内出现的死亡、中毒症状及体征，并进行血液学、血液生化、脏器系数、病理学等指标检测。
4. 遗传毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为2组，每组10只，分别为实验组（给药组）和对照组。
（2）给药方式：实验组灌胃给药，剂量为2.0g/kg体重，连续给药90天。
毒理学基础 第六章 化学物的一般毒性作用
〔四〕慢性实验设计要点
1.实验动物 2.染毒途径与期限
3.剂量分组: 高剂量组：1/5-1/2 LOAEL〔亚慢〕 中剂量组：1/50-1/10LOAEL 低剂量组：1/100 LOAEL或：1/1000-1/10LD50 阴性对照：
4.观察指标 同亚慢，但精，为亚慢显现靶的指标。
〔五〕结果评价
染毒使半数动物出现相同效应〔或死亡〕的剂量[ED50(1)]
的比值，K 即= 蓄ED5积0(n)系数。
ED50(l)
LD50(n
K
=
)
LD50(l
)
1)固定剂量法 2)剂量递增法
〔2〕生物半减期法
用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用 化学物的蓄积极限：
a.半减期的测定 b.计算蓄积极限
第六章 化学物的一般毒性作用
急性毒性 一般毒性亚慢性毒性
慢性毒性
急性毒性试验 亚慢性毒性试验 慢性毒性试验
第一节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念
➢ 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体〔实验动物或人〕 一次或24小时内屡次接触外源化学物后在短期内所引 起的毒性效应。
➢ 包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应 ➢ 说明： ➢ 1.接触的次数：一次/屡次 ➢ 2.毒效应出现时间： ➢ 3.中毒效应的强度：
〔二〕染毒途径
1.经消化道染毒 2.经呼吸道染毒 3.经皮肤染毒 4.经注射染毒
〔三〕剂量选择及分组
1.剂量范围确实定： 动物死亡率0％－100％ 〔或10％-90%〕的致死剂量范围
2.分组及剂量确实定： 窛氏法：6－8组为宜，各组剂量呈等比级数 霍恩氏法：4组，各组剂量呈等比级数
〔四〕毒作用观察
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急性毒性试验
(一)经典的急性致死性毒性试验
通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50)
1、实验动物
常用的实验动物是小鼠或大鼠。
一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物
毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备，
也可仅做雌性动物的LD50试验。
小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。
2、染毒剂量设计
首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解
度、挥发度、PH等理化性质。
对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质
近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的
LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按
几何级数)染毒，找出找出10%~90%(或0% ~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范
围内设几个剂量组。
改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要
求以等比级数设置。
根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0) / (n-1)
式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；
n 为设计的剂量组数。
有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。
在用大鼠或小鼠进行试验时，
一般用20只动物，雌雄各半。
单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。
如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。
3、观察
染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。
在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。
观察内容包括：
(1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。
(2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。
(3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、
自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、惊厥、腹
泻、嗜睡等现象。
神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。
植物神经兴奋：腹泻或竖毛。
(4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进
行组织病理学检查。
4、LD50计算
(1)霍恩氏法
(2)简化寇氏法
M = X - i(工p - 0.5)
式中：m —log LD50,
X —最高剂量组剂量对数值，
p —死亡率(用小数表示)，
工p—死亡率总和，
i —相邻两组剂量对数之差。
(3)直接回归法：
死亡频率呈正态分布，则变化曲线为典型的“钟罩”型；死亡频率化为累积死亡频率，反应曲线呈S 形；累积死亡频率化为概率单位时，反应曲线呈直线。
(二)急性毒性试验的其他方法
1. 固定计量法
2. 急性毒性分级法
3. 上、下移动法
亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法
1、实验动物
要求选拔两种实验动物，一种为啮齿类，首选是大鼠，另一种为非啮齿类，首选是狗。
亚慢
性毒性试验一般每个剂量组20只大鼠，或每组4~6只狗。
慢性毒性试验每组40只大鼠，狗
每组8只或以上。
2、染毒途径
常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和经皮肤染毒。
3、染毒期限
工业毒理学一一3 —6个月
食品毒理学一一6个月一1年
环境毒理学一一6个月一1年
致癌试验——接近或等于动物的预期寿命
4、剂量分组
(1)亚慢性毒性的剂量选择：
阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组
急性毒性的阈剂量：1/20~1/5 LD50
组距：3~10倍，最低不小于2倍
(2)慢性毒性的剂量选择
阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组
亚慢性阈剂量：1/50~1/5LD50
组距：2~5倍，最低不小于2倍
5、观察指标
(1)中毒症状(行为和外观)
(2)体重：每周称量一次
(3)食物利用率(试验动物每食入100g饲料所增长的体重克数)
(4)实验室检查
1) 血液学检查
2) 尿液检查
3) 血液生化学检查
(5 )病理及病理组织学检查
对濒死动物进行解剖。
试验结束及恢复期结束时，活杀实验动物。
1) 系统解剖：消化道、肺、肝、肾、淋巴腺、眼、皮肤等，记录有无肉眼可见的异常变化。
2) 脏器系数：是指
某个脏器质量与体重的比值，又称脏体比值。
常以100 g体重或1g 体重计。
需称量脏器湿重并计算其脏器系数。
3) 组织病理学检查
(6)特异性指标
6、结果分析：选择适当的统计学方法进行各剂量组与阴性对照组的比较。