延胡索的镇痛实验
延胡索的实验报告
一、实验目的1. 掌握延胡索的提取方法。
2. 分析延胡索中的活性成分。
3. 了解延胡索的药理作用。
二、实验原理延胡索（Corydalis yanhusuo W. T. Wang）是一种具有镇痛、抗炎、抗抑郁等药理作用的药材。
本实验采用溶剂提取法从延胡索中提取活性成分，并通过薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）等方法进行定性、定量分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：延胡索药材（购自药店）。
2. 试剂：甲醇、乙醇、氯仿、正己烷、石油醚、浓硫酸、氨水、碳酸钠等。
3. 仪器：分析天平、回流提取器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、高效液相色谱仪、紫外-可见分光光度计等。
四、实验方法1. 延胡索提取（1）称取延胡索药材10g，加入50ml甲醇，回流提取1小时。
（2）将提取液过滤，滤液减压浓缩至干燥。
（3）将干燥物用正己烷、氯仿、石油醚依次萃取，分别浓缩干燥。
（4）将各萃取物合并，再用甲醇溶解，得到延胡索提取物。
2. 活性成分分析（1）薄层色谱（TLC）①点样：取延胡索提取物1μl，点于TLC板上。
②展开：将TLC板置于展开剂中，展开至溶剂前沿。
③显色：将TLC板取出，晾干后，喷以碘蒸气显色。
（2）高效液相色谱（HPLC）①样品制备：取延胡索提取物适量，加甲醇溶解，定容至一定体积。
②色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇-水（梯度洗脱）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min。
五、实验结果1. 延胡索提取物的薄层色谱（TLC）分析：在TLC板上观察到延胡索提取物中有多个斑点，其中有两个斑点与对照品（延胡索乙素、延胡索甲素）的斑点位置一致。
2. 延胡索提取物的HPLC分析：在HPLC图谱中，延胡索提取物中有两个峰，分别对应延胡索乙素和延胡索甲素。
通过峰面积计算，延胡索乙素和延胡索甲素的质量分数分别为2.5%和1.0%。
六、实验结论1. 本实验采用溶剂提取法从延胡索中提取活性成分，方法简便、高效。
2. 延胡索提取物中含有延胡索乙素和延胡索甲素，二者是延胡索的主要活性成分。
延胡索的镇痛作用
• 2、给药 给药组1-5号腹腔注射延胡索水煎液 （0.2ml/10g），对照组6-10号腹腔注射生 理盐水（0.2ml/10g），并记录给药时间。 • 3、测痛阈变化值 给药后15、30min各测一次痛阈，对 60s内不出现舔后足的小鼠应立即取出，痛 阈按60s计算。
实验结果
组 别 给药前 痛阈值 给药后痛阈值 镇痛百分率
15min 30min 15min 30min
对 照 组 实 验 组
注意事项
小鼠出现举前肢、踢后肢、舔前足、跳 跃等现象均不作为疼痛指标，只有舔后足 才作为疼痛的指标。
延胡索的镇痛作用实验
12级中药实验班 第六组
实验目的
• 学习热板法的实验操作手法 • 观察延胡索的镇痛作用
实验原理
热板法：小白鼠的足部受热版刺激而产生 疼痛时，就发生舔后足的特殊反应。从接 触热板到舔后足所需要的时间为痛阈值， 其为观察指标。
实验材料
• 实验动物：20g左右小鼠10只
• 实验器材：热板仪、注射器、延胡索水煎 液、生理盐水、苦味酸溶液
炮制对延胡索镇痛作用的影响(热板法)-中药药理学
【实验材料】
药品： 延胡索提取物 动物： 雌性小鼠，18—22g
醋 制 延 胡 索
生 延 胡 索
仪器：热板仪
【实验方法】
小鼠的选择及
5-30秒
正常痛阈的测定
延胡索组
Hale Waihona Puke 醋制延胡索组生理盐水组
若放入热板仪 内小鼠60秒仍 无反应，应将 小鼠取出，痛 阈值以60秒计。
给药后15分钟测定 给药后45分钟测定 给药后60分钟测定
炮制对延胡索镇痛作用的影响
（热板法）
课前准备：
1、500字综述：镇痛药的作用机制及相关的疾病动物模型。 2、实验设计：延胡索及其炮制品镇痛作用的研究。
【实验目的】
掌握镇痛药的实验方法； 观察炮制对延胡索镇痛作用的影响。
【实验原理】
把小鼠放在事先加热到55°C的金属盘(铁
皮，铝、铜均可)上，以舔后足作为“疼痛’ 反应指标。观察给药前、后痛阈值的变化。
敏感，易引起跳跃。
【思考题】
1、延胡索的镇痛作用和吗啡有哪些区别？
2、炮制对延胡索镇痛作用的影响 ？
3、镇痛药的实验设计应注意哪些问题 ？
痛阈值
【结果与统计】
痛域提高百分率计算公式
给药后平均痛阈值 – 给药前平均痛阈值 给药前平均痛阈值 ×100％
痛阈提高百分率（％）=
生理盐水组 药物有无作用 延胡索组 醋制延胡索组
各时间点组间检验
作用有无强弱差异
注意事项!!
1、动物体重对结果有影响，小鼠以20g左右为宜。 2、小鼠以雌性为好，雄性因阴囊受热后易松弛， 与“热板’接触而致反应过敏。 3、室温对实验有影响，过低小鼠反应迟钝，过高则
延胡索不同炮制品镇痛抗炎作用研究
延胡索不同炮制品镇痛抗炎作用研究【摘要】目的通过不同的致痛、致炎模型观察延胡索不同炮制品的镇痛抗炎作用。
方法采用小鼠热板法和扭体法，观察延胡索不同炮制品镇痛作用；采用耳肿法及毛细血管通透性法观察药物的抗炎作用。
结果延胡索不同饮片对二甲苯所致的耳廓肿胀及醋酸所致的毛细血管通透性增加都有明显的抑制作用，其中以醋煮延胡索作用较强。
延胡索不同炮制品对醋酸所致的扭体也有明显的抑制作用。
热板法显示各样品均能明显提高小鼠的痛阈值，其中以醋煮延胡索作用较为明显。
结论延胡索的不同炮制品均有显著的镇痛抗炎作用，其中以醋煮延胡索作用较强。
【关键词】延胡索；镇痛；抗炎；炮制Abstract：ObjectiveTo study analgesic and anti-inflammatory effects of different kinds of Corydalis yanhusuo.MethodsThe analgesic effect was tested by hot plate method and writhing body method in mice. The anti-inflammatory effect was tested by ear swollen method and capillary penetration method in mice. ResultsThe action of Corydalis yanhusuo Aeruginosae was more intensives. ConclusionCorydalis yanhusuo and its different processed products have marked analgesic and anti-inflammatory effects， of which the vinegar-product is more intensive.Key words：Corydalis yanhusuo; Analgesia; Anti-inflammation延胡索具活血化淤，行气止痛功效，临床常用于胸胁、脘腹疼痛，经闭痛经，产后淤阻，跌扑肿痛等证。
河北医大中药药理学实验指导04基本实验项目-9延胡索对小白鼠的镇痛作用(扭体法)
实验九延胡索对小白鼠的镇痛作用（扭体法）
【目的】观察延胡索的镇痛作用。
【原理】延胡索能活血行气止痛。
小白鼠腹腔受化学药物刺激，表现为扭体反应，以此作为指标、观察金铃子散的镇痛作用。
【器材】注射器、烧杯、鼠笼、计时器等。
【药品】延胡索水煎液lg/ml、0.6%醋酸溶液、生理盐水。
【动物】小白鼠。
【方法】将小鼠称重、标记后随机分组。
给药组灌服延胡索水煎液0.3ml∕10g,对照组灌服等量生理盐水。
给药后30min,各鼠腹腔注射0∙6%醋酸溶液0.2ml/只。
观察并记录注射醋酸溶液后15~30min内出现扭体反应（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次数及时间。
计算延胡索的镇痛百分率。
镇痛率二（对照组平均扭体次数-金铃子散组平均扭体次数）÷对照组平均扭体次数XlO0%
【结果】将实验结果填入表内。
延胡索对小鼠的镇痛作用（□±SD）
【注意】
（I）0.6%醋酸溶液必须临用前配制。
(2)若延胡索为生品，煎煮时可加入0.1%醋酸或食用醋适量，以助生物碱成分溶出。
(3)小鼠对疼痛刺激的反应差异甚大，据药理学惯例，镇痛百分率须大于50%才认为有镇痛作用。
(4)也可用0.01%酒石酸睇钾溶液0.2ml∕只致痛，作扭体实验。
中药“止痛之最”——延胡索
中药“止痛之最”——延胡索有一味中药被称为“止痛圣药”，它是中药里的“止痛之最”，它就是延胡索。
延胡索又称延胡、元胡。
延胡索是“浙八味”之一，始载于宋《开宝本草》，原名玄胡索，因避宋真宗讳，改玄为延。
延胡索为罂粟科植物延胡索的干燥块茎，主产于浙江东阳、磐安、永康等地，湖北、安徽、湖南、江苏等地也有栽培种植。
具有显著的镇痛、镇静、催眠作用，对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病有较好的治疗效果。
【性昧与归经】辛、苦，温。
归肝、脾经。
【功能与主治】活血，行气，止痛。
用于胸胁、脘腹疼痛，胸痹心痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛。
【用法与用置】 3〜10g；研末吞服，一次1.5〜3g。
【选购贮存】以个大、饱满、质坚实、断面色黄者为佳。
20世纪中叶，中国科学家成功从延胡索中分离出镇静效果明显的延胡索乙素，其镇静效果强于解热镇痛药，又无杜冷丁等镇静药的成瘾性，适用于内科疾病引起的头痛、经痛及分娩痛。
有人研究了延胡索乙素的镇痛作用机制，认为延胡索乙素阻滞纹状体、前额皮层等脑区D2受体后，通过纹状体、伏膈核－弓状核－PAG通路加强脑干下行痛觉调制系统的抗痛功能。
有研究对颅痛定( 左旋延胡索乙素) 的镇痛机制进行了分析，并推论其不属于解热镇痛抗炎药，也不属于阿片类麻醉性镇痛药。
有研究以高架十字迷宫模型，发现延胡索具有抗焦虑的作用，其所含延胡索乙素能够通过抑制杏仁体释放多巴胺来抑制由印防己毒素诱导的大鼠自主运动和旋转次数增加，也能减少大鼠在冰水中的自主运动频率。
延胡索中的生物碱具有很强的镇痛、镇静和抗心律失常作用。
很多新的研究表明，延胡索还有其他广泛的生理活性。
延胡索中的主要有效成分——延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素等生物碱，对心、脑缺血再灌注损伤具有保护作用。
除此之外，这些生物碱还有镇痛、抗焦虑，抗胃、肠溃疡，抗肿瘤，抗炎、抗菌、抗病毒等多种作用。
中成药元胡止痛方：由中药醋延胡索和白芨组成，为临床常用经方。
方中君药延胡索辛温通散，为行气活血、止痛良药，善治一身上下诸痛。
【doc】醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究
【doc】醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究霾萑彝皇蜃中医医院(8300o0)赵翡翠赵晓琴李永和摘要目的:考察不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用所产生的影响.方法:采用HPLC法测定延胡索醋制品中延胡索乙素的含量,采用小鼠扭体法和热板法对比各醋制品镇痛作用.结果:醋制延胡索中延胡索乙素的含量高于生品,其中以醋烘品为最高;醋制延胡索的镇痛作用强于生品,:采用其中以醋烘品为优.结论醋烘法进行延胡索加工炮制可控,可行,有效,为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.关键词醋制廷胡索;延胡索乙素;镇痛;炮制延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(CorydalisyanhusuoW.T.Wang)的干燥块茎,味辛,微苦,性温.归肝脾经,功能行气血,调月经,止疼痛,用治气血瘀滞诸痛证.延胡索有多种炮制方法,如醋炒,醋煮,醋蒸,酒炒,盐炒等.醋,味酸,苦,性温,具有散瘀止血,理气止痛作用,中医认为,醋能引药人肝,增强药物疏肝散瘀,止痛的功效,醋制能加强延胡索疏肝止痛的作用.现代研究表明延胡索主要含生物碱类成份,其中延胡索总生物碱,延胡索甲素,乙素,丑素均有镇痛作用,尤以延胡索乙素镇痛作用最强【1】.但延胡索乙素为叔胺型,亲脂型生物碱,游离时难溶于水,经醋制后,其生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐,煎煮时易于溶出,从而更好地发挥药效,故临床上多以延胡索醋制品人药. 现延胡索多用醋炒,醋煮两种炮制方法,但工艺中不易于控制炮制温度和药材含水量,也不便于规范饮片炮制质量,尽管有关延胡索的炮制条件和含量变化的探讨,文献报道较多,但如何规范炮制 4讨论4.1国内糖尿病研究有应用STZ一次性剂量 5065mg/kg,数天后可产生持续性高血糖,但与糖尿病实际发病有一定差距[51.本实验用高脂饮食结合小剂量STZ注射的方法复制出糖尿病动物模型, 该模型具有中度高血糖,高血脂的特点,其发病过程及特征与2型糖尿病患者的代谢特点和临床过程比较相似,且造模方法简便易行,成功率高,重复性好,是研究2型糖尿病发病机制,相关并发症及药物学评价的理想模型.4.2本实验中,三黄消渴片低,高剂量组均能明显降低糖尿病大鼠血糖,而且随用药时间的延长,降糖作用增强.低剂量组降糖效果优于高剂量组,表明其降糖作用没有剂量依赖性.这些结果为我~f31t$ 床运用三黄消渴片治疗糖尿病提供了实验依据,至于其降糖作用的机制则有待进一步研究. 4.3在整个观察过程中,模型空白对照组出现典型的多饮,多食,多尿和明显消瘦,毛竖无光泽,跄卧拱背.阳性药物对照组也有类似改变,但程度较模型组轻.给药20天后服用三黄消渴片低,高剂量组大鼠的毛发,体重,精神状况,血糖值比阳性对照药物组和模型空白对照组相比均有明显改善. 4.4三黄消渴片低剂最组大鼠在喂药30天内全部存活,存活率100%.三黄消渴片高剂量组大鼠有3只死亡,存活率57.1%.模型空白对照组有4只死亡,存活率20%.阳性对照药物有4只死亡,存活率20%. 本研究结果表明,三黄消渴片具有一定的中医理论基础,且低剂量组在降低糖尿病高脂血症大鼠血糖的同时,对其消渴症状,体质,精神状态均有明显改善.表明三黄消渴片疗效肯定,可作为临床糖尿病治疗的辅助用药,充分发挥中医药标本兼治, 扶正祛邪的优势.】【1【2】【3】【4]【5】参考文献:E海科学技术出版社,1989:.83-102 苗述楷,蔡惠文.糖尿病并发症防治学【M】.北京:中国医药科技出版社,2000.陈奇.中药药理研究方法学【M].人民卫生出版社,1993. 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学【M】.人民卫生出版社,1982.粱海荣,唐焕文,罗皓,链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾病模型的建立.应用预防医学,2006,12(3):133-135. (收稿日期:2007-03—14)新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)35 方法,改善目前各种市售的炮制品质量差异大的状况,还有待进一步验证.而据文献报道【21醋烘法具有易控制烘制温度和药材含水量,操作简单易行, 便于规范炮制品质量等优点,故本实验参照《中国药典》一部2005版延胡索药材项下测定醋烘法与醋炒法和醋煮法中延胡索乙素的含量,并进行小鼠镇痛作用的对比,对采用醋烘法炮制延胡索进行初步探索,以便为今后规范醋延胡索的炮制工艺和质量标准奠定基础.l仪器与试药Waters2695高效液相色谱仪(美国waters公QTM5超纯水仪(MilliporeCorporation, 司);Direct—Bedford,MA,U.S.A.);延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110726—200409),延胡索药材(新疆参茸药业有限公司,批号20060101),小白鼠:昆明种,体重l8—22g,由新疆医科大学动物中心提供(动物合格证号:医动字16—001).所用试剂均为分析纯.2方法与结果2.1延胡索炮制品的制延胡索生品:取延胡索药材捣碎成粗颗粒状, 颗粒度为过一号筛.醋炒延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,闷润至醋被吸尽后,置炒制容器内,用文火加热炒干,取出放凉.醋煮延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋与适量清水(以平药面为宜),置煮制容器内,用文火加热煮至透心.醋液被吸尽时,取出晾干. 醋烘延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,至醋吸尽后,置烘箱中于8O?烘干,取出放凉. 2.2各炮制品中延胡索乙素含量测定2.2.1色谱条件色谱柱:4.6mmxl50mmVP—ODS C.柱,粒度5lxm;流动相:甲醇一O.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(55:45),流速:1.0ml?min;检测波长:280nm;柱温:35?,进样量:lOIxL. 2.2.2对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量,加甲醇制成每lmL含461xg的溶液,作为对照品溶液.2.2.3供试品溶液制备取延胡索各炮制品粉末 (过三号筛)lg,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液一甲醇(1:20)50mL,称定重量,冷浸lh后加热回流lh,放冷,再称定重量,用浓氨试液一甲醇(1: 20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,定量转移至5mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得. 2.2.4线性关系的考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液5,lO,l5,2O,25,30lxL在上述色谱条件下重复进样3次,测定峰面积,以峰面积平均值和浓度进行线性回归,得线性方程为:Y=998.03X+248.8,r=0.9997.延胡索乙素在0.234—1.403lxg之间具有良好的线性关系.2.2.5各炮制品中延胡索乙素的含量测定精密吸取各炮制品的供试品溶液201xL注入色谱柱,按外标峰面积法计算延胡索乙素的含量,结果见表1. 表1延胡索乙素含量测定结果2.3小鼠镇痛实验2.3.1样品液的制备嘲称取延胡索生品及炮制品各25g,分别置于1000mL烧杯中,用400mL和,每次保持微沸20min,用脱 250mL水分别煎煮2次脂棉过滤,合并滤液,浓缩至100mL,备用. 2.3.2扭体法圈取体重18~22g小鼠(雌雄各半)l00 只,随机分成5组,分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重.40min后,各鼠腹腔注射O.7%醋酸0.2mL,观察并记录15min内各鼠产生扭体反应(小鼠腹部受化学刺激后出现伸展后肢,腹部收缩,扭曲身体;腹部内凹呈蜂腰状,躯干与后肢伸张,臀部高起)的次数,由表 2可见,各样品组与生理盐水组比较小鼠扭体次数差异均有统计学意义(JP.O1),醋品镇痛作用均强于生品(JP.O1),其中以醋烘延胡索作用为强. 表2延胡索小鼠的镇痛作用(扭体法)与生理盐水组比较,?P<O.Ol;与生品组比较,AP<O.O12.3.3热板法昀取体重18~22g小鼠(雌性),调节恒温水浴水温在(55~0.5)?,将500mL烧杯放入其36新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期) 与给药前比较,'O.01;与生理盐水组比较,AP>0.05,AP<0.01;与生品组比较,?O.01中,使烧杯底部接触水面.小白鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时,就发生舔后足的特殊反应.从接触热板到舔后足所需要的时间作为痛阈值,以此为观察指标.每次取雌性小白鼠1只,放人烧杯内.记录自放人烧杯至出现舔后足所需时间(S),作为该鼠的痛阈值.凡30s内不出现舔后足者,弃之不用.依次测量各小鼠的痛阈值.取预选合格的小鼠100 只,随机分为5组,每组20只,重新测痛阈值1次. 将两次痛阈的平均值作为该鼠给药前的痛阈值.各鼠分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只 0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重,给药后的 30,60min测定各鼠痛域值.若小白鼠在热板上 60min无痛觉反应,应即取出,按60min结果计人表内,计算用药后痛域提高的百分率(结果见表3),可见各样品组镇痛作用均强于给药前和生理盐水组,醋品镇痛作用均强于生品(P<O.01),其中以醋烘法作用为强.痛阈提高百分率=(用药后平均痛阈值一用药前平均痛阈值)佣药前平均痛阈值X 1oo%3讨论中药饮片是在中医药理论指导下,根据辨证用药及调剂,制剂的需要,对中药材进行加工炮制的成品.炮制工艺包含着深厚的中医药理论与丰富的经验技艺,是中医药的特色,也是具有民族特色的独特制药技术,必须继承其中的精髓,勇于创新,使其应用科学化,规范化,正是基于此,本实验对比延胡索生品及其不同醋制品中延胡索乙素的含量变化,并进行了小鼠镇痛实验,结果表明:延胡索经醋炒,醋煮,醋烘后均能提高延胡索乙素的含量,从而证明了醋品的止痛作用增强的原因,同时醋烘品相对于醋炒品,醋煮品延胡索乙素含量稍高,可能是烘制温度较低,对延胡索乙素破坏较少的原因【7】. 扭体法和热板法两种镇痛实验表明,延胡索具有镇痛作用(P<O.01),且醋制延胡索的镇痛作用明显优于延胡索生品(P<O.01),醋烘法优于醋炒法和醋煮法,可得出采用醋烘法进行延胡索加工炮制从操作工艺上是可以控制的,从有效成份含量的测定来看是可行的,从药理实验结果来看是有效的,从而为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.参考文献[1]沙世炎,徐礼桑,严敏如,等.中草药有效成份分析法(上册).北京:人民卫生出版社,1985:53.[2]窦志英,孙巍.不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响.天津中医药大学,2006,25(3):186-187. [3]张化,张学兰.延胡索炮制现代研究.山东中医药大学,2001,25(2):l43一l44.[4]龚千峰.中药炮制学[M】.北京:中国中医药出版社,2003:201. [5]杨中林.中药炮制学实验与指导【M】.北京:中国中医药出版社, 20o3:84.[6]苗明三.实验动物和动物实验技术【M】.北京:中国中医药出版社.1997:130-145,187—190.[7]马民.元胡炮制的现代研究.时珍国医国药,2005,16(5):709. (收稿日期:2006-11-28)。
延胡索小鼠实验报告
一、实验背景延胡索（Corydalis yanhusuo），又称元胡、延胡等，是一种传统的中药材，主要分布在我国华北、东北、华东等地。
延胡索具有活血化瘀、行气止痛的功效，广泛应用于临床治疗各种疼痛症状。
近年来，随着现代药理学研究的深入，延胡索的活性成分及其药理作用逐渐被揭示。
本实验旨在探讨延胡索的镇痛作用，并对其作用机制进行初步研究。
二、实验目的1. 观察延胡索对小鼠的镇痛作用。
2. 探讨延胡索镇痛作用的可能作用机制。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康昆明种小鼠40只，体重18-22g，雌雄各半。
2. 药物：延胡索提取物，由我院中药研究所提供。
3. 仪器：电子秤、鼠笼、鼠夹、酒精棉球、灌胃器、注射器、试管、移液器、显微镜等。
四、实验方法1. 实验分组：将40只小鼠随机分为5组，每组8只，分别为正常对照组、模型组、延胡索低剂量组、延胡索中剂量组、延胡索高剂量组。
2. 模型制备：除正常对照组外，其余各组小鼠采用化学刺激法建立急性疼痛模型。
具体操作如下：将小鼠置于鼠笼中，用酒精棉球消毒小鼠尾部皮肤，然后用注射器吸取0.1ml 1%醋酸溶液，注入小鼠尾部皮肤下。
3. 给药：正常对照组和模型组给予生理盐水，延胡索低、中、高剂量组分别给予相当于人体临床用量的0.5倍、1倍、2倍剂量的延胡索提取物。
4. 观察指标：观察各组小鼠在给药后30分钟、1小时、2小时、4小时的疼痛反应，包括舔舐、翻滚、跳跃等行为。
5. 数据处理：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较各组小鼠疼痛反应的差异。
五、实验结果1. 与模型组相比，延胡索低、中、高剂量组小鼠在给药后30分钟、1小时、2小时、4小时的疼痛反应均明显减轻，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 光镜观察：延胡索低、中、高剂量组小鼠的神经纤维和神经元结构正常，细胞核无明显肿胀和固缩，细胞质无明显空泡化。
六、讨论1. 本实验结果表明，延胡索具有显著的镇痛作用，且作用强度与剂量呈正相关。
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痛阈提高百分率
用药后 平均痛阈值— 用药前平均痛阈值 — 用药前平均痛阈值
×100%
注意事项
1.室温以15～20℃为宜，过低则小鼠反应迟钝，过高则过于敏感，而引起跳跃，影响实验的准 确性。
2.正常小鼠一般放入烧杯后10～15s内出现不安，举前肢，舔后足，踢后肢，跳跃等现象。这 些动作均不作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛的指标。
给药前 组别 延胡索注射液 a1—a5 哌替啶注射液 b1—b5 生理盐水 c1—c5 第 1次 第 2次 平均
给药后 15 ′ 30 ′ 45 ′ 60 ′ 90 ′
结果分析
分组 盐胡索 哌替啶 生理盐水 动物数 ５ ５ ５ 给药前平 均值（ｓ） 15 给药后痛阈值（ｓ） 30 60 90 15 痛阈提高百分率% 30 60 90
试验方法
用哌替啶注射液（ lmg ／ ml ）作阳性对照，用生理盐水作阴性对照，用盐胡索水煎醇沉液 （4g／ml）作药物实验，分三组，每组5只预选合格的实验小白鼠，三组分别按0.2ml／10 g 用药量经过腹腔注射哌替啶注射液、生理盐水、盐胡索水煎醇沉液，纵向比较各组小白鼠在用 药前后痛阈值的变化，横向比较各组实验动物在应用不同药物后痛阈值的变化，分析结果。
6组
实验方法
1.热板法 2.化学刺激法
实验目的
1.掌握镇痛药的实验方法 2.观察延胡索的镇痛作用 3.掌握实验操作手法。
实验原理
延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板 刺激而产生疼痛时，就发生舔足的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为痛阈值，以 此为观测指标。比较用药组和对照组之间痛阈值的变化，来验证药物的镇痛作用。
3.一般不选用雄鼠，因雄鼠阴囊可触及烧杯底部，易呈现敏感反应，影响结果
问题讨论
试述延胡索镇痛的有效成分及机理。
实验准备
（一） 实验动物 小白鼠（雌性），每组预选合格数量为15只。 （二） 实验器材 鼠笼、水浴锅、烧杯（500ml）、天平、注射器、秒表、钳子、镊子、棉棒 等。 （三） 实验药品 哌替啶注射液lmg／ml；延胡索水煎醇沉液4g／ml；生理盐水；苦味酸（标 记用）。
方法步骤
（一） 预选实验动物（结合给药前第一次痛阈值测定）：调节水浴锅，使温度恒定在 55 ± 0.5℃，每次取小鼠1只，放入烧杯内。记录自放入烧杯至出现舔后足所需时间(s)， 作为该鼠 的痛阈值。凡30s内不出现舔后足者，弃之不用。依次测量各小鼠的痛阈值。取预选合格的小 鼠15只作为实验动物。 （二） 实验动物的分组：随机分为3组，每组5只，用苦味酸标记并编 号。 （三） 用药前第二次测定痛阈值：再重测痛阈1次，将两次痛阈的平均值作为该鼠给药 前的痛阈值。 （四） 用药：然后，第一组腹腔注射延胡索液0.2ml／10 g，第二组腹腔注射 哌替啶注射液0.2ml／10g，第三组腹腔注射等容量的生理盐水作对照。 （五） 测定给药后 的痛阈值：给药后的15、30、60、90min测定各鼠痛阈值。若小鼠在热 板上60s仍无痛觉反 应，应取出，按60s计。将结果记入表内，按不同时间测定的 各鼠