孤雌激活
5.卵母细胞的孤雌激活
孤雌激活(parthenogenetic activation)是指处于第二次减数分裂中期的成熟卵母细胞不经过精子受精作用，而在某些理化因素的刺激下继续生长发育的过程，包括恢复并完成第二次减数分裂，发生卵裂形成早期胚胎。
由雌性配子经孤雌激活产生后代的生殖过程称为孤雌生殖形成的胚胎称为孤雌胚胎。
5.1.卵母细胞激活机制
在受精时，一系列的细胞内Ca2+ 多次持续波动引起MPF的失活和卵母细胞的激活(Cuthbertson and Cobbold 1995; Collas et al. 1993; Swann and Ozil 1994)。
在小鼠(Miyazaki et al. 1986, 1993; Whitaker and Swann 1993; Kline 1994; Igarashi er al. 1997) 、仓鼠(Igusa and Miyazaki 1983; Miyazaki et al. 1986, 1991)和兔(Collas et al. 1995)上都证实了卵母细胞在受精时伴随有Ca2+的波动，说明Ca2+波动是启动卵母细胞周期和继续发育的前提。
卵母细胞激活是以Ca2＋为第二信使，成熟促进因子(MPF)、细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)、细胞静止因子(CSF)等细胞因子综合作用的结果。
进行孤雌激活的卵母细胞是处于MII期的卵母细胞，其含有高活性的CSF，能维持MPF处于高活性状态，使卵母细胞处于减数分裂的中期(Rall J M 1992)。
孤雌激活是通过各种物理、化学方法刺激MII期卵母细胞完成第二次减数分裂，阻止第二极体排出，形成常染色体二倍体胚胎(李裕强2001)。
卵母细胞内Ca2+节律性脉冲的升高是卵母细胞完成孤雌发育不可缺少的过程(Hochi S 2000)。
MII期的卵母细胞受精或人工激活后卵母细胞胞质Ca2+升高可使MPF和CSF失活或消失，从而启动成熟分裂器，促使M期卵母细胞继续第二次成熟分裂(Kline D 1988)，并形成孤雌胚胎(Swann M 1999)。
MPF是一种蛋白激酶，在卵母细胞的减数分裂过程中起关键的调控作用，可促进细胞进入M期，并在M期维持高活性状态，在M期的中后期活性迅速下降直到消失，使卵母细胞活化，完成第二次成熟分裂(李裕强等1999)。
不同物理或化学方法对卵母细胞激活效果不同，但其激活机理基本是一致的，同激活方法的最终目的均是要将静止在MII期的卵母细胞恢复减数分裂周期，这就要求卵母细胞内MPF和CSF的活性降低或消失。
而MPF的活性是由对Ca2+非常敏感的CSF来维持，CSF的作用是抑制停滞于MII期卵母细胞内的cyclinB的降解。
卵母细胞受精或人工激活后，细胞内Ca2+浓度迅速升高，使CSF的活性消失，cyclinB被降解，从而引起MPF的活性降低或消失，卵母细胞离开MII期，完成减数分裂并进行卵裂。
有研究表明，抑制卵母细胞内游离Ca2+浓度的升高就会抑制卵母细胞激活的一系列反应，Ca2+浓度的升高是卵母细胞激活的重要诱导信号，但并不是诱导卵母细胞激活一定需要Ca2+浓度的脉冲升高(邓满齐等1994)。
放线菌酮(CHX)是一种蛋白质合成抑制剂，通过作用于80S的核糖体来抑制肽链的转移，从而抑制蛋白质合成，己经有实验证实，CHX可使小鼠和牛的卵母细胞发生孤雌激活(Presicce G A 1994a; Bos Mikich A et al. 1995; Sun Q Y et al. 1999a; Sun Q Y et al. 1999b) 。
而不能使猪(Nussbaujm DJ 1995)和中国仓鼠(Tateno H 1997)卵母细胞激活。
一般认为，乙醇、电脉冲和氯化锶的刺激可以导致卵母细胞的活化，而随后CHX协同作用进一步抑制卵内新的相关蛋白质，如cyclinB、CSF的合成，使其不能产生新CSF和MPF，使MPF一直处于较低水平，进一步促进卵母细胞的活化。
单独的CHX作用不能使猪IVM卵母细胞活化，说明猪卵母细胞对CHX不敏感，只有与其他刺激因素联合使用时，才能起到协同促进的作用。
这也说明，CHX不是通过Ca2+波引起的卵母细胞活化，而是通过抑制有关蛋白质合成起作用。
此外，6-DMAP是一种蛋白质磷酸化抑制剂。
卵母细胞成熟和受精均涉及到多种蛋白质磷酸化状态的改变。
6-DMAP对卵母细胞的激活作用主要是维持P34cdc2的磷酸化和抑制cyclinB的磷酸化使MPF活性下降。
同时还可以抑制纺锤体形成时微管蛋白的磷酸化抑制极体的排出。
但6-DMAP单独使用对卵母细胞的激活作用较弱，一般要与适度的能引起Ca2+波动的其他激活因子协同作用方可使卵母细胞充分激活(刘贞伟2004)。
近年来多用Ionomycin联合6-DMAP进行卵母细胞的孤雌激活，Ionomycin是一种高效Ca2+载体，它不能直接加速Ca2+的跨膜转运，而是动员细胞Ca2+释放，依次触发后期Ca2+内流(Morgan and Jacob 1994)，引起细胞内Ca2+浓度升高和卵母细胞激活(Jones et al. 1995)。
5.2卵母细胞孤雌激活方法
卵母细胞的孤雌激活方法分为三类：物理激活法，化学激活法和物理与化学联合激活。
物理激活法又包括温度刺激、机械刺激、电刺激等。
化学激活法有钙离子载体(A23187, lonomycin)、二价阳离子(SrCl2、CaCl2等)、乙醇、酶类(链酶蛋白酶、透明质酸酶等)，蛋白质合成抑制剂、蛋白质磷酸化抑制剂和麻醉剂等。
物理与化学联合激活法有电脉冲、温度与乙醇、蛋白质合成抑制剂、蛋白质磷酸化抑制剂等结合使用(Jiang et al. 2002; Otoi et al. 2002; 陈呢喃等2010) 。
在用乙醇、A23187、lonomycin、IP3激活卵母细胞以及核移植胚时，配合6-DMAP可以得到较高的激活率(Presicce et al. 1994)。
6-DMAP对DNA的合成没有抑制作用(Ledda et al. 1996; Loi et al. 1996)，其单独使用对卵母细胞的激活作用较弱，一般要与可以引起Ca2+波动的其他激活因子协同作用才能使卵母细胞达到充分激活(Presicce et al. 1994; Booth et al. 1999)。
目前，多种激活方法联合使用取得了较好的激活效果。
Tateno和Kamiguchi利用5种化学介质如乙醇、氯化锶、CHX、PMA(PKC激活剂)和钙离了载体A23187分别对中国仓鼠卵母细胞进行激活研究发现，用A23187和CHX联合使用刺激激活最有效，而单独机械刺激和酶刺激不能使其活化，在小鼠(Hagemann et al. 1995)和牛(Miyazaki et al. 1995)的卵母细胞激活中也证实了这一结果。
5.3 孤雌胚胎的体外发育
卵母细胞被激活后，如果培养条件适宜，孤雌活化卵将同受精卵一样开始卵裂和发育。
小鼠、兔、牛、猪等的激活卵在体外培养条件下均可发育到囊胚(陈大元2000)。
将孤雌胚与正常胚构成嵌合体后，孤雌胚可以参与机体的全程发育，可使动物发育到期(Fundele at al. 1989)。
Konoetal (2004)得到了孤雌小鼠性成熟后与雄性小鼠交配的后代。
早期胚胎的体外培养比较复杂，培养液成分、培养温度、气相、湿度、pH、渗透压、离子浓度、能量来源、血清成分、光、水质和培养皿等都会对其有一定影响。
不同种动物的早期胚胎代谢具有一定的差异性，而培养液的成分又极为复杂，这可能是造成各种胚胎培养基差异的原因。
在培养液中添加尿嘧啶和三价因子能够促进颗粒细胞的增殖，提高牛卵母细胞的成熟率、卵裂率及8～16细胞率；ATP对牛卵母细胞成熟率影响不大，但能提高孤雌激活胚胎发育能力(王洪峰2006)。
在培养液中添加血清及细胞因子可以提高体外孤雌胚的发育能力(田长永等2010; 许丹宁等2010)，体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞的孤雌激活及发育具有显著的影响(张果平等2009)。
有研究表明CNP同时与许多种生殖过程有关，包括胚胎和胎儿的发育。
在啮齿动物发情周期中，CNP和它的受体在子宫和卵巢有很高的表达量。
在妊娠期，CNP mRNA在小鼠胚胎中可以检测到，并且表现出器官特异性表达，在雌性生殖组织胎盘中有高浓度的表达(T Waltherand H Stepan 2004)。
CNP在生殖和胎儿发育过程中的生物作用有大量提示：(1)在成年鼠，子宫与卵巢中CNP基因的表达量最高(Stepan et al. 2000a)；(2) 至少在小鼠子宫内，雌二醇能够诱导CNP的表达(Acuff et al. 1997)；(3) CNP与它的受体在大鼠胎盘表达(Cameron et al. 1996)并且在卵巢和子宫中受发情周期的调控，且在发情期前期表达量最高(Dos Reis et al. 1995; Huang et al. 1996) ；(4)在人类生殖组织，病理性的怀孕像宫内胎儿生长迟缓会改变CNP的表达(Stepan et al. 2002a)。
但是，在体外用添加了CNP的培养液培养卵母细胞后，对其胚胎发育有无影响尚不清楚。
牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究
是 离子 霉 素 激 活 胚 胎 的 囊胚 发 育 率 显 著 高 于 电激 活 方 法 （ ． ７ ｖ ０ ４ ， ０ ０ ） 本 试 验 还 采 用 两种 方 法 来培 养 牛 ３ ６ ｓ ． Ｐ（ ． ５ 。 １ 化 学 激 活孤 雌 胚 。方 法一 是 把 化 学 激 活 牛 体 外成 熟 卵 母 细 胞 放 于 ｓ ａ Ｓ ｎｈ ｔ ｉｕ ｔ ｌｉ ａ ） 养 基 中连 续 培 养 ７ ＯＦ ａ（ ｙ ｔｅｉ Ｏｖ ｃ Ｆｕｄ ａ 培 ｃ ｄ ｄ ； 法二 是 把 化 学 激 活 牛 体 外成 熟 卵 母 细 胞 放 于 ｓ Ｆ ａ 养基 中 ４ｄ后 ， 转 移 进 入 含 有 ｌ Ｆ Ｓ Ｆ ｔｌ ｏ ｉｅ ｅｕ 方 ０ ａ培 再 Ｏ Ｂ （ ｅ ｖｎ ｒｍ） ａＢ Ｓ 的 Ｓ ａ 培 养基 中 继 续 培 养 ３ｄ。试 验 结 果 表 明 ： 法 一 中的 囊胚 发 育 率 显 著 高 于方 法 二 （ １６ ｖ ． ９ ， ０ ０ ） ＯＦ ａ 方 １． ４ ｓ ４ Ｐ（ ． １ 。 ３
ｖｓ７７ ， ．４ Ｐ＞ ０． ０５），ｂｕｔｔ ｌ ｓ ｏ ｙｓ ａ ｅ ｉ ｏｎ ｈｅ ｂ ａ ｔ ｃ ｔｒ ｔ ｎ ｉ ｏｍ ｙ ｉ ｃ ｉａ ｉｎ ｇｒ ｕｐ ｃｎ ａ ｔｖ ｔｏ ｏ ｖ ０． ， （ ０． ５） Ｔ ｗｏ ｍ ｅ ｈｏ ｒ ｅ ｏ ｏ— ｓ１ ４ Ｐ ０ ． ｔ ｄｓ ｗｅ ｅ ｕｓ ｄ ｆ ｒ ｂ
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第２ ８卷 第 牛 、 卵母 细 胞 孤雌 激 活 的 研 究 羊
彭礼 繁 ， 光 彬 罗
（ 阳农业 大 学动 物胚 胎 工程 实验 室 ， 宁 沈 辽 １０ ６ ） １ １ １
摘要 ： 主要比较了离子霉素、 电脉冲及培养基更换对牛羊体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响。两种方法对牛胚胎的研究
水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较
可 以指导移人 的核发生 发育 程序 重编 。人工 激活方 式很 多 ， 除
传 统 的 电刺 激 （ ｏ ａ ｉ ｌ ｌ １ ９ ） 乙 醇 （ ｇｉ １８ ） Ａ ｙｇ Ｙ ｅａ ，９ ２ 和 Ｎａａ Ｔ，９ ７ 之 外 ， 子 霉 素 ＿ 、 离 子 载 体 Ａ ３ ８ 等 都 被 证 明 可 以 激 活 卵 离 】钙 ］ ２ １７ 母 细 胞 ，但 是 激 活 效 率 因激 活 方 法 以及 卵龄 ［’ 多种 因 素 影 响 。等
１ 材料 与方 法
１ １ 试 剂 及 培 养 液 的 配 制 本 试 验 研 究 主 要 试 剂 均 为 Ｓｇ ． ｉｍａ 产 品 ；Ｂ Ｆ Ｓ购 自杭 州 四季 清 生 物 制 品 厂 ； Ｓ Ｉ 购 自宁 波 激 Ｆ Ｈ、 Ｈ
素 制 品 厂 。 洗 卵 液 ： ＣＭ１９ ＋ ５ Ｂ Ｓ ＋ １ Ｔ ９ Ｆ Ａ ０ ０ｍＭ ｐ ｓ ５ Ｈｅ ｅ ＋
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中 国草食 动 物
２Ｏ Ｏ ６焦
水 牛 卵母 细胞 孤 雌 激 活及 孤 雌 胚 与体 外 受精 胚 发 育 比较
郭海 英 ， 高峰 ， 建 中 ， 业 刚 ， 季 武 唐 李跃 民 （ 南 大学重 庆 市牧草 与 草食 家畜 重点 实验 室 ， 西 重庆 北 碚 ４０ １ ） ０ ７６
关 键词 ： 水牛卵母细胞 ； 孤雌激活 ； 体外受精
孤 雌 激 活 是 指 通 过 不 同 方 法 刺 激 ＭＩ期 卵 母 细 胞 。 其 完 Ｉ 使
而有所差异 。
成第二 次减数分裂 ， 并抑制第二极体排 出。 从而产生染色体 为正
常二 倍 体 的胚 胎 。卵 母 细胞 的充 分 激 活 是 提 高 核 移 植 效 率 的 关 键 因素 之 一 。 有 在 去 核 卵 母 细 胞 充 分 激 活 的情 况 下 ， 核 卵 才 只 去
水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较
１ ． 体 外 成 熟 时 间 对 水 牛 卵 母 细 胞 孤 雌 激 活 与 胚 胎 发 育 ．１ ３ 的 影 响 将 体 外 成 熟 ２ ｈ ２ ｈ ２ｈ、０ １ 、４ 、７ ３ ｈ的 卵母 细 胞 置 于 含 Ｏ１ ．％透 明质 酸 酶 的 Ｐ Ｓ 无 ｃ Ｍ ） 中反 复 Ｂ （ ａ 、 液 吹 打 。去 除 卵 丘 细 胞 。在 含 ５ ｍ ｌ １ ｏ／ 子 霉 紊 ￣ Ｌ离 （ ｎ ｍ ｃｎ Ｉｎ ｉ ｏ ｙｉ 。 ）的 胚胎 培 养 液 中 处 理 ５ ｎ 用 ｏ ｏ ｍｉ。
水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较
郭 海 英 ， 高 峰 ， 建 中 。 业 剐 ， 跃 民 季 武 唐 李 （ 南 大 学 重 庆 市 牧 草 与 草 食 家 畜 重 点 实 验 室 ， 庆 北碚 西 重 ４０ １） ０ ７６
摘 要 ： Ｍ Ⅱ期 水牛 卵 母 细 胞 进 行 人 工 诱 导 激 活 可 以帮 助 人 们 间 接 判 断 体 外 成 熟 卵 母 细 胞 质 量 的优 劣 。 且 ， 对 并 卵 母 细胞 的充 分 激 活 也 是提 高核 移植 效 率 的 关键 因 素之 一 。 验 比较 了 水 牛 卵母 细 胞 体 外成 熟 时 间对 孤 雌 激 活胚 发 育 试
鲜的 Ｃ Ｍ液 中培养 。４ ｈ后 统计卵裂 率 。～ １ ８ ６ １ｄ 统 计囊胚 率 。
１ ． 几 种 不 同化 学 激 活 方 法 对水 牛 卵母 细 胞 ．２ ３
孤雌激 活效果 的比较
将体外成 熟 ２ ～ ８ ７ ２ ｈ的卵母细胞 随机
１ 试 荆及 培 养 液 的 配 制 ． １
的 囊胚 发 育 率 显 著 高 于 体 外 受精 胚 （ ３ ％ ｖ．２ ．％） １． Ｏ ｓ １ ７ 。 关键词 ： 水牛 卵母 细 胞 ； 雌 激 活 ： 外 受 精 孤 体 中 图 分 类 号 ：８ ３８３ Ｓ １． ￥ ２ ． ：８ ４８ ＋ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７ ２ ３ ２ ｏ ）３ ０ Ｏ 一 ３ １０ — ７ Ｘ（０ ６ Ｏ — ｏ ６ Ｏ
细胞骨架抑制剂_电激活液对兔卵孤雌激活和发育的影响
畜牧兽医学报 2009,40(1):26231A ct a V eteri nari a et Zootechnica S i nica细胞骨架抑制剂、电激活液对兔卵孤雌激活和发育的影响徐 营1,2,雷 蕾1,杨利国3,陈大元13(1.中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,北京100101;2.嘉兴学院医学院,嘉兴314001;3.华中农业大学,武汉430071)摘 要:应用细胞骨架抑制剂细胞松弛素B和秋水仙素处理兔成熟卵母细胞,然后采用电激活的方法激活兔卵母细胞,观察细胞骨架抑制剂对兔卵母细胞孤雌激活和孤雌发育的影响,结果表明:应用不同的电激活液,即甘露醇、Zimmerman氏和山梨醇对兔卵母细胞的孤雌激活效果无显著性差异(P>0105);用715μg・mL-1细胞松弛素B 处理卵母细胞后孤雌激活,其22细胞胚率(8212%)和囊胚发育率(4314%)与对照组(7614%和5115%)相比无显著性差异(P>0105);用1μg・mL-1秋水仙素处理兔卵母细胞,兔卵母细胞孤雌激活后的22细胞胚率(6419%)和囊胚发育率(2318%)明显下降,与对照组相比存在显著性差异(P<0105);用细胞松弛素B和秋水仙素共同处理的22细胞胚率(6215%)和囊胚发育率(3019%)与秋水仙素单独处理的结果无显著性差异(P>0105)。
因此,秋水仙素对兔卵母细胞的孤雌激活影响比CB更大。
通过免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察发现,细胞骨架抑制剂处理后,经孤雌激活获得的囊胚中,微丝和微管结构未见异常。
关键词:细胞骨架抑制剂;兔卵母细胞;电激活液;孤雌激活中图分类号:S8291112 文献标识码:A 文章编号:036626964(2009)0120026206The E of Cytoskeleton Inhibitor and Electro2activation Solution on theParthenogenetic Activation and Preimplantation Development in R abbit OocytesXU Y ing1,2L EI Lei1,YAN G Li2guo3C H EN Da2yuan13(1.S t ate Key L aboratory of Rep rod ucti ve B iolog y(S KL RB),I nstit ute ofZoolog y(IO Z),Chi nese A cadem y of S ciences(CA S),B ei j i n g100101,Chi na;2.College of Medici ne,J i ax i n g U ni versit y,J i ax i ng314001,Chi na;3.H uaz hong A g ricult ural Uni versit y,W uhan430071,Chi na)Abstract:The present st udy aimed to investigate effect s of cyto skeleton inhibitors and elect ro2ac2 tivation solutions on t he part henogenetic activation and preimplantation develop ment in rabbit.M II oocytes were t reated wit h cytochalasin B or cochicines before elect ro2activation.The result s showed t hat t here was no significant different among elect ro2activation solutions considering oo2 cytes part henogenetic activation(P>0105).Furt hermore t here was no significant difference of22 cell or blastocyst develop ment when rabbit oocytes were t reated wit h or wit hout cytochalasin B (715μg・mL-1)before elect ro2activation(8212%vs7614%,and4314%vs5115%,respective2 ly).(P>0105).The develop mental rate of22cell and blastocyst were significantly decreased (6419%and2318%respectively)when oocytes were treated wit h colchicines(110μg・mL-1)be2收稿日期:2007212207基金项目:中国科学院知识创新重大项目(KSCX1205201);科技部攀登项目(952专208);嘉兴市科技局科研重点项目(2007AZ2013);浙江省实验动物公共服务平台科研计划项目(2008F80025)资助作者简介:徐 营(19702),男,蒙古族,山东人,博士,副教授,主要从事胚胎学和发育生物学的教学和科研工作,Tel:0573283643850,E2mail:xuyongmrd@yahoo1com3通讯作者:陈大元,E2mail:mrdgene@ 1期徐 营等:细胞骨架抑制剂、电激活液对兔卵孤雌激活和发育的影响fore elect ro2activation co mparing wit h t hat of no t reat ment(P<0105).The result s f rom cytocha2 lasin B plus cochicine t reat ment were similar to t hat of cochicines t reated alone(6215%22cell rate and3019%blastocyst rate).Immunofluorescent staining and laser scanning confocal microscopy result s indicated t hat t here was no abnormality of microt ubule or microfilament in blastocyst s which derived f rom cyto skeleton inhibitor treated and following elect ronic activated oocytes.K ey w ords:cyto skeleton inhibitor;rabbit oocytes;electro2activation solution;part henogenetic activation 哺乳动物卵母细胞显微操作过程中,经常使用细胞骨架抑制剂—细胞松弛素B(Cytochalasin B, CB)和秋水仙素(Colcemid)或秋水仙素类似物,细胞骨架抑制剂可以减少核移植操作对卵子的损伤,并使移核易于操作[122]。
猪孤雌激活胚胎体外培养影响因素的研究的开题报告
猪孤雌激活胚胎体外培养影响因素的研究的开题报告猪孤雌激活胚胎体外培养是一种重要的生殖技术，其可以增加猪的繁殖效率，提高生产力和经济效益。
然而，该技术的应用仍受到许多因素的限制，包括孤雌激活剂的选择、培养条件的优化和体外培养过程中对胚胎的影响等。
因此，本文旨在探究猪孤雌激活胚胎体外培养的影响因素。
首先，孤雌激活剂的选择是影响猪孤雌激活胚胎体外培养的重要因素之一。
研究发现，不同的孤雌激活剂对猪胚胎的激活效果和发育能力有明显差异。
目前，常用的孤雌激活剂包括钙离子离子载体（Ca2+ ionophore）、孤体活化因子（iA）和电脉冲（EP）等。
因此，本文将探究不同孤雌激活剂对猪胚胎体外培养的影响，并寻找最适合的孤雌激活剂。
其次，培养条件也是影响猪孤雌激活胚胎体外培养的重要因素之一。
研究显示，温度、pH值、氧气浓度、培养基成分和培养时间等因素都对猪胚胎的发育能力和生存率产生影响。
因此，本文将探究最适宜的温度、pH值、氧气浓度、培养时间和培养基成分，以提高猪孤雌激活胚胎体外培养的成功率和胚胎品质。
最后，猪孤雌激活胚胎体外培养过程中对胚胎的影响也是本文的研究重点。
研究发现，体外培养会对胚胎的发育产生负面影响，如自发性发育中止、过早细胞分化和细胞凋亡等。
因此，本文将探究如何减少体外培养对胚胎的负面影响，并寻找最佳的体外培养条件，以提高猪胚胎的发育能力和生存率。
综上所述，本文将以猪为研究对象，从孤雌激活剂的选择、培养条件的优化和体外培养过程中对胚胎的影响等方面探究猪孤雌激活胚胎体外培养的影响因素，旨在提高猪的生殖效率和经济效益。
关于猪卵母细胞孤雌激活技术概述
关于猪卵母细胞孤雌激活技术概述摘要：孤雌激活随着近年来体细胞克隆技术的兴起而成为了又一研究热点，而猪由于其生理结构与人的相似性，所以其卵母细胞的孤雌激活更具有特别的研究价值，文章就孤雌激活的概念、机理、方法、影响因素等方面全面论述了猪卵母细胞孤雌激活的研究概况。
关键词：猪；卵母细胞；孤雌激活孤雌生殖(parthenogenesis)作为一种生殖方式在无脊椎动物和低等脊椎动物中较为常见，在鱼类、两栖类、爬行类和鸟类等脊椎动物中也存在孤雌生殖的现象，但哺乳动物在自然状态下则未见有孤雌生殖现象。
孤雌生殖的关键是提高卵母细胞的激活率，通过人工模拟自然条件下卵母细胞的自然激活机理(卵母细胞的自发激活和精子穿入引起卵母细的激活)创造更多更好的激活方法，从而进一步提高卵母细胞的孤雌激活率，一直是孤雌生殖研究的重点内容，具有重要的研究价值。
一方面可把卵子活化的各个过程(如皮质反应、减数分裂的恢复和发育到第l次卵裂过程)分开来研究，对于阐明哺乳动物卵激活过程的信号偶联过程、细胞周期阻滞的恢复、受精机制和发育机理具有重要意义。
另一方面，卵母细胞激活是细胞核移植和胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)的关键环节，卵母细胞的激活率的高低直接关系到ICSl技术的效率，目前，卵母细胞激活率很低是核移植和胞质内单精子注射成功率低的重要原因之一。
同时，由于猪的生理结构与人的诸多相似，被医学界认为是人类器官移植的最佳提供者，且猪的数量充足，妊娠周期短，产仔多，容易饲养，取材容易，充分满足临床需要，未来在生物医学方面有潜在的重要应用前景，这使猪的孤雌激活技术成为近年来的研究热点，这对于畜牧业和生物医学具有重大理论和实践意义。
1. 卵母细胞孤雌激活的概念孤雌生殖是指无雄性配子的任何作用，由雌性配子产生个体的繁殖[1]。
孤雌生殖的关键是提高卵母细胞的激活率，而卵子在自然条件下的激活是由精子穿入刺激引起的，即由于精子的进入启动M Ⅱ期卵母细胞继续发育，这一过程称为卵母细胞的激活。
不同卵龄对小鼠卵母细胞孤雌激活的影响
，其激活率和囊胚形成率远远高于单一
参考文献
Cibelli JB，Grant KA，Chapman KB et al. Parthenogenetic stem cells in nonhuman primates 〔J〕 . Science，2002 ，295 （ 5556 ） ： 819
2+ 〔19 ， 20 〕
， Sr
2+
作为
2+ 同族的二价阳离子，有可能取代 Ca 而通过细胞膜上
的钙离子通道进入细胞内 ， 并进入内质网和线粒体 ， 置换出
2+ 2+ 内源 Ca 释放到胞质中，使胞质内游离的 Ca 增加， 进而介
导了依赖 Ca 3. 3 高
〔10 〕
2+
的皮质反应，导致卵母细胞的激活
熟度及卵龄是影响卵母细胞激活的重要因素
〔3 ， 25 〕
导致的卵母细胞的激活率和激活后的发育机制问题目前研究 报道还不多， 其合适的激活卵龄尚有争议 。 Web 等 认为， 随着卵龄的延长和卵母细胞质的老化 ， 维持减数分裂阻断的 物质的降解其越易被激活 ， 也有学者认为是由于老化的卵母 细胞对 Ca
〔11 〕
， 可用于基因治疗、 器官移植、 组织修复、
疾病治疗等医学领域。 3 孤雌激活条件的研究 多年来，学者们一直在探索激活最佳方法和激活时最佳 卵母细胞的卵龄， 以使卵母细胞达到最大比例激活 ， 并且激 活后的细胞最大限度发育到胚胎直至继续成熟
〔10 ， 17 〕
。 激活方
法和卵龄常会影响和改变胚胎进一步发育能力 ，好的激活方法 是简单而有效，激活后发育成胚泡比例高 ，且胚泡形态和质量 好
2+
物身上均有体现： 如昆虫类的蟑螂、 苍蝇、 蚂 蚁 及 蜜 蜂 等，
牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活及其胚胎体外培养方法的研究
操作 烦琐 ， 一般 采用 简 单 培养 液 ［Ｒ （ｏ ｅｋ ａｓ Ｃ １Ｒ ｓ ｎｒ ｎ
等 ，９ ３ 或 Ｓ Ｆ液 （ａ ｄ ｅ １９ ） Ｏ Ｇ ｒ ｎ ｒ等 ， ９ ４ ］ 加 血清 、 １９）添
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广 东畜牧兽 医科 技 ２０ 年 （ ３ 鲞 塑 ０７ 第 ２ 第
试验研 究 ・２ ９・
牛 体 外 成 熟 卵 母 细 胞 的 孤雌 激 活 及 其 胚 胎 体 外培 养方法 的研 究
彭礼 繁 ，姜 午旗 ，罗光彬 （ 阳农业 大 学动物 胚 胎工 程 实验 室 ，辽 宁 沈 沈 阳 １ ０ ６ ） １ １ １
运 回实验 室 。卵巢 用 ３ ． ℃灭菌 生 理盐 水 冲洗 ３ ８５
ｃ 内流 ； ａ 乙醇 ， 致 胞 内外 ｃｚ都 增 加 ； 子 霉 导 ａ 离 素， 只从胞 内转 移 ｃ ａ 。牛 卵母细 胞孤 雌激 活 多用 乙醇 和离 子霉 素 ，电激 活 多用于 体细胞 核移 植 中。 牛胚胎早 期发育 体系主要 分为 ２种 ： 体细胞 共培 养体 系和 成分 明确 的培养 液 。 体细胞 共培养 体系 的 饲养层细 胞主要 是输卵 管 、 子宫上皮 细胞 或 Ｂ Ｌ细 Ｒ
（、 ９ ｖ １ ６ ％ Ｐ ０ ０ ） ３６％ ｓ１ ． ４ ， ＜ ． １。
关键词：牛；卵母细胞；孤雌激活；体外培 养
中 圈分 类号 ：￥ １． ８４８ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ５ ７ ２ ０ ） ６ ０ ２ — ３ ０ ５ ８ ６ （０ ７ ０ — ０ ９ ０
立 牛胚 胎体 外 生产 体 系提 供实 验基 础 。
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究引言：随着现代生物科技的不断发展，人们对于动物胚胎发育过程的探索也愈发深入。
猪作为一种重要的农业畜牧业动物，其生殖发育研究对于提高繁殖效率和品种改良具有重要意义。
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究被认为是改善猪生殖效率的关键技术之一，本文将就该研究进行探讨。
一、猪卵母细胞体外成熟的研究进展1.1 体外培养条件的优化猪卵母细胞的体外成熟需要适宜的培养基和环境条件的支持。
过去的研究中发现，添加荷尔蒙和营养因子可以促进卵母细胞的发育，但也有一些不良因素对其生成产生负面影响。
如今，研究人员通过改良培养基成分和添加植物激素等手段，成功地提高了卵母细胞的发育率和质量。
1.2 卵母细胞成熟标志物的鉴定卵母细胞的成熟状态可以通过某些标志物的表达情况进行鉴定。
近年来，研究人员发现，猪卵母细胞的成熟可以通过检测卵母细胞表面的特定蛋白、细胞器的形态及功能等进行判定。
这些标志物的鉴定为猪卵母细胞体外成熟的监测提供了依据。
1.3 卵母细胞体外成熟能力的提高提高猪卵母细胞的体外成熟能力对于提高繁殖效率具有重要意义。
研究人员通过调整培养条件、添加辅助因子等手段已取得了一定的突破。
例如，改善培养基中气相和营养物质的供应，可以促进细胞发育和成熟率的提高。
此外，添加某些荷尔蒙如促黄体生成素、卵泡刺激素等也能够提高卵母细胞的体外成熟能力。
二、孤雌激活的研究现状2.1 孤雌激活的意义孤雌激活是指在缺乏精子参与的情况下，卵母细胞可以自主地发育和分裂，从而获得新生命。
这种现象在动物界被广泛研究并被认为是生殖发展领域的一个热点。
对孤雌激活机制的深入研究不仅可以理解胚胎发育的基本过程，还有助于解决某些生殖障碍的问题。
2.2 孤雌激活的机制目前，孤雌激活的机制尚不完全清楚，但有一些重要的研究和理论已经提出。
研究发现，内质网钙离子释放和细胞质内信号通路的活化是孤雌激活的重要因素。
山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚的体外培养
本试验比较 了几种不同的化学激活方法对 山羊
卵母 细 胞 激 活 的 影 响 ， 要 是 想 比 较 Ａ ３８ 主 ２ １７和
Ｉ ｏ ｙｉ 两种激 活剂 ， ｏ ｍｃ ｎ ｎ 那一种激 活剂激活 山羊卵 母细胞更有效 ｝ 并用 Ｃ ｌａ Ｒ ａ 液与颗粒细胞共培养法
发 育 能力 更佳 。
１ １ 试 剂 与 用 品 ． 所用化学试剂 除特别指明外 ， 均为 Ｓ ｍａ ｉ 公司 ｇ 生产｝ 培养 用 Ｍ１９由 Ｏ ｂｏ公 司生产 ｝ ９ ｉ ｃ 胎牛血清
Байду номын сангаас
关键词 ： 山羊 ； 卵母 细胞 ； 孤雌 激活 ； 囊胚率
一
在哺乳动物核移植研究 中， 卵母 细胞是 目前惟 （Ｂ ） Ｈ ｃ ｎ 公 司生产 ｝ Ｆ Ｓ 由 ｙｌ ｅ ｏ ＨＭＧ由丽珠公 司生 利用的受核体。去核卵母细胞 的充分激活是核移 产 （ Ｆ Ｈ 和 Ｌ ． ７ ｍＬ 。 含 Ｓ Ｈ００ ５Ｕ／ ） 植技术程序中的必要环节。去核卵母 细胞只有被充 分激活后 ， 能指导 移人 的核发 生发育 程序 重编 才
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动物 医学进展 ，０ ６ ２ （ ） ７ －０ ２ ０ ，７ ５ ： ７８
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｉ ｔｒｎ ｒ ｅ ｉｉ ｅ ｏ ｒｓ ｎ Ｖｅ ｅｉ ａｙ Ｍ ｄｃｎ
山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚 的体外 培养
赵 晓娥 ， 王 妍， 张 涌
卵裂率和 囊胚 率（ ５ ２ 和 ４ ８ ） ３ ． ． 显著 低 于
Ａ２ １ ７ ６ＤＭＡＰ 组 （ ８ ９ 和 ２ ． ） ３８ ＋ － ６ ． ４ １ 和
ｃｎＢ和 Ｃ Ｆ的合成 。 ｌ ｉ Ｓ 也可使卵母细胞内的 ＭＰ Ｆ活 性下降（ ｔｋａ ｄＫ ｂｌａ １ ９） 达成类似精子 Ｍｏｌ ｎ ｕ ｅ ，９ ０ ， ｉ ｋ 受精激活的效果 ， 并使卵母细胞在激活处理后 ３ｈ ～