血清丙氨酸氨基转移酶测定(精)
血清丙氨酸实验报告
一、实验目的1. 了解血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）在肝脏代谢过程中的作用。
2. 掌握血清ALT活性测定的原理和方法。
3. 学会运用分光光度法测定血清ALT活性。
4. 分析血清ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
二、实验原理血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）是一种存在于肝脏细胞内的酶，主要催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
当肝脏受到损伤时，ALT会大量释放到血液中，因此，血清ALT活性的测定对肝脏疾病的诊断具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性。
在实验中，ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，该化合物在碱性条件下呈现棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 血清样本：取适量血清样本，置于冰浴中保存。
2. 试剂：丙氨酸、α-酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠等。
3. 仪器：分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：分别配制不同浓度的丙酮酸溶液，加入2，4-二硝基苯肼和氢氧化钠，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：取血清样本，加入丙氨酸、α-酮戊二酸、磷酸盐缓冲液和2，4-二硝基苯肼，混匀后置于37℃水浴中反应一段时间。
反应结束后，加入氢氧化钠终止反应，测定其在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算ALT的活性。
3. 结果记录与分析：记录实验数据，计算ALT的活性，分析ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
五、实验结果1. 标准曲线的制作：绘制标准曲线，得到线性回归方程为y=0.0058x-0.0035，R²=0.998。
2. 血清ALT活性的测定：测定血清样本的ALT活性为540 U/L。
3. 结果分析：根据文献报道，ALT活性在正常范围内为0-40 U/L。
本实验中血清样本的ALT活性为540 U/L，明显高于正常范围，提示可能存在肝脏疾病。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
丙氨酸氨基转移酶检测方法
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
方法学评价： 血清中也含有酮酸及LDH，可以消耗 NADH而使测定结果偏高。 对策：采用过量的NADH（终浓度 0.14~0.2mmol/L），将血清同不含α-酮戊二酸 的所有试剂一起预温，使其他副反应充分进行， 再加入α-酮戊二酸以启动酶反应，监测光吸收 的变化，可完全排除这种干扰。
定时比色法
国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
1.
2.3.Biblioteka 国内较多采用赖氏法，其优点为： 标准曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作 用的实际情况； 标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力 的大小； 测定结果可以直接与分光光度法相比较。
赖氏法原理： 赖氏法原理： 丙酮酸和α-酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙 酮酸和谷氨酸，在酶反应到达规定时间内，加入溶于 酸的2，4-二硝基苯肼终止酶反应，并分别与产物丙酮 酸和剩余底物α-酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙，在 碱性条件下均呈红棕色，二者吸收光谱在505nm处差 异最大，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙 的3倍，据此可算出丙酮酸的生成量，推算出ALT的酶 活力。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
转移酶（transferases）
催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物 的酶。 反应代表式为： AB+C A+BC B为被转移的基团，如氨基（—NH2）等
转氨酶（transaminase）
又称氨基转移酶。 大多数转氨酶是催化α-氨基酸的氨基转移 到α-酮酸的酮基上，产生另一种α-酮酸和α-氨基 酸。
临床意义 ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。 1、急性病毒性肝炎，可观察病情发展，作预后 判断。 2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝，正常或轻度增高。 3、肝硬化、肝癌时，ALT轻度或中度增高，提 示可能并发肝细胞坏死。 4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多 发性肌炎等亦可引起ALT增高。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。
2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。
二、实验原理ALT是一种酶，分布在人体的细胞内，主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。
正常情况下，ALT主要在肝脏中发挥作用。
当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，导致血液中ALT活力的升高。
因此，测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。
本实验使用比色法测定血清ALT活力。
利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸，和血清ALT催化产生的丙酮酸反应，生成2,4-二硝基苯胺，其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。
由此计算出血清ALT活力。
三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好，室温恢复至20-25°C。
2. 取比色管，在无菌条件下加入以下试剂：2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG，混匀。
3. 加入待测血清样品1ml，立即混匀。
4. 马上读测吸光度(Zero)。
5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。
6. 然后再读一次吸光度。
7. 加入ALT试剂，混匀，孵育60秒钟。
8. 反应结束后7分钟内，读取吸光度值，记录。
9. 将标准品同样操作，测定吸光度，计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净，确保无污染。
2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。
3. 操作过程中要注意保持常温。
4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定，避免影响结果。
5. 测定前，必须保证血清样品无血浆外渗。
6. 测定期间谨慎操作，防止试剂泼溅，注意安全。
五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。
当ALT活性超过健康人参考范围时，说明肝脏功能出现异常，可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶I（NADH）被氧化为氧化型辅酶I（NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。
根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H，侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W∕V）的氯化钠溶液稀释样本。
6 .2.单位换算：ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7. 2若试剂浑浊，或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。
8.试剂性能指标8.1 试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8. 2装量：不低于标识值。
8. 3试剂空白吸光度：在34Onnl处，光径ICnI时，空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8. 6准确度：相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度：在34Onrn处，光径ICnl时，测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度：CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。
丙氨酸氨基转移酶检测
丙氨酸氨基转移酶检测1 检验目的规范丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法酶动力学法3 检测原理在ALT的催化下，丙氨酸的氨基转移到a-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD＋。
NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与样品中ALT的活力成正比，在340nm处测定NADH 下降的速率，即可计算出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH+H+ L- L-乳酸 + NAD+4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：20～25℃稳定1天4～8℃稳定7天-20℃稳定1周5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围≤41U/L9 患者结果可报告区间4～800U/L。
10 警告/危急值未规定。
11 性能指标11.1 线形上限：△A/min为0.40，800U/L。
11.2 精密度：批内、批间CV分别为7.3%、9.2%.11.3 准确度:不准确度≤15%.11.4 总胆红素达到180umol/L时不会有明显干扰；中、重度脂血明显干扰。
12 干扰因素及变异的潜在来源12.1 血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨存在的条件下，亦消耗NADH，使结果偏高。
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【计算】
• ALT(U/L)= AU/As × 100 • 【参考范围】 • 0～50U/L（二硝基苯肼法） • 【临床意义】 • 1.血清ALT活性增高可见于下述疾病：（1）肝胆疾病 传
染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、 胆管炎和胆囊炎等；（2）心血管疾病 心肌梗死、心肌炎、 心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等；（3）骨骼肌疾病 多 发性肌炎、肌营养不良等。
• 2.一些药物和毒物可引起ALT活性升高 如氯丙嗪、异烟肼、
利福平、奎宁、地巴唑、水杨酸制剂、乙醇、铅、汞、四 氯化碳、有机磷等。停药后ALT活性就可下降。
• L-丙氨酸＋α-酮戊二酸 丙酮酸 ＋ L-谷氨酸 • 丙酮酸 ＋ 2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-2，4-二硝
基苯腙
操作方法水混合均匀，即可使用
• 2、操作方法 试剂空白管 标准管
样品管
基质液（μ L）250
250
250
标准液（μ L）-
50
-
样品（μ L） -
血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定（2、 4-二硝基苯肼法）
实验目的
• 掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定（终点法）
的原理
• 熟悉血清丙氨酸氨基转移酶测定的临床应
用
实验原理
• L-丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶
（alanine aminotransferase，ALT，EC 2.6.1.2） 催化下生成丙酮酸和L-谷氨酸，加入2，4-二硝基 苯肼终止酶反应，并与丙酮酸生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下显红棕色，在波 长510nm处读取吸光度，即可计算出丙氨酸氨基 转移酶的活性。
-
50
蒸馏水（μ L）50
-
-
混合37℃水浴30分钟，然后各管加显色剂250 μL， 37℃水浴20分钟取出，各 管加稀释氢氧化钠2.5ml,室温放置3分钟上机测定.
• 标准值:100U/L
• 波长510纳米,试剂空白调零,按公式计算结
果.
• 参考范围:0-50U/L
• 样本要求：最适样本为当日空腹采集的无