大肠杆菌的培养
大肠杆菌培养教学课件ppt
微藻培养法
微藻培养法是一种利用微藻进行培养的方法，通过将微藻接种到适宜的培养基中，并在适宜的光照、温度和pH条件下进行培养，以促进微藻的生长和繁殖。
微藻培养法的优点是能够生产出高营养价值的微藻粉，且微藻具有较高的光合作用效率，可以减少温室气体的排放。
微藻培养法适用于对营养价值要求较高的食品、饲料等领域，如小球藻、螺旋藻等。
摇瓶培养法适用于各种类型的细菌培养，包括大肠杆菌、金黄色大规模生产，且可以实现对细菌生长过程的实时监测和控制。
发酵罐培养法适用于对产量要求较高的细菌培养，如大肠杆菌、酵母菌等。
发酵罐培养法是一种大规模生产细菌的方法，通过在大型发酵罐中接种细菌，并在恒温条件下进行通气和搅拌，以促进细菌的生长和繁殖。
降解有机污染物
大肠杆菌能够转化重金属离子，例如汞、铅和镉等。通过将重金属离子摄入细胞内，大肠杆菌可以将其转化为无害的物质，从而降低其对环境和人类健康的危害。
转化重金属
在生物降解污染物中的应用
废水处理
大肠杆菌在废水处理中具有广泛的应用前景。通过生物反应器技术，将大肠杆菌与其他微生物一起培养，用于处理各种工业和生活废水。
大肠杆菌能够发酵多种糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等。
某些大肠杆菌菌株具有致病性，可引起肠道感染和腹泻。
分类
大肠杆菌属于肠杆菌科，埃希氏菌属。
命名
大肠杆菌的命名是根据其发现的地点和时间来命名的。
大肠杆菌的分类与命名
大肠杆菌在生物体内的地位与作用
大肠杆菌是肠道正常菌群之一，对维持肠道微生态平衡起到重要作用。
通过绘制细胞生长曲线，了解细菌的生长特性和规律，为后续实验提供依据。
大肠杆菌培养的实际应用
05
生产胰岛素
大肠杆菌是一种常用的生产胰岛素的微生物，通过基因工程的方法将人类胰岛素基因转移到大肠杆菌中，使大肠杆菌能够生产出胰岛素，用于治疗糖尿病。
纯化大肠杆菌的方法
纯化大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，也是许多生物学实验室中最常用的微生物之一。
在进行分子生物学和遗传学研究时，纯化大肠杆菌是必不可少的步骤之一。
纯化大肠杆菌的目的是将目标菌种从其他微生物（如其他细菌、真菌）和杂质中分离出来，以便后续的实验操作。
以下是一种常用的纯化大肠杆菌的方法：1. 培养大肠杆菌首先，需要选择一株含有目标基因的大肠杆菌株，并进行培养。
将该菌株接种到含有合适营养物质的培养基中，并在适当的温度下培养。
常用的培养基包括Luria-Bertani培养基（LB培养基）等。
2. 收获大肠杆菌在培养过程中，大肠杆菌会进入对数生长期。
当细菌数量达到一定程度时，可以收获细菌。
收获大肠杆菌的方法有两种：离心收获和滤膜收获。
离心收获适用于较大规模的细菌培养，而滤膜收获适用于小规模的细菌培养。
3. 细胞破碎将收获的大肠杆菌细胞进行破碎，以释放细胞内的目标蛋白或核酸。
细胞破碎的方法有多种，包括机械破碎、超声波破碎和化学破碎等。
机械破碎是最常用的方法之一，可以使用搅拌器或高压均质器对细胞进行破碎。
4. 离心分离通过离心将细胞的残渣和细胞碎片与溶解的目标物分离。
首先，通过低速离心将细胞碎片和细胞碎片从溶解的目标物中分离出来。
然后，通过高速离心将残留的细胞碎片和杂质从溶解的目标物中完全清除。
5. 溶解目标物将离心分离的溶解物中的目标物进行溶解，得到纯净的目标蛋白或核酸。
溶解的方法根据目标物的性质不同而不同，可以使用洗脱缓冲液、盐溶液或变性剂等。
溶解后，可以通过低速离心将溶解物中的可溶性目标物与不溶性杂质分离。
6. 纯化目标物将溶解的目标物进行纯化，以获得纯净的目标蛋白或核酸。
常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析和透析等。
选择合适的纯化方法可以根据目标物的性质和目标物与杂质之间的亲和性进行选择。
7. 鉴定目标物对纯化后的目标物进行鉴定，确保纯化的目标物具有预期的功能和性质。
大肠杆菌培养教学课件ppt
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。
《大肠杆菌的培养和分离》实验设计
《大肠杆菌的培养和分离》实验设计实验目的：1. 掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。
3. 培养和分离大肠杆菌是许多生物技术实验的基础，通过本实验的学习，同学们可以更好地开展相关生物技术实验工作。
实验原理：大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在微生物学及相关学科的研究中具有重要意义。
为了能够更好地开展生物技术实验，需要掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。
在培养大肠杆菌时，我们一般选用LB培养基（Luria-Bertani培养基），它是一种营养丰富的培养基，可以满足大肠杆菌的营养需求。
在制备LB培养基时，需将适量的蛋白胨、酵母提取液和纯化水混合均匀后加热至沸腾约1分钟，然后加入适量琼脂糖，搅拌均匀后装入烧瓶中。
分离纯化大肠杆菌时，需要将样品（如肠道内容物、污水等）进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围，然后在LB培养基上进行平板培养。
在培养过程中，需要控制培养温度、时间和氧气浓度等因素，以促进大肠杆菌的生长和繁殖。
随着时间的推移，大肠杆菌会在平板上生长成大量的细菌菌落，此时，我们可以将单个细菌菌落挑选出来进行分离纯化，以得到单一纯化的大肠杆菌。
实验材料与仪器：材料：LB培养基、螺旋细胞均一器、平板培养基、霉菌试验纸、吸管、医用酒精、胶体金离子分离剂等仪器：高压灭菌器、移液管、显微镜、细胞计数板实验步骤：1. 制备LB培养基。
2. 取样和稀释。
取样品（如肠道内容物、污水等），取适量于吸管中，并将其进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围。
3. 平板培养。
将LB培养基倒入平板中，恰好覆盖平板的整个表面。
待培养基凝固后，使用螺旋细胞均一器将取样液均匀滴在培养基表面上。
将平板置于37℃恒温箱中，控制温度和氧气浓度等因素，待大肠杆菌细菌菌落生长到足够数量时，进入下一步。
4. 分离纯化。
将平板上的大肠杆菌细菌菌落挑选出来，使用吸管将细菌菌落转移到新的平板中进行分离纯化。
一般建议选择较小的细菌菌落进行挑选，这样可以减少细菌间的竞争，提高挑选单一菌株的成功率。
大肠杆菌培养生长条件
大肠杆菌培养生长条件大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中。
它具有很强的适应能力，可以在各种环境中生存和繁殖。
为了获得最佳的大肠杆菌培养生长条件，科学家们进行了大量的研究和实验。
大肠杆菌的生长需要提供适宜的营养物质和环境条件。
首先，大肠杆菌需要碳源来提供能量和碳元素。
常见的碳源包括葡萄糖、乳糖等单糖，以及淀粉、纤维素等复合糖。
此外，大肠杆菌还需要氮源来合成蛋白质和核酸等生物大分子。
常见的氮源包括氨基酸、尿素等。
此外，大肠杆菌还需要矿物质、维生素和其他微量元素来维持正常的生长。
大肠杆菌的生长还需要适宜的温度和pH值。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度在37摄氏度左右，这也是人体内的温度。
在这个温度下，大肠杆菌的生长速度最快。
当温度过高或过低时，大肠杆菌的生长速度会受到限制。
此外，大肠杆菌对pH值也有一定的要求。
大肠杆菌的最适生长pH值在6.5-7.5之间，略偏碱性。
当pH 值过高或过低时，大肠杆菌的生长也会受到影响。
除了营养物质和环境条件外，大肠杆菌的生长还受到其他因素的影响。
例如，氧气浓度对大肠杆菌的生长有重要影响。
大肠杆菌可以根据氧气浓度分为厌氧菌和好氧菌。
厌氧菌在缺氧或低氧条件下生长，而好氧菌则需要充足的氧气供应。
此外，大肠杆菌的生长还受到周围环境的微生物和竞争菌的影响。
如果培养基中存在其他细菌或真菌等竞争菌，可能会影响到大肠杆菌的生长。
为了提供最适合大肠杆菌生长的条件，科学家们通常会制备含有适宜营养物质的培养基。
常用的培养基包括LB培养基、M9培养基等。
在制备培养基时，需要根据具体实验目的和大肠杆菌的特点进行调整。
此外，科学家们还会通过控制温度、pH值和氧气浓度等环境因素，来优化大肠杆菌的生长条件。
大肠杆菌的生长需要适宜的营养物质和环境条件。
科学家们通过研究和实验，不断优化大肠杆菌的培养生长条件，以满足不同实验的需求。
这些研究不仅有助于我们更好地了解大肠杆菌的生长特性，也为其他相关领域的研究提供了重要的基础。
大肠杆菌如何培养
大肠杆菌如何培养
一、大肠杆菌如何培养1. 大肠杆菌如何培养2. 大肠杆菌的保存方法 3. 大肠杆菌菌种的复苏二、大肠杆菌对人体益处和危害三、什么是大肠杆菌
大肠杆菌如何培养
1、大肠杆菌如何培养1.1、称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
1.2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
1.3、调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
1.4、过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基,这步可省略。
1.5、分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
2、大肠杆菌的保存方法
2.1、常用的长期保存法有:液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜(DMSD)等保护剂。
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。
下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。
2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。
3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。
4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。
5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。
6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。
7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。
8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。
9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。
10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。
11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。
12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。
13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。
14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。
15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。
16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。
17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。
18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。
19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。
20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。
大肠杆菌培养实验报告
大肠杆菌培养实验报告大肠杆菌培养实验报告实验目的：本次实验旨在通过培养大肠杆菌的方法，观察其生长特性以及对不同环境条件的适应能力，进一步了解大肠杆菌的生物学特性。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 培养皿- 无菌纱布- 灭菌的玻璃棒- 灭菌的移液器- 灭菌的试管- 灭菌的培养皿- 灭菌的培养瓶- 灭菌的显微镜玻片2. 实验步骤：a. 准备工作：- 将培养皿、试管、移液器等实验器材进行高温高压灭菌处理，确保实验环境的无菌性。
- 准备好大肠杆菌培养基，并将其分装到培养瓶中。
b. 大肠杆菌的采集与接种：- 用灭菌的玻璃棒在无菌纱布上擦拭待采集样品（如水龙头、土壤等），将擦拭得到的微生物转移到灭菌的试管中。
- 取适量的培养基，用灭菌的移液器将待采集样品中的微生物接种到培养基中。
c. 培养条件的控制：- 将接种好的培养基放入恒温培养箱中，控制温度在37℃左右。
- 观察培养基的酸碱度，保持在适宜的范围。
d. 观察与记录：- 在培养过程中，每隔一定时间观察培养基上的菌落形态和数量，并记录下来。
- 利用灭菌的显微镜玻片，取适量的培养基样品进行菌落形态的观察。
实验结果与讨论：通过实验观察与记录，我们得到了以下结果：1. 大肠杆菌的生长特性：- 大肠杆菌在37℃的恒温培养箱中，呈现出较快的生长速度。
- 菌落的形态呈灰白色，边缘整齐，表面光滑。
2. 大肠杆菌对不同环境条件的适应能力：- 在不同酸碱度的培养基中，大肠杆菌仍能生长繁殖，但在极端酸性或碱性条件下，生长速度明显减缓。
- 大肠杆菌对温度的适应能力较强，尤其在适宜的37℃下生长最为迅速。
3. 菌落形态的观察：- 大肠杆菌在培养基上形成的菌落呈圆形或不规则形状，直径约为1-2毫米。
- 菌落表面光滑，质地较软，有时会呈现出微小的凹陷。
通过以上实验结果，我们可以初步了解到大肠杆菌的生长特性和对环境的适应能力。
大肠杆菌作为一种常见的细菌，在人体肠道中起着重要的生理功能，但也可能引发一些疾病。
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大肠杆菌种子液的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的配方：
液体培养基
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 10.0g
氯化钠 5.0g
水 1000ml
pH 7.4-7.6
固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂
1 试管斜面与平板的制备
（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。
（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，
补充水到所需的总体积。
将称量好的 1.8％琼脂放入已溶
的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。
（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,
边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到
7.4-7.6。
反之用1mol/L HCl进行调节。
（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。
其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培
养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。
（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名
称、配制日期。
（6）灭菌将上述培养基以0.1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。
（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。
（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的
一半为宜。
2 接种大肠杆菌斜面种子
(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，
用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。
(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。
3 制备平板种子
(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌
生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀
释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取
各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸
取溶液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。
（12）次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新
鲜灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃，170r/min恒
温振荡培养18h作种子培养液。
其后的实验中，每次实验前从种子培养液中吸取2ml菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，37℃，170r/min恒温振荡培养
使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：
1.称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.
5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染.
分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故入冰箱内暂存.
9.无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。
大肠杆菌 / 大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。
大肠杆菌显蓝色至紫色，大肠菌群显红色。
成份 (g/L)
特殊营养物质
28.19
混合显色剂
0.31
琼脂
13.0
pH 6.8 ± 0.2 25 ℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 41.5g 加入 1000ml 蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过 1 分钟。
取 1ml 制备好的样品液加入直径为 9cm 无菌平皿中心，倾入冷却至 45-50 ℃培养基约 15ml ，混匀，凝固后，再加入一层培养基进行履盖。
或冷却至 45-50 ℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时，加入适当稀释度的样品液 1ml ，涂布于培养基上， 36 ± 1 ℃培养 18 ～24h 。
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。
干燥培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1 、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液
2 、取样品液 1ml 加入冷却至 45-50 ℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h ，选用有 30 ～ 200 个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群和大肠杆菌菌落。
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠菌群 = 蓝色菌落 + 紫色菌落 + 粉红色菌落
大肠杆菌 = 蓝色菌落 + 紫色菌落
4 、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上， 36 ± 1 ℃培养 12-16 小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验 ( 本公司有生化鉴定管套装 20 支 x3 种 )
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡红色。
制备好的平板呈透明粉红色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h 小时：
质控菌株
ATCC
生长情况
菌落颜色
单增李氏菌
27853
-/+
无色
金黄色葡萄球菌
25923
-/+
无色
大肠杆菌
25922
+++
蓝色
沙门氏菌
+++
无色
大肠菌群
+++
粉红色
方法的局限性
本培养基鉴定大肠菌群 / 大肠杆菌，少数情况下可能会出现假阳
性，但不会出现假阴性，有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色菌落。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。