瘤胃微生物的传统定量方法在反刍动物中的应用

通 信 作 者 ： 英 庭 （９ ２ ， ， 东 省 乳 山市 人 ， 授 ， 士 生 导 师 ， 林 １６ 一）男 山 教 硕 主 要 从 事 反 刍 动 物 营养 研 究 。
一
是数 量 最 多而 且 最 为重 要 的微 生物 ． 胃内 容物 中 瘤
细菌 达 ｌ ｌ “个／ ．０ Ｏ一０ ｍＬ ２ ０多 种 ： 胃原 虫 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ４ １ 瘤 ０～ ０
个 ／ ，５个 属 ； 氧 真 菌 游 动 孢 子 数 ｌ 。１ ／ ， ｍＬ ２ 厌 ０～ ０ 个 ｍＬ
６个 属 ； 噬菌 体颗 粒 数可 达 １ １ ｍＬ 由众 多 的 ０～ ０ 个／ 。
亨 盖 特 厌 氧 滚 管 技 术 是 美 同 微 生 物 学 家 亨盖 特 （ ｕ ｇｔ） １ ５ Ｈ ｎ ａ 于 ９ ０年 首 次提 并 应用 于瘤 胃厌氧 ｅ 微 生物 研究 的一种 厌氧 培 养技术 。以后这 项技 术经
用 模 拟 瘤 胃环 境 而设 计 的培 养 基 ， 瘤 胃微 生 物进 对 行 分 离 、 培 养 、 数 、 态 鉴 定 、 理 生 化 特 性 的 纯 计 形 生
鉴别 、 分类 等 。瘤 胃细菌 与真 菌 的数 量用 显微 镜直接
计数 ， 常采 用滚 管 法 计 数 ， 以及 最 大或 然 数 计 数 法 。 微 生 物学 家 从 上 世纪 ５ ０年 代 就 开 始 研 究 瘤 胃细 菌 的培 养方 法 ， 中最 为 经 典 的 是亨 氏滚 管 法 和 最 大 其
关 键 词 ： 胃 微 生 物 ； 氏 滚 管 法 ； 大 或 然 法 瘤 亨 最
反 刍 动 物 在 长 期 的 自然 进 化 过 程 中 形 成 了独
等 ，９ ９ ， 养 的 已知菌 种 可能不 完 全适 合培 养 条 １８ ） 培 件 或 者进 入 了未 培养 状 态 ， 因而 测 定 的瘤 胃微 生 物
摘 要 ： 胃微 生物 作 为一 个 完整 的 生 态 系统 ， 日粮 成 分 、 养方 式 、 节等诸 多 因素 的影响 ， 识 瘤 胃微 生 瘤 受 饲 季 认
物 的功 能及 其活 动规 律 复杂 而 困难 。瘤 胃微 生物 的传 统 定量 方 法有 亨 氏滚 管法和 最 大或 然数 计数 法 ，二者 有 着各 自的优 缺 点 。本 文综 述 了瘤 胃微 生物 的传 统 定量 方 法的应 用状 况及 各 自的优 缺 点 。
段时 间 内持续 使 用 。
１ 亨 氏 滚 管 法 及 其 应 用 １１ 亨 氏 滚 管 法 ．
细菌 、 菌 和原 虫 组 成 的 微 生 态 系 统 中 ， 仅 每 种 真 不 微 生 物 与底 物 的作 用机 理 不 同 ， 种 微 生 物 之 间 的 各
关系更 是 复杂… 。 采 用 Ｈ ｎ ａｅ 展 起 来 的 厌 氧 培 养 技 术 ， 及 采 ｕｇｔ发 以
卞 町 ２１・ ・ 圈 才・ １１ 科技 ０ ０
・
２ ・ １
瘤 胃微生 物 的传统定 量方法在 反刍动物 中的应用
祁茹 ，林英 庭
（ 岛农 业 大 学动物 科 技 学院 ， 岛 ２ ６ ０ ） 青 青 ６ １ ９
中图分类 号 ：８ １ 文 献标 识码 ： 文 章编 号 ：０ ４ ４ ６ （０ １ １ — ０ １ ０ Ｓ— Ａ １ ０ — ２ ４ ２ １ ）０ ０ ２ — ３
数 法 （ ｌ ｔｂ ｔ ｈ ｉｕ ）Ｈｕ ｇ ｔ １ ６ ）和 最 大 或 然 ｒ ｌ ｕ ｅ ｃ ｎｑ ｅ （ ｎ ａｅ ９ ９ ｐ ｏ— ｅ ， ￣
数 法 （ ｓ ｒｂ ｂｅｎ ｍｂ ｒ ｅ ｈ ｉ ｕ ， Ｎ） Ｄｅ ｏｉ ｍｏ ｔ ｏ ａ ｌ ｕ ｅ ｅ ｎｑ ｅ ＭＰ （ ｈ ｒｔ ｐ ｔ ｙ
凝 固 ， 常 为 有 流 动水 的滚 管 架 上 自动滚 动 ， 可 通 也
在 水 浴 中手 动 滚 管 。琼 脂 培 养 基 凝 同后 立 即放 人
３ ℃培养 箱培 养 。 ９ 培养 数天 后 ， 滚管 壁 上 即可 出现菌 落 ， 后 在 Ｃ ： 件 下用 接 种 环 挑取 单 菌 落 放入 新 而 Ｏ 条
鲜 的 培 养 基 培 养 。新 培 养 的 菌 液 经 过 多 次 滚 管 和 单
收 稿 日期 ：０ ｌ ０ — ６ ２ １一 １ ２
作 者 简 介 ： 茹 （９ ７ ） 女 ， 祁 １ ８ 一 ， 内蒙 古 巴 彦 淖 尔 市 人 ， 士 研 究 生 ， 要 硕 主 从事反刍动物营养研 究。
历 了几 十 年 的不 断改 进 ， 其 技 术 日趋 完 善 ， 逐 使 并
渐 发 展成 为研 究厌 氧 微 生 物 的一 套 完 整技 术 ， 而且 多年来 的实 践 已经证 明它 是研 究 严 格 、 性 厌 氧菌 专 的一种 极 为有效 的技术 。
亨 氏 滚 管 法 基 本 步 骤 为 ： 氏管 巾分 装 有 ４ ５ 亨 ～ ｍＬ
特 的瘤 胃发酵 系统 。瘤 胃内栖 息 着大 量 的微 生 物 ．
包括 瘤 胃细菌 、 虫 、 原 真菌 和 噬菌体 等几 大类 。细 菌
总数 可 能偏 低 。近年 来 随 着分 子 技 术 的应 用 ， 人们 不 断发现新 的瘤 胃微 生物 品种 ， 以更加准 确 、 可 快速 、
高效 地评 价 瘤 胃微生 物 。但是 ， 实验 条 件 和 经 费 受 的影 响 ， 统 的定 量 方 法仍 被 广 泛采 用 并 将 在 今后 传
或 然 数 法 。Ｋ ａｓ 等 （９ ６ ｒ 细 菌 的 多 样 性 进 行 了 ｒｕ ｅ １ ９ ）￣ ２ 对
的融 化 琼 脂 培 养 基 ， 冷却 至 ４ ℃左 有 时接 种 ， 后 ３ 然
迅 速 在 较 低 温 度 条 件 下 滚 管 数 秒 钟 使 琼 脂 培 养 基
大 量 的研 究 ， 们 认 为瘤 胃中 主要 的细 菌 有 ２ 他 ２种 。 这 些 研究 都 是 基 于传 统 的培 养 方法 ， 亨 氏 滚 管计 如