细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(
细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞色素P450酶系（CYP-ECOD）总活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统中乙氧基香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶系活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450酶系的总活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。
其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。
作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。
乙氧基香豆素脱乙基酶（7-ethoxycoumarin O-deethylase；ECOD）的活性是细胞色素P450酶系的诊断标记，其基于ECOD广泛性催化细胞色素P450亚酶的活性。
乙氧基香豆素（7-ethoxycoumarin）在乙氧基香豆素脱乙基酶的催化下，转化为羟基香豆素（7-hydroxycoumarin）后荧光峰值的变化（激发波长368nm，散发波长456nm），来定量测定细胞色素P450酶系的活性。
乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统为：
ECOD
7-ethoxycoumarin + NADPH→7-hydroxycoumarin+CH3CHO ＋NADP+
产品内容
缓冲液（Reagent A）5毫升
反应液（Reagent B）500微升
底物液（Reagent C）125微升
终止液（Reagent D）2毫升
标准液（Reagent E）100微升
产品说明书1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent E）避免光照，终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于标准样品配制和反应的容器
培养箱：用于孵育反应
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪过荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。
然后进行下列操作。
一、测定准备
1．准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里
2．设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长370nm，散发波长450nm，并置零3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4．分别加入25微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管
5．移取25微升标准液（Reagent E）到1号管，混匀
6．小心移取25微升1号管稀释的标准液（Reagent E）到2号管，混匀
7．小心移取25微升2号管稀释的标准液（Reagent E）到3号管，混匀
8．小心移取25微升3号管稀释的标准液（Reagent E）到4号管，混匀
二、标准曲线测定
1．移取155微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2．加入20微升反应液（Reagent B）
3．加入5微升底物液（Reagent C）
4．加入20微升上述配制的标准样品
5．上下倾倒数次，混匀
6．在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
7．加入75微升终止液（Reagent D），混匀
8．在37℃温度下孵育5分钟，避免光照
9．转移到新的比色皿或黑色96孔板
即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
三、样品测定
1．移取155微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2．加入20微升反应液（Reagent B）
3．加入5微升底物液（Reagent C）
4．加入20微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
5．上下倾倒数次，混匀
6．在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
7．加入75微升终止液（Reagent D），混匀
8．在37℃温度下孵育5分钟，避免光照
9．转移到新的比色皿或黑色96孔板
即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
12．根据标准曲线获得样品对应羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、计算样品实际活性
[根据标准曲线获得样品对应羟基香豆素浓度（微摩尔/升）X 0.2（体系容量；毫升）X样品稀释倍数]÷ [0.02 （样品容量；毫升X 15（反应时间；分钟）]＝纳摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝纳摩尔/毫克/分钟。
线粒体呼吸链复合体Ⅳ 细胞色素 C 氧化酶活性检测试剂盒说明书
线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C 氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0945规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格 保存条件 提取液液体75 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂一液体33mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二粉剂×2瓶 -20℃保存 试剂三粉剂×2支 2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中。
临用前取1支加入13.5mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；2、 试剂三：试剂置于试剂瓶内EP 管中；临用前取1支加入2mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃保存2周，避免反复冻融；3、 工作液的配制：临用前取0.5mL 试剂三加入到溶解好的4.5mL 试剂二中混合备用（约25T ），或者按比例现用现配。
产品说明：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C 的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。
还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C ，因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
Reduced Cytochrome C （550nm ） Oxidized Cytochrome C注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 称取约0.1g 组织或收集500万细胞，加入1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书中文版
植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过细胞色素C氧化酶反应系统中还原性细胞色素C氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）等裂解悬液中细胞色素C氧化酶的活性检测。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景细胞色素C氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的细胞线粒体上（包括植物细胞），主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。
基于底物还原型细胞色素C（reduced cytochrome c），受到细胞色素C氧化酶的催化，转化为氧化型细胞色素C（oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm 波长），由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。
细胞色素C氧化酶反应系统为：产品内容清理液（Reagent A）毫升裂解液（Reagent B）毫升缓冲液（Reagent C）毫升反应液（Reagent D）毫升稳定液（Reagent E）微升稀释液（Reagent F）微升产品说明书1份保存方式保存清理液（Reagent A）和缓冲液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器DOUNCE匀浆器：用于组织匀化微型台式离心机：用于样品制备培养箱：用于反应孵育比色皿：用于比色分析的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤一、样品准备1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）9．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管11．（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）12．即刻移入到1.5毫升离心管13．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）14．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测读准备1．准备好上述制备好的样品，置于冰槽里融化2．设定好分光光度仪：温度25℃，波长550nm，间隔10秒，测读7次（共60秒），并置零或设置0秒和60秒各测读1次3．将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后移出100微升到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稳定液（Reagent E），轻柔混匀后，室温下暗室里静置至少15分钟（可见颜色变化），置于冰槽里，标记为反应工作液（注意：参见注意事项5），放在暗室里三、背景对照测定1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的1毫升比色皿2．加入xx微升稀释液（Reagent F）3．上下倾倒数次，混匀4．室温下孵育2分钟5．放进分光光度仪，置零6．取出比色皿，加入xx微升含有反应液（Reagent D）和稳定液（Reagent E）的反应工作液7．上下倾倒数次，混匀8．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（0秒读数－60秒读数）四、样品测定1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿2．加入100微升待测样品（注意：建议总量50微克总蛋白，且样品需澄清）3．上下倾倒数次，混匀4．室温下孵育2分钟5．放进分光光度仪，置零6．取出比色皿，加入xx微升含有反应液（Reagent D）和稳定液（Reagent E）的反应工作液7．即刻上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（0秒读数－60秒读数）9．计算样品活性注意事项1．本产品为20次操作，包括背景对照2．操作时，须戴手套3．样品中忌用DTT和巯基乙醇等处理4．建议测定组织细胞裂解悬液的蛋白浓度，便于计算活性单位之需；建议使用－Bradford蛋白质浓度定量检测试剂盒（GMS30030.1）5．每增加1个样品，增加反应工作液为：反应液（Reagent D）50微升＋稳定液（Reagent E）3微升，以此类推。
大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究
大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究朱曼;王睿;张永青;梁蓓蓓【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2004(9)5【摘要】目的 :建立大鼠肝微粒体蛋白含量以及肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系含量与活性测定的紫外和荧光分光光度方法。
方法 :应用差速离心法提取大鼠肝微粒体 ,Lowery法测定肝微粒体蛋白浓度 ,应用紫外和荧光分光光度法测定肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系含量及活性。
结果 :牛血清白蛋白标准曲线的线性范围为 2 5～2 5 0mg·L-1,最低检测限为2 5mg·L-1,相关系数r为 0 .9975 ;紫外分光光度法测定细胞色素P4 5 0和细胞色素b5含量及NADPH CytC还原酶活性的结果显示方法灵敏 ;测定氨基比林N 脱甲基酶、红霉素N 脱甲基酶活性的甲醛标准曲线 ,线性范围为 0 .0 5～0 .5mmol·L-1,最低检测限为0 .0 5mmol·L-1,相关系数r为0 .9988;测定 7 乙氧基香豆素脱烃酶活性的resorufin标准曲线线性范围为 1～8μmol·L-1,最低检测限为1μmol·L-1,相关系数r为 0 .9998。
结论 :紫外和荧光分光光度方法测定大鼠肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系中 6种酶的含量及活性的灵敏可靠 ,重复性较好。
【总页数】4页(P500-503)【关键词】紫外分光光度计;荧光分光光度计;肝微粒体细胞色素P450【作者】朱曼;王睿;张永青;梁蓓蓓【作者单位】解放军总医院临床药理药学研究室【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.联合诱导法对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 汪希兰;谢金才;王翠芬;2.氟喹诺酮类药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 张沂;于春令;邸秀珍;赵猛;米媛媛3.甲磺酸加替沙星对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 张沂;邸秀珍;任婷麟;王大鹏4.联合诱导法对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 汪希兰;谢金才;王翠芬5.凹土玉米芯垫料对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 舒畅;张延英;吴建军;陶维天;蔺兴遥;朱建坤;康万荣;李存祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
碧云天冠状病毒Mpro 3CLpro活性荧光检测试剂盒 P0313S P0313M说明书
冠状病毒M pro /3CL pro 活性荧光检测试剂盒产品编号 产品名称包装 P0313S 冠状病毒M pro /3CL pro 活性荧光检测试剂盒 100次 P0313M冠状病毒M pro /3CL pro 活性荧光检测试剂盒500次产品简介：碧云天研发的冠状病毒M pro /3CL pro 活性荧光检测试剂盒(Coronavirus M pro /3CL pro Activity Fluorometric Assay Kit)是一种用荧光法快速高灵敏检测冠状病毒主蛋白酶(main protease, 简称M pro ，也称3C-like protease ，简称3CL pro )活性的试剂盒。
2019年底由新型冠状病毒引起的肺炎疫情，从2020年初开始在全球大流行，感染病例快速上升，引发全球关注。
该病毒被世界卫生组织(WHO)命名为2019-nCoV ，被国际病毒分类委员会命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。
由新型冠状病毒导致的疾病，被世界卫生组织正式命名为冠状病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19），通常称为新型冠状病毒肺炎，简称“新冠肺炎”。
新型冠状病毒(2019-nCoV)属于单正链的RNA 病毒，与SARS-CoV 以及MERS-CoV 具有较高的同源性，该病毒感染进入宿主细胞后，在宿主细胞的帮助下，其遗传物质RNA 的ORF1a/b 首先翻译表达出两条多聚蛋白前体(pp1a 和pp1ab)，多聚蛋白前体在主蛋白酶(main protease, 简称M pro )和木瓜样蛋白酶(papain like proteases)的作用下发生分子内的切割产生多个非结构蛋白。
M pro 也被称为3C-like protease (3CL pro )，因为其切割位点的特异性与微小RNA 病毒(picornavirus)的3C 蛋白酶(3C protease)很相似，两者并称为M pro /3CL pro。
细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒
细胞总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于各种新鲜食物样品总抗氧化能力检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。
通过稳定的有机氮自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical；DPPH），受到抗氧化剂的去自由基作用，呈现深紫色转化为黄色的变化，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（515nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。
细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书
细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）要紧用途细胞色素P450酶系（CYP-ECOD）总活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过乙氧基香豆素脱乙基酶反映系统中乙氧基香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的转变，即采纳荧光法来测定样品中酶系活性的权威而经典的技术方式。
该技术通过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各类细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450酶系的总活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳固。
技术背景细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。
其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。
作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。
乙氧基香豆素脱乙基酶（7-ethoxycoumarinO-deethylase；ECOD）的活性是细胞色素P450酶系的诊断标记，其基于ECOD普遍性催化细胞色素P450亚酶的活性。
乙氧基香豆素（7-ethoxycoumarin）在乙氧基香豆素脱乙基酶的催化下，转化为羟基香豆素（7-hydroxycoumarin）后荧光峰值的转变（激发波长368nm，散发波长456nm），来定量测定细胞色素P450酶系的活性。
乙氧基香豆素脱乙基酶反映系统为：ECOD7-ethoxycoumarin + NADPH →7-hydroxycoumarin + CH3CHO ＋ NADP+产品内容缓冲液（Reagent A） 5毫升反映液（Reagent B） 500微升底物液（Reagent C） 125微升终止液（Reagent D） 2毫升标准液（Reagent E） 100微升产品说明书 1份保留方式保留在－20℃冰箱里，反映液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent E）幸免光照，终止液（Reagent D）具有侵蚀性，注意操作平安；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于标准样品配制和反映的容器培育箱：用于孵育反映200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器荧光分光光度仪过荧光酶标仪：用于荧光分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。
Calcein PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒说明书
Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒产品简介：碧云天生产的Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit ，或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。
本试剂盒使用便捷，荧光染色和检测仅需约30分钟。
本试剂盒染色30分钟后，就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。
本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性，从而反映细胞活性与细胞毒性。
其中Calcein AM 染色活细胞，呈现绿色荧光；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞，呈现红色荧光。
本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。
图1. Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。
HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A)；绿色荧光标记的即为Calcein 染色的活细胞(图B)，红色荧光标记的即为PI 染色的死细胞(图C)；Calcein和PI 双染叠加(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。
在本实验中，HT-29细胞经TSZ 处理4小时。
TSZ 为TNFα、SM-164和Z-V AD-FMK 组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。
实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester ，中文名称为钙黄绿素AM或钙黄绿素乙酰氧基甲酯)，是一种可以对活细胞进行荧光染色的细胞染色试剂，Calcein AM 是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团，加强了疏水性，因此能够很容易穿透细胞膜。
双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明
说明书
包装 60ml 10ml 11ml 0.1ml 1份
保存条件：
RG008-1和RG008-3在4℃保存1个月有效，-20℃保存一年有效，-70℃可以长期保存；RG008-2和RG008-4在-20℃避光保 存6个月有效，-70℃避光保存一年有效。
注意事项：
¾ 加入Renilla荧光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫荧光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性，因 此，宜在转染时把Renilla荧光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫荧光素酶RLU读数的10%。Renilla荧光素酶的读 数高于萤火虫荧光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
4. 按仪器操作说明书开启荧光测定仪，将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒。 5. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升，但每次样品的使用量要保持一致)，加入100微升
萤火虫荧光素酶检测试剂，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)。以报告基因细胞裂解液为空白
使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后可以直接加入报告基因细胞裂解液；
细胞内氧化应激活性氧ROS初级荧光测定试剂盒产品说明书中文版主要用途
细胞内氧化应激活性氧（RoS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradica1：O2）＞过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxy1radica1：0H）、过氧化基（peroxy1radica1；R00'氢过氧自由基Chydroperoxy1;H00烷氧自由基（a1coxy!radica1）.氮氧基（niiricOxide；NO）、过氧亚硝基阴离子（PeroXyniIri1eanion；ONOO）次氯酸（hyρoch1orousacid；HoC1）、半酸自由基（semiquinoneradica1单线态氧气（Sing1etoxygen）等细胞内活性氧族（ReaciiveOxygenSpecies;ROS）的产生和增多，将导致细胞哀老或凋亡。
2,,7-二氯荧光乙酰乙酸盐（2'.7idich1orof1uOreSCeindiaCe1ate,DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。
一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。
据此测定细胞内活性氧族的浓度。
产品内容清理液（Reagen1A）亳升染色液（Reagen1B）微升稀释液（Reagen1e）亳升保存液（Reagen1D）受升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagen1B）在一20七冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4C冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMSI2052）：用于细胞操作所需的培养基15亳升锥形离心管：用于细胞操作的容器15亮升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或衡标仪：用于定量检测荧光细胞实验步骤一、间接法实验开始前，将一20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，稀释液（ReagentC）放进37°C恒温水槽里预热。
Calcein-AM PI 活细胞 死细胞双染试剂盒说明书
Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒说明书货号：CA1630规格：500T保存：-20°C 避光干燥保存，一年有效。
产品内容：名称规格保存Calcein-AM Solution(2mM)50μL -20°C 避光干燥保存PI Solution （1.5mM ）150μL -20°C 避光干燥保存10×Assay Buffer 50mL -20℃保存，经常使用可放在4℃保存。
产品说明：Calcein-AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm,Em=515nm ）。
因其在传统的Calcein （钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM ）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。
一旦进入细胞后，Calcein-AM （本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein ，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。
与其它同类试剂（如BCECF-AM 和CFDA)相比，由于Calcein,AM 细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。
因此，Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI ）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。
碘化丙啶（Propidium iodide ，PI ）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA 双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535nm,Em=617nm ），因此PI 仅对死细胞染色。
由于Calcein 和PI-DNA 都可被490nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。
而用545nm 激发，仅可观察到死细胞。
本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM 和PI 的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。