第四章 胚胎移植

2）常见动物的常用超排方案
（ 1 ）小鼠 于发 情周期的任意时间开始腹腔注 射 PMSG 5-10IU，48小时后注射hCG5-10IU。大约在 注射hCG后12-13小时排卵。 （2）仓鼠 腹腔注射PMSG 25IU，72小时后注射hCG 40IU，一般于注射hCG后者17小时排卵。
（3）家兔 每天皮下注射FSH 1mg，连续注射3天。 于最后一次注射FSH之后24小时注射LH 2.5mg。 或者，先注射PMSG 50IU，72小时后再注射hCG 50IU。一般于注射LH（hCG）后13小时排卵。 （4）牛 于发情第10-13天开始一次肌肉或皮下注射 PMSG 2000-3000IU，或者每天两次肌肉或皮下注 射 FSH-P （猪脑垂体FSH），连续注射3-4 天，总 剂量 28-50mg 。于开始注射促性腺激素后 48 小时 ，注射前列腺素 F2α 或类似物来溶解黄体。母牛 一般于注射PG后36-48小时发情。
2）胚胎移植是胚胎工程各项技术的基础
体外受精、显微受精、动物克隆、转基 因动物的产生等最终要通过胚胎移植技 术来实现
三.胚胎移植技术的发展简史
• 3.1早期阶段 • 1890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔 的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内 ，分别获得仔兔2只。 • 3.2初级阶段 • 1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵 羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左 右。
• 3.3发展阶段 • 1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成 功，之后日、美采用非手术法移植成功 。胚胎移植成功率达70-80%。
• 3.4实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司， 1973年牛冻胚移植成功（英）。 • 3.5实用化研究阶段 1982- 目前 大规模胚胎移植、核移植、嵌合 体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英 美日德广泛开展。克隆羊诞生。
3.超排方法
• 主要方法是给动物注射LH或hCG，模仿体内的 LH高峰。但应注意，注射激素的时间要适当， 必须在发情开始前不久、有成熟卵泡存在（发 情前期）时进行注射。
• 由于一般难以准确确定发情前期，故多采用注射 PMSG 来调整发情周期（卵泡发育），而后再注射 LH，使动物按时排卵。在大多数动物（如牛、羊和 猪），都是于黄体退化末期和发情前期之间注射 PMSG，而后间隔一定时间注射LH或hCG。 • 而在实验动物（小鼠、大鼠、仓鼠和兔），则可打 乱情期注射PMSG，使其按照预定时间排卵。
12-13
17 11-13 40 20-28 40
3）影响超排效果的因素
• 超数排卵的效果受动物的遗传特性、年龄、营 养状况、发情周期的阶段、季节及激素的批号 等多种因素的影响。 • 所以，不同品种和不同个体的超排反应差异很 大，至今仍是胚胎移植中有待研究改进的一个 重要问题。
三．供体母畜的配种
1．提高优秀种畜的繁殖率
这是胚胎移植之最显而易见的意义。 例如，像奶牛这样的单胎动物，一头优秀母牛 一生中一般最多只能生10个牛犊。但若通过重 复采卵进行胚胎移植，让生产性状较差的母牛 代替优秀母牛怀孕 9 个月，就可以大大提高其 繁殖率。而且，如果再用激素对供体进行超数 排卵，使每次采集的胚胎数增加到 5-10 个，就 又可以使优秀母畜的繁殖率增加5-10倍。
• 排卵少有两个原因： ⑪ 是哺乳动物，特别是家畜的妊娠期较长， 排卵的机会很少； ⑫是主要家畜都不是多胎动物，每次排卵排 除的卵母细胞数只不过 1-2 个。单纯的胚胎 移植只能解决第一个问题，使动物重复地发 生暂时妊娠，而人为缩短动物的妊娠周期。 而第二个问题的解决途径就是超数排卵。
• 2.2超排作用二，是它可被用来控制动物的排卵
1）常用的激素
• 最初用于超排的垂体促性腺激素都是脑垂体组织的丙 酮浸出物，但目前主要用孕马血清促性腺激素 （pregnant mare gonadotropin, PMSG）和人绒毛膜促 性腺激素（human chorion gonadotropin, hCG）等胎盘 来源的激素，因为这些激素比脑垂体激素更容易获得， 可从尿或血中大量提取。 • PMSG主要表现为FSH活性，而hCG则主要起LH样的 作用。
6．作为研究手段
1）繁殖和胚胎学研究 • 在绵羊，通过把一个品种的胚胎移植到另一个品种母 体内的方法已经证明，出生重主要由羔羊的基因型决 定，但也受受体品种和窝重的影响。被毛的特性是受 妊娠期间母体环境的影响的。 • 通过从不育母羊收集胚胎并经形态鉴定后再移植到正 常受体的方法，已经帮助确定了在受到诸如热应激、 年龄、营养不良、泌乳以及孕激素处理等不利因素影 响后所出现不育的原因。
• 在猪，通过胚胎移植实验证明，维持妊娠的最少胚 胎数目是2-4个；黄体数目并不限制窝重。 • 在绵羊，一般产 1-2 个羔的品种在接受移植胚胎后， 可维持更多的妊娠；说明是排卵数而不是子宫容量 致使某些品种更高产。 • 进行绵羊品种间胚胎移植已经证明，妊娠期的长度 是由胎儿控制的，而与母体无关。
（5）绵羊和山羊 于发情开始后第13（绵羊）或16（山 羊）天一次肌肉或皮下注射PMSG 1000-2000 IU，或 者每天肌肉注射FSH-P，连续注射4天，总剂量为1824mg。于开始注射促性腺激素后36-48小时，一次肌 肉注射PGF2α或类似物。母羊一般于注射PG后24-36 小时发情。发情开始时一次静脉注射hCG 1000单位。 （6）猪 于发情第13、14或15天肌肉注射氯前列烯醇 100μg，8小时后再注射同样剂量的氯前列烯醇。在 第一次注射氯前列烯醇后24小时，肌肉注射PMSG 750-1000IU。72小时后，肌肉注射500-1000IU hCG。 一般于注射hCG后38-50小时排卵。
• 超排母畜表现发情后，选用优秀种公 畜的精液进行人工授精或实施本交配种。 由于超排母畜往往排卵很多，故应选择 活力高、密度大的精液进行多次（2-3次） 输精或配种，每次间隔8-10小时。
四．胚胎的回收
• 胚胎的回收就是利用冲卵液将胚胎由雌性 生殖道冲洗出来的过程。胚胎的回收用手术 法，也可采用非手术法。
2015-5-7 14
第二节 胚胎移植的生理学基础 与基本原则
一.
胚胎移植的生理学基础 二. 胚胎移植的基本原则
一.胚胎移植的生理学基础
• 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激 素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十 数个； • 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育； • 早期胚胎处于游离状态； • 胚胎发育不存在免疫问题； • 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系； • 胚胎的遗传性不受受体的影响；
2．加速动物育种和品种改良进程
在发展中国家，通过利用当地母畜作为受体进行 进口胚胎移植可迅速实现品种替代。在育种工 作中，一头优秀种公畜所起的作用之所以远比 一头优秀种母畜大，是因为一头公畜一生留下 的后代数目要比一头母畜多得多。然而，由于 胚胎移植可以使母畜的繁殖率提高许多倍，故 也就提高了优秀母畜在育种工作中的作用。
2. 胚胎移植的基本原则
① 种的一致性：供体和受体属于相同的种
② 动物生理状态的一致性：黄体期
③ 解剖部位的一致性：子宫角或者输卵管
胚胎移植原则图解
பைடு நூலகம்
第三节 胚胎移植的基本技术程序
一、供受体的选择与饲养管理 供体
– 遗传品质优秀 – 繁殖性能良好 – 营养状况好，体格健壮 – 无疾病
受体
– 土种动物或者本地品种 – 体格接近，营养良好 – 无疾病 – 繁殖生理特点与供体相似，比如多周期发情
第四章 胚胎移植
第一节 概念、意义和发展简史
一．概念
胚 胎移 植 （ embryo transfer ） 俗 称 “ 借 腹怀 胎”，是指于着床前自一母体（供体）收集 胚胎，移植到另一母体（受体）内完成妊娠 的过程。 在畜牧业上，供体一般为优秀母畜，而受体 一般为品质较差些的母畜。
二. 胚胎移植的意义
3．促进动物的进出口
通过运输冷冻胚胎可以代替种畜的进出口活动。 这样做可以大大节约购买、运输和检疫种畜所 需的费用。此外，由外地引进胚胎而繁殖的家 畜，因为是从小就在当地生长发育，故较容易 适应本地区的环境，也可自养母得到一定的免 疫能力。
4．某些感染性疾病的控制和不妊症的治疗
已经证明，胚胎移植是向无特异性病原体（ specificpathogen-free, SPF）猪群引入新鲜血液的一种安全 手段。然而，其条件是，必须事先知道有关的特异 性病原体不能够经胚胎或冲卵液传播。同样，在其 他动物也有可能从感染某种疾病的母畜获得“干净” 胚胎进行移植，以便拯救一些理想的基因。 在优秀母畜容易发生习惯性流产或难产，以及由于其 他原因（如年老体弱）不宜负担妊娠过程的情况下， 也可采用胚胎移植使其繁殖正常后代。
移植前2个月进行编号和补饲
二.供体超数排卵
1. 超数排卵的定义
• 超数排卵（superovulation）简称超排，是指通 过给母畜注射适当的激素，维持更多卵泡正常 发育而排除更多卵子的过程。
2.超数排卵的作用
• 2.1 超排作用一，也是其主要目的，是增加动物的
每次排卵数目。 • 大家都知道，哺乳动物的卵巢在动物出生时就已经 含有成千上万的卵母细胞，但在动物整个生命期间， 经自然排卵所排除的卵母细胞数目则是相当少的。
几种动物注射LH（hCG）后的排卵时间
动物 注射LH（hCG）的方法 排卵时间（注射后h）
小鼠
仓鼠 兔 牛 绵羊 猪
注射5-10IU PMSG后48小时注射5-10IU的 hCG
注射25IU PMSG后72小时注射40IU hCG 注 射 FSH （ PMSG ） 后 72 小 时 注 射 2.5mgLH 停止注射孕激素后注射500IU hCG 注射孕酮和PMSG后注射1000IU hCG 于发情前期（根据阴门肿胀和发情行为判 定）注射500IU hCG
时间。 • 为避免因卵子老化而降低繁殖率，必须准确掌握 动物的排卵时间，适时配种。在自然状态下，动 物的排卵时间是受促性腺激素（主要是LH）高峰 控制的。由于此高峰是由成熟卵泡所分泌的动情 素正反馈作用诱发的，故其出现的时间往往与动 物的发情行为紧密相伴。这样，若能准确地检查 出发情开始的时间，也就能正确地估计出排卵的 时间。然而，由于实践中人们不可能那样频繁地 对动物试情，故难以准确地估计排卵时间。因此， 为了准确地把握排卵时间，人们往往用激素来控 制或调整动物的排卵过程。