布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测

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一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法[发明专利]

专利名称：一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法专利类型：发明专利
发明人：杜志强,王建英,张雪峰
申请号：CN201310403116.5
申请日：20130906
公开号：CN103675289A
公开日：
20140326
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法，属于免疫学的技术领域。

本发明利用重组布鲁氏菌Omp19外膜蛋白作为抗原蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过免疫印迹试验进行人或者家畜动物血清的免疫识别，根据免疫印迹的结果可以直接判断人与家畜体内是否存在布鲁氏菌。

本发明可以作为检测人或者家畜体内是否存在布鲁氏菌的重要方法，在我国广大农牧业养殖区的布鲁氏菌病的快速、准确检测方面有较大的应用空间。

申请人：内蒙古科技大学
地址：014010 内蒙古自治区包头市昆区阿尔丁大街7号
国籍：CN
代理机构：包头市专利事务所
代理人：庄英菊
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布鲁氏菌主要外膜蛋白特征及其应用研究进展

布鲁氏菌主要外膜蛋白特征及其应用研究进展
王锐;王占黎;丁海涛;邹昊
【期刊名称】《包头医学院学报》
【年(卷),期】2022(38)1
【摘要】布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病。

外膜蛋白是布鲁氏菌重要的毒力因子,同时具有较好的免疫原性,能够刺激机体产生较强的免疫力,可以作为布鲁氏菌病诊断的抗原和布鲁氏菌病亚单位疫苗的候选物。

本文对目前几种重要的布鲁氏菌外膜蛋白相关研究进展进行综述,以期进一步了解布鲁氏菌外膜蛋白的特性,为研制布鲁氏菌病的诊断试剂及相关疫苗提供参考价值。

【总页数】5页(P92-96)
【作者】王锐;王占黎;丁海涛;邹昊
【作者单位】内蒙古医科大学;内蒙古自治区疾病相关生物标志物重点实验室;内蒙古自治区人民医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展
2.犬种布鲁氏菌外膜蛋白的特性及宿主牦牛及其外膜蛋白的影响
3.基于布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的ELISA检测试剂盒的研制与应用
4.布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅲ.牛种、羊种布鲁氏菌非典型株外膜蛋白SDS—PAGE图谱的特点
5.布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅱ.牛、羊、猪三种布鲁氏菌光滑型菌株外膜蛋白SDS-PAGE图谱的比较
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布鲁氏菌病PCR检测的临床意义

布鲁氏菌病PCR检测的临床意义姚馨月;郑文艳【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2016(048)002【总页数】4页(P189-192)【关键词】布鲁氏菌;PCR;诊断【作者】姚馨月;郑文艳【作者单位】内蒙古医科大学,内蒙古呼和浩特010059;中国人民解放军第253医院感染科,内蒙古呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】R378.5布鲁氏菌病(brucellosis,简称布病)是由布鲁氏菌感染引起的人畜共患传染-变态反应性疾病[1]。

世界动物卫生组织(OIE)将其列为重要传染病，属于《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并列为《家畜家禽防疫条例实施细则》中二类传染病中之首[2～4]。

布病在我国的整体流行趋势呈现出老疫区死灰复燃，新疫区范围扩大[5]。

布鲁氏菌病潜伏期为1～3周，初期症状类似重感冒，如发热、关节疼痛、疲劳、乏力、多汗、肝脾肿大等症状。

临床症状极不典型，在诊疗过程中易造成误诊，急性期布病如不及时诊断极易发展为慢性期。

慢性布病患者往往都会伴有不同程度的骨关节系统病变[6]。

本病的致命性并发症为中枢神经系统病变及心肌病变[7]。

所以布病的早期诊断，就变的尤为重要。

我国CDC布病诊断标准为：(1)流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、布鲁菌培养物等，或生活在疫区的居民；(2)临床症状和体征排除其他疑似疾病；(3)实验室检查：病原分离、试管凝集实验、补体结合实验、抗人球蛋白阳性。

凡具备第(1)、(2)项和第(3)项中的任何一项检查阳性即可确诊为布病。

布病的实验室检查方式是确诊布病的关键证据。

诊断布病的“金标准”是病原分离，但病原分离要求在P3级生物实验室进行，对实验室操作人员有较高的专业技术要求，耗时长，最终的菌落形态不易辨认，且有明显的操作暴露危险，增大医源性感染的可能。

在基层不易推广。

培养的阳性率极低。

1.1 凝集实验SAT一直是各国用作诊断布病的常规血清学诊断方法，我国更是将其列为了诊断布病的法定检测方法[8]。

布鲁菌Irr蛋白的生物信息学分析、表达纯化以及ELISA方法的初步建立

·研究论文·摘要：为建立一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA 检测方法，本研究对Irr 蛋白进行生物信息学分析、原核表达，用纯化的重组蛋白Irr 作为包被抗原，建立了一种检测布鲁菌抗体的间接 ELISA 方法。

结果显示，重组蛋白Irr 包被量为0.25 μg ，5％脱脂奶粉封闭2 h ，一抗稀释浓度1∶500孵育2 h ，二抗稀释浓度1∶5000孵育2 h ，显色15 min 时建立的间接ELISA 方法条件最优，该方法的OD 450临界值为0.55，与凝集实验的符合率达到96.7%，同时具有较好的特异性和重复性。

以上结果表明，本研究基于Irr 蛋白建立了操作简单、特异性高、重复性好的血清学间接ELISA 检测方法，为布鲁菌病的诊断和流行病学调查提供了技术支持。

关键词：布鲁菌；Irr 蛋白；原核表达；生物信息学；间接ELISA 方法中图分类号：S852.61 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2023）04-0057-10Bioinformatics Analysis, Expression and Puriﬁ cation of Brucella Irr Protein andPreliminary Establishment of ELISA MethodSUN Tianhao 1, ZHANG Qian 2,3, CAO Xudong 2, LI Nan 1, CHENG Kejian 1, ZHANG Jiangwei 1,WANG Zhen 1,2, CHEN Chuangfu 1,2(1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Xinjiang 832000, China; 2. Co-Innovation Center for Zoonotic Infectious Diseases in the western region, Shihezi University, Xinjiang 832000, China; 3. Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Xinjiang 832000, China)布鲁菌Irr 蛋白的生物信息学分析、表达纯化以及ELISA 方法的初步建立孙天浩1，张倩2,3，曹旭东2，李楠1，程科建1，张江伟1，王震1,2，陈创夫1,2（1.石河子大学动物科技学院，石河子832000；2.西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心，石河子832000；3.新疆农垦科学院，石河子832000）Abstract: In order to establish an indirect ELISA method for detecting Brucella antibodies, this study performed bioinformatics analysis and prokaryotic expression of Irr protein, and used purified recombinant protein Irr as the coating antigen to establish a method for detecting Brucella Indirect ELISA method for antibodies. The results showed that the coating quantity of recombinant protein Irr was 0.25 μg, 5% skimmed milk powder was blocked for 2 h, the primary antibody dilution concentration was 1:500 and incubated for 2 h, the secondary antibody dilution concentration was 1:5000 and incubated for 2 h, and the color development was 15 min. Optimally, the critical value of this method is OD 450 0.55, and the coincidence rate with the agglutination experiment reaches 96.7%, which also has good speciﬁ city and repeatability. In summary, this study established a serological indirect ELISA detection method based on Irr protein with simple operation, high speciﬁ city and good reproducibility, which provided technical support for the diagnosis and epidemiological investigation of brucellosis.Key words: Brucella ; Irr protein; prokaryotic expression; bioinformatics; ELISA收稿日期：2021-06-15基金项目：国家自然科学基金项目（31760020，U1803236）作者简介：孙天浩，男，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治研究；张倩，女，助理研究员，硕士，主要从事动物传染病诊断与防治研究通信作者：王震，E-mail：******************.cn；陈创夫，E-mail：**************Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(4):57-66· 58 ·中国动物传染病学报2023年8月布鲁菌病（Brucellosis），是由胞内生存的布鲁菌引起的一种严重危害人和家畜健康的人兽共患传染病，其可以引起人的波浪热，母畜流产以及公畜睾丸炎等症状，严重阻碍畜牧业的发展和公共卫生安全[1]。

布鲁氏菌的血清学检测方法

布鲁氏菌的血清学检测方法布鲁氏菌病（简称布病）是一种人兽共患的传染病，世界范围内流行。

布病给人造成了大量损失和痛苦。

近年由于布病的散发病例的增多，患者多无明确接触史，临床症状又不典型，因此其实验室检测至关重要。

目前布氏菌的实验室检测主要分三类：布氏菌细菌学检测、血清学检测和分子生物学检测。

细菌学检测周期长、阳性率低、感染风险高等特点，分子生物学对仪器、人员、技术的要求较高使得这两类技术在临床诊断应用上不是很普遍，应用最多的还是布氏菌的血清学检测。

本文现就布氏菌的血清学的检测进行如下综述。

布氏菌血清学方法可以分为：凝集法、补体结合法、酶联免疫吸附试验法、荧光偏振法、胶体金层析法等。

其中凝集法是通过特异性抗体与颗粒性抗原结合产生凝集的血清学实验，现应用最多的为虎红平板凝集实验、试管凝集实验、二巯基乙醇试管凝集实验、抗人球蛋白抗体实验等。

虎红平板凝集实验（RBPA）其抗原系用抗原性良好的牛种布氏菌株在适宜培养基上培养收获菌体, 经加热灭活, 离心后用虎红染料染色, 悬浮于乳酸缓冲液（PH3.6-3.7）制成。

它能抑制非特异性反应的IgM和增强特异性IgG 的活性, 其反应敏感稳定, 特异性优于试管凝集实验。

因此PBPA在很多国家推广使用, 是我国常规的诊断方法之一。

RBPA操作简单，不需要大型精密的仪器，适合基层医疗机构和检测点应用。

因有很高的灵敏性且能在短时间内完成，RBPA常用于初筛实验。

其有很高的准确性，特别是当检测1:4稀释血清标本阳性时其诊断的特异性更高【1】。

但RBPA也有局限性，纤维蛋白原可与虎红染料发生非特异性结合形成假阳性【2】，急性病人早期，体内产生的抗体以IgM为主，RBPA可能检测为阴性。

试管凝集实验(SAT)又称莱特试验是1897年由Wright发明，其方法简便，特异性强，可半定量检布鲁氏菌抗体滴度，因此有很高的诊断价值，至今在临床上广泛使用。

我国布病诊断标准中当SAT滴度≥1：100可确诊是活动性布病。

布鲁氏菌外膜蛋白OMP15.6表达及免疫反应原性测定

摘要：达羊布鲁氏菌１Ｍ预测外膜蛋白Ｏ１．，索其作为诊断抗原的可能性。采用降落ＰＲ方法，表６ＭＰ５探６Ｃ从羊布鲁氏菌１Ｍ基因组ＤＡ中扩增出４３ｐ的基因片段，６Ｎ２ｂ将该片段克隆于原核表达载体ＰＥ４．，建重组ＧＸ一Ｔ２构表达载体。经ＩＴＰＧ诱导，ＤＳＰＥ检测，结果表明，在大肠杆菌中成功表达了外膜蛋白Ｏ１．。经ＷｅｔＳ —ＡＧＭＰ５６ｓ．ｅｂｏｔｇ测，ｍ．ｌｔｎ检ｉ该蛋白能与豚鼠抗布鲁氏菌阳性血清发生特异性免疫反应，为其之后的抗原性以及免疫原性研究
Ｉｔｔｒｔｏ０ｎ￣ｌｍ￣ａｄｏＩＭａｂａＰቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ０ｄｍｉ，ｉｆＢｕｌｉｉｆ．ｏｎ＝ｌｔ船ｍｒ￣】惋ｒ
Ｗａ２Ｓａｈａｎｈｏｕ，Ｌ，ＷｕＱｉｇｎｉＮａｎｍｉ
１．５６
（ＯｅａｏａｏｙｆｒＺｏｏｅ．ｈｎｇｉｕｔａＵｉｒｔ，Ｂｉｇ１０）ＭＡＫｙＬｂｒｔｒｏｏｎｓｓＣｉＡｒｌｒｌｎｖｓｙｅｉ１３ａｃｕｅｉｊｎ０９
布鲁氏菌病是世界范围内引起１２血清与抗体豚鼠抗布鲁氏菌每降一度２个循环，５℃ 时１．５０个循的人畜共患病重要病原体之－［ ” 。世阳性血清由本实验室置备；羊抗豚鼠环，２℃延伸９，３７０Ｓ共６个循环；最界部分地区在２０世纪８０年代中期ＩＧ购自北京百奥康生物技术有限公后７ｇ２℃延伸１ｎ０ｍｉ。后，我国自２０世纪９０年代后期，布司。１３４重组表达载体的构建ＰＲ．．Ｃ鲁氏菌病疫情一直呈现回升态势，是１３目的片段的ＰＲ扩增和重组产物ＢｍＨ和ＥｏＩ双酶切后，．ＣａＩｃＲ和在持续稳定下降２Ｏ年后的大幅度反表达载体的构建同样用Ｂｍ和ＥｏＩ酶切的表ａＨＩｃＲ双弹。目前国内外尚缺乏高效的布鲁氏１３１引物的设计与合成根据达载体ＰＥ一Ｔ２连接，将连接产．．ＧＸ４．菌疫苗。布鲁氏菌细菌学检测在方法ＧｅＢｎ中ＯｎａＫＭＰ５１．６对应的基因设物转化入感受态细胞Ｂ２，在带有Ｌ１上存在安全性差、时耗力和诊断通计引物，并引入Ｂｍ和ＥｏＩ耗ａＨＩｃＲ酶氨苄抗性的ＬＢ平板上，筛选阳性菌量低等缺点；利用细菌多糖抗原的血切位点。引物由上海生工生物技术有落。将该平板上的单个菌落导入含有清学检查存在交叉反应及不能鉴别限公司合成。氨苄的ＬＢ液体中，７℃ 过夜摇动３临床感染动物和疫苗免疫动物等缺上游引物５Ｇ ’ ＧＧＴＣ后，质粒酶切鉴定，接以菌液为ＣＡＣ提直ＧＣＴＡＣＴＣＡＴＧＣＧＡＣＴ３；ＣＴＴ ’下模板进行ＰＲ鉴定，陷，使动物布病防控技术临床应用致Ｃ并送公司测序。受Ｎ￣Ｎ［布鲁氏菌抗原成分复杂，游引物５ＧＧＡＴＣＣＧＴＡＴ１４重组表达载体的诱导表达将２１。 ’ ＡＴＧＣ．Ｃ ’ 有脂多糖、多糖、Ｏ外膜蛋白等，研究ＴＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧ３。测序正确的阳性菌液导入含有氨苄发现布鲁氏菌外膜蛋白具有很好的１．基因组模板ＤＡ的提取取的２．２３ＮＹＴ液体培养基，７℃培养至菌３免疫原性［１２。为此，－３本研究试图通过灭活的羊种布鲁氏菌１菌液１液的０值在０．．时加入６Ｍ５Ｄ．１５０大肠杆菌表达、鉴定蛋白的免疫反应ｕＬ，用１５ｕＬＮＥ重悬之后加入ＩＴＩＴ终浓度分别为０３ＴＰＧ，ＧＰ．ｍＭ、５原性，以便为进～步寻找诊断性抗原１５ｕＬ含２ＴｉｎＸ一０Ｔ３％ｒｏ１０ＮＥ洗１ｔ．ｍＭ、．ｍＭ，分２ｈ４ｈ６ｈ取０２０、、提供理论依据。涤。然后加入新鲜配置的５／ｍＬ的样，ｍｇ检测蛋白是否表达，并确定最佳１材料与方法溶菌酶３Ｌ０，轻弹混匀，７℃水浴表达条件。３１１菌株、载体羊布鲁氏菌１Ｍ３ｎ再加入５ｍｇ．６０ｍｉ。／蛋白酶Ｋ１５Ｗｅｔ－ｂｏｔｇ检测表达蛋ｍＬ．ｓｒｅｎｌｔｎｉ１，５℃水浴孵育过夜，最后加白的免疫原性重组的Ｏ１．５ｕＬ６ＭＰ５６蛋灭活菌株及ＰＥ．Ｔ２表达载体均ＧＸ４一由本实验室保存。入１ｍＬ的ＲＡｓ，２０ｕｅＣＮｅ－０℃保存白经１％Ｓ —ＰＥ凝胶电泳后，２ＤＳＡＧ半干转印至硝酸纤维素膜，０１％马血基金项目：现代农业（肉牛）业技术体系建设备用。产Ｃ７℃封闭１，ＢＴ洗涤３次，ＰＳｈ与专项资金；国家科技部科技支撑计划项目１３３目的基因的ＰＲ扩增反清３．．应条件为９４℃预变性３ｎ９ ℃变１０；４ｍｉ：０稀释的豚鼠抗布鲁氏菌阳性血５（０６Ａ０Ａ５０）２０ＢＤ４０－３；性４，火温度从６５退Ｓ５℃ 降到５５℃ ，清作用７ｍｉ，ＢＴ洗涤３次，１０ｎＰＳ与：通讯作者：吴清民

羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化

’ 讯作者简介，通白文涛。Ｅｍｉｂｉｔ＠ｆｍｕｅｕｃ。．ａｌａａｍ．ｄ．ｎ：ｗｏ
２５期
张
蕾，：布鲁菌外膜蛋白Ｏ２ｄ的原核表达、定及纯化等羊ｍｐ５鉴
Ｐｌ５‘一ＧＡ：ＧＧＧＡＴＣＣＧＧＡＡ他ＡＣＧ１ＡＡＡＡＡ．］ＴＣ
亚公司。
１２引物．
国家自然科学基金（３９１８）助００２１资
第一作者简介：张蕾，士研究生，－ａ：ｘ１７０博Ｅｍｉｚ３９＠ｆｍｕｌ０ｉ．ｎ
ｅｕｃｄ．ｎｏ
根据Ｇｎａｋ中序列，计羊布鲁菌Ｏｐ５ｅＢｎ设ｍ２ｄ基因编码区上下游引物（分别含有ＢｍＨＩ和ＸｏａｈＩ酶切位点）由上海博亚生物工程公司合成：，
性抗体，且可用于布鲁菌病的检测］。布鲁菌外膜蛋白特别是Ｏ２／ｍ３ｍｐ５Ｏｐ１家族蛋白，常用于作为潜在的保护抗原或者诊断抗原。近期研究发现，
２１００年６月１日收到０军队科技攻关项目（６Ｏ１、０Ｇ９）
第ｌ０卷第２５期２１００年９月１７ —８５２１）５６４ —５６１１１（００２ —１６０
科
学
技
术
与
工
程
Ｖｏ．０Ｎｏ２Ｓｐ．０１１１．５ｅ２０
ＳｉｎｃｃｎｌｇｎｇｎｅｒｎｃｅｅＴｅｈｏｏｙａｄＥｎｉｅｉｇ

布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察

布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察高永辉;张松乐;曾政;罗德炎;张良艳;董梅;王希良【期刊名称】《中华地方病学杂志》【年(卷),期】2006(025)001【摘要】目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率.方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建的核酸疫苗及上述6条片段转入pET32a(+)后诱导表达的的重组蛋白免疫小鼠,3次免疫后进行攻毒实验,对其免疫保护效率进行初步观察.结果L7/L12和BLS的重组蛋白疫苗和核酸疫苗都产生了非常显著的保护作用,P39的核酸疫苗、IF3和BCSP31的重组蛋白疫苗也产生了非常显著的保护作用,其中L7/L12核酸疫苗的保护效率最高.结论初步认为布鲁杆菌的优势抗原表位所获得的基因工程疫苗可产生一定的抗布鲁杆菌作用,可作为未来布鲁杆菌新型疫苗的候选者,有进一步研究的价值.【总页数】4页(P46-49)【作者】高永辉;张松乐;曾政;罗德炎;张良艳;董梅;王希良【作者单位】100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的免疫保护[J], 石星明;王云峰;王玫;刘胜旺;童光志;徐灵龙;贺笋2.猪口蹄疫O型基因工程疫苗免疫保护试验 [J], 赵利平;刘玉梅;刘国英;郑兆鑫3.鸡传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95I株病毒攻击的免疫保护 [J], 王云峰;石星明;王玫;刘胜旺;童光志;何来;贺笋;崔红玉;李一经4.鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LT95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护 [J], 石星明;王玫;王云峰;杨桂花;孙鹏;李继松;曾伟伟;刘胜旺5.PEDV基因工程亚单位疫苗对仔猪的免疫保护试验 [J], 洪树彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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ｎｏｏｃｌｍｅｒ．ＴｈｉｔｄｙａｅｔｙｏｒｅｅｏｌｇｉａｍｏｙｓｓｕｐｖｓｈｅｗａｆｄｖｌｐｍｅｔｎｐｏｏｉｆｅＢｒｅｌｔｒｅｅｎａｄｒｍｔｏｎｏｎｗｕｃｌａａｇｔｄ
Ｂｕｒｅｌｕｅｅｂａｏｅｎｃｌａｏｔｒｍｍｒｎｅｐｒｔｉｓ
ＦＵｉｇｌ，ＤＯＮＧｉｇｍｅ，ＷＡＮＧｏＪｎ —ｉＢｎ — ｉＲｕ，ＷＡＮＧｉ— ｉＪａｘｎ
（ｌｇｆＩｆｒｔｎＡｎｍａｃｅｃ＆Ｔｅｈｏｏｙ，ＩＣｏｌｅｏｎｏｍａｉｉｌＳｉｎｅｅｏｃｎｌｇｍｍｕｏｏｙＬｂｒｔｒ，ｎｌｇａｏａｏｙ
１材料与方法
主产生的免疫应答以细胞免疫为主，体液免疫为辅。
收稿日期：０００ — ２２１－５１
基金项目：国家 “ 十一五” 技支撑计划项目（０６ＡＤ０Ａ１）科２０Ｂ４０；河北省“ 一五 ” 技支撑项目（５４４１；北省 “ 万吨奶工十科０２０２Ｄ）河千
ｇｙｏｙａｉｎｍｏｉｉｄｌｃｓｌｔｄｆｅｗｉ — ｍａｎｐｒｎｓｌｈｎｌｏｈｏｙｎｔ，ｔｅｅｌｉｅｗｉｈａｊｖｎ．ｏｔｈＤ－ｎｏｙａｏｙ— ｅｙｉｔｉｃａａｅｈｎｍｕｓｆｄｐｓｉｔｄｕａｔＢａｅｎｃｍｐｅｅｙｒｎｏｚｄｅｐｒｍｅｔ，ＢｓｄｏｏｌｔｌａｄｍｉｅｘｅｉｎｓＡＬＢ／ｃｒｎｅｔｄ，ｎｈｎｓｍｐｅｆｓｒｍｒｃｍｉｅｗｅｅｉｊｃｅａｄｔｅａｌｓｏｅｕｗｅｅ
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆＶｅｅｉａｙＭｅｉｎｈｎｓｏｒａｏｔｒｒｄｃｅｎｉ
中国兽医杂志２１年（４０１第７卷）４期第
布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测
付景丽，董炳梅，王若，王家鑫
ａｔｂｄＳｎｔｓｇｉｉａｔ（ｎｉｏｙｉｏｉｎｆｎＰ＞００）ｃ．５．Ｅｘｅｉｎａａｃｎｎｕｅｅｌｌｒｉｍｕｅｒｓｏｓｔｍｍｕｐｒｍｅｔｌｃｉｅｉｄｃｄｃｌａｖｕｍｎｅｐｎｅｗｉｈｉ－
（北农业大学动物科技学院免疫学实验室，北保定０１０）河河７００摘要：研制安全、效、型靶向化布鲁菌外膜蛋白疫苗，用去污剂连续抽提与电洗脱法分离纯化出布鲁菌外膜蛋为有新采
白，进行ａＩ甘露吡喃异硫氰酸苯酯糖基修饰、剂乳化。依据统计学中完全随机实验设计试验，疫ＢＬ／小鼠，集并 —）＿佐免Ａ．ｃＢ收
ｃｌｅｔｄａｄｉｆｒｎｔｉｅｆｒｈｄｅｅｍｉｔｏｎｏｌｃｅｔｆｅｅｔｍｓｏｔｅｔｒｎａｉｏｆｏｔＩｂｈｇＧａＩｎｄＦＮ一ｌｖｌｗｉｈｅｅｓｔＥＬＩＳＡ．Ｒｅｕｔｓｌｓｓｏｗｅｈａｈｅｔｒｅｏｔｉｆ３７５ｋＤｎ．ｈｄｔｔｔａｇｔｐｒｅｎｓｏ．ａｄ４７２ｋＤｒｓａｅｎｄｇｙｃｓｌｔｄｓｃｅｓｕｌｙ．Ａｆｅａｅｉｏｌｔｄａｌｏｙａｅｕｃｓｆｌｔｒ
ＰｏＰｒｒｔｏｃａｅ１．ｒ．ｕｅｐｏｅｍｉＧｒｄ２５／自Ａｍｒｓｏｓ９６购ｅｃ，ｏＤ一露吡喃异硫氰酸苯酯、ｉｎ一０、ＭＳｃ甘 — ＴｒｏＸ１０ＤｔＯ、４甲基吗啉购自Ｓｇ一ｉｍａ公司，，，０１一甲基十２６１，４四五烷购自Ａｃｏ，ｙｏｙｈｃｅｇｈｔ、ｒｓＬｓｚｍｅＣｉｎＥｇＷｉ两ｋｅ性洗涤剂３１ —４购自ＣｌｉｃｅＲＭＩ１４ａｂｏｈｍ，Ｐ一６０购自
势，差异不显著（＞Ｏ０）但Ｐ．５。表明试验用疫苗能激发机体的细胞免疫应答，产生了免疫记忆。本研究为研制布鲁菌新型且
靶向化疫苗的研发和推广提供了研究依据。关键词：布鲁菌Ｉ蛋白；基化；剂；苗夕膜糖佐疫
ｉｍｍｕｉｉｇｍｉｅｗｉｈｎｎｐｒｉｌｓａｊｖｎｍｕｓｆｄｖｃｉｅｈｅｅｆＩＮ一ｓｉｃｅｓｄｇａｕｌｎｚｎｃｔａｏａｔｃｅｄｕａｔｅｌｉｅａｃｎ，ｔｅｌｖｌＦ７ｗａｒａｅｒｄａｌｉｏｎｙ
ｖｃｉ．ａｃｎｅ
ＫｅｒｓＢｒｃｌａ；ｕｅｅｂａｅｐｏｅｎｌｃｓｌｔｏｙｗｏｄ：ｕｅｌｏｔｒｍｍｒｎｒｔｉ；ｇｙｏｙａｉｎ
ＣｏｒｓｏｄｎｕｈｒＷＡＮｉ— ｉｒｅｐｎｉｇａｔｏ：Ｊａｘｎ
ＡｇｉｕｔｒｌＵｎｖｒｉｆＨｅｅ，Ｂｏｉｇ０１０ｒｃｌａｉｅｓｔｏｂｉａｄｎ７００，Ｃｈｎ）ｕｙｉａ
ＡｂｔａｔＩｒｅｏｄｓｇａｅｅｆｃｉｅａｄｎｖ１ｔｒｅｅｕｅｌｕｅｅｂａｅｐｏｅｎｖｃｓｒｃ：ｎｏｄｒｔｅｉｎｓｆ，ｆｅｔｖｎｏｅａｇｔｄＢｒｃｌａｏｔｒｍｍｒｎｒｔｉａ — ｃｎ，ｃｎｅｕｉｅｅｔａｔｎｗｉｈｅａｉａｏｎｌｃｒｃｅｕｉｎｗａｍｐｏｅｏｉｏａｅｔｅｅｐｏｅｎ，ｉｅｏｓｃｔｘｒｃｉｔｒｄｃｔｒａｄｅｅｔｉｌｔｏｓｅｌｙｄｔｓｌｔｈｓｒｔｉｓｖｏ
中图分类号：８２６４￥５．１
文献标识码：Ａ
文章编号：５９６０（０１０—０５００２ —０５２１）４０１—３
Ｉｍｍｕｏｓａｏａｇｔｇｖｃｉｅｃｎａｅｔｌｃｓｌｔｎｏｎａｓｙｆｒｔｒｅｉａｃｎｏｊｇｔｄｗｉｇｙｏｙａｉｆｎｕｈｏ
不同时间点血液样品，ＬＳ法检测血清中ＩＧ和ＩＮ７含量。结果显示分离纯化出３．Ｄ与４．Ｄ的目的蛋白并成ＥＩＡｇＦ一７５ｋ７２ｋ功糖基化修饰；米颗粒佐剂乳化后的试验用疫苗免疫小鼠，清ＩＮ水平呈显著升高趋势（纳血Ｆ一Ｐ＜Ｏ０）抗体水平略显优．５；
１１材料．
ＢＢｃ鼠（ＡＬ／小体重２￣２，性，０５ｇ雄合
１６
中国兽医杂志２１年（４卷）４期０１第７第
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆｔｒａｙＭｅｉｎｈｎｓｏｒａｏｅｉｒｄｃｅＶｅｎｉ
格证编号９４７）自河北省实验动物中心，剂：０１３购佐ＭｏｔｎｄＭＳ２１ｎａｉｅＩ５ＣＶＧ由法国赛比克公司惠赠，
ｉｅｕ（ｎｓｒｍＰ￣００）Ｅｘｅｉｅｔｌｖｃｉｅｈｓａｌｔｅａｖｎａｅｉｎｉｏｙｌｖｌｕｈｉｆｒｎｅｏ．５．ｐｒｎａａｃｎａｉｌｄａｔｇｎａｔｂｄｅｅ，ｂｔｔｅｄｆｅｅｃｆｍｔ
程 ” 撑技术研究（７２１６）支０２７４２作者简介：景丽（９０）女，士生，要从事抗感染免疫研付１８一，硕主
究， — ｉｊｇｉ＠ｙｈｏｃＥｍａｌｉｌｕａｏ．ｎ：ｎｆ通讯作者：家鑫，— ｉ王Ｅｍａｌ：ｗａｇｉｉ６＠ｙｈｏｃｒｎｊｘｎ８ａａｏ．ｏｎ
只，其他组均为１ｇ只；免疫次数：次；疫间５／两免隔为两周。１５１试验取材（）免后４７１、４ｄ二免．．１一、、Ｏ１，
ＩｖｔｏｅＣｒｏａｉｎ，ｏｓＦ７ＱｕｎｉｉｅｎｉｒｇｎｏｐｒｔｏＭｕｅＩＮ一ａｔｋｎ
１４蛋白抗原与佐剂乳化成试验用疫苗。．
１５免疫接种试验采取完全随机资料的方差分．析比较如下种类的免疫效果：Ｏ只６８周龄６～
布鲁菌最主要毒力特征是在吞噬细胞内生存和