血凝抑制试验名词解释
血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)资料
2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
1.3 原理
血凝的原理因不同的病毒而有所不同,如:
痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本身，而 是痘病毒的产物--类脂蛋白的作用。
流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细 胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。
2、血凝抑制试验(HI)
2.1定义
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的 量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的 受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时 红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制 (hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血 凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。
三、实验步骤
（以禽流感为例，参照禽流感防治技术规范）
1 阿氏（Alsevers）液配制 量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸
血凝及血凝抑制试验的应用
血凝及血凝抑制试验的应用血凝现象是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程。
这种现象在医学领域具有重要意义，可用于血液凝固机制的研究、血液疾病和血栓性疾病的检测和诊断等。
而血凝抑制试验则是一种通过检测血凝因子的抗凝活性，评估血液抗凝系统功能的一种方法。
血凝现象在医学中应用广泛。
血凝机制的研究可以帮助人们更好地了解血液凝固的生理过程，从而对止血和血栓性疾病的发病机制有更深入的认识。
血凝检测在医学诊断中具有重要价值，例如在手术前对患者的凝血功能进行评估，以避免手术中大出血的风险。
血液疾病如凝血障碍、血小板减少等以及血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等均可通过血凝检测进行诊断和病情监测。
血凝抑制试验是一种检测血凝因子抗凝活性的方法。
该方法的基本原理是当血液中存在某种物质（如抗体）时，会抑制血凝因子的活性，从而阻止血液凝固。
通过检测这种物质的含量，可以评估血液抗凝系统的功能。
血凝抑制试验在临床上应用广泛，可用于检测和诊断各种凝血性疾病和免疫系统疾病，如血友病、系统性红斑狼疮等。
血凝及血凝抑制试验在医学领域中具有广泛的应用价值。
对于医生来说，了解血凝现象和血凝抑制试验的原理和应用，可以更准确地诊断和治疗各种血液疾病和血栓性疾病。
随着科学技术的不断发展，血凝检测技术和方法的不断完善和提高，其在医学领域的应用也将越来越广泛和重要。
本文将探讨定向遗忘中提取抑制的机制，并分析其成功提取引起抑制的案例。
简要介绍定向遗忘和提取抑制的概念，然后介绍基础知识点，包括抑制遗忘和提取抑制的作用。
接下来，详细介绍定向遗忘中提取抑制的机制，最后分析一个实际案例，阐述该机制的成功应用。
当我们遇到一个新概念或事物时，通常需要对其进行记忆。
然而，记忆并不总是准确无误的，有时甚至会遗忘某些信息。
定向遗忘便是一种有目的地遗忘特定信息的记忆过程。
与此当我们试图回忆某些信息时，也会受到抑制的影响，导致信息无法成功提取。
提取抑制是一种自我保护机制，可以避免不必要的回忆，从而减轻大脑的负担。
血凝HA和血凝抑制试验HI
HA值可用于评估血液凝固功能和血栓形成风险
试验方法
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试验材料：抗凝剂、试管、离心机、凝血因子活性检测试剂等。
试验原理：通过观察血液凝固过程，检测血浆中凝血因子的活性。
试验步骤：采集血液样本，加入抗凝剂，离心分离血浆，加入凝血因子活性检测试剂，观察血液凝固时间并记录结果。
不同点：血凝HA试验只能判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，而血凝抑制试验HI不仅可以判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，还可以检测抗凝物质的具体类型和浓度。
试验方法的比较
血凝HA试验：通过观察血凝块的形成和溶解过程，检测抗凝物质的存在和含量
操作简便性：血凝HA试验操作相对简单，而血凝抑制试验HI需要更多的样本和操作步骤
参考值：血凝HA试验结果的参考值一般为阴性或阳性，具体参考值因不同病毒而异。
临床意义
用于诊断血栓栓塞性疾病
评估血液高凝状态的风险
辅助诊断易栓症等血栓前状态
监测抗凝治疗的效果
02
血凝抑制试验HI
试验原理
血凝抑制试验HI是一种检测病毒抗体的方法，通过与特异性抗体结合，抑制病毒的凝集活性，从而检测出病毒抗体。
临床意义
用于诊断疾病：血凝抑制试验HI可以用于诊断多种疾病，如流感、麻疹等病毒感染性疾病，以及疟疾、血友病等出血性疾病。
监测治疗效果：通过血凝抑制试验HI，可以监测治疗效果，评估病情进展和预后。
指导治疗：血凝抑制试验HI的结果可以指导治疗，例如在输血时，通过血凝抑制试验HI可以确定最佳的输血量。
流行病学调查：血凝抑制试验HI还可以用于流行病学调查，了解疾病的流行趋势和分布情况。
试验意义：用于检测凝血因子活性，评估血液凝固功能，协助诊断凝血障碍相关疾病。
血凝抑制试验
影响禽流感血凝抑制试验因素的分析及解决方法摘要：在试验过程中，存在很多的因素会直接影响禽流感血凝抑制试验，从而导致试验结果不正确等现象出现，禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验（HI）。
基层工作中常用于新城疫、禽流感等免疫抗体的检测，辅助诊断病毒性疾病等，此方法操作简便、快速、准确、实用，但在实践中也常常由于某些因素的影响，从而使试验结果不精确，有时甚至无法判定结果。
1血凝试验原理和方法血凝(直接血凝)反应(HA)：利用病毒或病毒的血凝素，能选择性凝集动物红细胞及病毒浓度与红细胞凝集程度呈正相关的特性，采集敏感的动物红细胞配制成1%红细胞悬液与待测定的病毒液在微量血凝板上进行红细胞凝集实验，根据红细胞的凝集程度间接测定病毒中的病毒浓度。
方法是用鸡红细胞与标准抗原作用，检测出标准抗原血凝单位,为血凝抑制试验作准备。
2影响血凝试验的主要因素2.1被检血清腐败变性被检血清腐败变性严重影响免疫抗体检测。
因此，血样采集后要及时分离血清，分离后及时测定或放臵在4℃冰箱内保存，要力求新鲜，如暂时不测定可冷冻保存。
血清使用前要充分摇匀。
2.2不同来源、不同浓度的红细胞不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大，所以红细胞来源一定要相同。
一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞，将3只以上公鸡红细胞混合在一起。
也可由1只公鸡来提供红细胞，但必须经多次试验证明是可行的。
有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。
但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定，效价差异很大。
不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。
2.3病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时浓度高低不一，会人为造成误差。
因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。
2.4 4个血凝单位(HAU)抗原配制不准确4个HAU抗原要现用现配，混悬液要混匀，配好的抗原室温下放臵不得超过4个小时，不可反复冻融。
1---血凝和血凝抑制实验
做好个人防护
注意事项
7、环境温度一定要重视，一般要求在室温下20-25°进行， 如果低于15°反应结果就出现的慢；如果高于30°结果会出现的 快；如果低于4°会发生红细胞自凝现在。因此，观察时间可以 适当根据反应情况缩短，所以实验室要装有空调和温度计。
8、微量反应版如果是有机玻璃的一定要清洗干净，孔底 要透亮，无磨损毛糙无划痕和有残留物。不干净的反应板在试验 中会出现自凝现象。使用正规厂家生产的一次性微量板就可杜绝 这种情况。
检测质量控制措施
标准、 规范
注 意
优质的试剂
充分准备！！！
校准的仪器
正确的操作
注意事项
1、四个单位抗原，红细胞悬液使用过程中要轻轻摇匀；
2、移液器的吸头在反复洗吹时要插入液面以下但不可过深， 避免使用中速度过快产生过多气泡造成移液量减少，每孔混匀完毕 要将吸头内液体排尽。
注意事项
3、移液器使用时要用力均匀不可过力，吸头要安装牢固，防止 使用过程中漏气或者掉落。吸头尽量使用一次性的，若反复使用要清 洗干净，最好用超声波清洗机清洗，高压灭菌后使用，如果发现吸头 堵住不能吸到液体或者弯曲及时淘汰。 4、移液器在滴加液体，特别是在加抗原和红细胞悬液时一定不要 深入液面中造成交叉污染，影响浓度造成结果较大误差，可以尝试悬 空垂直加样。
1、HA原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地 使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的 现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应（红细胞 不流淌）。
病 毒 颗 粒
红 细 胞
2、HI原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这 种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细 胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑 制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
血凝抑制实验_实验报告
一、实验目的1. 了解血凝抑制实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握血凝抑制实验在禽流感病毒检测中的应用。
3. 学会通过血凝抑制实验结果判断禽流感病毒的感染情况。
二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测病毒感染的方法，通过检测血清中病毒特异性抗体的存在和效价，来判断动物是否感染过某种病毒。
在禽流感病毒检测中，该实验主要用于检测血清中的禽流感病毒抗体水平，从而判断禽流感病毒感染状态。
实验原理：当禽流感病毒与含有抗体的血清混合后，病毒表面的血凝素（HA）与抗体结合，导致病毒颗粒聚集，血凝素活性降低，从而使红细胞不发生凝集。
通过观察红细胞是否发生凝集，可以判断血清中是否含有禽流感病毒抗体。
三、实验材料1. 禽流感病毒抗原2. 1%鸡红细胞悬液3. 0.5%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）4. PBS缓冲液5. 96孔V型酶标板6. 微量移液器7. 振荡器8. 恒温培养箱9. 移液器吸头四、实验方法1. 准备工作（1）将禽流感病毒抗原用PBS缓冲液稀释至适当浓度。
（2）将鸡红细胞悬液用PBS缓冲液稀释至1%。
（3）将PVP用PBS缓冲液溶解，浓度为0.5%。
2. 血凝抑制实验（1）取96孔V型酶标板，每孔加入25μL PBS缓冲液。
（2）在第一排第1孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后，从第1孔吸取25μL加入第2孔，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μL。
（3）向每孔加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后置于振荡器上振荡10秒。
（4）将酶标板置于室温（20-25℃）下静置30分钟。
（5）观察红细胞是否发生凝集，记录结果。
3. 结果判定（1）完全抑制：红细胞不发生凝集。
（2）部分抑制：红细胞发生凝集，但凝集程度较轻。
（3）未抑制：红细胞发生凝集，凝集程度明显。
五、实验结果与分析1. 结果记录根据实验结果，记录每孔红细胞凝集情况，并计算抑制率。
血凝与血凝抑制试验(附思考题及答案)
五、结果判定
• 血凝试验：根据血凝价稀释病毒悬液 • 血凝抑制试验：血凝抑制试验效价：出现完全血凝抑制时的最高
血清稀释度。
Байду номын сангаас
六、思考题
• 1、血凝价判定偏高或者偏低对血凝抑制价的判定结果有什么 影响？
• 若血凝价判定偏高，即稀释的倍数偏高，使得病毒浓度未达 到要求的4个血凝单位，则需要中和病毒的血清更少，即血清 的稀释倍数更大，因此结果会偏高。
将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液备 用 • 0·85%生理盐水 • 鸡血清
四、实验步骤
• （一）血凝试验 • 1～12孔加入生理盐水 • 第一孔加入50ul病毒悬液，倍比稀释至第11孔 • 1～12孔加入1%的红细胞50ul • 震荡后置于37度恒温箱25～30min后，观察结果 • 病毒的血凝价？ • 病毒的血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
血凝和血凝抑制试验
安尧o
一、实验目的
• 1、掌握病毒血凝与血凝抑制试验的原理。 • 2、掌握试验的设计、操作步骤和结果的判定。
二、实验原理
• 血凝试验（HA）：
• 血凝抑制试验（HI）：
• 某些病毒能够使动物的红细胞发 生凝集现象。
• 红细胞凝集的本质是抗原-抗体 反应，红细胞表面存在凝集原
• 在病毒悬液中加入特异性抗体
• 2、血凝和血凝抑制试验的应用？ • 血凝试验可以检测某种病毒是否具有凝集红细胞的能力，测
定病毒的血凝价、滴度，血凝抑制试验可以检测抗体是否有 效，抗体的效价。
请在此处添加标题
• （二）血凝抑制试验 • 1～11孔加入25ul生理盐水 • 第1孔加待检血清25ul，倍比稀释至第10孔 • 1～11孔加入25ul4个血凝单位的病毒悬液 • 1～12孔加入1%红细胞50ul • 震荡后置37度恒温箱25~30min观察结果。 • 红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点
血凝和血凝抑制试验
血清
生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl / /
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RBC RBC
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 5/0μl / 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
血凝和血凝抑制.
1%鸡红 25 25 25 25 25 25
细胞
结果预测 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++
7 8 9 10 H 11(+) 12（-)
128 256 、、 、、 弃
A
25 25 25 25 x
25
25 25 25 25 25血 x 凝素
25 25 25 25 25 25
25 25 25 25 25 25
血凝抑制试验步骤
1.取96孔V型反应板1块置于水平实验台上， 在第1排1-10孔内加入25ul PBS缓冲液，第11孔不加。
第12孔加25ul PBS缓冲液。 2.在第1孔内加入被检血清25ul，混匀后吸出25ul加入 第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推至 第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。 3.在1-12孔内均加入“四价”血凝素25ul，震荡后，室 温静止作用40min。 4.在1-12 孔内均加入1%的鸡红细胞悬液25ul，震荡， 室温30min。 5.观测结果，记录实验数据．
3、血凝试验中为什么要加补充液？ 4、为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？ 5、血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？
孔号 1 2 3 4 5 6
稀释度 2 4 8
16 32 64
PBS 25 25 25 25 25 25 血凝素 25 25 25 25 25 25
PBS
25 25 25 25 25 25
实验材料
器材：96孔V型微量反应板、微量移液器、枪头 试剂：1%鸡红细胞(采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，
血凝和血凝抑制试验
3. 4.
பைடு நூலகம்
0.85%生理盐水。 生理盐水。 生理盐水 被检血清，采自被检鸡的健康血清。 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、操作步骤
（一）血凝试验（HA） 血凝试验（ ）
1. 在血凝板第一排的 在血凝板第一排的1~12孔加入 孔加入50µl生理盐水。 生理盐水。 孔加入 生理盐水 2. 在第1孔中加入 病毒抗原， 在第 孔中加入50µl病毒抗原，反复吸取混匀 孔中加入 病毒抗原 后吸50µl到第 孔，如此倍比稀释直到第 孔， 到第2孔 如此倍比稀释直到第10孔 倍比稀释直到第 后吸 到第 混匀后弃50µl； 最后两孔 （ 11、 12） 为红细 ； 最后两孔（ 、 ） 混匀后弃 胞对照。 胞对照。
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25
弃 50µl /
50 / / 50
25 50
注： 11孔为病毒对照 应该完全凝集， 12孔为细胞对照 孔为病毒对照， 孔为细胞对照， 1) 第 11 孔为病毒对照 ， 应该完全凝集 ， 第 12 孔为细胞对照 ， 应该完全沉积到孔底，只有当对照成立时试验结果方有效。 应该完全沉积到孔底 ， 只有当对照成立时试验结果方有效。 以红细胞100 凝集的稀释度为判定终点。 100% 2) 以红细胞 100% 凝集的稀释度为判定终点 。 血凝抑制滴度大 于等于1 为阳性，小于1 为阴性，等于2 为可疑。 于等于1：24为阳性，小于1：22为阴性，等于23为可疑。
病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开， 2 ） 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开 ， 血凝素呈游离状态，例如天花 牛痘、 天花、 血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 3 ） 脑炎病毒 、 口蹄疫病毒等 ， 凝集红细胞的条 脑炎病毒、 口蹄疫病毒等， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 同时还要掌握反应的pH和温度等。 同时还要掌握反应的pH和温度等。 pH和温度等