医学免疫学PPT：免疫学实验技术及其应用
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医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
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3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
免疫学应用医学PPT课件
17
抗原抗体反应类型
反应类型
中和反应
实验技术
病毒中和试验
结果判断
检测病毒感染性
毒素中和试验
标记免疫反应 荧光免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 金免疫技术
检测外毒素毒性
检测荧光现象 检测放射性强度 检测酶底物显色 检测发光强度 检测金颗粒沉淀
18
抗原抗体反应类型
标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光 物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测 标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 (4)测定沉淀环直径 (5)在标准曲线上查找相应 抗原浓度
23
沉淀反应
双向琼脂扩散
(1)抗原抗体双向自由扩散 (2)24小时出结果 (3)呈现沉淀线或弧
24
免疫酶技术
25
免疫荧光技术
26
金免疫标记技术
手持端 兔抗鼠IgG 鼠抗HCG单抗
金标鼠抗HCG单抗
尿液浸湿标志线
斑点金免疫层析试验检测HCG
27
金免疫标记技术
阳性
弱阳性
阴性
无效
质控线 测试线
尿样
斑点金免疫层析试验检测HCG
28
免疫细胞检测
非特异性免疫细胞检测 中性粒细胞运动、吞噬和杀菌功能检测 巨噬细胞检测 NK细胞检测 特异性免疫细胞检测 T细胞亚群、数量、功能检测 B细胞功能检测
4
抗原、抗体诊断技术
凝集反应：直接、间接（正向、反向、抑制）、协同
体 外 抗 原 － 抗 体 诊 断 技 术
血清学试验
沉淀反应：液相（比浊技术）、凝胶（扩散、电泳） 补体参与的反应：溶血试验、补体结合试验
抗原抗体反应类型
反应类型
中和反应
实验技术
病毒中和试验
结果判断
检测病毒感染性
毒素中和试验
标记免疫反应 荧光免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 金免疫技术
检测外毒素毒性
检测荧光现象 检测放射性强度 检测酶底物显色 检测发光强度 检测金颗粒沉淀
18
抗原抗体反应类型
标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光 物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测 标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 (4)测定沉淀环直径 (5)在标准曲线上查找相应 抗原浓度
23
沉淀反应
双向琼脂扩散
(1)抗原抗体双向自由扩散 (2)24小时出结果 (3)呈现沉淀线或弧
24
免疫酶技术
25
免疫荧光技术
26
金免疫标记技术
手持端 兔抗鼠IgG 鼠抗HCG单抗
金标鼠抗HCG单抗
尿液浸湿标志线
斑点金免疫层析试验检测HCG
27
金免疫标记技术
阳性
弱阳性
阴性
无效
质控线 测试线
尿样
斑点金免疫层析试验检测HCG
28
免疫细胞检测
非特异性免疫细胞检测 中性粒细胞运动、吞噬和杀菌功能检测 巨噬细胞检测 NK细胞检测 特异性免疫细胞检测 T细胞亚群、数量、功能检测 B细胞功能检测
4
抗原、抗体诊断技术
凝集反应：直接、间接（正向、反向、抑制）、协同
体 外 抗 原 － 抗 体 诊 断 技 术
血清学试验
沉淀反应：液相（比浊技术）、凝胶（扩散、电泳） 补体参与的反应：溶血试验、补体结合试验
医学免疫学实验课件
02
实验二：免疫细胞的分离与培 养
Chapter
免疫细胞的分离方法
将细胞悬液种植在特定培养皿上 ，只有贴壁生长的细胞能够继续 繁殖，常用的有T细胞分离培养法 和B细胞分离培养法。
利用荧光标记抗体和细胞表面抗 原的特异性结合，通过荧光检测 系统对细胞进行快速分选和计数 。
密度梯度离心法 贴壁筛选法 磁珠分离法 流式细胞术
培养条件
适宜的温度、湿度、气体环境等 ，以保证细胞的正常生长和代谢 。
01 02 03 04
生长因子
刺激细胞生长和分裂的蛋白质， 如白细胞介素、集落刺激因子等 。
传代培养
当细胞密度达到一定水平时，需 要进行传代培养，即将细胞分散 并重新种植在新的培养器皿中。
免疫细胞的功能检测
增殖能力检测
通过检测细胞分裂的速率来评估细胞的增殖能力，常用方 法有MTT法和BrdU法。
抗原提呈细胞（APC）表面的共刺激 分子与T细胞表面的受体结合，提供 必要的共刺激信号，促使T细胞活化 。
细胞因子作用
如白介素（IL）、干扰素（IFN）、肿 瘤坏死因子（TNF）等细胞因子，可 与免疫细胞表面的受体结合，促进细 胞活化。
免疫细胞的分化过程
初始T细胞分化
在抗原刺激和细胞因子的作用下，初始T细胞分化为不同 亚型的效应T细胞，如Th1、Th2、Th17等。
04
血清的收集和分离是在免疫反应达到高峰后进行的，通常采用离心、 沉淀等方法将免疫血清与其它成分分离，得到纯净的免疫血清。
免疫血清的效价测定
01 02 03 04
效价测定是评估免疫血清免疫效果的重要手段，通常采用抗原-抗体 反应的方法进行测定。
效价测定的方法包括间接凝集试验、间接酶联免疫吸附试验、中和试 验等多种，根据抗原和抗体特性选择合适的方法。
免疫学在医学中的应用医学免疫学课件
03 通过对免疫系统的深入研究，可以发现新的免疫 治疗方法和药物，为临床治疗提供更多的选择和 手段。
免疫学在临床医学研究中的应用
免疫学在临床医学研究中具有重要的作 用，为诊断、治疗和预防疾病提供了重 要的理论基础和实践指导。
疫苗研发是利用免疫学原理制备能够预 防和控制传染性疾病的疫苗，是控制传 染病的重要手段。
3
免疫规划
通过国家或地区性的免疫规划项目，对特定人群 进行免费接种，控制和预防传染性疾病的流行。
免疫学在临床医学研究中的
04
应用
免疫学在基础医学研究中的应用
01 免疫学在基础医学研究中有着广泛的应用，为临 床治疗和预防疾病提供了重要的理论基础。
02 免疫学在基础医学研究中，主要研究免疫系统的 组成、功能和调控机制，以及各种免疫相关疾病 的发病机制和防治方法。
面抗原的表达水平。
酶联免疫吸附试验
将抗原或抗体与酶结合，利用酶的 催化作用将抗原或抗体与样本中的 相应抗体或抗原结合，通过显色反 应进行定性或定量分析。
免疫印迹技术
通过分离样品中的蛋白质，然后利 用特异性抗体进行检测，以确定目 标蛋白的存在、组织和细胞中特异 表达的蛋白。
免疫学在感染性疾病诊断中的应用
免疫诊断是将免疫学的技术方法 应用于诊断领域，为疾病的诊断 和鉴别诊断提供准确依据。
05
免疫学研究的未来发展
免疫学研究的热点问题
免疫调节机制ຫໍສະໝຸດ 01深入研究免疫系统的调节机制，包括免疫细胞的相互作用、信
号转导和基因调控等，以揭示免疫应答的精细调控过程。
免疫与疾病的关系
02
进一步探究免疫系统与各种疾病的发生、发展的关系，为疾病
免疫治疗是利用免疫调节机制来治疗疾 病的一种方法，包括抗体治疗、细胞免 疫治疗等。
免疫学在临床医学研究中的应用
免疫学在临床医学研究中具有重要的作 用，为诊断、治疗和预防疾病提供了重 要的理论基础和实践指导。
疫苗研发是利用免疫学原理制备能够预 防和控制传染性疾病的疫苗，是控制传 染病的重要手段。
3
免疫规划
通过国家或地区性的免疫规划项目，对特定人群 进行免费接种，控制和预防传染性疾病的流行。
免疫学在临床医学研究中的
04
应用
免疫学在基础医学研究中的应用
01 免疫学在基础医学研究中有着广泛的应用，为临 床治疗和预防疾病提供了重要的理论基础。
02 免疫学在基础医学研究中，主要研究免疫系统的 组成、功能和调控机制，以及各种免疫相关疾病 的发病机制和防治方法。
面抗原的表达水平。
酶联免疫吸附试验
将抗原或抗体与酶结合，利用酶的 催化作用将抗原或抗体与样本中的 相应抗体或抗原结合，通过显色反 应进行定性或定量分析。
免疫印迹技术
通过分离样品中的蛋白质，然后利 用特异性抗体进行检测，以确定目 标蛋白的存在、组织和细胞中特异 表达的蛋白。
免疫学在感染性疾病诊断中的应用
免疫诊断是将免疫学的技术方法 应用于诊断领域，为疾病的诊断 和鉴别诊断提供准确依据。
05
免疫学研究的未来发展
免疫学研究的热点问题
免疫调节机制ຫໍສະໝຸດ 01深入研究免疫系统的调节机制，包括免疫细胞的相互作用、信
号转导和基因调控等，以揭示免疫应答的精细调控过程。
免疫与疾病的关系
02
进一步探究免疫系统与各种疾病的发生、发展的关系，为疾病
免疫治疗是利用免疫调节机制来治疗疾 病的一种方法，包括抗体治疗、细胞免 疫治疗等。
免疫学应用(课件)
免疫学应用
免疫预防：利用各 种生物或非生物制 剂来建立机体的免 疫应答，以达到预 防疾病的目的。
用免疫学原理， 防病、治病所 采取的措施
免疫治疗：应用免 疫学原理，针对疾 病的发生机制，增 强机体的免疫功能， 以达到治疗目的所 采取的措施。
特
自然
自然主动免疫：自然感染
异
免疫
自然被动免疫： IgG通过胎盘、初乳SIgA
较好，维持3-5年甚至更长时间
较小,但有毒力回复突变
3.人工被动免疫生物制品
✓抗毒素：外/类毒素→马→Ab ✓人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白 ✓细胞因子
✓单抗/基因工程抗体
人工被动免疫注意事项
提示
✓注意防止超敏反应 ✓早期和足量 ✓不滥用丙球
被动免疫不能激活免疫系 统，故不能产生记忆反应， 其保护作用是短暂的。
6个月 乙肝疫苗（第3针）
1个月 2个月
3个月
乙肝疫苗（第2针）
三价脊灰疫苗（初服） 三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 1针）
8个月 1.5岁
4岁
麻疹疫苗（初种）
三价脊灰疫苗（加服），百白破 （加强）
三价脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗 （复种）
4个月
三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 2针）
7岁
BCG（复种），麻疹疫苗（复种）， 百白破（加强）
4 ．新型疫苗
1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 3）基因工程疫苗
编码免疫原基因→载体→体内 ↓
酵母菌、大肠杆菌（体外培养）
如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗
5.计划免疫 我国儿童计划免疫程序
年龄
免疫预防：利用各 种生物或非生物制 剂来建立机体的免 疫应答，以达到预 防疾病的目的。
用免疫学原理， 防病、治病所 采取的措施
免疫治疗：应用免 疫学原理，针对疾 病的发生机制，增 强机体的免疫功能， 以达到治疗目的所 采取的措施。
特
自然
自然主动免疫：自然感染
异
免疫
自然被动免疫： IgG通过胎盘、初乳SIgA
较好，维持3-5年甚至更长时间
较小,但有毒力回复突变
3.人工被动免疫生物制品
✓抗毒素：外/类毒素→马→Ab ✓人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白 ✓细胞因子
✓单抗/基因工程抗体
人工被动免疫注意事项
提示
✓注意防止超敏反应 ✓早期和足量 ✓不滥用丙球
被动免疫不能激活免疫系 统，故不能产生记忆反应， 其保护作用是短暂的。
6个月 乙肝疫苗（第3针）
1个月 2个月
3个月
乙肝疫苗（第2针）
三价脊灰疫苗（初服） 三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 1针）
8个月 1.5岁
4岁
麻疹疫苗（初种）
三价脊灰疫苗（加服），百白破 （加强）
三价脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗 （复种）
4个月
三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 2针）
7岁
BCG（复种），麻疹疫苗（复种）， 百白破（加强）
4 ．新型疫苗
1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 3）基因工程疫苗
编码免疫原基因→载体→体内 ↓
酵母菌、大肠杆菌（体外培养）
如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗
5.计划免疫 我国儿童计划免疫程序
年龄
免疫学应用ppt-医学免疫学课件
接种次数 免疫力出现时间 免疫力维持时间
用途
多用于预防
二、免 疫 治 疗
•概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强 或抑制机体的免疫功能达到治疗疾病的治疗方法。
•用于免疫治疗的制剂：抗体、细胞因子及其拮抗剂、免 疫细胞、免疫增强剂和免疫抑制剂。
•分类（作用机制）： 1、被动免疫治疗 被动增强：抗体、免疫效应细胞、小分子免疫肽
免疫重建
定义：将免疫功能正常个体的造血干细胞或 淋巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后 者的造血能力、免疫功能全部或部分得 到恢复。 方法：骨髓移植、脐血干细胞移植
作用：治疗免疫缺陷病、白血病、再障
（五）采用免疫增强剂进行的免疫治疗
免疫因子：有转移因子和免疫核糖核酸 化学合成药物：左旋咪唑→T↑NK↑，西咪替丁→Ts↓ 微生物制剂：有卡介苗和短小棒状杆菌→Mφ↑→CK↑
•
人工被动免疫生物制品
抗毒素：外/类毒素→马→Ab 人丙种球蛋白：人血浆丙种球蛋白和胎盘球蛋白
细胞因子
单抗/基因工程抗体
•
人工被动免疫注意事项 注意防止超敏反应 早期和足量 被动免疫不能激活 不滥用丙球 免疫系统，所以， 不能产生记忆反应， 其保护作用是短暂 的。
马血清抗毒素的两重性：
检测抗原和抗体的体外实验
1．抗原抗体检测原理 抗原抗体特异性结合 检测。 2．血清学反应(血清学实验)：体外的抗原抗体反应。 3．抗原抗体反应的特点
特异性：抗原-抗体的结合。 可逆性：抗原抗体结合是分子表面的非 共价键结合。 比例性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例 密切相关。 阶段性：抗原抗体反应可分为两个阶段
免疫学应用
应用免疫学理论阐明有关疾病的发病机制和发展规律
免疫学检测技术的基本原理及其应用PPT
免疫反应链
了解单克隆和多克 隆抗体在免疫反应 中的作用。
信号放大
揭示检测技术如何 利用信号放大机制 来增强检测敏感性。
检测方法
介绍常见的免疫学 检测方法，如 ELISA、免疫印迹 和流式细胞术。
免疫学检测技术的主要应用领域
探索免疫学检测技术在医学领域中的主要应用领域，包括诊断疾病、疫苗开发和药物监测。
1 定义
免疫学检测技术是一组用于检测和测量免疫反应的实验细胞生物学的深入研究。
免疫学检测技术的基本原理
深入了解免疫学检测技术的基本原理和机制，包括抗原-抗体相互作用、免疫反应链、信号放大和检测 方法。
抗原-抗体相 互作用
抗原与特定抗体之 间的相互作用是这 些技术的基础。
诊断疾病
了解免疫学检测技术在早期疾病诊断和监测中的重要作用。
疫苗开发
探索免疫学检测技术在疫苗研发和效力评估中的应用。
药物监测
了解如何利用这些技术来监测药物治疗的有效性和副作用。
免疫学检测技术的具体方法和步骤
深入了解免疫学检测技术的具体方法和步骤，包括样本收集、试剂准备、标记和检测分析。
1
样本收集
收集样本是免疫学检测的第一步，通常涉及血液、尿液或组织样本。
免疫学检测技术在医学领域的应用案例
探索免疫学检测技术在医学领域中的实际应用案例，包括癌症诊断、自身免疫疾病和传染病。
癌症诊断
了解如何利用免疫学检测技术 来识别和分类不同类型的癌症 细胞。
自身免疫疾病
探索免疫学检测在自身免疫疾 病诊断和治疗中的关键作用。
传染病
了解免疫学检测技术在传染病 预防、控制和治疗中的应用。
免疫学检测技术的基本原 理及其应用
本演示文稿将介绍免疫学检测技术的基本原理及其在医学领域中的应用。了 解这些关键概念和案例将有助于您更好地理解和应用免疫学检测技术。
免疫学临床应用ppt课件
（1）鉴定病原菌：诊断疾病 （2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌 （3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
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BAS-ELISA:可用来检测细菌、病毒、肿 瘤细胞表面抗原等。 生物素与抗生物素 有极高的亲和力，利用抗生物素为桥梁 ，联结生物素化的抗体及生物素化过氧 化物酶，可获得极高的敏感性（多级放 大系统）。
■-Ab+待测Ag+ Ab-生物素化+抗生物素（四价）+ 生物素化—E+底物
• 生物素(biotin，B)
★单向免疫扩散的应用 应用：测定血清中IgG、IgM、IgA 与补体C3的含量. 缺点:1～2天才出结果。
★双向免疫扩散的应用 应用：根据沉淀线的数目和形状可
对抗原或抗体进行定性检测、组分
分析等。
单向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散试验
★对流免疫电泳可检测： 血液中的HBsAg和AFP
★免疫比浊法主要用于： 血清蛋白及抗体成分的分析研究
抗原或抗体的检测
双抗体夹心法: 常用于检测标本中的抗原。将已
知抗体包被在固相载体上，加入待测 标本，使其中的抗原与抗体结合，洗 去未结合的抗原，加入已知的酶标抗 体与标本中抗原结合，再洗去未结合 的酶标抗体，加入底物，底物受酶的 催化发生化学反应产生有色物质。
待测 抗原
酶标 抗体
抗体
底物
双抗体夹心法
抗原或抗体的检测
间接法: 常用于检测血清中的抗体。将已知抗
原包被于固相载体，加入待检标本，若标 本中有相应的抗体，则可与抗原结合，再 加入酶标二抗，洗涤后加底物，底物受酶 的催化发生化学反应产生有色物质。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
已知 待测 抗原 抗体
酶标 抗体
• 此法是测定抗体最常用的方法。
间接法
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)
Ab 过剩
Ag 过剩
比例适当，交联成网络
（二）抗原抗体反应的影响因素 1.电解质 抗原抗体（等电点pH3-5和pH5-6）在 中性或弱碱性条件下带有负电荷，需适当 浓度的电解质（如0.85%NaCl）才会结合； 2.温度 通常为37℃ 3.酸碱度 最适pH值在6-8之间。pH值接 近等电点时，抗原抗体多带正负电荷相等， 由于自身吸引而出现凝集，导致非特异性 反应。
生物素在机体内以辅酶形式参与各 种羧化酶反应，故又称为辅酶R或维生 素H。分子中有两个环状结构，其中I环 为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部 位；II环为噻唑环，上有一戊酸侧链， 其末端羧基是结合抗体和其他生物大分 子的唯一结构。
• 亲和素 (avidin，A) 与生物素结合后稳定，亲合素由4
个相同的亚基组成，能结合4个分子的 生物素。亲合素与生物素之间的亲和力 极强，二者能快速结合，且反应不受外 界干扰，具有高度特异性和稳定性。
（二）抗体的钝化与分离
1.非特异性免疫球蛋白的分离钝化 2.抗原特异性免疫球蛋白的分离钝化。
二、抗原抗体反应的检测方法
抗原抗体反应
凝集反应
沉淀反应
蛋白芯片 技术
免疫标记
直接凝集 间接凝集
免疫比浊 单向免疫扩散
双向免疫扩散
免疫电泳
荧光 酶 同位素 化学发光 胶体金 免疫印迹
1.凝集反应 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应
1:8
1:16
直接Coombs试验
抗人免疫球蛋白 待测标本
作用:对新生儿Rh+血型是否发生溶血现 象的进行诊断
⑵ 间接凝集反应的应用
常用的载体颗粒：人O型血红细胞 和 聚苯乙烯乳胶颗粒
应用：链球菌O抗体的检测实验; 类风湿因子的检测. Coombs试验
间接Coombs试验
已知的Rh+ 红细胞
经产妇的待 测血清标本
免疫电泳 (immunoelectrophoresis)
对流免疫电泳
火箭电泳
免疫比浊法原理
抗体 抗原
免疫复合物的 浓度与透射光 的衰减呈正相 关。
测吸光度
抗原或抗体的检测
3.免疫标记技术 用荧光素、酶、同位素等标记抗
体或抗原用以测定相应抗原或抗体的 技术称为免疫标记技术。 特点：敏感、特异、快速，能定性、 定量、定位。
BAS-ELISA法：敏感性更高。用于抗原、抗 体以及DNA、RNA的检测。
卵白及某些微生物中的蛋白质
抗原或抗体的检测 酶免疫斑点试验
斑点金免疫层析试验
胶体金：氯金酸（HAuCl4）在还原剂的 作用下，可聚合成特定大小的金颗粒， 因其在静电作用下而呈稳定的胶体状态 ，故称胶体金。
免疫标记技术常用方法
★免疫荧光技术 ★酶免疫测定法EIA ★放射免疫测定法 ★化学发光免疫技术 ★免疫胶体金技术 ★免疫印迹法
(1)免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检
测特异性抗原或抗体的方法。常用的 荧光素有异硫氰酸荧光素、藻红蛋白 等.
直接荧光法：检测不同的抗原，需要不 同的特异性荧光抗体
间接荧光法：用一抗与样本中的抗原结 合，再用荧光素标记的二抗染色。此方 法既可检测抗原又可检测抗体。若查抗 原，一抗为已知的；若查抗体，抗原是 已知的。一种荧光抗体可用于多种不同 抗原的检测
免疫荧光技术
(2)酶免疫测定法（EIA） ： 1971年瑞典学者Engvail和Perlman-
nn,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别 报道将免疫技术发展为检测体液中微量 物质的固相免疫测定方法，称为酶联免 疫吸附试验（ELISA）。
免疫学实验技术 及其应用
免疫学诊断
●抗原或抗体的检测 ●免疫细胞及其功能有关测定 ●免疫功能检测的临床应用
第一节 抗原或抗体的检测
一、抗原抗体结合反应的特点及影响因素
(一)抗原抗体反应的特点 1.特异性 2.亲和力 3.可逆性 4.可见性 5.阶段性： 特异性结合阶段、肉眼可见阶段
Ag-Ab反应的可见性
抗人免疫球蛋白
作用:此实验阳性的经产妇经最近不能 再次妊娠
（3） 间接凝集抑制试验
检测标本中是否存在与致敏载体 相同的抗原。
凝集反应原理图解（一）
凝集反应原理图解（二）
凝集反应原理图解（三）
抗原或抗体的检测
2.沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合后出现
沉淀物称沉淀反应。
★单向免疫扩散
★双向免疫扩散 ★免疫电泳 ★免疫比浊法
抗体结合后形成凝集团块称凝集反应。
★直接凝集反应
★间接凝集反应
⑴直接凝集反应的作法及应用
玻片法：定性试验,主要用于细 菌与人类ABO血型的鉴定。
试管法：半定量试验.常用于检测抗 体的滴度或效价，临床诊断伤寒或 副伤寒所用的肥达氏反应和诊断布 氏菌病所用的瑞特试验
玻片法
直 接
凝 试管法
集 反 应
1:2稀释待测血清 1:4