药物分析 第04章分析样品前处理
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药物分析中新型样品前处理技术-PPT
23
Anal. Methods, 2013, 5, 718-721
Determination of sulfonamide residues in water samples by inline solid-phase extraction-capillary electrophoresis
Schematic diagrams of the packed bed and impregnated membrane analyte concentrators proposed in this paper for CE analysis of sulfonamides. 24
A new poly(phthalazine ether sulfone ketone)-coated fiber for SPME to determine
nitroaromatic explosives in aqueous samples, Wenna Guan et al. J. Chromatography
microextraction fiber, Gui-bin Jiang et al. analytica chimica acta 6 1
42
1 ( 2 0 0 8 ) 56–61
各种不同的Fiber SPME
SEM images showing the surfaces of CNT films prepared in ethanol.
30
SPME的特点
无需或仅需极少洗脱溶剂 装置简单、易操作 快速 所需样品体积少 易于自动化、易于和其他技术联用
31
SPME发展历程
1990 Pawliszyn Waterloo University, SPME-GC 1993 Supelco Commercial SPME-GC 1995 Pawliszyn SPME-HPLC 1996 Supelco Commercial SPME-HPLC 1997 Pawliszyn in-tube SPME-HPLC
Anal. Methods, 2013, 5, 718-721
Determination of sulfonamide residues in water samples by inline solid-phase extraction-capillary electrophoresis
Schematic diagrams of the packed bed and impregnated membrane analyte concentrators proposed in this paper for CE analysis of sulfonamides. 24
A new poly(phthalazine ether sulfone ketone)-coated fiber for SPME to determine
nitroaromatic explosives in aqueous samples, Wenna Guan et al. J. Chromatography
microextraction fiber, Gui-bin Jiang et al. analytica chimica acta 6 1
42
1 ( 2 0 0 8 ) 56–61
各种不同的Fiber SPME
SEM images showing the surfaces of CNT films prepared in ethanol.
30
SPME的特点
无需或仅需极少洗脱溶剂 装置简单、易操作 快速 所需样品体积少 易于自动化、易于和其他技术联用
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SPME发展历程
1990 Pawliszyn Waterloo University, SPME-GC 1993 Supelco Commercial SPME-GC 1995 Pawliszyn SPME-HPLC 1996 Supelco Commercial SPME-HPLC 1997 Pawliszyn in-tube SPME-HPLC
药物分析：样品前处理和药物提取技术
2018/12/10
碱性物质
药物 pKa ＞pKa 2～3单位
32
Henderson—Hasselbalch公式
水相最佳pH值可通过公式计算求出:
[A－] pH = pKa + Log [HA] 酸式 碱式
碱性药物 pH﹥pKa 2~3个单位 酸性药物 pH﹤pKa 2~3个单位 当水相 pH 在以上条件时， 99%~99.9% 的药 物以非电离形式存在，易被有机溶剂提取
枯草杆菌蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、枯
草菌溶素
2018/12/10 23
缀合物（结合物）水解
含有羟基、氨基、羧基、巯基的药物或代谢物分子 与葡萄糖醛酸结合成苷，与硫酸形成酯。这些缀合 物的极性均较母体大，亲水性强，不易被有机溶剂 提取，需进行水解处理 酸水解——常用盐酸。酸的浓度、酸化时间、加热 与否，随药物而异 (简便、快速，但专一性差) 酶水解——β-葡萄糖醛酸苷酶、芳基硫酸酯酶（酶 解时一般pH4.5~7.0，37℃厌氧条件下温育16 h。 尿液酶解时需事先除去尿中能抑制酶的阳离子 ） 溶剂解——一些药物的硫酸酯，可随加入的萃取溶 剂在萃取过程中发生分解
常用预处理方法
1. 去除蛋白质
去除蛋白的目的意义 使结合型药物释放出来，以测定总浓度 得到较“干净”的提取液，减少乳化 消除对测定的干扰 去除蛋白的方法 蛋白质沉淀法 组织的酶消化法
2018/12/10 19
蛋白质沉淀法
生成不溶性盐
酸类（TCA、HClO4、钨酸、焦磷酸等）—— 在低于蛋白质等电点的 pH 值时，酸根与带正 电荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀
甲醇
饱和(NH4)2SO4
2018/12/10
碱性物质
药物 pKa ＞pKa 2～3单位
32
Henderson—Hasselbalch公式
水相最佳pH值可通过公式计算求出:
[A－] pH = pKa + Log [HA] 酸式 碱式
碱性药物 pH﹥pKa 2~3个单位 酸性药物 pH﹤pKa 2~3个单位 当水相 pH 在以上条件时， 99%~99.9% 的药 物以非电离形式存在，易被有机溶剂提取
枯草杆菌蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、枯
草菌溶素
2018/12/10 23
缀合物（结合物）水解
含有羟基、氨基、羧基、巯基的药物或代谢物分子 与葡萄糖醛酸结合成苷，与硫酸形成酯。这些缀合 物的极性均较母体大，亲水性强，不易被有机溶剂 提取，需进行水解处理 酸水解——常用盐酸。酸的浓度、酸化时间、加热 与否，随药物而异 (简便、快速，但专一性差) 酶水解——β-葡萄糖醛酸苷酶、芳基硫酸酯酶（酶 解时一般pH4.5~7.0，37℃厌氧条件下温育16 h。 尿液酶解时需事先除去尿中能抑制酶的阳离子 ） 溶剂解——一些药物的硫酸酯，可随加入的萃取溶 剂在萃取过程中发生分解
常用预处理方法
1. 去除蛋白质
去除蛋白的目的意义 使结合型药物释放出来，以测定总浓度 得到较“干净”的提取液，减少乳化 消除对测定的干扰 去除蛋白的方法 蛋白质沉淀法 组织的酶消化法
2018/12/10 19
蛋白质沉淀法
生成不溶性盐
酸类（TCA、HClO4、钨酸、焦磷酸等）—— 在低于蛋白质等电点的 pH 值时，酸根与带正 电荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀
甲醇
饱和(NH4)2SO4
2018/12/10
第04章定量分析样品前处理
适用于含卤素、硫、氮、硒等 有机药物的分析
本法特点是简便、快速、破坏完 全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含 被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层 再用无灰滤纸包裹
第四章 药物定量分析与分析方 法验证
第一节 定量分析样品的前处理方法
一、含卤素有机药物的分析
含卤素有机药物系指药物分子结 构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相 连者，而不包括某些有机药物的卤酸 盐或氢卤酸盐
结构特点：C—X
（一）卤原子的活泼性
1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原 子的活泼性和它直接相连的烃基的结 构有很大关系
1000ml
2000ml或特殊结 构的燃烧瓶
正确选用燃烧瓶的目的在于： 样品能在足够的氧气中燃烧分解完 全；有利于将燃烧分解产物较快地 吸收到吸收液中；防止爆炸的可能 性。
②测定含氟有机药物时，用石英制 燃烧瓶 ③铂丝燃烧时起催化作用 ④应同时做空白试验 ⑤燃烧时要注意防爆
⑥燃烧要完全 ⑦燃烧产生的烟雾完全被吸收
2. 碱性或酸性还原后测定法
本法是将含卤素有机药物在碱性或 酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回 流，药物产生还原裂解反应，使有机 结合的卤素转变为无机的卤素离子， 然后采用银量法（Fajans法）测定。
本法适用于测定结构中碘与苯环直 接相连，且一个苯环上含多个碘原子 的含卤素有机药物。
（1） 碱性还原后测定法
（3）操作方法
①燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加
本法特点是简便、快速、破坏完 全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含 被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层 再用无灰滤纸包裹
第四章 药物定量分析与分析方 法验证
第一节 定量分析样品的前处理方法
一、含卤素有机药物的分析
含卤素有机药物系指药物分子结 构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相 连者，而不包括某些有机药物的卤酸 盐或氢卤酸盐
结构特点：C—X
（一）卤原子的活泼性
1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原 子的活泼性和它直接相连的烃基的结 构有很大关系
1000ml
2000ml或特殊结 构的燃烧瓶
正确选用燃烧瓶的目的在于： 样品能在足够的氧气中燃烧分解完 全；有利于将燃烧分解产物较快地 吸收到吸收液中；防止爆炸的可能 性。
②测定含氟有机药物时，用石英制 燃烧瓶 ③铂丝燃烧时起催化作用 ④应同时做空白试验 ⑤燃烧时要注意防爆
⑥燃烧要完全 ⑦燃烧产生的烟雾完全被吸收
2. 碱性或酸性还原后测定法
本法是将含卤素有机药物在碱性或 酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回 流，药物产生还原裂解反应，使有机 结合的卤素转变为无机的卤素离子， 然后采用银量法（Fajans法）测定。
本法适用于测定结构中碘与苯环直 接相连，且一个苯环上含多个碘原子 的含卤素有机药物。
（1） 碱性还原后测定法
（3）操作方法
①燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加
药物分析-第四章-前处理
重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度
编辑版ppt
13
(3)专属性（specificity）
中国药科大学药物分析教研室
指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能 存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的 特性)。
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14
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(4) 检测限（limit of detection， LOD） ： 药物能被检出的最低浓度(µg/ml) 测定: 信噪比法(S:N=3:1)
线性程度：相关系数
Y
b
(7) 耐用性（robustness）:
a X
测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度
影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH， 商品柱的品牌，柱温等
编辑版ppt
16
检验项目和验证内容
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项目内容 鉴别
准确度
精密度
重复性
中间精密度
专属性②
＋
检测限
定量限
氧瓶燃烧法
样品
吸收液
测定方法
含氟有机药物 H2O
pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝
分光光度法
含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法
分光法
含溴有机药物 或H2NOa2O-NHa液OH- 液 银量法 分光法
硫酸肼饱和液
含碘有机药物 NaOH液-Fra bibliotek银量法 碘量法
硫酸肼饱和液 汞量法 分光法
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第四章 药物定量分析与分析方法验 证
⊙定量分析样品前处理方法 ⊙ 定量分析方法特点 ⊙药品质量标准分析方法验证
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1
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(3)专属性（specificity）
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指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能 存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的 特性)。
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(4) 检测限（limit of detection， LOD） ： 药物能被检出的最低浓度(µg/ml) 测定: 信噪比法(S:N=3:1)
线性程度：相关系数
Y
b
(7) 耐用性（robustness）:
a X
测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度
影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH， 商品柱的品牌，柱温等
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检验项目和验证内容
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项目内容 鉴别
准确度
精密度
重复性
中间精密度
专属性②
＋
检测限
定量限
氧瓶燃烧法
样品
吸收液
测定方法
含氟有机药物 H2O
pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝
分光光度法
含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法
分光法
含溴有机药物 或H2NOa2O-NHa液OH- 液 银量法 分光法
硫酸肼饱和液
含碘有机药物 NaOH液-Fra bibliotek银量法 碘量法
硫酸肼饱和液 汞量法 分光法
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第四章 药物定量分析与分析方法验 证
⊙定量分析样品前处理方法 ⊙ 定量分析方法特点 ⊙药品质量标准分析方法验证
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药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
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(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
药物分析第04章分析样品前处理
I 2 2 N 2 S 2 O a 3 2 N N a 2 S 4 I O a 6
20
三、经有机破坏的分析方法
有机卤素及金属的药物结构中的卤素或 金属离子与碳原子结合牢固者,用上述方法 难以成为无机的化合物,此时必须采用有机 破坏的方法,使之转变为无机化合物,方可进 行测定.
1 湿法破坏法 2 干法破坏法 3 氧瓶燃烧法
泛影酸（卤素原子与芳环相连,化学键牢固）
COOH
COONa
I I
回流
CH3COHN
+11NaOH +3Zn
NHCOCH3
加热
I
H 2N
NH 2
+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O
NaI+AgNO3
AgI +NaNO3
曙红钠为吸附指示剂 黄色 玫瑰红色
18
（2）酸性还原后测定
在醋酸酸性条件下加还原剂锌粉,加热 回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后用 银量法测定. 如：碘番酸含量测定
CH3CONH I
碘他拉酸
I
CONHCH3
HO
ICHΒιβλιοθήκη CHCOOHH2NC2H5 I
碘番酸
Br
CO
CO
SO 3N a
OH SO 3N a
磺溴酞钠
6
O
F
COOH
N
N
诺氟沙星
HN
C2H5
醋酸氟轻松
HO CH3
CH2OCOCH3
C CH3
O
O
CH3 C
O CH3
H
FH
O
7
F
2. 常见的含金属元素的有机药物
20
三、经有机破坏的分析方法
有机卤素及金属的药物结构中的卤素或 金属离子与碳原子结合牢固者,用上述方法 难以成为无机的化合物,此时必须采用有机 破坏的方法,使之转变为无机化合物,方可进 行测定.
1 湿法破坏法 2 干法破坏法 3 氧瓶燃烧法
泛影酸（卤素原子与芳环相连,化学键牢固）
COOH
COONa
I I
回流
CH3COHN
+11NaOH +3Zn
NHCOCH3
加热
I
H 2N
NH 2
+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O
NaI+AgNO3
AgI +NaNO3
曙红钠为吸附指示剂 黄色 玫瑰红色
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（2）酸性还原后测定
在醋酸酸性条件下加还原剂锌粉,加热 回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后用 银量法测定. 如：碘番酸含量测定
CH3CONH I
碘他拉酸
I
CONHCH3
HO
ICHΒιβλιοθήκη CHCOOHH2NC2H5 I
碘番酸
Br
CO
CO
SO 3N a
OH SO 3N a
磺溴酞钠
6
O
F
COOH
N
N
诺氟沙星
HN
C2H5
醋酸氟轻松
HO CH3
CH2OCOCH3
C CH3
O
O
CH3 C
O CH3
H
FH
O
7
F
2. 常见的含金属元素的有机药物
药物分析-体内样品分析的前处理
2. 固相萃取法
(1) 固相萃取法的原理 (2) 固相萃取法操作步骤 (3) 注意事项 (4) 固相萃取法的特点 (5) 自动化固相萃取
(1) 固相萃取法的原理
含药物体内样品通过小柱时, 受到 “吸附”,“分配”,“离子交换”或其它亲和力 作用, 药物及内源性物质同时被保留在固定相(填料)
洗脱方式有两种: ①冲洗溶剂洗去干扰物, 再用对药物 亲和力更强的溶剂洗脱药物; ②药物直接被洗脱, 干扰物保留
(1) 溶剂的选取原则
①对药物分子未电离形式可溶, 对电离形式不溶；
②沸点低,易挥发;
③与水不相混溶;
④无毒, 不易燃烧; ⑤具有化学稳定和惰性; ⑥不影响紫外检测
①辅助试剂的使用 乙醚(1.2%水): 氯化钠
②混合溶剂的使用 正己烷-异丙醇(95:5)
溶剂
紫外截止波长 (nm)
沸点(℃)
正己烷
210
69
环己烷
210
81
甲苯
285
111
↓ 异丙醚* 极 性 乙醚*
220
68
220
35
增 醋酸戊酯 加 ↓ 三氯甲烷
285
149
245
61
甲基异丁基酮
230
116
醋酸乙酯
260
77
正丁醇
215Βιβλιοθήκη 118*:含过氧化物；:肝脏毒性, 有致癌作用
(2) 溶剂的用量
有机相与水相(样品)体积比为1:1~5:1
对于单个样品处理, SPE操作省时 对于大量样品的处理
半自动SPE: 萃取过程机械化 全自动化仪器: 通过柱切换技术
实现固相萃取与HPLC联用
(5) 自动化固相萃取法 柱切换: 固相萃取-LC/MS/MS
药物分析第04章定量分析样品前处理与分析方法验证
第四章 药物定量分析与分析方法验证
1
本章主要内容：
第一节 定量分析样品的前处理方法 一、概述 二、不经有机破坏的分析方法 三、经有机破坏的分析方法
第二节 定量分析方法的特点 第三节 药品分析方法验证
2
本章主要学习目的： 1.熟悉不经有机破坏的分析方法； 2.熟悉经有机破坏的分析方法； 3.掌握氧瓶燃烧法； 4.掌握测定方法的效能指标。
39
（4）操作方法
在燃烧瓶内加入规定的吸收液，并将瓶口用水
湿润；小心急速通氧气约1分钟，立即用表面皿覆盖
瓶口，备用；点燃包有供试品的滤纸包或纸袋尾部，
迅速ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，
俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的
烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗
瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。
3
第一节 定量分析样品的前处理方法
目的:使待测药物或待测元素转化为适宜的测定方 式, 从而利于分析测定。 优点: 增加测定的专属性和灵敏度。
样品种类： 1. 含卤素元素（F、Cl、Br、I） 2. 含金属元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn 、Bi) 3. 含N、P、S 等元素
4
第一节 定量分析样品的前处理方法
燃 烧 瓶 容 积 大 小 的 选 择 。 通 常 取 样 量 为 10 － 20mg，使用500ml燃烧瓶;加大样品取样量（200mg） 时可选用1000或2000ml的燃烧瓶。
35
图2 氧瓶燃烧装置与样品包装操作图
36
（ 2）吸收液的选择
A. 作用： 吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各 种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变 为一定的便于测定的价态。
1
本章主要内容：
第一节 定量分析样品的前处理方法 一、概述 二、不经有机破坏的分析方法 三、经有机破坏的分析方法
第二节 定量分析方法的特点 第三节 药品分析方法验证
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本章主要学习目的： 1.熟悉不经有机破坏的分析方法； 2.熟悉经有机破坏的分析方法； 3.掌握氧瓶燃烧法； 4.掌握测定方法的效能指标。
39
（4）操作方法
在燃烧瓶内加入规定的吸收液，并将瓶口用水
湿润；小心急速通氧气约1分钟，立即用表面皿覆盖
瓶口，备用；点燃包有供试品的滤纸包或纸袋尾部，
迅速ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，
俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的
烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗
瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。
3
第一节 定量分析样品的前处理方法
目的:使待测药物或待测元素转化为适宜的测定方 式, 从而利于分析测定。 优点: 增加测定的专属性和灵敏度。
样品种类： 1. 含卤素元素（F、Cl、Br、I） 2. 含金属元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn 、Bi) 3. 含N、P、S 等元素
4
第一节 定量分析样品的前处理方法
燃 烧 瓶 容 积 大 小 的 选 择 。 通 常 取 样 量 为 10 － 20mg，使用500ml燃烧瓶;加大样品取样量（200mg） 时可选用1000或2000ml的燃烧瓶。
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图2 氧瓶燃烧装置与样品包装操作图
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（ 2）吸收液的选择
A. 作用： 吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各 种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变 为一定的便于测定的价态。
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泛影酸（卤素原子与芳环相连,化学键牢固）
COOH I I CH3COHN I NHCOCH3
COONa
回流 +11NaOH +3Zn 加热
H 2N
NH2
+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O NaI+AgNO3 AgI +NaNO3
曙红钠为吸附指示剂 黄色
玫瑰红色
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（2）酸性还原后测定
（一）样品采集
生物样本： 生物体的任何脏器、组织、体液均可作为生物样本. 常用样本: 血液（血浆、血清或全血）、尿液、唾液、毛发 样品处理方法： （１）去蛋白质 （３）仪器分析 （２）分离纯化浓集 （ 4 ）缀合物水解
1 血浆或血清样品处理
适用：有机药物药动学研究、生物利用度测定、治疗 34 药物检测等
Br
Br Br
Br C O
C O
碘他拉酸
I I H2N I
HO SO3Na
OH SO3Na
CH2CHCOOH C2H5
磺溴酞钠
碘番酸
6
O F N HN N C2H5
CH2OCOCH3 C O CH3 CH3 O C CH3 O H H
7
COOH
诺氟沙星
HO
醋酸氟轻松
O
CH3 F F
2. 常见的含金属元素的有机药物
12
原理
HC O C C O CH Oˉ
+
Fe2+
Oˉ
Fe2+ + Ce4+
Hale Waihona Puke Ce3+ +
Fe3+
Fe2+ + e
N N 3 N N 3
Fe3+
红色
浅蓝色
13
2 经水解后测定法 （1）直接回流后测定法
将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如 乙醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后, 加热回流使其水解,将有机结合的卤素,经 水解作用转变为无机的卤素离子,然后选用 间接银量法进行测定.
氧瓶燃烧法是将有机药物放入充满氧气的 密闭烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物 质（气态）吸收于适当吸收液中,然后根据欲测 物质的性质,采用适当分析方法进行鉴别、检查 或含量测定.
特点
① 快速分解有机药物的简单方法.
② 不需复杂设备,能使有机结合中的待测元素定量地 分解成无机离子状态. ③ 适用于含卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查 25 和含量测定,特别适用于微量样品的测定.
CH CH C O O O O Sb Sb 2K+ 3H2O O O O O O C CH CH C O O C O
酒石酸锑钾
Mg(C17H35COO)2
C C CH O Fe O
硬脂酸镁
O
C O
富马酸亚铁
8
CH2OH HOCH2 CHOH HOCH CHO OH O OCH 9H CHO Sb O Sb OCH Na3· CHO OCH COO OOC
1 湿法破坏法 2 干法破坏法 3 氧瓶燃烧法
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1 湿法破坏法
根据所用试剂的不同，湿法破坏可分为以下 几种： ① ② ③ 硝酸-高氯酸法 －破坏力强,不适于含氮杂环 硫酸-硫酸盐法 －常用于含砷、锑有机药物 硝酸-硫酸法 －适于大多数有机物质破坏
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湿法破坏法注意事项：
1 取样量 含金属元素在10 ~ 100g范围内,取样10 g 生物样品—血样10 ~15ml；尿样50ml 2 所用仪器凯氏烧瓶 3 空白试验 4 通风橱中进行
（1）仪器装置
26
（2）操作
①取样10-20mg
②加吸收液﹑通氧 ③燃烧
④吸收 ⑤测定
O2 /Pt 吸收于 样品 燃烧产物 吸收液 适宜方法测定 燃烧
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（3）注意事项
①. 充氧气要充分
使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,通气 管应接近液面，使瓶内空气排尽，燃烧完全时没有黑 色炭化物. ②. 吸收完全
在醋酸酸性条件下加还原剂锌粉,加热 回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后用 银量法测定. 如：碘番酸含量测定
I I H2N I CH2CHCOOH C2H5
用四溴酚酞乙酯作指示剂， AgNO3滴定。 黄色沉淀→绿色
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（3）利用药物中可游离的金属离子的 氧化性测定含量
含锑药物Sb5+具有氧化性,在酸性下氧化 KI定量析出I2，可用Na2S2O3 滴定. 例如：葡萄糖锑钠
2．选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品(
A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 D. 氢气 B. 铂丝 E. 无灰滤纸
)
C. 普通滤纸
3. 氧瓶燃烧法可用于(
)
A. 含卤素有机药物的含量测定 B. 醚类药物的含量测定 C. 检查甾体激素类药物中的氟 D. 检查甾体激素类药物中的硒
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E. 芳酸类药物的含量测定
第二节 体内样品分析预处理方法
应充分振摇,燃烧瓶看不到烟雾. Cl－、F－白色烟雾 Br－棕色 I－紫色 放置15min，用少量水冲洗瓶塞及铂丝。
28
③. 吸收液的选择
氟 氯 水 NaOH溶液
溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液 碘 NaOH－硫酸肼饱和溶液 硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液
④. 防爆 样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆炸 的可能性,必须采取防护措施. 戴防护眼镜 防护措施 29 瓶外包湿毛巾
（4）卤素化合物的燃烧产物
①氟化物、氯化物
O2 / Pt R X X CO2 H 2O
氟或氯以离子状态存在，吸收后可直接测定.
②溴化物
O 2 / Pt R Br Br2 Br CO 2 H 2 O
量大 量少
③碘化物
O 2 / Pt R I I 2 I IO3 CO 2 H 2 O
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① 三氯叔丁醇
CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH 回流 △
(CH3)2CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O
NaCl + AgNO3
AgNO3 + NH4SCN
AgCl↓ + NaNO3
AgSCN ↓ + NH4NO3
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② 六氯对二甲苯（Hexachloro-p-xylene）
OH Ca2+
[ HC
3
O
-
] 2·5H O
2
乳酸钙
O
例1：乳酸钙含量测定
0.3g+水100ml 放冷+NaOH 15ml EDTA滴定 钙紫红素指示剂
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(2)金属离子直接与碳原子以共价键相连
O H OH O O Fe
富马酸亚铁
例2：富马酸亚铁含量测定 富马酸亚铁溶于热硫酸,同时分解释放 出亚铁离子,可选用铈量法进行测定.邻 二氮菲为指示剂.
Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 △
2NaOH + H2SO4
MgSO4 + 2 C17 H35COOH
Na2SO4 + 2H2O
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3 经氧化还原后测定法
（1）碱性还原后测定 卤素结合于芳环上,由于分子碘的结合较牢固,需 在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）,加热回流,使碳碘键断裂,形成无机碘化物后测定.
2O
葡萄糖酸锑钠
9
根据卤素或金属在分子中结合牢固程 度不同处理方法而异.
前 不经有机破坏的分析方法 处 理 方 经有机破坏的分析方法 法 直接测定法 经水解后测定法 经氧化还原后测定法 湿法破坏法 干法破坏法 氧瓶燃烧法
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二、不经有机破坏的分析方法
1 直接测定法
（1 ）金属离子不直接与碳原子相连
回流
Cl3C
CCl3
+6AgNO3+6H2O 加热
(HO)3C
C(OH)3
6AgCl↓ + 6NO3 - +6 H+
加入AgNO3加热回流完全后,可用硫 氰酸铵标准溶液直接滴定剩余的硝酸银, 以求得含量.
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（2） 用硫酸水解后测定法 也适用于金属原子与脂肪链的碳原子相连,结 合不牢固药物. 例：硬脂酸镁与定量硫酸共沸、水解生成 硬脂酸和硫酸镁，剩余的酸以氢氧化钠滴定. 原理：
量大 量极少 量少
溴化物或碘化物,燃烧后以多种价态存在, 30 吸收后应转化为统一价态再测定.
（5）实例-碘苯酯的含量测定
I CH3 C
NaOH-H2O 吸收 KI 0.02mol/L Na2S2O3 淀粉作指示剂 终点：蓝色消失
(CH2)8
COOC2H5
甲酸 空气
样品
O2/Pt 燃烧
Br2-HAc
Sb
5
2KI Sb
H
3
I 2 2K
I 2 2Na 2 S 2 O 3 2NaI Na 2 S 4 O 6
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三、经有机破坏的分析方法
有机卤素及金属的药物结构中的卤素或 金属离子与碳原子结合牢固者,用上述方法 难以成为无机的化合物,此时必须采用有机 破坏的方法,使之转变为无机化合物,方可进 行测定.
燃烧吸收加溴醋酸溶液加甲酸、加KI 滴定
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1 燃烧吸收
O R-І CO2+H2O+Na І+ І2+Na ІO3+NaCl
2 溴-醋酸氧化剂： 将І - 、 І 2 氧化为І O3 2Na І +Br2 = 2NaBr+ І 2 І 2+5Br2+6H2O = 2H І O3 +10HBr 3 加甲酸：除去过量的溴