高效液相色谱使用详细操作步骤
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪操作说明书
高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。
本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。
二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。
2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。
三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。
b) 打开相关软件并进行系统初始化。
c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。
2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。
b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。
c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。
3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。
b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。
c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。
4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。
b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。
5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。
b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。
6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。
b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。
c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。
四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。
2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。
3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。
其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。
最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。
其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。
此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。
在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。
此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。
首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。
其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。
最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
高效液相色谱仪使用说明
高效液相色谱仪使用说明1.准备工作-确保仪器处于良好的工作状态，包括液相泵、进样器、检测器等。
-检查液相系统的压力，确保其正常运转，防止发生泄漏。
-配制样品溶液，根据实验要求合理选择溶剂，并进行适当的预处理（如过滤、稀释等）。
2.仪器开机-打开HPLC主机电源，并等待其自检完成。
-检查HPLC控制软件是否正常运行，确保能够与仪器进行连接。
-点击仪器上的电源按钮，启动液相泵和检测器。
3.参数设置-在HPLC控制软件上设置分离柱类型、柱温、流速、梯度时间等参数，根据具体分析需求进行调整。
-设置进样器类型、进样量、进样方式等参数。
对于自动进样器，可以根据需求选择自动取样量和进样模式（如全自动、自动稀释等）。
4.样品进样-将样品注射器浸入样品溶液中，吸取适量的溶液。
-将注射器插入进样器，并按照设定的参数进行进样。
-如果使用自动进样器，将样品放置在样品托盘上，设置好进样量和进样模式，然后启动自动进样程序。
5.进行分离-点击HPLC控制软件上的“运行”按钮，启动色谱分离程序。
-观察检测器的信号和色谱图，确保分离效果良好。
-如有需要，可以对实时结果进行记录，以便后续的数据分析和处理。
6.清洗仪器-在实验结束后，关闭色谱柱，避免柱材料干燥堵塞。
-关闭液相泵和检测器，将废液排空。
-按照要求进行液相系统的清洗和保养，包括冲洗柱子、清洗进样器、检测器等。
7.数据处理-将HPLC分析得到的数据导出到计算机中。
-使用相关的数据处理软件进行数据处理和分析，如峰面积计算、定量分析、质谱图的解释等。
-如有需要，可以生成报告或结果图表，以备后续参考。
注意事项：-严格按照操作规程操作仪器，避免操作失误导致意外事故和数据异常。
-定期维护和保养仪器，确保其长期有效运行。
-注意安全使用有毒、易燃、易爆的溶剂和试剂，如有需要应采取相应的安全措施。
-遵守实验室规章制度，切勿滥用仪器，保证仪器的正常使用和他人使用的权益。
总结起来，高效液相色谱仪的使用说明主要包括准备工作、仪器开机、参数设置、样品进样、分离操作、仪器清洗和数据处理。
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高效液相色谱使用操作步骤
一、泵操作面板
PUM P：运行键 START：梯度运行键 PURGE：快冲键RESET：复位键 HOLD：程序暂停键 STOP：泵停止键TIME：程序开启键 FLOW：流速： RSVR： A B C 精品文档，超值下载
PROG：程序 DEL：删除程序 PMAX：最大压力PMIN：最小压力 ENTER：确定
TIME 0 FLOW ENTER （设置流速）
TIME 0 RSVR ABC ENTER （设置溶剂）
TIME 0 PROG ENTER （设置程序）
TIME 0 % A 30 ENTER （设置比例）
TIME 0 % B 30 ENTER （设置比例）
TIME 0 % C 40 ENTER （设置比例）
DEL PROG 1 ENTER （删除程序）1.对于梯度泵设定举例如下：(人参皂苷的梯度)
TIME 0 PROG 1 ENTER
TIME 0 % A 81 ENTER
TIME 15 % A 81 ENTER
TIME 60 % A 65 ENTER
TIME 65 % A 0 ENTER
TIME 80 % A 0 ENTER
TIME 81 % A 81 ENTER
TIME 100 % A 81 ENTER
因为A+B之和始终是100%，所以B相就不用设了。
7．对于对照品在这种条件下只要对照品的峰全部出完后按下RESET键等20分钟即可进第二针进完针后按START 键运行梯度程序。
但是对样品来说一定要等峰出完后再按下RESET键等基线基走直才可进下一针。
二、检测器操作面板
RESET：复位键 A/Z：调零键 WL：调波长 ENTER：确定
三、实验前的准备工作
1、实验前流动相提前配好过滤脱气。
2、置换流动相时把泵的滤头从原来的流动相中换到新的流
动相中滤头要轻拿轻放。
3、液路排气顺序：首先打开排气阀—按PURGE键进行排气
结束后—按STOP键停止—再拧紧排气阀—按PUM P键让泵运行。
4、打开检测器首先观察右上角氘灯指示灯确认氘灯是否点
亮，按WL键调好实验波长后按A/Z键调零。
5、打开电脑打开在线工站选择对应的通道，输入实验信息、方法、包括采样控制，积分和仪器条件，积分面积外标法测绝对含量归一法相对含量内标法测绝对含量；后点数据采集，将电压调到-20~20，时间调到0~30，点零点校正后再点
查看基线，大约1个小时左右基线基本稳定（就是基本成直线，因为检测器打开后需要一定的稳定时间，检测器基本稳定泵里面的流动相同时也就置换好了），就可以进样了。
6、进对照品：对照品配成溶液后要过滤再进样等对照品的峰出来以后点停止采集输入文件名后保存。
（一般连进三针为准）
7、进样品：样品配成溶液后要过滤再进样等样品的峰出来以后点停止采集输入文件名后保存。
8、进样阀搬阀顺序—搬到LOAD位置时进针—打完针后搬到INJECT位置进样要求打针匀速轻快搬阀轻快每次基本一样，外标法进样量是定量管的四—五倍。
9、用以下公式算出样品含量：
C标/C样=S标/S样
10、做校正曲线：打开离线——点打开——打开对照品的谱图——点积分方法（选用面积外标法）——点组分表——点全选——输入所需要对照品的峰名——点采用——点校正——点标准含量——输入含量（可以是对照品的浓度也可以是百分数）——OK——点加入标样——再次打开刚才打开的对照品的谱图——校正完毕——点峰名看校正曲线图——点输出——取名保存。
11、计算样品的含量：打开离线-打开样品的谱图-点预览——点加载——加载刚才对照品的校正曲线谱图——即可得
出样品的含量
四、液相色谱仪注意事项：
1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。
如果没有漏液则可能是（2）白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去，采取的方法是排气泡排气时：先STOP停泵—打开排气阀—按PURGE（快冲）键—等气泡排完后先STOP停泵—拧紧排气阀，其先后步骤不要搞反了。
2、泵正常工作时最高压力最好不要超过200KG，所以打开泵以后可以将泵的最大压力调到200KG，这样如果压力超过上限则会自动报警停机，流速最好不用超过1ML/MIN，如果使用时压力超过200KG，建议将流速调低点以降低压力（在色谱柱正常的情况下），如果是因为色谱柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱（因为色谱属于耗材长时间使用就需要更换，更换的主要依据色谱柱出峰不正常或者柱压力过高）。
3、泵正常工作时平均每15天左右向注油孔加润滑油2~3滴。
4、流动相里面如果有盐或酸类，做完实验后要先用95%二
次蒸馏水与5%甲醇洗色谱柱40分钟左右，然后用纯甲醇洗30分钟左右才可以关机。
第二天如果继续做实验流动相里面仍旧有盐或酸类，最好先用95%二次蒸馏水与5%甲醇过度20分钟，再用流动相。
如果流动相里面只有甲醇，水，乙腈。
做完实验后就不用95%二次蒸馏水5%甲醇冲洗，可直接用纯甲醇洗30分钟即可关机。
5、C18色谱柱的耐酸PH值范围3—8使用时不要超出。
6、仪器长期不用时一定要将滤头泡在甲醇里半月开机一次，如果开机时泵抽不上液可以打开排气阀按PURGE快冲。
7、调反压器时要注意等液体流出来以后才能调一般调8—10KG，比如现在泵显示屏显示柱压50KG那再增加10KG 显示屏上显示柱压60KG然后拧紧锁紧螺母。
8、色谱仪关机顺序：清洗液路时可以把检测器直接关机，清洗结束后先按STOP让泵停止后在关电源不允许直接关机。