版中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制34页PPT
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培养基的配制-PPT
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)
《培养基及其配制》课件
2 选择性培养基
添加抗生素或抑菌剂，选择性培养特定的微生。
3 固体培养基
用于在培养皿中培养微生物，便于观察和分离。
培养基的消毒方法
1 高温灭菌
2 化学消毒
通过高温蒸汽或干热处理， 将细菌、病毒等微生物杀 灭。
使用化学物质如酒精、次 氯酸钠等消毒培养基。
3 辐射消毒
利用紫外线或电离辐射对 培养基进行消毒处理。
3 研究工具
培养基在微生物学和细胞 学等领域中广泛应用，是 研究的重要工具。
培养基的配制方法
1
添加营养物质
2
根据细胞需要，在基质中添加有机或无
机营养物质。
3
消毒处理
4
通过高温、辐射等方法对培养基进行消 毒，以杀灭潜在的微生物。
选择基质
根据实验需求选择适当的基质作为培养 基的基础配方。
调整pH值
使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
培养基的主要组分及其功能
营养物质
提供细胞生长所需的碳水化合物、氮源和无机盐 等。
生长因子
促进细胞分裂和增殖，维持细胞的正常功能。
胺基酸
作为蛋白质的组成单元，参与细胞代谢。
染色剂
用于观察和分析细胞的形态和结构。
常用培养基类型及适用领域
1 富养基
提供丰富的营养物质和生长因子，适用于细胞的扩增和生物制剂的生产。
《培养基及其配制》PPT 课件
欢迎来到《培养基及其配制》的PPT课件！本课件将带你深入了解培养基的定 义、配制方法以及常用类型和适用领域。让我们开始学习吧！
培养基的定义和作用
1 定义明确
了解培养基的具体定义和 主要作用，为后续内容提 供基础。
2 支撑细胞生长
培养基为细胞提供营养和 环境条件，促进其正常生 长和分裂。
添加抗生素或抑菌剂，选择性培养特定的微生。
3 固体培养基
用于在培养皿中培养微生物，便于观察和分离。
培养基的消毒方法
1 高温灭菌
2 化学消毒
通过高温蒸汽或干热处理， 将细菌、病毒等微生物杀 灭。
使用化学物质如酒精、次 氯酸钠等消毒培养基。
3 辐射消毒
利用紫外线或电离辐射对 培养基进行消毒处理。
3 研究工具
培养基在微生物学和细胞 学等领域中广泛应用，是 研究的重要工具。
培养基的配制方法
1
添加营养物质
2
根据细胞需要，在基质中添加有机或无
机营养物质。
3
消毒处理
4
通过高温、辐射等方法对培养基进行消 毒，以杀灭潜在的微生物。
选择基质
根据实验需求选择适当的基质作为培养 基的基础配方。
调整pH值
使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
培养基的主要组分及其功能
营养物质
提供细胞生长所需的碳水化合物、氮源和无机盐 等。
生长因子
促进细胞分裂和增殖，维持细胞的正常功能。
胺基酸
作为蛋白质的组成单元，参与细胞代谢。
染色剂
用于观察和分析细胞的形态和结构。
常用培养基类型及适用领域
1 富养基
提供丰富的营养物质和生长因子，适用于细胞的扩增和生物制剂的生产。
《培养基及其配制》PPT 课件
欢迎来到《培养基及其配制》的PPT课件！本课件将带你深入了解培养基的定 义、配制方法以及常用类型和适用领域。让我们开始学习吧！
培养基的定义和作用
1 定义明确
了解培养基的具体定义和 主要作用，为后续内容提 供基础。
2 支撑细胞生长
培养基为细胞提供营养和 环境条件，促进其正常生 长和分裂。
培养基配制技术ppt课件
概述
一、微生物的概念及种类
（一）什么是微生物？
是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见， 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才 能观察到的微小生物。
（二）微生物有什么特点？
个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、 容易变异等特点
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
二、微生物与人类的关系
• 绝大多数微生物对人和动植物是有益的，有些则是必需 的。
自然界中N、C、S等 元素循环
有少数微生 物能引起人 类和动、植 物的病害
工业,微生物应用于食 品、皮革、纺织、石油、 化工、冶金等
污水处理,利用微生物 降解有机磷、氰化物等
农业,以菌造肥, 以菌催长,以菌 防病,以菌治病
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
• 抑制剂
培养基的类型（作用）
• 作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的 检出率
• 种类：
• 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）。
• 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、玫瑰红。
回顾
• 微生物培养基的类型 • 微生物培养基配制原则、配制步骤 • 常用的几种培养基的适用微生物 • 牛肉膏蛋白胨培养基中琼脂的作用
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
培养基的类型
按物理性状划分：
• 固体培养基：适合于菌种和孢子的培养和保存，也用于有子 实体的真菌类（香菇、白木耳）的生产
中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制PPT课件
21
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
22
灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
23
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
24
菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
14
二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
15
所有配制好的培养基均应进行验证，验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
18
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
19
用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
22
灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
23
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
24
菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
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二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
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所有配制好的培养基均应进行验证，验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
18
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
19
用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
培养基及其配制PPT课件
氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢
的调节。
第11页，共50页。
缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片 失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落 叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。
桃 树
第12页，共50页。
缺铜症状：
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄，叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色，引起落叶。
◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
第18页，共50页。
5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
第19页，共50页。
6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页，共50页。
母液的配制方法： 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量，分别溶解后再混合成母液。
第42页，共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3
的调节。
第11页，共50页。
缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片 失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落 叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。
桃 树
第12页，共50页。
缺铜症状：
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄，叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色，引起落叶。
◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
第18页，共50页。
5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
第19页，共50页。
6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页，共50页。
母液的配制方法： 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量，分别溶解后再混合成母液。
第42页，共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3
微生物培养基的配制和灭菌 PPT课件
化學藥劑消毒滅菌： 微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒 精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液， 它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑，詳見表6—4。
實驗程式18
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題？ 培養基中加瓊脂的作用是什麼？ 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同？ 如何檢查培養基滅菌是否徹底？
實驗程式16
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
實驗程式17
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
紫外線滅菌法： 一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h， 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑， 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
（培養基的配製）
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
（培養基的種類）
據組成成分可分為:
1.合成培養基：由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基：有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基：利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
（三種培養基的配方及配製）
澱粉瓊脂培養基（高氏一號Gause´1），用於分離 和培養放線菌，是一種合成培養基。配方如下：
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
實驗程式18
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題？ 培養基中加瓊脂的作用是什麼？ 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同？ 如何檢查培養基滅菌是否徹底？
實驗程式16
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
實驗程式17
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
紫外線滅菌法： 一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h， 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑， 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
（培養基的配製）
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
（培養基的種類）
據組成成分可分為:
1.合成培養基：由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基：有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基：利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
（三種培養基的配方及配製）
澱粉瓊脂培養基（高氏一號Gause´1），用於分離 和培養放線菌，是一種合成培養基。配方如下：
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
培养基质量保证与质量控制.ppt
适用菌种
病毒 支原体 各类细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌 蓝藻 动物细胞
液体石蜡覆盖保存法
传代保存的变相方法 能够适当地延长保存时间 优质石蜡121℃高压灭菌2小时，160℃
干燥箱中灭菌1—2小时，放冷备用 液体石蜡的深度以1cm左右 保存期通常6个月至一年
适用菌种
霉菌、酵母菌、放线菌、部分细菌。如： 大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌 等需氧性细菌
目标菌的生长指标G大于6时，培养基可
接受
定性测试方法
用3mm接种环取测试菌培养物，在测试 培养基表面划平行直线。可同时在一个 平板上接种多个菌株，但划线不能交叉
按标准中规定的培养时间和温度对接种 后的平板进行培养
结果解释
培养后按以下方法计分：
0表示无生长 1表示微弱生长 2表示生长良好
不能用于低温冷冻保存的微生物（如孢 子形成能力极差的丝状菌）
不适于用菌种：固氮菌、乳酸杆菌、明 串珠菌、分枝杆菌、沙门法：菌种悬浮在10％(体积分数)甘油蒸 馏水中。置于低温(-70)保藏。
注意事项：所要保藏的菌种，最好先培养至对 数期；使用液体培养基时，可直接加到已灭过 菌的甘油中，并使甘油的终浓度在l0％～30％ 左右。为避免反复冻溶，可分装于小离心管中， 置低温保藏。
性能评价 所用测试菌株
实验室验收：
产品标签：
名称和批号 有效期
接收日期 包装及其完整性
SN/T1538.1-2005中4.1;对应 CNAS/CL01 4.6.2内容,通常要 记录(采购服务和供给)
储存要求
例行常规检查内容:
容器密闭性复查 首次开封日期 内容物的感官检查
使用前检查(即用型培养基):
方法和螺旋平板涂布法效果较好。
第四章微生物培养基的类型及配制PPT课件
无菌操作台 (Laminar flow)
35
培养基的配制 – 装水
1. 以量筒装取适当量蒸 馏水于玻璃容器中
2. 于玻璃容器上标示培
养基名称
精选课件
36
培养基配制 – 秤药
精选课件
1. 放上秤药纸
並归零
2. 以秤药匙舀 出适当量药 品 (请看培 养基配方上 說明)
37
培养基配制 – 溶解培养基
安全吸球隨意放置桌面，菌 液容易流出至桌上
灭菌
41
注意事項 – 杀菌锅的使用
放东西
调整温度时间
加水盖过铁板
精选关课门件
关紧泻压伐42
注意事項 – 杀菌锅使用
灭菌结束后，等
压力降回零
时才可打开门
进入杀菌锅 之物 品，盖子不可关 太紧或太松
精选课件
43
注意事項 – 杀菌锅使用
拿灭菌后物品请记得带耐热手套
精选课件
44
培养基配制 – 平板培养基
用途
沙门氏和志贺氏菌属分离
志贺氏菌分离鉴别
大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别
肠道致病菌分离
绿脓杆菌分离鉴别
志贺氏、沙门氏菌分离
肠道菌分离鉴别
霍乱弧菌分离
真菌、酵母菌分离
精选课件
21
3、鉴别培养基
在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区 分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助 开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴 别培养基。
盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
精选课件
57
无菌操作
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)
接种 (6)塞好棉塞
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称量 配制 分装 矫正pH
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养 基质量，培养基灭菌方法和条件，应通過 无菌性试验和促生长试验进行验证，验证 方法同《中國药典2019年版》附录灭菌 法。。
不同种类培养基应采用不同的灭菌方 法，配制好的培养基灭菌一般多用流通 蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.
流通蒸汽灭菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
当批培养基不符合促生长试验，应寻找造 成不合格的原因。这个调查包括采取适当 的行动以防止问题的重复出现。如果未找 到原因或还没有解决有关培养基的促生长 问题，那么任何不符合要求的批次均不能 使用。
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
滤膜过滤除菌
3、培养基的贮藏
⑴商品化培养基应根据使用说明书上的 要求进行储存。培养基标签上应标有批号， 生产日期、有效期及培养基的有关特性。 所采用的保藏和运输条件应使培养基最低 限度失去水分并提供机械保护。
⑵配制好的培养基应保存在2～25℃避 光的环境。若保存于非密闭容器中，一般
在三周内使用；若保存于密闭容器中，一
所有配制好的培养基均应进行验证，验证
方法参照《中国药典2019年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进
行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
培养基的有效期是指已通过促生长试验的 培养基在整个有效期内均需符合这些相应 的标准。每批培养基储存的时间将取决于 一定存放条件（包括容器和密封性）的培 养基组成成分的稳定性。
⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水， 特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水， 对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容 器配制与分装，配制时若需加热助溶应 注意温度不要过高
⑸、对配制培养基的过程作详细的记录， 记录内容包括：配制日期、培养基名称、 成分、配制数量、质量监控结果等进行全 面详细记录。
1、培养基的制备方法结源自判定被检培养基上的菌落平均数不得小于 对照培养基菌落平均数的70%，且菌 落形态、大小应与对照培养基上的菌落 一致。判该培养基的适用性检查符合规 定。
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
用于环境监控的培养基应特别小心防护。
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
灵敏度检查
参照 2019年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
菌悬液制备后在室温下放置应在2小时 内使用，若保存在2～8℃可以在24小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因 此，培养基的质量是微生物试验成功与否 的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮 藏条件和质量控制试验是提供优质培养基 的保证。
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生 产的符合规定的商品化成品培养基，脱水 培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌 株和用途。配制时应按使用说明上的要求 操作，受潮结块不能使用，以确保培养基 的质量符合要求。
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
⑸固体培养基灭菌后的再融化应在加热的
水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次， 融化的培养基应放在45～50℃的水浴中， 不得超过8小时。
二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
般在一年内使用，琼脂培养基不得在0℃ 或0℃以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。 若培养基要长期保存，琼脂平板应密闭包
装或置于密闭容器中以防止水分流失。
⑶培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在 高压 菌器中，避免影响培养基的质量。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光 的环境。
⑷保存于密闭容器中，可防止水分流失以 延长保存时间。
⑵配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或 搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧 瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的 器皿应 洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可 使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器， 避免金属离子与培养基成分结合，生成有 害物质，影响细菌生长。
⑶培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备， 可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物 质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂 或之前玻璃器皿所盛装的物质。因此。应 使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁 剂和外来物质的残留，并进行清除污物的 确认。
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养 基质量，培养基灭菌方法和条件，应通過 无菌性试验和促生长试验进行验证，验证 方法同《中國药典2019年版》附录灭菌 法。。
不同种类培养基应采用不同的灭菌方 法，配制好的培养基灭菌一般多用流通 蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.
流通蒸汽灭菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
当批培养基不符合促生长试验，应寻找造 成不合格的原因。这个调查包括采取适当 的行动以防止问题的重复出现。如果未找 到原因或还没有解决有关培养基的促生长 问题，那么任何不符合要求的批次均不能 使用。
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
滤膜过滤除菌
3、培养基的贮藏
⑴商品化培养基应根据使用说明书上的 要求进行储存。培养基标签上应标有批号， 生产日期、有效期及培养基的有关特性。 所采用的保藏和运输条件应使培养基最低 限度失去水分并提供机械保护。
⑵配制好的培养基应保存在2～25℃避 光的环境。若保存于非密闭容器中，一般
在三周内使用；若保存于密闭容器中，一
所有配制好的培养基均应进行验证，验证
方法参照《中国药典2019年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进
行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
培养基的有效期是指已通过促生长试验的 培养基在整个有效期内均需符合这些相应 的标准。每批培养基储存的时间将取决于 一定存放条件（包括容器和密封性）的培 养基组成成分的稳定性。
⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水， 特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水， 对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容 器配制与分装，配制时若需加热助溶应 注意温度不要过高
⑸、对配制培养基的过程作详细的记录， 记录内容包括：配制日期、培养基名称、 成分、配制数量、质量监控结果等进行全 面详细记录。
1、培养基的制备方法结源自判定被检培养基上的菌落平均数不得小于 对照培养基菌落平均数的70%，且菌 落形态、大小应与对照培养基上的菌落 一致。判该培养基的适用性检查符合规 定。
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
用于环境监控的培养基应特别小心防护。
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
灵敏度检查
参照 2019年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
菌悬液制备后在室温下放置应在2小时 内使用，若保存在2～8℃可以在24小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因 此，培养基的质量是微生物试验成功与否 的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮 藏条件和质量控制试验是提供优质培养基 的保证。
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生 产的符合规定的商品化成品培养基，脱水 培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌 株和用途。配制时应按使用说明上的要求 操作，受潮结块不能使用，以确保培养基 的质量符合要求。
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
⑸固体培养基灭菌后的再融化应在加热的
水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次， 融化的培养基应放在45～50℃的水浴中， 不得超过8小时。
二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
般在一年内使用，琼脂培养基不得在0℃ 或0℃以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。 若培养基要长期保存，琼脂平板应密闭包
装或置于密闭容器中以防止水分流失。
⑶培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在 高压 菌器中，避免影响培养基的质量。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光 的环境。
⑷保存于密闭容器中，可防止水分流失以 延长保存时间。
⑵配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或 搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧 瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的 器皿应 洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可 使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器， 避免金属离子与培养基成分结合，生成有 害物质，影响细菌生长。
⑶培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备， 可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物 质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂 或之前玻璃器皿所盛装的物质。因此。应 使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁 剂和外来物质的残留，并进行清除污物的 确认。