2020年高二生物选修一专题五《血红蛋白的提取和分离》知识点总结测试无答案

专题五血红蛋白的提取和分离

【知识框架】

1. 分离不同种类蛋白质可以利用蛋白质各种特性的差异，如分子的__________、所带电荷的_________、_________、__________和对其他分子的_________等。凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法；电泳是指带电粒子在_______的作用下发生________的过程，许多重要的生物大分子，如＿＿＿＿＿、＿＿＿＿等都具有＿＿＿＿＿＿＿＿，在＿＿＿＿＿＿下，这些基团会带上＿＿＿＿＿＿＿，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷＿＿＿＿＿的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子的差异以及 ___ 、的不同，使带电粒子产生不同的___________，从而实现样品中各种分子的分离。常用的电泳法有_________________电泳和___________________电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率取决于＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿以及＿＿＿＿＿＿＿等因素。在测蛋白质分子量（纯度鉴定）时通常使用____ 电泳。

2.当相对分子质量不同的蛋白质通过琼脂凝胶层析时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部，路程较，移动速度；而相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较，移动速度，导致相对分子质量小的流出，相对分子质量大的流出，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3.蛋白质的提取和分离一般分为四步：、粗分离、和。

（1）样品（哺乳动物的血液）处理和粗分离

样品处理和粗分离的过程为：→→→。①红细胞的洗涤：目的：去除＿＿＿＿＿；方法：＿＿＿＿＿＿＿＿离心。

采集血样前，盛血容器中需预先加入_______________作为____________，以防止

______。采血后应及时分离____________和_________，分离方法采用______________（500r/min离心10min），分离后，去除____层透明的黄色血浆，将____层______色红细胞倒入烧杯，加入____倍体积的___________，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次以上，直至____________________，表明红细胞已洗涤干净。洗涤红细胞时，洗涤次数过少，无法将__________全部除去，如果血液样品离心后分层不明显，可能原因是＿＿＿＿＿；离心速度过____和时间过_____，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到＿＿＿的红细胞，影

响后续提取的血红蛋白的＿＿＿＿。

②血红蛋白的释放：将已洗涤干净的红细胞倒入烧杯，加＿＿＿＿到原血液的体积，使红细胞________，再加40%体积的＿＿＿＿，使________溶解，置于______搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）, 红细胞破裂释放出血红蛋白。

③分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度进行高速离心10 min ，离心管中的溶液从上往下分为4层:

第1层（最上层）：＿＿＿＿＿＿的______层

第2层（中上层）：＿＿＿＿＿＿＿的沉淀层，＿＿色薄层固体

第3层（中下层）：＿＿＿＿＿的水溶液层，＿＿＿＿的液体

第4层（最下层）：其它杂质的＿＿＿＿＿沉淀层

将试管中的液体用＿＿＿＿过滤、除去＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，于＿＿＿＿＿中静置片刻后，分离出下层的＿＿＿＿＿＿＿＿。

④粗分离：即＿＿＿＿。将装有血红蛋白溶液的透析袋放入pH为7.0的____________中，透析12h，透析的原理是___ ___________________________ ，透析的目的是____________ ___。

（2）血红蛋白的纯化——凝胶色谱法(层析)

①制作色谱柱：柱体是长40cm、内径 1.6cm的玻璃管，柱顶部插入安装了________的橡皮塞，柱底部插入安装了_______（带头部）的橡皮塞（橡皮塞上部切成锅底状凹穴），在橡皮塞中安装移液管时，移液管上部_______（必需/不能）超过橡皮塞凹穴底面，凹穴上覆盖尼龙网，再用尼龙纱将橡皮塞上部包好插入柱体的下端，移液管头部作为出口部位，连接细尼龙管，用螺旋夹控制尼龙管的打开与关闭。

②装填凝胶色谱柱：商品凝胶使用前直接放在＿＿＿＿＿中膨胀，并用＿＿＿＿＿将加入洗脱液的_________加热至接近沸腾，这种方法既加速凝胶膨胀，又除去凝胶中可能带有的________和排除凝胶颗粒内的_______。因为干的凝胶和用缓冲液（洗脱液）平衡好的凝胶的体积差别_______（不大/很大），所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算＿＿＿＿＿＿＿。交联葡聚糖凝胶（SephadexG-75）的“G”表示凝胶的_________、

_________及__________，“75”表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水_____g。凝胶装填色谱柱时，色谱柱下端连接的尼龙管应_______（打开/关闭），将配制好的凝胶悬浮液_________（一次性/分多次）缓慢倒入色谱柱内，期间_____（可

以/不能）轻微抖动色谱柱，使凝胶装填均匀，凝胶色谱柱内不得有＿＿＿＿存在，否则会搅乱洗脱液中蛋白质的＿＿＿＿＿＿，降低＿＿＿＿＿。一旦发现凝胶柱内有气泡，必需_______。凝胶装填完毕，立即连接盛有_______________（pH为7.0）的洗脱瓶，在50cm高的操作压下充分洗涤平衡，使凝胶装填紧密。

③样品的加入和洗脱：加样前，打开色谱柱下端的流出口，让色谱柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降，当缓冲液缓慢下降到__________________时关闭出口，然后按照下图①～④顺序加样，最后连接装有缓冲液的洗脱瓶进行洗脱，待红色蛋白液接近色谱柱底部时，用试管收集流出液，每试管____mL。如果凝胶色谱柱装填成功、分离操作正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带______、________、________地随着洗脱液缓慢流出，反之，如果凝胶色谱柱的装填不好，红色区带_________、________、________，分离效果不好。通过凝胶色谱(层析)除去透析后的血红蛋白溶液中的＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（3）纯度鉴定：判断＿＿＿＿的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。在鉴定的方法中，使用最多的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。十二烷基硫酸钠（SDS）能与各种蛋白质形成“蛋白质—SDS复合体”， SDS所带负电荷的量大大超过蛋白质分子的电荷量，掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，电泳时，蛋白质的迁移速率完全取决于________________，蛋白质由点样孔向______极迁移，