临床基因扩增实验室质量管理体系的建立
PCR实验室的质量体系文件
• 检测项目的性能验证； • 项目检测的SOP; • 仪器和设备的操作SOP； • 仪器和设备的维护SOP； • 人员的技术档案； • 各种记录表格；
表格记录
仪器设备的维护校准SOP
• 日维护 • 周维护 • 定期维护 • 剂量单位校准 • 厂家校准
人员的技术档案记录
④ 不再出现； ⑤ 纳入标准；
理的“精髓”。
质控规则的符号及其定义
符号
定义
• 12S • 13S • 22S • R4S
一个质控测定值超出±2s控制限。 一个质控测定值超出±3s控制限。 两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的
差值超出4s控制限。
合要求、要猜到病原体等；
第49-51页
室间质量评价
• 为客观比较一个实验室的测定结果与靶值 的差异，由外单位机构，采取一定的办法， 连续和客观地评价实验室的测定结果，发 现误差并校正结果，使各实验室之间的结 果具有可比性，这是对实验室操作和实验 方法的回顾性评价，而不是用来决定在实 时的测定结果的可接受性。
室间质评的档案袋
• 申请表； • 接收记录； • 保存记录； • 实验记录； • 结果上报表； • 结果汇报表； • 分析和改进内容；
Next
质控规则
• 质控规则的功能：判断测定批的失控还是 在控；
• 失控处理：
① 查出原因； ② 采取措施； ③ 保证消除；
防止同样的问题出 现第二次是质量管
• Levey-Jennings质控图法：稳定条件下，20 个室内质控结果不应有多于1个结果超过 2SD限度；在1000个测定结果中超过3SD的 结果不多于3个。
“即刻法”
• 在刚开始进行质控时，可以采用“即刻法” 进行质控，当日常有效测定次数超过20次 时，转入使用Levey-Jennings 质控图结合 Westgard多规则质控的方法进行质控。
临床基因扩增实验室 质量管理体系的建立
2013.10.21
From
福建省临床基因扩增检验实验室 规范化培训暨技术人员培训班
卫生部临床检验中心 李金明
实时荧光定量PCR
模板起始浓度越高，荧光信号强度达 到域值所需的循环数越少，即Ct值越 小。
荧光值
未知浓度样本
循环数n
荧光值 Ct值
模板起始浓度的常用对数 与Ct值呈负线性关系。
• 改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上， 即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操 作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。
室内质量控制
• 标本采集、运送和保存中的关键点:
① 容器——密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物； ② 采集方法——人员训练有素、防污染、保存时间和温度； ③ 合格标本——容器完整、量够、时间符合要求、外观符
Levey-Jennings质控图
Thank you！
The end.
• 一人一个档案； • 个人基本情况； • 培训证和上岗证； • 论文、著作、成果等； • 培训考核记录等；
仪器设备的技术档案
• 一台仪器一个档案； • 仪器的基本情况； • 仪器的使用说明书； • 仪器校准的记录； • 维修维护的记录等；
Next
室内质量控制
• 由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实 验室工作的可靠性程度；旨在监测和控制本实验室工作的 精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的 一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告 的一项工作；
已知浓度系列标准品
循环数n
标准曲线
log起始浓度
无基因无核酸的重要性
• 严格分区（一区→二区→三区）； • 开窗通风； • 用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面； • 增长紫外照射的时间； • 用75%乙醇空中喷雾； • 实验前的处理程序和实验后的处理程序；
核酸污染的来源
• 临床标本中存在的大量待测微生物 • 科研中得到的质粒克隆 • 以前分析研究的特定微生物 • 大量存在于实验环境中的特定微生物 • 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验
室最容易产生的，将造成假阳性的“污 染”。
Next
质量体系文件的编写
• 基本原则：最有效+符合实际； • 三大特性：
①法规性：一旦批准必须认真执行； ②唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序； ③适用性：要符合实际，具有可操作性；
• SOP包含的内容：5W+1H； • SOP呈现方式：图片+文字；
• 41S 四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。 • 7T 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变
化。
• 10X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。
质控方法
• “即刻法”和Levey-Jennings质控图法 • “即刻法” 的实质是一种统计学方法，即
Grubs异常值取舍法 ；只要有3个以上的数 据即可决定是否有异常值的存在。
临床基因扩增检验实验室的设置质量管理体系的建立及其技术验收
产物分析区
核酸扩增后产物分析方法,如膜上或微孔板上 探针杂交方法,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝 胶电泳,核酸测序等方法。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必 须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增 产物带出。由于本区有可能用某些可致基因 突变和有毒物质，故应注意实验室人员的安 全防护。
卫检字2002第8号
临床基因扩增检验实验室技术验收申请表
一.基因扩增实验室基本情况 二.提供材料情况（十部分）
《医疗机构执业许可证》 拟设置基因扩增实验室医院医疗资源状况、对该检 测的需求及实验室运行的预测分析 拟设置基因扩增实验室的设置平面图 实验室主要负责人简历表 实验室工作人员一览表
临床基因扩增检验实验室技术验收申请表
试剂准备区
试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试
剂制备好后应有质检： 一是否有污染（是否 有假阳性存在）、二是使用弱阳性质控物检 测试剂的扩增效果。
标本制备区
仪器设备配置标准：
生物安全柜 ， 2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰 箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加 热模块；微量加样器（覆盖1～1000µl）；可移动 紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品； 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心 管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作 鞋；专用办公用品等。
样品处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的 核酸提取方法，可在开展临床标本检测前对提取方法进 行评价。
标本制备区
温育既可在加热模块也可在水浴中进行。加 热模块和水浴应在每次使用时，都要对所设置 的温度使用已经校准的温度计进行校准。
临床PCR实验室设计与质量管理体系建立
广西壮族自治区人民医院检验科 覃桂芳
临床基因扩增检验实验室设计
?依据：卫生部颁发的《临床基因 扩 增检验实验室管理暂行办法》
（卫医发[2002]10
号）
? 《医疗机构临床基因扩增管理法》
(卫办医政发〔2010〕194号)
临床标本的接收
?通常的工作流程：标本采集 血清分离
? 方便工作
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
传递窗
传递窗
传递窗
空气流向
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
对“实验室质量管理”的理解
? 经验管理 ? 质量检验管理 ? 统计质量管理
? 全面质量管理： ISO9000、 ISO/IEC 15189-2007、 ISO/IEC17025-2005
管理的本质
是协调
管理的对象
是以人为中心的组织资源与职能活动
“理念”的转变
? “质量管理是 质量部门的职责” — —
责”
“质量改进是 每个员工的职
? “培训是一种 负担” — — “培训是一种 未来投资”
? “尽量减少测量数据” — —
“理念”的转变
? “人是错误的来源” — — 操作中的错误追根寻源往往是 管
? 标准化+全面质量管理
管理 ≠ “外部检查”、通过“认证”和 “认可”
“管理”的定义
●管理就是通过计划、组织、领导和控制，协调以人为中 心的组织资源与职能，以有效实现目标的社会活动。
含义
具体理解
管理的目的 是有效实现目标，所有的管理行为，都是为实现目标服务的
临床_PCR_实验室质量管理体系的建立
临床PCR实验室质量管理体系的建立卫生部临床检验中心李金明《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）是到目前为止卫生部针对一项检验技术的临床应用管理下发的第一个法规性文件，要求临床PCR实验室，不但在实验室设置及仪器设备等硬件上要满足开展临床检验的条件，而且要求实验室在日常工作要有文件化的工作程序。
对于临床实验室来说，这是从来没有过的。
我们的检验科多少年来遵循的都是一种固定的经验管理模式，对日常检验工作，通常缺乏一个文件化的程序，只是购买到商品试剂盒以后，按照试剂盒的说明书去进行检验，对试剂盒本身也缺乏相应的质检，日常检验基本上是完成即可，至于完成的质量怎么样，心中无数，只能从临床大夫和患者投诉的多少来做判断。
做得好一点的检验科，还多少有一点室内质控，或是参加了室间质评，做得差的，很多检验项目根本就没有室内质控。
但近年来，随着临床实验室质量保证的概念逐步地进入我们的临床检验实践，我国临床检验正进入到一个规范化和标准化的时代，尤其是临床PCR实验室，起到了一个很好的领头和示范作用。
在全国，一大批从事临床PCR检验的专家和同道，在他们的日常工作和申请实验室验收过程中，总结经验，建立了不但在形式而且在实质上符合当今实验室质量管理模式的临床PCR实验室。
本处的许多叙述，有本人的一些体会和理解，但很多的概念应该说是来自于我们全国各实验室的同行们实际工作经验的启发。
一、实验室质量管理概述实验室质量管理是说起来容易，做起来难。
要说吧，其基本内容也就四句话，就是写你所应做的，做你所写的，记录你已做的和分析你已做的。
所谓写你所应做的，就是将在实验室检测中要做的事以文件化的形式表述出来，形成一个实验室的质量管理文件，通常包括质量手册、质量体系程序文件和标准操作程序（SOP）等。
质量手册的基本定义是：阐明一个实验室的质量方针，并描述其质量体系的文件。
其主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员职责、实验室设施环境、仪器设备、溯源性、检验方法、标本管理、记录、报告等，是对上述各方面质量管理的一般性描述。
临床PCR实验室的设置及质量管理内容
什么样的临床基因扩增检验实验室 是最标准的？
临床基因扩增实验室设置的一般原则
各区独立
注意风向 因地制宜
“十六字口诀”
方便工作
基因扩增实验室 各区的功能和配置
试剂储存和准备区
储存试剂的制备 试剂的分装 主反应混合液的制备
冰箱 混匀器 微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 消耗品（带滤心吸头、
实验室管理要求：记录
实验室应有适合自身实际情况又符合现行规章 制度的记录管理制度；
记录应有参与标本收集、标本准备和处理、检 测的人员签字。
所有记录和报告都应安全贮存、妥善保管并保 密。
实验室管理要求：报告
检测结果的报告应准确、清晰和客观。定性测定报告“阴 性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ml报告。
当临床科室或患者要求用电话、图文传真或其它电子和电 磁设备传送结果时，实验室应保证工作人员遵循文件化的 程序，并为对方保密。
怎样编写SOP？
实验室的日常工作管理
工作项目 水浴箱、微量恒温器（加热模块） 次氯酸钠溶液 生物安全柜 室内质控
弱阳性质控（定性） 低、中、高浓度质控（定量） 阴性质控：原样本
最主要的扩增产物污染 来源
有可能使用致突变和有 毒物质
微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 专用消耗品 专用办公用品等
实验室质量管理体系的建立
质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序
实验室管理要求：设备管理
主要设备应有维护程序文件及维护记录；
(a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可 能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)修复的设备必须 经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使 用；(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工 作的影响。
临床基因扩增检验实验室质量管理手册
临床基因扩增检验实验室质量管理手册
简介
本手册旨在规范临床基因扩增检验实验室的质量管理流程，以提高检验质量并确保患者安全。
质量管理流程
1. 检验前准备
- 确认患者信息的准确性和完整性
- 根据检验要求准备样本
- 校正和确认仪器的准确性和稳定性
2. 检验过程控制
- 按照标准操作程序进行检验
- 确认样品正确匹配
- 记录检验数据，并对异常数据进行分析和处理
3. 质量控制
- 确认质控方法的准确性和可行性
- 测试质对质控样本
- 分析质控结果，及时纠正异常结果
4. 检验结果的分析和审核
- 检查正常和特殊值
- 对异常结果进行处理和检讨
- 最终结论的审核和确认
5. 数据保存和传输
- 建立合适的数据保存和传输机制，确保数据的完整性和保密性
- 纳入质量管理体系中，保证数据安全和可及性
6. 质量管理体系监督与评价
- 借鉴ISO9000等标准体系，不断完善和更新质量管理手册
- 定期对质量管理体系进行内部审核和外部评估，及时发现和解决问题。
结束语
以上是临床基因扩增检验实验室的质量管理手册，请按照规范操作流程进行检验，加强质量管理意识，确保每一个检验结果科学可靠、安全可靠、可追溯、可重复，最终造福患者。
临床基因扩增检验质量要求
检验试剂及耗材的采购、验收、管理、领用及使用
样品的采集、运送、接收、处理及保存 检验方法的选择、确认或验证
检验项目及仪器设备标准操作程序的建立和管理
检验结果质量保证
检验报告管理的规定：结果的发放方式、报告的格式和 内容、保护患者隐私的规定 记录的管理：记录的修改。保存及期限 对差错事故及不符合工作的纠正及预防措施
程，系统误差应<7.5%）
应保存主要设备的档案，档案内容应包括：设备标识、型 号、序号或其它唯一性识别、到货日期和投入运行日期、 目前放置地点、接收时的状态、仪器使用说明书或其存放 处、证实设备可以使用的设备验证报告、校准和/或检定 报告、维护、损坏、故障或维修的记录
应制定各类仪器维护保养，校准/检定计划，并有执行记 录。
对服务对象投诉处理
人员要求
实验室至少应有2名取得PCR上岗证，并为本单位在职 技术人员 实验室负责人应具有中级或以上专业技术任职资格 开展遗传性疾病基因芯片诊断技术或基于组织等分子 病理检测技术并出具诊断报告的实验室，还应具备至 少2名取得《医师执业证书》、主治医师或以上专业技 术、从事本专业的本单位在职医师
分析中质量控制
对新项目的性能进行方法学验证，并有相应的实验记录。 仪器、试剂、方法更新时应进行方法学验证，并有记录。 定量检测项目方法学验证的内容至少应包括：精密度、 正确度、线性范围（可报告范围）、检出限；
定性检测项目方法学验证的内容至少应包括：检出限、
精密度、符合率。
室内质量控制
目的 监测和控制实验室常规工作的精密度，即实验 室测定的批内和批间重复性 IQC结果决定了实验室即时测定结果的可靠性和有效性
淋病奈瑟菌有自溶的特性，标本采集后应立即送检。
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法一直是医疗机构重要的管理办法之一。
为了促进和维护基因扩增检验的质量，保证实验室的安全可靠，避免误诊，充分保障患者的权益，国家卫生健康委办公厅拟定了医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法。
首先，临床基因扩增检验实验室应当建立医院基因检测中心和定点实验室，定
期开展正规的检测活动，加强实验室的管理，落实质量管理体系。
其次，建立完善的质控系统，包括临床诊断质量控制、设备质量管理、实验室检验程序管理等，以保证检验质量。
同时，应加强实验室内部管理，定期进行质量检查和内部审计，确保实验室有效、规范、安全地运行。
此外，医疗机构还应充分重视基因检验人员的专业能力，人员应具备研究和操
作经验，并经过国家学术资格考试，取得正规的执业医师资格证书和相关技术人员专业技术资格证书。
此外，医疗机构还应签订《临床生物样本处理与检验责任书》，确保《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》的全面、严谨的执行。
综上，医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法应遵循以上规定并加以实施，以保证临床基因扩增检验可靠准确，切实保护患者的权益和健康安全，有效提升医疗服务质量。
临床基因扩增检验实验室的设置及质量管理体系的建立(PPT 35页)
注意风向 “十六字口诀”
因地制宜 方便工作
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
传递窗
传递窗
传递窗
空气流向
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
实验室质量管理体系的建立
质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序
(相关记录表格)
质量管理的内涵
阳性室内质控物来源：
浓度及批号：
扩增位置：
阴性室内质控物来源：
批号：
扩增位置：
所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：
1
9
17
25
2
10
18
26
3
11
19
27
4
12
20
28
5
13
21
29
6
14
22
30
7
15
23
31
8
16
24
32
核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。
仪器设备使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒温仪温度校准： ℃
实验室的日常工作管理
工作项目
水浴箱、微量恒温器（加热模块） 次氯酸钠溶液 生物安全柜 室内质控
弱阳性质控（定性） 低、中、高浓度质控（定量） 阴性质控：原样本
经历提取过程的空管 仅含扩增反应混合液管 实验台面
加样器、离心机
实验室各区
核查点
□校准及记录温度 □新鲜配制 □先起动运行30分钟后再开始工作
□有 □有
□有 □有 □有
□使用后用次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁
分子检测实验室设置、人员及质量管理体系建立要求-肖艳群
签发分子遗传报告的医师：至少具有中级遗传学专业技术职务任职资格， 并有从事分子遗传工作的经历
NGS实验室人员要求
NGS检测实验室管理和技术人员：专业、学术水平、教育培训情况需
符合要求
NGS实验室技术人员：需有PCR上岗证，且应接受NGS技术的理论与 实验培训，经考核合格后方可上岗
NGS数据分析人员：应参与NGS数据分析培训，并考核合格后方可上
包括标本接收、报告发放流程
定期评估检验项目、检验结果输入、输出一致性
人员资质
实验室负责人：至少具有中级专业技术职称、医学检验或相关专业背景。 有从事分子诊断工作的经历
实验室操作人员：具备相关资质并经过有资质的培训机构培训合格取得上 岗证后方可上岗
签发分子病理报告的医师：至少具有中级病理学专业技术职务任职资格， 并有从事分子病理工作的经历
（八） 严重违反国家实验室生物安全有关规定或不具备实验室生物安全保障条件的
国家相关技术指南
测序技术的个体化医学检测应用指南（试行） 遗传性相关个体化医学检测应用指南（试行） 肿瘤个体化治疗检测应用指南（试行）
孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范
实验室建设
硬件
实验室设置
实验室设备
描述检测项目可以适用的样品类型（例如外周血、血浆、FFPE石蜡标本），并指明本项目建 立、外显子组）捕获的方法和试剂 湿实验分析过程的对照与设置方法 测序平台、测序反应的试剂或耗材的版本（例如反应池/flow cells、芯片） 测序设备上用于产生原始数据及输出格式（如fastq文件）的软件和版本号 监控和评估测序过程的指标和质量控制参数 分析流程的接受和拒绝标准（例如，如果测序覆盖度不能达到特定检测项目的最低要求，采 用NGS进行靶向区域测序的结果就可能存在假阳性或假阴性，从而与后续的Sanger测序验 证结果不符，因此就需要对于这类项目建立可以接受的靶向区域覆盖度标准 ）
核酸扩增检测实验室建设及质量管理体系建立(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
室内外空气交换，也用于更换工作衣和工作鞋。 2 各区互相独立，各区必须有明确的标识，各区物品专用，
设置相应的仪器和设备。 3 各区内的任何物品不可移至其它区。各区之间应有传递窗
，用于传递实验过程中的物品。
• 3、各区的功能： • 1）试剂准备区：负责试剂的配制、分装、主反应混合液配制和 • 保存， 处于正压状态，以保证试剂的稳定性。 • 2）样品制备区：负责样品登记、分装，核酸提取纯化、保存和 • 加样，配有生物安全柜。处于负压状态。 • 3）基因扩增区：负责核酸扩增及其产物的测定； • 4）产物分析区：负责扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
• 4、工作流向 •：
•
试剂准备区 样品制备区
基因扩增区 产物分析区
5、避免污染的设计
• 如何避免污染是核酸扩增实验室设计的关键。因此，围绕这一核 心问题展开实验室布局、空调通风系统设计和风量控制等。一般 的核酸扩增实验室建设具有如下要求。
• 1）实验室现场要求高
• ① 需要标准的四区分离和气流控制。 • ② 每个独立的实验区都有一个缓冲间，同时，每个区域均采用气
核酸扩增检测实验室建设及质量管理体系建立
主要内容
一、核酸扩增实验室的分区设计及各区的功能。 二、“无基因”或“无核酸”概念。 三、实验室清洁及防止标本间交叉污染和扩增产物遗留污染的方法。 四、质量管理体系的建立（标准操作程序、实验记录表格等的编写）。
• 国外新冠疫情仍在蔓延，国内防控措施正确获得巨大成功， 进入了常态化防控和复工复产阶段。不过，有时个别地区仍出现 聚集性病例，需要快速有效的方法及时对疑似病人进行诊断，病 毒核酸检测作为诊断新冠病毒感染的金标准，可为诊断提供直接 证据。因为新冠病毒暂定为第二类病原微生物，而且致病力尚未 完全明确，因此，操作者存在较大的感染风险。