胚胎冻融的原理
胚胎冻融的原理
胚胎冻融的原理本文转载于兰州军区兰州总医院生殖医学中心：胚胎冻融的原理介绍很多人都不明白胚胎冻融的原理就是什么？所以在网上一直提问，就于这个问题，今天大编成给大家一起互动这个蒙蔽的答案，期望对存有疑惑的您有所帮忙，也期望能够协助您踏进疑惑！专家为我们讲解：利用冷冻技术将胚胎和配子从生理温度降至低温并贮存，需要时，再从低温状态解冻至生理温度。
为增加胚胎和配子对冻融过程的耐受，增加存活率，必须选择合适的物质作为冷冻保护剂。
专家谈至：胚胎相同与配子，所以须采用相同的冷藏保护剂和冷藏方法展开冷藏，但它们都就是活的细胞，对耐热冷藏与融化过程存有相近的机理，以下以胚胎为基准表明。
一、常用冷冻保护剂1.渗透性保护剂例如丙二醇（proh），二甲基亚砜（dmso），甘油（glycerol）等小分子化学物质，难扩散进细胞，也称作细胞内冷藏2.非渗透性保护剂包括单糖如葡萄糖、果糖，双糖如蔗糖、麦芽糖等，它们不能进入细胞，利用它增高细胞外溶液的渗透压而引起非特异保护作用，又称细胞外冷冻保护剂。
二、冷藏保护剂对胚胎的影响及机制（一）毒性作用为证明其毒性，将胚胎放在相同的冷藏保护剂一定时间，却不将其冻融，再继续观测胚胎的发育，辨认出在22℃时，逗留在proh的胚胎失活率为低于dm的，而在4℃时，曝露于此两种冷藏保护剂几乎未辨认出其对胚胎存有不良影响。
但经冻融过程后，存活率却显著上升，除其毒性促进作用外，引发冻融后胚胎失活的因素主要存有：（二）细胞内冰晶形成细胞的冷藏实际上就是一个水解过程，如果在资金投入液氮前胚胎能够充份水解，防止构成细胞内冰晶，就是胚胎冻融后能够存活的主要因素。
相信仔细看过以上讲解的您一定收益匪浅吧，希望我的分享能给您带来福音！。
胚胎冷冻原理
胚胎冷冻原理当科技进步到一定程度时，胚胎冷冻技术便应运而生。
胚胎冷冻是指将受精卵或初期胚胎置于低温环境下，储存起来，以便未来使用。
这项技术不仅帮助那些在生育时遭遇不孕不育的夫妇，更为科学界的发现提供了便捷的途径。
胚胎冷冻的整个过程可以分为以下几个步骤：第一步，收集和准备健康的卵子和精子。
在体外受精的过程中，取出卵子和精子，然后将它们培养在培养皿中，以促进受精卵的发育。
第二步，收集和冷冻受精卵。
将受精卵贴在培养皿上，按照标准程序进行操作。
在发育的早期，胚胎会被收集并放置在低温的液氮中，这会停止胚胎的发育，使其进入休眠状态。
第三步，储存和保护。
使用液氮条码系统来确保胚胎的标识和储存信息，以避免混淆和损失。
胚胎在常规下是能够存储5年，但在特定情况下或新技术和研究的发现，其保存时间或可延长。
胚胎冷冻可以帮助那些需要辅助生殖技术的夫妇。
例如，一些女性因年龄或疾病等原因而不能自然怀孕，或许可以将他们的受精卵冷冻下来，以备不时之需。
此外，对于那些必须接受放疗或化疗的患者，他们还可将备用胚胎存储在里面，用于将来他们生育孩子的可能性。
同时，胚胎冷冻也为科学研究提供了全新的方向。
有些科学研究无法在体外进行，因为某些特定的细胞只在某些发育阶段生存。
通过冷冻胚胎，科学家就可以拥有这些细胞并在适当的时间点解冻以进行研究。
然而，胚胎冷冻技术也存在一些争议，其中最主要的是胚胎的生命可形成。
有些人认为，在冷冻过程中，胚胎会被暴露在液氮所引发的极寒温度下，这可能导致损伤甚至死亡。
因此，他们反对这种技术并呼吁立即禁止它。
总之，虽然存在着一些争议，但胚胎冷冻技术仍是一项非常重要的科学技术。
它为那些需要帮助实现生育的夫妇提供了新的选择，并为科学研究提供了独特的途径。
我们需要继续关注这项技术的发展和应用，并逐步完善它。
胚胎冷冻保存资料
渗透型冷冻保护剂
属于细胞内冷冻保护剂，一般小分子物质，在0℃ 以上很容易通过细胞膜进入细胞质。 机理：在进行胚胎冷冻时，保护剂使水分子从细胞 内渗透出，减少了细胞内冰晶的形成；同时保护剂 与水分子形成氢键，降低了冻结部分的电解质浓度 从而减少了冷冻过程对细胞的损伤。 常见的渗透型冷冻保护剂有：甘油、二甲基要亚砜 （DMSO）、丙二醇和乙二醇等。
胚胎冷冻保存原理 胚胎冻存的损伤机制 抗冻保护剂 胚胎冷冻方法 人类胚胎冷冻案例
胚胎冷冻保存原理 冷冻保存,是将体外培养物悬浮在加有或小加 冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速度降 至零下某一温度，对其长期保存的过程。此 时细胞的代谢活动被完全抑制，使细胞的生 命在静比状态下保存来，从而达到长期保存 的目的。
非渗透型冷冻保护剂 属于细胞外冷冻保护剂，一般为高分子物质， 能够溶解于水，但不能进入细胞。 机理：非渗透型冷冻保护剂主要通过该改变 渗透压引起细胞脱水，发挥非特异性保护作 用。 常见的非渗透型冷冻保护剂包括：单糖（如 葡萄糖）、二糖（如蔗糖）、三糖（如棉子 糖）、聚乙烯吡咯烷酮等。
冷冻方法
胚胎冻存的损伤机制
胚胎的冷冻实际上是一个脱水过程，冷冻保存的关 键是设法减少细胞内冰晶对胚胎造成的损伤。正常 胚胎细胞内水分含量达80%以上，在冷冻过程中， 胚胎细胞中的水分将从细胞中游离出来冷冻成冰晶， 一方而对胚胎细胞造成机械性损伤即冰晶损伤，另 一方而导致未结冰的细胞内溶液渗透压急剧增高， 造成蛋自质变性即溶液损伤，二者最后都导致胚胎 小可逆性变化而死亡。
胚胎冻融原理及技术进展
② 预平衡液ES：以BS为基础液配制7.5%DMSO+7.5%EG ③玻璃化冷冻液VS：以BS为基础液配制15%DMSO+15%EG+0.5MSucrose
2.从原核到囊胚阶段胚胎的玻璃化冷冻
预平衡
玻璃化
囊胚冷冻前进行人工皱缩( 对滋养细胞层进行激光穿刺，使囊胚腔内液体流出，囊胚腔 塌陷，再进行冷冻减少冰晶的产生) 后再行冷冻。
Rienzi L, Gracia C, Maggiulli R, et al. Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance. Hum Reprod Update. 2017 ;23(2):139-155.
保护剂毒性。 开放载体：交叉污染。
对细胞超微结构的影响：玻璃化冷冻时巨大 的渗透压变化及高浓度冷冻保护剂会引起滋 养细胞微绒毛数量的减少，对质膜、线粒体 和粗面内质网等细胞器都可能造成影响。 操作机械性损伤：人为技术熟练程度；激光 辅助也可能会因其热效应而影响胚胎发育。
六、胚胎解冻
4. 囊胚期细胞慢速冷冻流程
脱水程序
• 5%glycerol，10min； • 9%glycerol/0.2mol/L sucrose， 10min； • 装入含0.5ml 9%glycerol 0.2mol/L sucrose冷冻保护溶 液的冷冻管中。 • 上机。
胚胎冻融技术及其在我国肉羊产业中的应用
Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｆ ｅ ｅ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ
胚胎冻融技术及其在我国肉羊产业中的应用
特 日格 勒 － － ， 何 小龙 ， 王孟巍 ， 祁 云 霞 ， 刘永斌 ， 荣威 恒
（ １ ． 内蒙 古农 业 大 学 动 物 科 学 学 院 ， 内 蒙古 呼 和 浩 特 蒙 古 呼伦 贝 尔 市 畜牧 工 作 站 ， 内 蒙古 海拉尔区 ０ １ ０ ０ １ ８ ； ２ ． 内 蒙 古农 牧 业 科 学 院 ， 内蒙 古 呼和 浩 特 ０ １ ０ ０ ３ １ ； ３ ． 内 ０ ２ １ ０ ０ ８ ）
Ｔ ｅ ｒ ｉ ｇ ｅ ｌ ｅ 一 ， Ｈ Ｅ Ｘ ｉ ａ ｏ － ｌ ｏ ｎ ｆ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｍｅ ｎ ｇ － ｗ ｅ ｉ ， Ｑ Ｉ Ｙ ｕ ｎ － ｘ ｉ ａ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｙ ｏ ｉ － ｈ ｅ ｎ ｇ
关键词 ： 胚胎冻融技术 ； 胚 胎 移植 ； 肉羊
中图分类号 ： ￥ ８ ２ ６ ． ３ ６ 文 献标 识码 ： Ａ 文 章顺 序 编 号 ： １ ６ ７ ２ — ５ １ ９ ０ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７ — ０ ０ ５ ３ — ０ ３
Ｅｍ ｂｒ ｙ ｏ Ｆｒ ｅ ｅ ｚ ｉ ｎ ｇ ａ ｎｄ Ｔｈ ａ ｗｉ ｎｇ Ｔｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｉ ｔ ｓ Ａｐ ｐｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｍ ｕｔ ｔ ｏ ｎ Ｓ ｈｅ ｅ ｐ Ｉ ｎ ｄｕｓ ｔ ｒ ｙ ｉ ｎ Ｃｈｉ ｎａ
摘要 ： 胚 胎 冻 融 技 术 可使 胚 胎 移 植 不 受 时 间 、 地 点的限制 ， 从 而 达 到 提 高胚 胎 移 植 效 率 的 目的 ． 研 究 和 优 化
《胚胎冷冻保存》课件
准化和规范化。
THANKS
02
胚胎冷冻保存技术
胚胎冷冻保存的方法
玻璃化冷冻
快速降温使胚胎进入玻璃化状态，减少冰晶形成。
程序化冷冻
慢速降温使胚胎逐渐结晶，适用于大多数胚胎类型。
显微操作
对胚胎进行显微操作，如显微切割或显微注射，以提高冷冻存活率。
冷冻保护剂的选择与使用
01
02
03
低温保护剂
选择适当的低温保护剂， 如二甲基亚砜（DMSO） 或乙二醇（EG），以保护 胚胎免受低温损伤。
技术挑战
04
胚胎冷冻保存过程中可能存在细胞损伤的风险 ，需要不断优化冷冻和解冻技术，提高胚胎存
活率。
胚胎科研中的冷冻保存
技术简介
胚胎科研中的冷冻保存 主要用于研究胚胎发育 的机制和过程，通过低 温生物学方法将胚胎在 液氮中长时间保存。
应用场景
主要应用于动物模型和 人类胚胎科研，为科研 人员提供实验材料和研
温度控制
严格控制冷冻和解冻过程 中的温度，以最大程度地 减少对胚胎的损伤。
冷冻保存的效果评估
存活率
遗传稳定性
解冻后评估胚胎的存活率，以确定冷 冻效果。
通过遗传学方法检测解冻后的胚胎是 否保持了正常的遗传物质。
发育能力
观察解冻后的胚胎是否能正常发育， 以评估其发育潜力。
03
胚胎冷冻保存的应用
辅助生殖技术中的胚胎冷冻保存
引入自动化和智能化技术，提高胚胎冷冻保存的效率和安全性。
胚胎冷冻保存技术的潜在应用领域
辅助生殖技术
为不孕不育夫妇提供冷冻保存胚 胎的服务，实现生育愿望。
动物繁殖
保护珍稀动物和濒危物种，通过 冷冻保存其胚胎实现种质资源的
牛囊胚两步法玻璃化冷冻管内解冻方法的优化及其原理初步分析
牛囊胚两步法玻璃化冷冻管内解冻方法的优化及其原理初步分析牛胚胎程序化冷冻已广泛应用于生产当中,冷冻程序较统一,技术相对成熟。
玻璃化冷冻是继程序化冷冻之后发明的一种简单高效的冷冻方法,细胞无需经历缓慢的程序化降温过程,在玻璃化液中短暂处理后直接投入液氮冷冻即可。
该方法不需要昂贵的程序化冷冻仪,操作省时,节约资金。
牛胚胎玻璃化冷冻虽有大量的研究报道,但冷冻方案多种多样,极不统一,较大程度上限制了该方法的推广。
首先,解冻程序不统一,研究者对分步解冻与一步解冻各执己见,没有提出明了的解析,让生产者无从参考：其次,细胞在玻璃化液中的处理时间不确定,预处理时间从1min至20min均有报道,玻璃化液中的处理时间从30s至3min均有采用。
处理时间范围如此宽泛,不便于生产者参考。
牛卵母细胞是研究抗冻保护剂渗透的理想半透膜模型,本研究以MII期牛卵母细胞为模型,从原理上分析了抗冻保护剂的添加与脱除之间的关系,以及处理时间与胞内抗冻保护剂浓度的关系。
并将结论用于优化牛囊胚两步法玻璃化冷冻和管内解冻,以期简化和统一牛胚胎玻璃化冷冻方法,为指导生产提供依据。
实验结果表明：(1)用蔗糖浓度较高的玻璃化液处理牛卵母细胞后可采用较低浓度的蔗糖溶液甚至DPBS脱毒。
实验3.1中,牛卵母细胞经过EG20(20%v/v乙二醇的DPBS溶液)预处理3min,分别移入ES1(40%v/v乙二醇+0.3M蔗糖的DPBS 溶液)或ES3(40%v/v乙二醇+0.8M蔗糖的DPBS溶液)中处理30s。
ES1组以DPBS、0.25M蔗糖、0.5M蔗糖脱毒后的存活率分别为3.33%、56.67%和76.67%；而ES3组脱毒后的存活率分别为56.67%、83.33%和96.67%。
(2)实验3.2中,牛囊胚经EG20预处理3min后,分别以EG40(40%v/v乙二醇的DPBS溶液)、ES1、ES2(40%v/v乙二醇+0.5M蔗糖的DPBS溶液)或ES3处理30s,均采用DPBS脱毒,脱毒后各组胚胎再扩张率分别为90.32%、93.33%、86.60%、75.00%。
冻融胚胎移植是怎么回事
冻融胚胎移植技术的发展是由于在促超排卵药物刺激下，一个周期一次采卵可获得多个卵子，体外受精成功后可获得多个早期胚胎，而胚胎移植一次不宜超过4个以避免多胎妊娠，剩下一些好的胚胎就不得不丢掉了。
如果多余胚胎可以冷冻储存，对于在刺激周期未获妊娠者，可于自然周期复温后再次移植，从而增加妊娠机会。
另外，为避免卵巢过度刺激综合征(OHSS )，本刺激周期不移植，冷冻储存胚胎备自然周期再移植。
冷冻和解冻需要特殊的方法和试剂，是科学家经过多次的科学实验总结出来的。
1972年科学家报道小鼠冻融胚胎妊娠成功，产出鼠仔。
1983年澳大利亚冻融入胚胎移植妊娠成功。
1985年英国用胚泡期胚胎冷冻后解冻移植妊娠成功并分娩。
目前，胚胎冻融技术已在世界各地展开，已诞生的冻融胚胎试管婴儿已有数百例。
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胚胎冻融的原理
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/shiguanyinger/sgbk/2012/0625/10282.html
胚胎冻融的原理介绍
很多人都不明白胚胎冻融的原理是什么？所以在网上一直发问，就于这个问题，今天小编给大家一起分享这个迷惑的答案，希望对有困惑的您有所帮，也希望能帮助您走出困惑！
专家为我们讲解：利用冷冻技术将胚胎和配子从生理温度降至低温并贮存，需要时，再从低温状态解冻至生理温度。
为增加胚胎和配子对冻融过程的耐受，增加存活率，必须选择合适的物质作为冷冻保护剂。
专家讲到：胚胎不同与配子，所以须选用不同的冷冻保护剂和冷冻方法进行冷冻，但它们都是活的细胞，对耐受冷冻与融解过程有相似的机理，以下以胚胎为例说明。
一、常用冷冻保护剂
1.渗透性保护剂如丙二醇（PROH），二甲基亚砜（DMSO），甘油（glycerol）等小分子化学物质，容易渗透入细胞，也称为细胞内冷冻
保护剂。
2.非渗透性保护剂包括单糖如葡萄糖、果糖，双糖如蔗糖、麦芽糖等，它们不能进入细胞，利用它增高细胞外溶液的渗透压而引起非特异保护作用，又称细胞外冷冻保护剂。
二、冷冻保护剂对胚胎的影响及机制
（一）毒性作用
为证明其毒性，将胚胎置于不同的冷冻保护剂一定时间，却不将其冻融，再继续观察胚胎的发育，发现在22℃时，停留在PROH的胚胎失活率高于DM的，而在4℃时，暴露于此两种冷冻保护剂几乎未发现其对胚胎有不良影响。
但经冻融过程后，存活率却明显下降，除其毒性作用外，引起冻融后胚胎失活的因素主要有：
（二）细胞内冰晶形成
细胞的冷冻实际上是一个脱水过程，如果在投入液氮前胚胎能充分脱水，避免形成细胞内冰晶，是胚胎冻融后能存活的主要因素。
相信仔细看过以上讲解的您一定收益匪浅吧，希望我的分享能给您带来福音！。