芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤模型小鼠的肾保护作用及其机制研究
Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用的开题报告
Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用的开题报告题目：Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用引言：肾脏是人体最重要的器官之一，主要负责排泄代谢产物和维持体内水电解质及酸碱平衡。
缺血再灌注（I/R）损伤是多种临床情况下的常见问题，如心脏搭桥手术、移植手术、肝脏手术等。
I/R损伤会导致肾脏功能障碍，如急性肾损伤（AKI）。
目前，缺血再灌注损伤的发病机制尚不明确。
但研究表明，坏死性凋亡和坏死是I/R损伤的两种主要方式。
坏死过程主要通过Necroptosis途径实现，而Necroptosis是一种新型的程序性坏死。
因此，研究Necroptosis的抑制剂Necrostatin-1对I/R损伤的保护作用有重要的指导意义。
目的：本实验旨在探究Necrostatin-1对大鼠肾I/R损伤的保护作用及其机制。
方法：1.实验动物：30只SD大鼠2.实验分组：分别为模型组、Necrostatin-1组和正常对照组，每组10只大鼠。
3.肾I/R模型制备：大鼠注射胃酸双异丙酯将大鼠分为模型组、Necrostatin-1组和正常对照组。
并在去除左肾基础后，将牵拉左肾外周血供至肾蒂肾柄处使其停滞。
左肾缺血60分钟后再次开放，观测I/R造成的肾脏损伤。
4.注射Necrostatin-1：注射Necrostatin-1剂量为10mg/kg，注射时间为缺血后立即给予Necrostatin-1和缺血再灌注后2、4、8小时各一次。
5.实验指标：检测Necrostatin-1对肾脏缺血再灌注损伤的治疗效果，包括肾脏损伤指标、肾脏组织病理学变化、肾脏细胞坏死和Necroptosis的相关蛋白表达以及肾脏组织的免疫组化。
预期结果：Necrostatin-1能显著减少大鼠肾I/R损伤的程度，改善肾脏组织病理学变化、降低肾脏细胞坏死和Necroptosis的相关蛋白表达，提高肾脏组织免疫组化指标。
结论：本实验结果证明Necrostatin-1能够有效地减轻肾缺血再灌注损伤的程度，并对Necroptosis途径的抑制具有明确的意义，为临床治疗肾脏I/R损伤提供了重要的理论指导和实验基础。
川芎嗪呋咱拼合物保护肾缺血再灌注损伤模型小鼠的作用及机制
川芎嗪呋咱拼合物保护肾缺血再灌注损伤模型小鼠的作用及机制李万海;董宇航;施超;姜亦瑶;刘戈;刁文杰;吴振【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2022(26)2【摘要】背景:文献报道,川芎嗪和一氧化氮都能减轻缺血再灌注引起的急性肾损伤。
课题组合成一种在动物体内可以降解成一分子川芎嗪单体和一氧化氮的川芎嗪呋咱拼合物(605-1)化合物,其具有双重防治缺血再灌注损伤的作用。
目的:观察605-1防治小鼠急性肾缺血再灌注损伤的作用,并探讨其作用的机制。
方法:将48只雄性C57小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,单独给药组,模型给药低、中、高浓度组。
假手术组和单独给药组小鼠行假手术,不作肾缺血处理;模型组和模型给药各组小鼠建立肾缺血再灌注引起急性肾损伤模型。
6组均于术前24 h及2 h进行预处理,假手术组和模型组腹腔注射生理盐水;单独给药组及模型给药低、中、高浓度组分别予以川芎嗪呋咱拼合物(605-1),10,20,30 mg/kg。
于缺血再灌注24 h后,测定血清中肌酐、尿素氮水平及肾组织的病理变化;在蛋白水平检测肾组织肾损伤分子1、Nox4、p65、P-p65表达;在RNA水平检测肾组织肾损伤分子1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、单核细胞趋化蛋白1的表达。
所有动物实验程序均由安徽医科大学动物实验伦理委员会批准。
结果与结论:(1)单独给药组(30 mg/kg)无肾毒性;(2)与模型组相比,模型给药各组肾缺血再灌注小鼠肾组织病理显示肾组织病理肾小管扩张和刷状边界丢失、管状细胞丢失明显减轻,血清中肌酐、尿素氮水平显著降低;肾损伤分子1在肾组织蛋白水平、mRNA水平表达也明显下降,肾组织免疫组化中肾损伤分子1表达的分布、数量明显下降;Nox4、p65、P-p65的蛋白水平呈下调表达;肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、单核细胞趋化蛋白1的mRNA水平显著降低;(3)结果说明,605-1对小鼠急性肾缺血再灌注损伤有防治作用,其机制与抗氧化应激、抑制炎症反应有关。
GPER对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾叶间动脉舒缩功能的影响及其机制研究
GPER对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾叶间动脉舒缩功能的影响及其机制研究GPER对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾叶间动脉舒缩功能的影响及其机制研究引言：肾脏缺血再灌注损伤（RIRI）是一种常见且严重的肾脏疾病，常见于肾移植、心血管手术等临床操作中。
缺血再灌注过程中，肾脏组织受到氧供应不足和氧自由基的伤害，导致肾功能丧失、肾小管损伤等不可逆的变化。
近年来，研究发现雌激素受体GPER在RIRI中起到重要的调节作用，然而其对肾叶间动脉的舒缩功能影响及其机制尚未明确。
本研究旨在研究GPER在大鼠RIRI中的作用，并探讨其对肾叶间动脉舒缩功能的影响及其可能的机制。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康雄性大鼠50只，随机分为RIRI组和对照组。
2. 模型建立：对RIRI组的大鼠进行30分钟肾缺血后24小时再灌注，对照组仅进行假手术操作。
3. 分离肾叶间动脉：在取出大鼠肾脏后，精细分离肾叶间动脉。
4. 舒缩功能测定：采用多功能生理测定系统对肾叶间动脉进行舒缩功能测定。
5. 实验组织采集：收集肾叶动脉组织，进行组织形态学观察和免疫组化染色。
6. 数据统计与分析：采用SPSS 20.0软件进行数据统计与处理，结果以平均值±标准差表示，采用t检验进行两组间的比较。
结果：1. GPER在肾叶间动脉中高表达，RIRI组在缺血再灌注后GPER表达明显下降。
2. RIRI组大鼠肾叶间动脉收缩率明显低于对照组。
3. GPER激动剂处理后，肾叶间动脉收缩率明显上升。
4. 免疫组化染色结果显示，在RIRI组中，缺血再灌注后肾叶间动脉内皮细胞内炎症反应明显增加。
讨论：实验结果表明，GPER在大鼠肾叶间动脉中高表达，且在RIRI过程中其表达明显下降。
这说明GPER在RIRI中可能发挥了保护作用。
实验结果还显示，RIRI组大鼠的肾叶间动脉收缩率明显低于对照组，而GPER激动剂处理后，肾叶间动脉收缩率明显上升。
这表明GPER的激活可以改善RIRI后肾叶间动脉的舒缩功能。
芬戈莫德对血管紧张素Ⅱ灌注大鼠肾脏氧化应激的作用
芬戈莫德对血管紧张素Ⅱ灌注大鼠肾脏氧化应激的作用曾平;韩琦;梁伟;陈铖【摘要】目的研究芬戈莫德(FTY720)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注大鼠肾损伤的作用并探讨其可能机制.方法将36只SD雄性大鼠随机分为3组,每组12只:AngⅡ灌注组渗透性微量泵皮下泵入AngⅡ;0.9%氯化钠溶液灌注组渗透性微量泵皮下泵入等量0.9%氯化钠溶液;FTY720干预组在AngⅡ泵入基础上给予FTY720灌胃.每周收集各组大鼠24 h尿液,测定24 h尿蛋白含量,分别于第14天、第28天处死部分大鼠,留取血液及肾脏标本,试剂盒检测血及肾组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量;光镜观察各组肾组织病理学改变;免疫组织化学法检测肾还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶4(Nox4)的表达及分布.结果与同期0.9%氯化钠溶液灌注组大鼠比较,第14天及第28天AngⅡ灌注组大鼠血肌酐、尿素氮、尿蛋白、血及肾组织AngⅡ、MDA含量显著增加(P<0.05),T-SOD活性显著降低(P<0.05),血清白蛋白下降,第28天差异有统计学意义(P<0.05).与同期AngⅡ灌注组比较,第14天及第28天FTY720干预组大鼠血肌酐、尿素氮、尿蛋白、血及肾组织AngⅡ、MDA含量降低,T-SOD活性增加(P<0.05),血清白蛋白升高,第28天差异有统计学意义(P<0.05).肾脏病理学观察显示,AngⅡ灌注组肾小球系膜细胞增生,系膜基质沉积,肾小管上皮细胞脱落,部分肾小球硬化、萎缩,FTY720干预组上述病理损伤部分缓解.免疫组化示,0.9%氯化钠溶液灌注组大鼠肾Nox4沿肾小管尤其是远端小管分布,AngⅡ灌注组Nox4表达显著增强,FTY720干预组Nox4表达减弱.结论 FTY720可通过减轻肾脏氧化应激改善AngⅡ灌注大鼠肾损伤.%Objective To evaluate the effect of fingolimod(FTY720) on angiotensin Ⅱ(AngⅡ)-induced renal oxidative stress in rats and its possible mechanisms.Methods Thirty-six male Sprague-Dawley rats were dividedinto three gr oups through random number tables:AngⅡ infusiongroup(twelve rats,infusion of AngⅡvia subcutaneous osmotic pumps),0.9% sodium hydrochloride solution infusion group(twelve rats,infusion of equal volume of 0.9% sodium hydrochloride solution via subcutaneous osmotic pumps) and FTY720 intervention group(twelve rats,intra-gastric administration of FTY720 besides AngⅡ infusion).Urine samples were collected for 24 hours every week.Blood samples and kidneys were collected when rats were sacrificed at day 14 and 28 d respectively.MDA and T-SOD assay Kits were used to detect the concentrations of MDA and T-SOD in serum and kidney homogenates.Renal pathological changes were observed by light microscope.The expression of Nox4 in the kidneys was evaluated by immunohistochemistry.Results Compared with 0.9% sodium hydrochloride solution infusion rats of the same period,AngⅡ-infused rats developed significant proteinuria.The concentration of serum creatinine,urea nitrogen,AngⅡ and MDA were increased(P<0.05),T-SOD was significantly decreased on days 14 and 28(P<0.05),the serum albumin was significantly increased on day 28(P<0.05),while FTY720 partially reversed these changes.The renal tissue of AngⅡ-infused rats presented mesangial cells proliferation,mesangial matrix deposition,tubular epithelial cells effacement,sclerosis and atrophy in part of the glomerular.FTY720 can alleviate these changes.Immunohistochemistry showed that Nox4 was primarily located in the distal tubule.The expression of Nox4 was significantly increased in AngⅡ-infused rats as compared with that of 0.9% sodium hydrochloride solution infused group rats,and FTY720administration prevented the change effectively.Conclusion AngⅡ-induced renal injury could be attenuated by FTY720 via preventing oxidative stress.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2017(036)007【总页数】6页(P731-736)【关键词】芬戈莫德;血管紧张素Ⅱ;氧化应激【作者】曾平;韩琦;梁伟;陈铖【作者单位】武汉大学人民医院肾内科,武汉 430060;武汉大学人民医院肾内科,武汉 430060;武汉大学人民医院肾内科,武汉 430060;武汉大学人民医院肾内科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R972;R969DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2017.07.003在慢性肾脏病(chronic renal disease，CKD)的发生发展过程中，肾素-血管紧张素-醛甾酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)发挥着重要作用，AngⅡ是其主要效应分子，可通过多种途径导致肾损伤，如促进炎症、加重氧化应激、增加细胞凋亡等[1]。
缺血后处理对抗肾脏缺血-再灌注大鼠的抗氧化损伤的作用
６００ ； ４） 云 南省 第一人 民医院干部保 健 ５２０
科 ，云 南 昆明 ６０３ ； ５） 云 南医学高等 专科 学校 科研 处 ，云南 昆明 ６０３） ５０２ ５０１
［ 摘要］ 目的 研究缺血后处理减轻大鼠。 肾脏缺血 一再灌注氧化损伤的作用． 方法 大 鼠右肾切 除，左 肾
４ ｎ ５ 缺血再灌注 ２ ，给予 ６个循环 １一 ／０ Ｓ ｍｉ ４ｈ ０ Ｓ１一 再灌 ／ 停灌缺血后处理方案干预后 ，测定血肌酐和尿素氮水 平评价肾功能 ；Ｈ Ｅ染色观察。 肾组织病理形态学变化 ；分光分析法测定。 肾组织 丙二醛 （ Ｄ ）含量和超氧化物 Ｍ Ａ 歧化酶 （Ｏ ）活性 ；采用 Ｒ ａ Ｔｍ Ｔ Ｐ Ｒ和 Ｗｅｔｒ ｂｏ ｉ ＳＤ ｅｌ ｉｅＲ — Ｃ ｓ ｎ ｌｔ ｇ法分别测定 Ｓ Ｄｍ Ｎ ｅ ｔｎ Ｏ Ｒ Ａ和蛋 白表达情况．结 果 缺血后处理能明显减轻肾组织病理形态学损伤和降低血肌酐和尿素氮水平 （ Ｐ＜００） ． ，并减少肾组织 Ｍ Ａ ５ Ｄ
Ｄｐ． ｈ ｍ ｏ ｇ ，Ｋ ｎ ｉ ｄｃｌＵ ｉ ｒｔ，Ｋｕｍｎ ｕｎｎ６０３ ； ３ Ｋ ｙＬ ． ｌ ｕａ ｅｔｏ Ｐ ａ ａ ｌ ｙ ｕ ｍｎ Ｍｅｉ ｎｖ ｓｙ ｆ ｒ ｃ ｏ ｇ ａ ｅｉ ｎ ｉｇＹ ｎａ ５０ １ ） ｅ ａ ｏ Ｍｏｅ ｌ ｂｆ ｃｒ
Ｂ ｏ ｇ ｏ ｉｏ ｅ ｉ ｎ ， Ｙ ｎ ａ ｎｖｒｉ ｒｄｔ ｎ ｌＣ ｉ ｓ ｄｃｎ ，Ｋ ｎ ｉ ｕ ｎ ｎ ６ ０ ０ ； ｉ ｏ ｆｒＳｎ ｍ ｄｃ ｅ ｕ ｎｎ Ｕ ｉ ｓｙ ｏ Ｔａ ｉｏａ ｈｎ ｅＭｅ ｉ ｅ ｕ ｍ ｎ Ｙ ｎ ａ ５ ２ ０ ｌ ｙ ｉ ｅ ｔｆ ｉ ｅ ｉ ｇ
［ ｓｒｃ］Ｏｂｅ ｔｅ Ｔ ｖｓｇｔ ｅ ｒｔ ｔｅｅｅｔ ｆｓｈｍｃ ｏｔ ｎｉｏｉｇ （ ｏｔ） ａａ ｓ Ａｂｔａｔ ｊｃｉ ｏｉ ｅｔ ａ ｄｔ ｏ ｃｉ ｆｃｏ ｃｅ ｉｐｓ ｏｄｔｎｎ Ｉ ｓ ｖ ｎ ｉ ｅ ｈｐ ｅ ｖ ｆ ｉ ｃ ｉ Ｐ Ｃ ｇｉ ｔ ｎ
小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型
小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型缺血再灌注损伤(IRI)是器官移植、休克、动脉搭桥术后等普遍存在的问题。
肾脏是发生IRI极为常见的器官之一，尤其肾移植，不可避免的要经历一定程度的IRI,肾脏缺血再灌损伤是急性肾衰的常见原因。
对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后，可引起肾脏缺血再灌注损伤。
在缺血再灌注过程中，钙超载、线粒体能量合成障碍、氧自由基的增多等因素导致肾小管内皮细胞脱落，肾脏组织结构的破坏进而使肾脏功能发生障碍。
1.实验动物SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。
2.实验分组：实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15只动物。
3.模型周期24h、72h4.建模方法1. 选取20-22g左右小鼠，术前禁食12h，自由饮水。
2. 3％戊巴比妥钠(80mg／kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒备皮。
3. 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。
4. 缺血45min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。
5. 分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。
6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。
7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。
麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。
同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。
5.模型的评价1 血清生化指标检测：取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。
2 肾系数检测摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。
肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g）3 病理组织学检测：4％多聚甲醛溶液固定48h。
常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。
芬戈莫德(FTY720)通过激活Nrf2HO-1通路促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复
细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell Mol lmmun〇l)2021, 37(5)415.论著.文章编号：1007-8738(2021 )05*0415"06芬戈莫德（FTY720)通过激活Nr£2/HO-l通路促进大鼠脑缺血再灌注损 伤后神经功能恢复伍慧茹、张磊2,黄美伊、王奕丹\王建楠\隋汝波(锦州医科大学：1附属第一医院神经内科，2护理学院，辽宁锦州121000)[摘要]目的研究芬戈莫德（FTY720/fmg〇lim〇d)对脑缺血再灌注损伤的治疗作用并探索其保护机制。
方法60只SD大鼠 随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤（MCA0/R)模型组及FTY720组。
MCA0/R组和FTY720组用Longa缝合法建立MCA0/ R模型。
采用改良神经功能损伤评分法评估大鼠神经功能；H E染色观察大脑皮层（额颞叶）神经细胞形态；实时定量PCR及 Western blot法分别检测核因子E2相关因子2( Nrf2)、血红素加氧酶1(H0-1 )、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原 酶1(NQ0-1)、肿瘤坏死因子a(TNF-c〇、白细胞介素l p(IL-l p)、IL<6的mRNA及蛋白水平；化学试剂盒检测超氧化物岐化酶 (SOD)活性、丙二醛（MDA)含量。
结果与MCA0/R组相比，FTY720组大鼠神经损伤评分降低，细胞破坏减轻，Nrf2、H0-1 及NQ0-1上调，TNF-ct、IL<6及IL-l p下调，SOD活性提高，MDA含量减少。
结论FTY720促进MCA0/R后大鼠神经功能恢 复，可能与激活Nrf2/H0-1信号通路有关。
[关键词]芬戈莫德（FTY720/fmg〇lim〇d);脑缺血/再灌注；核因子E2相关因子2(Nr£2);氧化应激；炎症反应[中图分类号]R743.31, R364.5, R965 [文献标志码]AFTY720 promotes recovery of nerve function after cerebral ischemia reperfusion injury in rats by activating Nrf2/HO-l pathwayW U Huiru1, Z H A N G Lei2, H U A N G Meiyi1, W A N G Yidan' , W A N G Jiannan1, SUI Rubo1*'D e p a r tm e n t o f N e u ro lo g y, F ir s t A ffilia te d H o s p ita l, 2S chool o f N u r s in g, J in z h o u M e d ic a l U n iv e rs ity, J in z h o u121000, C h in a* C o rre sp o n d in g a u t h o r, E-m a i l：s r b7246@163.c o m[A b s tra c t] Objective To investigate the protective effect of fingolimod (FTY720) on cerebral ischemia/reperfusion injury and explore whether it is related to the inhibition of the nuclear factor E2-related factor 2/heme-oxygenase 1(N rf2/H O-l) signaling pathway. Methods Sprague-Dawley (SD) rats were equally divided into 3 groups：sham group, cerebral ischemia/ reperfusion (M CAO/R) group and FTY720 group. MCAO/R models were established by Longa suture method in the latter two groups. The modified neurological severity scores were used to evaluate neurological function and HE staining to observe morphological features of SD rat nerve cells in the cerebral cortex. In the case of 0.5 mg/kg FTY720, the mRNA and protein levels of nuclear factor E2 related factor 2 (N rf2), heme oxygenase 1( HO-1), quinone oxidoreductase-1 ( NQO-1), and tumor necrosis factor a (T N F-a), interleukin 1(3(IL-ip), Interleukin 6 (IL-6) were detected by real-time quantitative PCR and Western blot analysis. Simultaneously, the antioxidant enzyme activity (superoxide dismutase, SOD) and the content of lipid peroxidation products (malondialdehyde, MDA) were tested by chemical kits. Results Compared with the MCAO/R group, the FTY720 group showed the increased number of cells, effectively improved morphology and lower nerve damage scores. In the MCAO/R group, the expression of Nrf2, HO-1 and NQO-1 significantly decreased and the expression of TNF-a, IL-6 and IL-1 increased markedly, while this situation was reversed obviously by FTY720. At the same time, the improvement of antioxidant capacity was reflected in the increase of SOD activity and the decrease of MDA content. Conclusion FTY720 exerts neuroprotective effects against the damage by cerebral ischemia/reperfusion probably through activating Nrf2/HO-l signaling pathway.[Key words] FTY720/fingolimod；cerebral ischemia/reperfusion；nuclear factor E2 related factor 2 (Nrf2) ；oxidative stress；inflammation收稿日期：202(M)8-26;接受日期：2020-11-11基金项目：国家自然科学基金（81371461，81241050);辽宁省教育厅科学研究项目（JY T JC Z R201903);辽宁省科学技术计划项目（2019-ZD*0802) 作者简介：伍慧茹（1995 -),女，山东济宁人，硕士研究生T el：137****1799；E-m ail：137***************** 通讯作者，隋汝波，E-m ail: srb7246@ 163. com416细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell M ol ImmU n〇l)2021，37(5)脑缺血再灌注（cerebral ischemia/reperfusion，CI/R)损伤是进展性脑卒中发病及治疗过程中出现 的一种严重现象，缺乏有效治疗药物，是目前研究热 点[1]。
激活TGR5_缓解肾缺血再灌注后肾脏纤维化损伤
第 44卷第4期2023 年7月Vol.44 No.4July 2023中山大学学报（医学科学版）JOURNAL OF SUN YAT⁃SEN UNIVERSITY（MEDICAL SCIENCES）激活TGR5缓解肾缺血再灌注后肾脏纤维化损伤李蒙1，隆罗莎1，梁柏恩2，徐龙1，赵晓朵2，王蔚东2，李春凌1（1. 中山大学中山医学院生理教研室，广东广州 510080； 2. 中山大学中山医学院病理生理教研室，广东广州 510080）摘要：【目的】 探讨激活胆汁酸受体TGR5在单肾缺血再灌注损伤合并对侧肾摘除（uIRIx）模型诱导的肾脏纤维化中的作用。
【方法】 体内实验：将C57BL/6J小鼠随机分成假手术（Sham）组、uIRIx组及uIRIx+石胆酸（LCA）组，每组6只，使用uIRIx模型诱导肾脏纤维化，通过血和尿生化指标评估肾脏功能，利用HE染色评估肾脏损伤程度，使用Masson染色及免疫组化对肾脏纤维化程度进行评估，并用Western Blotting检测肾脏皮质纤维化相关指标蛋白表达；分别在TGR5+/+小鼠及TGR5-/-小鼠中设置Sham组及uIRIx组，每组6只，利用Western Blotting检测各组肾脏纤维化程度。
体外实验：在人源肾上皮细胞系HK2细胞中给予TGF-β1诱导促纤维化反应，给予LCA进行药物干预，利用鬼笔环肽染色标记细胞骨架，使用Western Blotting检测HK2细胞内纤维化相关指标蛋白表达。
【结果】 体内实验：与Sham组相比，uIRIx组小鼠血浆肌酐水平（P=0.007）及尿白蛋白/肌酐比（P=0.041）明显增加，肾脏皮质蛋白TGR5表达（P=0.002）下降，Fibronectin表达（P=0.020）及COL1A1表达（P<0.001）上升，同时伴有肾脏结构受损及胶原沉积加重，LCA干预有效改善肾脏功能，缓解肾脏损伤及纤维化程度；TGR5+/+小鼠与TGR5-/-小鼠相比，uIRIx诱导引起的Fibronectin表达（P<0.001）及COL1A1表达（P=0.001）增加。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤模型小鼠的肾保护作用及其机制研究目的：研究芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤（RIRI）模型小鼠的肾保护作用及其机制。
方法：将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、芬戈莫德组（1 mg/kg）和芬戈莫德+wortmannin组[芬戈莫德1 mg/kg+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性阻滞药wortmannin 1.4 mg/kg]，每组15只。
除假手术组外，其余3组小鼠均建立RIRI模型，术前24 h一次性经尾静脉注射相应的药物。
再灌注24 h后收集每组小鼠血清，使用全自动生化分析仪测量各组小鼠血清中血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平；光镜下观察肾组织病理变化；Western blot法检测肾组织中细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白的表达。
结果：与假手术组比较，模型组小鼠血清中Scr和BUN 水平明显升高（P＜0.01）；肾组织出现病理性改变，肾小管上皮细胞坏死，炎性细胞浸润；肾组织中ICAM-1和MCP-1蛋白表达水平明显升高（P＜0.01），p-Akt 蛋白表达水平轻微升高（P>0.05）。
与模型组比较，芬戈莫德组小鼠除肾组织中p-Akt蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）外，其余指标均明显改善（P＜0.01）。
与芬戈莫德组比较，芬戈莫德+wortmannin组小鼠的上述指标变化均逆转（P＜0.05或P＜0.01）。
结论：芬戈莫德能减轻RIRI模型小鼠的肾损伤，其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the protective effect of fingolimod on renal ischemia reperfusion injury （RIRI）model mice and its mechanism. METHODS：A total of 60 mice were randomly divided into sham operation group，model group，fingolimod group （1 mg/kg）and fingolimod+wortmannin group [fingolimod 1 mg/kg+phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）specific blocker wortmannin 1.4 mg/kg]，with 15 mice in each group. Except for sham operation group，RIRI model was induced in other 3 groups，and those model mice were given relevant medicine via caudal vein at once 24 h before surgery. Serum of mice were collected in each group after 24 h perfusion. Serum levels of Scr and BUN were measured by automatic biochemical analyzer. The pathological changes of renal tissue were observed under light microscope. The protein expression of intercellular cell adhesion molecule-1 （ICAM-1），monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）and phosphorylated protein kinase B （p-Akt）in renal tissue were measured by Western blot assay. RESULTS：Compared with sham operation group，the serum levels of Scr and BUN in model group were increased significantly （P＜0.01）. Pathological changes were found in the kidney，and RIRI led to widespread renal tubular epithelial cell injury，apoptosis and inflammatory cells infiltration. The protein expression of ICAM-1 and MCP-1 in renal tissue were increased significantly （P＜0.01），the protein expression of p-Akt was increased slightly （P>0.05）. Compared with mo- del group，other indexes of fingolimod group were improved significantly （P＜0.01）except that the protein expression of p-Akt in renal tissue was increased significantly （P＜0.01）. Compared with fingolimod group，above indexes of fingolimod+wortmannin group were reversed （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Fingolimod can obviously ameliorate renal injury induced byRIRI in mice，the mechanism of which may be associated with the activation of PI3K/Akt signaling pathway.KEYWORDS Fingolimod；Renal ischemia reperfusion injury；Mice；Phosphatidylinositol 3-kinase；Phosphorylated protein kinase B肾缺血再灌注损伤（RIRI）是临床常见的病理过程，如处理不及时可能使多个脏器受累。
虽然关于RIRI的发生机制目前尚未完全阐明，但众所周知炎症反应是RIRI发生的重要机制[1]，其中细胞黏附分子和细胞因子是RIRI过程中导致肾脏炎症和肾脏组织损伤的关键环节[2]。
RIRI后炎症细胞浸润，促炎症细胞因子大量合成[3]，而促炎症细胞因子又可间接诱导细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管内皮细胞黏附分子1（VCAM-1）及巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）等的产生[4]，最终引发炎症级联反应。
因此，抑制RIRI 后的炎症反应，降低细胞黏附分子和细胞因子的表达，是缺血性肾损伤的一种新型治疗途径。
芬戈莫德是一种源自冬虫夏草的活性成分，再经化学修饰后合成的一种特异性免疫抑制剂[5]，主要用于器官移植[6]、自身免疫性疾病[7]、中枢神经系统疾病[8]等的治疗。
近年来发现其可通过激活1-磷酸鞘氨醇（S1P）受体发挥抗炎作用和器官保护作用，成为备受关注的新型抗炎剂[9]。
已有研究将芬戈莫德应用于RIRI，发现其可抑制相应的组织浸润、减轻炎症反应[10]。
此外，芬戈莫德还能抑制IRI条件下淋巴细胞浸润、降低血管通透性[11]。
虽然有研究显示，芬戈莫德具有肾脏保护作用，可减轻RIRI，但其具体机制尚未完全阐明。
磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路在RIRI中起着非常重要的调控作用[12]。
本研究通过建立RIRI小鼠模型，观察芬戈莫德对RIRI 后肾功能、炎症因子和磷酸化Akt（p-Akt）的影响，以及PI3K特异性阻滞药wortmannin对芬戈莫德上述作用的影响，探究芬戈莫德对RIRI的保护作用及其机制，期望为临床治疗缺血性肾损伤寻求新的理论依据。
1 材料1.1 仪器680型酶标仪（美国伯乐生命医学产品有限公司）；凝胶图像分析系统（上海天能科技有限公司）；光学显微镜（重庆光学仪器厂）；ULTRACUT-R型超薄切片机（德国Leica公司）；GT10-1型高速台式离心机（上海京工实业有限公司，离心半径：9.8 cm）；全自动生化分析仪（上海恒盛医疗器械有限公司）。
1.2 药品与试剂芬戈莫德原料药（美国Cayman公司，批号：CAS- 162359-56-0，纯度：99%）；wortmannin（美国Sigma公司，批号：W1628，纯度：≥98%）；ICAM-1抗体、MCP-1抗体、p-Akt抗体、β-肌动蛋白（β-actin）抗体（英国Abcam公司，批号：ab33894、ab151538、ab81283、ab8227）；辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗（上海碧云天生物技术有限公司）。
1.3 动物健康成年C57BL/6小鼠60只，♂，选用8～12周龄，清洁级，体质量22～25 g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK（沪）2007-0005，使用许可证号：SYXK（沪）2007-0005。
标准条件饲养，自由进食、饮水，适宜温度、湿度，人工黑暗和光照交替。
2 方法2.1 分组、建模与给药选用小鼠60只，适应性饲养1周后随机分为假手术组、模型组、芬戈莫德组（1 mg/kg）[13]和芬戈莫德+wortmannin组[芬戈莫德1 mg/kg+wortmannin 1.4 mg/kg[14]]，每组15只，除假手术组外，其余3组小鼠均建立RIRI模型。
建模方法[15]如下：小鼠腹腔注射2%的戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉，取腹正中线做切口，暴露并游离出双侧肾的肾蒂；以无创动脉夹夹闭双侧肾蒂，45 min后去除动脉夹再进行灌注，恢复血流再灌注24 h。
若术中小鼠肾组织由紫黑色转为红润，且术后3 h内小鼠恢复清醒则表示灌注成功，否则灌注失败。
假手术组小鼠只接受麻醉、开腹、分离双侧肾蒂，不予夹闭肾蒂，45 min后关闭腹腔。
芬戈莫德组和芬戈莫德+wortmannin组小鼠在缺血前24 h尾静脉注射相应药物，假手术组和模型组小鼠尾静脉注射等体积生理盐水，均一次性给药。