微生物学第三篇 微生物学在药学中的应用

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微生物与药物变质

药品的微生物学检查

空气
含细菌、霉菌、酵母等。

水—大肠杆菌通常作为水是否被粪便污染的检验指标
表1
水质常规检验项目及限值(2005)
限 值
项 目 1、微生物指标*
总大肠菌群（ MPN/100mL 或 CFU/100mL ）
耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）
第三篇 微生物学 在药学中的应用
一、微生物制药
抗生素 氨基酸 维生素 甾体化合物 酶与酶抑制剂 菌体制剂与活菌制剂 其他产物


抗生素： 由微生物、动物或植物在生活过程中产生， 具有抗微生物、抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制、 抗虫或除草等作用的物质。

医疗用抗生素的特点： 有较大的差异毒力、生物活性强大而有选 择性、不易产生抗药性、毒副作用小、吸收快、 血药浓度高。
不得检出 不得检出
不得检出
100
菌落总数（CFU/mL）
人体
体表及体内与外界相通的腔道
正常菌群/条件致病菌（E.coli，绿脓，沙雷氏 菌） 菌群失调症/二重感染



土壤中微生物 原材料 动物脏器 中药材—晾晒、烘烤 包装物 制药设备、厂房建筑、死角管道 人流、物流
药物的变质与防患
表2. 上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量 供试品装量V(ml) ≤1 1＜ V ＜5 5≤V＜20 20≤V＜50 50≤V＜100 每支样品接入每管培 养基的最少量（ml） 全量 半量 2 5 10 最少检验数量（瓶或 支） 201 10 10 10 10
50≤V＜100(静脉给药) 100≤V＜500
5%或2个（取较多者） 10个
每个容器 20%或4个容器（取较大者） 2%或10个容器（取较大者）
抗生素固体原料药 （≥5克） 医疗器具 ≤100 100＜N≤500 ＞500
6 瓶( 支)
20%或4件（取较大者） 10件 2%或20件（取较少者）
注：1.每种培养基各接种10支供试品。 2.抗生素粉针剂（≥5克）及抗生素原料药（≥5克）的最少检验数量为6瓶 （或支），桶装固体原料的最少检验数量为4个包装。 3.如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。
二、抗生素药效学研究
1、抗生素的体内抗菌（ED50） 2、抗生素的体外抗菌 MIC——最低抑菌浓度 MBC——最低杀菌浓度 KCS——杀菌曲线
液体稀释法（试管法） 琼脂平板稀释法 （1）实验药物 （2）阳性对照药物 （3）阴性对照

3、抗生素的含量测定
（1）抗生素的单位
重量单位 以抗生素活性部分的重量为单位，1mg=1000 U 类似重量单位 以抗生素盐类重量，1mg=1000 U（包括非活性部分重量） 重量折算单位 与原始的生物活性单位相当的纯抗生素实际重量为1U加 以折算。 青霉G钠盐：1mg=1667u（以50ml肉汤中 抑制金葡菌生长的最小青霉素量为1 U） 特定单位 以特定的一批抗生素样品的某一重量作为一定单位，经 有关国家机构认可。国际单位（IU） 标准品—中国药品生物制品检定所分发 标示量—抗生素制剂标签上的标量（单位或重量）

GMP管理 质控


保藏运输



药品微生物检查（2005）
无菌产品无菌检查方法
(内毒素检测) 细菌计数方法


霉菌、酵母菌计数方法
控制菌检查方法
•无菌检查
是检查要求无菌的药品.医疗器具.原 料.辅料.以及要求无菌的其他物品是否染 有活菌的一种方法。
符合无菌检查法的规定仅表明了供试品 在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
（3）耐药性产生的生物化学机制
产生耐药性酶类
靶位改变
细胞膜通透性的改变
（4）耐药性的控制
避免耐药菌传播（医院）
合理用药 （1）抗生素可不用尽量不用，使用时应足量。 （2）合理联合用药 抗耐药菌新抗生素的寻找，如酶抑制剂抗生素等。 耐药机制的研究—耐药规律寻找，有助于合理用药。

三、药物的微生物检查
V ≥500 1.每种培养基各接种10支供试品。
半量 半量
500
10 6
6
表3
上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量
每支样品接入每管培 养基的最小量（mg） 全量 半量 150 最少检验数量（瓶或 支） 20（1） 10 10
供试品装量M（mg/支 或瓶） M <50 50≤M<300 300≤M<5g
M≥5g
外科用敷料棉花及纱 布 缝合线、一次性医用 材料 带导管的一次性医疗 器具（如输液袋） 其它医疗器具
500
取100 mg 或 1cm×3cm 整个材料3
102
10 10
10
整个器具3（切碎或拆 散开）
10
结果判断
若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确 证无菌生长，判供试品符合规定； 若供试品管中任何 1 管显浑浊并确证有 菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分 证明试验结果无效即生长的微生物非供试品 所含。

控制菌（质控菌）的检查
控制菌检查包括大肠菌群、大肠埃希 菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假 单胞菌和生孢梭菌检查。
先以增菌培养基增菌，再以鉴定培 养基鉴定。
表1 批产品出厂最少检验数量 供试品 注射剂 批产量N（个） 每种培养基最少检验数量
≤100
100＜N≤500
10%或4个（取较多者）
10个
＞500
大体积注射剂（＞100 ml） 眼用及其他非注射产品 ≤200 ＞200 桶装固体原料 ≤4 4＜N≤50 ＞50
2%或20个（取较少者）
2%或10个（取较少者）
无菌检查方法： 薄膜过滤法，直接接种法等 验证菌株为生孢梭菌、金黄色葡萄球 菌、枯草杆菌、铜绿假单胞菌、白色念 珠菌、黑曲霉，菌种要求不得超过5代， 制备菌液浓度为50~100cfu/ml。





需氧菌、厌氧菌、霉菌的检查 需氧菌：30~35。C，14天 （硫乙醇酸盐流体培养基） 厌氧菌：30~35。C，14天 （硫乙醇酸盐流体培养基） 霉 菌：23~28。C，14天 （改良马丁培养基） 观察培养液是否混浊或涂片染色镜检

（2）抗生素的效价及其测定
稀释法、比浊法、琼脂扩散法
4、抗（耐）药性
（1） 概念： （2）耐药性产生的遗传机制：
自发突变与药物选择
（抗药菌的产生与药物的存在无关。药物选择的结果是 杀死敏感菌，耐药菌富集）
细胞间抗药性遗传物质的转移
微生物的染色体或质粒上有编码抗生素耐药 性的遗传信息 质粒编码—链霉素，庆大霉素，卡那霉素， 青霉素，头孢菌素，红霉素，四环素等。 染色体编码—青霉素，链霉素，红霉素， 杆菌肽等。

抗生素的分类
（一）β-内酰胺类 青霉素类和头孢菌素类 （二）氨基糖甙类 链霉素、庆大霉素、卡那霉素、 妥布霉素、 （三）四环素类 四环素、土霉素、金霉素 （四）氯霉素类 氯霉素、甲砜霉素 （五）大环内脂类 红霉素、乙酰螺旋霉素 （六）作用于G+菌的其它抗生素 万古霉素、杆菌肽 （七）作用于G-菌的其它抗生素 多粘菌素、利福平 （八）抗真菌抗生素 灰黄霉素 （九）抗肿瘤抗生素 丝裂霉素、放线菌素D、博莱 霉素、阿霉素 （十）具有免疫抑制作用的抗生素 环孢霉素。
细菌、霉菌及酵母菌计数
计数方法包括平皿法和薄膜过滤法，需设阴 性对照
验证菌株为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、黑曲霉、枯草杆菌，菌种 要求不得超过5代，制备菌液浓度为 50~100cfu/ml。 若试验组的菌回收率（试验组的平均菌 落数减去供试品对照组的平均菌落数的 值占菌液组的平均菌落数的百分率）均 不低于70%