最新血清葡萄糖的测定
血清葡萄糖GLU测定
血清葡萄糖GLU测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂基于在精密度和准确性方面具有很高可靠性的Trinder’S方法，在防止已知化合物（如尿酸、谷胱甘肽和肌酐等）的干扰进行了进一步的改良。
GOD葡萄糖+ H2O+ O2 H2O2+葡萄糖酸 PODH2O+AAP + HBA 醌亚胺（红色）H2O 式中：AAP 为4-氨基安替比林；HBA 为4-羟基苯甲酸上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在波长500nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。
3 标本：3.1 病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清，标本最好不要溶血。
迅速分离血清或，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3.3 标本存放：血清应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5标本拒收标集：细菌污染、超时送检的的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司GLU试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：过氧化物酶 375U/L 4-羟基苯甲酸15mmol/L4-氨基安替比林0.75mmol/L磷酸盐缓冲液110mmol/L试剂2（R2）：葡萄糖氧化酶6000U/L 磷酸盐缓冲液110mmol/L4.1.2 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月4.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
血清葡萄糖浓度的测定
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿
病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据
有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
人体对糖的耐受现象 OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血
糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简
单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因 此不推荐临床常规应用。
方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活 动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75
实验步骤
B S T
工作液 dH2O
葡萄糖标准液 血清
1.00 mL 10 uL
-
1.0 mL 10 uL -
1.0 mL 10 uL
混匀， 37C， 15 mins dH2O 0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL 混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度. 计算:
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法。
它可以检测血清中的水溶性葡萄糖的含量，从而可以反映机体的糖代谢情况。
血清葡萄糖测定方法有多种，其中最常用的是酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK）。
2、酶联免疫法（ELISA）
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的血清葡萄糖测定方法。
ELISA技术利用免疫反应原理，把糖尿病患者血清中的葡萄糖水解酶以抗原或抗体的形式结合起来，然后用抗体识别，经过可见性染料和酶的底物分解，用放大效应得到明显的反应信号，通过测量信号来确定葡萄糖的浓度。
ELISA对葡萄糖的检测灵敏度很高，但是分析时间比较长，且需要有特殊的仪器。
3、磷酸二氢钾滴定法（HK）
磷酸二氢钾滴定法（HK）是另一种检测血清葡萄糖浓度的常用方法。
它是一种血清中葡萄糖的滴定法，用40-50℃的磷酸二氢钾溶液作为比色剂，通过比色分析得到血清中的葡萄糖含量。
这种方法分析速度快，结果准确，但是需要较高的技术要求。
4、结论
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法，它可以准确反映机体的糖代谢状况。
目前最常用的血清葡萄糖测定方法有酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK），它们具有自己的优缺点，根据实际情况选择合适的方法。
[生活]血液中葡萄糖含量的测定
![[生活]血液中葡萄糖含量的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/c0c0675bf6ec4afe04a1b0717fd5360cba1a8d4d.png)
血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。
邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。
此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。
由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。
三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。
2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。
4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。
5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。
邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。
置棕色瓶中至少可用两个月。
此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。
12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。
葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。
葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖【实验原理】葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。
醌的产量与葡萄糖量成正比。
醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。
【实验准备】一、材料（1）血清（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。
（2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。
（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml）（4）生理盐水。
（5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。
三、器材（1）试管和试管架（2）移液枪（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条（8）生化培养箱【实验步骤】（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按【实验结果】葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55参考值：3.89~6.11mmol/L测得数据为A2 A3 A4 A50.085 0.05 0.03 0.037(0.037+0.030)/2——×5.55 ﹦2.75mmol/L（0.085+0.050/2【实验讨论】①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。
④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引起误差。
血液葡萄糖的测定方法
血液葡萄糖的测定方法血液葡萄糖测定方法是用于检测人体血液中葡萄糖含量的一种方法。
葡萄糖是人体重要的能量供应来源，它在体内的浓度与机体的代谢状态密切相关。
因此，对于糖尿病患者来说，监测血液葡萄糖水平非常重要，有助于他们控制血糖水平，维持身体健康。
血液葡萄糖的测定方法有很多种，根据实际需求和方法的可行性，可以选择不同的方法进行测定。
以下将介绍几种常见的血液葡萄糖测定方法。
首先是基于试纸的葡萄糖测定方法。
这种方法常用于家庭血糖监测，便携式血糖仪就是基于试纸原理的。
使用这种方法，只需将试纸置于一滴血液上，试纸上的葡萄糖酶会与葡萄糖发生反应，产生氧化还原反应，导致试纸变色，通过比色板或仪器来判断血糖水平。
这种方法操作简便，但准确度相对较低，适用于一般家庭血糖监测。
其次是荧光法葡萄糖测定方法。
这种方法是基于葡萄糖氧化酶的反应原理，葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应生成辅酶还原型，再与辅酶反应产生荧光染料，测量荧光强度来计算血糖浓度。
这种方法灵敏度高，准确度较高，但需要专业的仪器和技术支持，适用于实验室中血糖测定。
此外，还有电化学法葡萄糖测定方法。
这种方法是将血液样品置于电极上，通过电化学反应来测量葡萄糖浓度。
常用的电极有电化学氧化酶电极和谐振速度电极。
电化学法测定血糖准确度高，但仪器复杂，需要专业的操作技术和维护。
最后是光学法葡萄糖测定方法。
这种方法是利用光学仪器，通过检测葡萄糖溶液对特定波长光的吸收或散射来测定葡萄糖浓度。
光学法测定速度快，操作简便，适用于实时监测。
总之，血液葡萄糖测定方法多种多样，每种方法都有其适用的场景和特点。
在选择合适的测定方法时，需要根据实际需求，考虑准确性、操作便捷性以及成本等因素。
对于糖尿病患者来说，定期监测血液葡萄糖水平非常重要，可以根据医生的建议选择合适的测定方法，并保持良好的血糖控制，以维持健康的生活。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性，
受血中非糖还 原物 质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
血液中葡萄糖的测定 邻甲苯胺法(“苯胺”相关文档)共8张
3. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 ——邻甲苯胺法
葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。
四、实验试剂 分光光度计（630nm），比色皿
在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0. 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0.
血 0.1毫升，加入 3% 三氯醋酸溶液1.9 毫升中，以沉淀蛋白质。离心后吸取上清液 1.0毫 升，加入邻甲苯胺试剂 5毫升作为测定管。在标准管中加入葡萄糖标准应用液 （0.05mg/ml）1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，在空白管中加入蒸馏水 1.0毫升及 邻甲苯胺试剂 5毫升，然后按上表进行测定。测定结果即为全血葡萄糖含量。
血液中葡萄糖的测定
——邻甲苯胺法
一、实验目的
掌握血糖的测定方法。
二、实验原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪
夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈兰绿色， 其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄 糖含量成正比。反应式如下:
三、实验器材
1.分光光度计（630nm），比色皿
0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，在空白管中加入蒸馏水 1. 离心后吸取上清液 1. 葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱(Schiff base)。 血清 （～100ml） 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2. 此法也适用于全血葡萄糖测定，特别是小儿病人作静脉抽血困难时，可采用指端血或耳垂血 0. 掌握血糖的测定方法。 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 雪夫氏碱呈兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄糖含量成正比。 血清 （～100ml） 4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 分光光度计（630nm），比色皿
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希夫氏碱 分子重排 蓝绿色化合物
（三）酶法
1.己糖激酶法（HK）
2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）
3.实验原理
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法） 葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。
葡萄糖+O2+H2O
GOD
葡萄糖酸+2H2O2
过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和 苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？
1.相关临床知识
口服葡萄糖耐量试验（OGTT）
概念：是一种葡萄糖负荷试验，用 以了解胰岛β细胞功能和机体对血 糖的调节能力，是诊断糖尿病的确 诊试验
原理：正常人进食糖类后血糖会 暂时升高，0.5~1小时后升到最高 峰，但不超过8.9mmol/L，2小时 后回到空腹水平。
注意事项
1.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液 葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰过 氧化氢酶反应，而造成假性偏低。
2.对于血液样品需及时分离血细胞。因红细胞的酵解将导致测定结果偏低。 建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。
3.严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
血糖受损。
2.实验目的
1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理 2.掌握血糖变化的临床意义
3.实验原理
血糖测定的方法有哪些？
（一）无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性
OH-
Cu2+
Cu+
磷钼酸
显色
特异性差
Glu
（二）有机化学法：邻甲笨胺法，联笨胺法等
邻甲笨胺 + Glu
缩合
脱水
葡萄糖基胺
血清葡萄糖的测定
1.相关临床知识
血液中的葡萄糖称为血糖。
1.相关临床知识
餐后两小时 11.1mmol/L≦
糖尿病
7.0mmol/L≦
空腹
空腹血糖
3.9-6.1 mmol/L
正常餐后两小时 3.9-7.8mmol/L
1.相关临床知识
I 型糖尿病（T1DM） 别名：青年发病型糖尿
病
或胰岛素依赖性糖尿病。
1.相关临床知识
OGTT操作步骤
1）.
试验前3天内，每日碳水化合物摄入量不少于150g。
2）. 空腹取血后，5分钟内口服溶于250~300ml水内的75g 无水葡萄糖粉的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给
予，不超过75g.
3）. 服糖后半小时、1小时、2小时、3小时分别在前臂采血测血糖, 采血同时，每隔1小时取尿液作尿糖试验。试验过程中，受试者不喝茶
THANKS
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3.当静脉空腹血糖＜7.0mmol／L，并且OGTT 2小时血糖介于7.8～11.1mmol／L之间， 说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。
4.当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT 2小时血糖≤7.8mmol／L，说明 人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹
原因：胰腺产生胰岛素 的细胞已经彻底损坏。
易发病人群：年龄轻， 大多<30岁
治疗：依赖胰岛素治疗胰来自B 细胞胰岛素靶细 胞
II 型糖尿病（T2DM） 别名：非胰岛素依赖型糖尿
病
原因：自身能产生胰岛素， 但细胞无法对其做出反应。
易发病人群：中老年人，肥 胖者
治疗：需要胰岛素单独或与 口服药联合应用的治疗
起各自对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖 现已归入特异性糖尿病中。 ① 颅内压增高：可刺激血糖中枢，如脑膜炎，颅外伤，颅内出血等，引起血糖增高。 ② 脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动时。
4.病理性低血糖 特发性功能性低血糖最多见，其次是药源性，肝源性和胰岛素 瘤等。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
4.实验器材和试剂
(一）器材
5ml移液管，微量可调式移液管， 721E分光计，37℃恒温水浴
（二）试剂
防止氧化，葡萄糖为单糖,含醛基,易氧化成羧基
1. 苯甲酸钠溶液（12mmol/L）
2. 酶酚混合试剂 酶试剂+酚溶液 1:1
3. 葡萄糖标准工作液（5mmol/L）
及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动
4）. OGTT 2小时后血糖≥11.1mmol／L可以确诊糖尿病
1.相关临床知识
OGTT诊断
1.当静脉空腹血糖＜6.1mmol／L，OGTT 2小时血糖＜7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖 后的血糖调节能力正常。
2.当静脉空腹血糖≥7.0mmol／L或OGTT 2小时血糖≥11.1mmol／L，说明人体处理进食后 葡萄糖的能力明显降低，可以确诊糖尿病。
5.实验操作
取试管3支，按表操作
试剂/ml 血清
葡萄糖标准液 蒸馏水
酶酚混合液
空白管（B） -
0.020 3.00
标准管（S） -
0.020 -
3.00
测定管（T） 0.020 3.00
混匀，置37℃水浴中，保暖25min,在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测 定管的吸光度。
计算公式
血清葡萄糖浓度=
A测定 A标准
×5mmol/L
参考值 空腹血清葡萄糖浓度：3.89~6.11mmol/L
临床意义
1.生理性高血糖 可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2.病理性高血糖 ① 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 ② 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引