血清葡萄糖(GLU)测定—GOD-POD(精)
血清葡萄糖GLU测定
血清葡萄糖GLU测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂基于在精密度和准确性方面具有很高可靠性的Trinder’S方法，在防止已知化合物（如尿酸、谷胱甘肽和肌酐等）的干扰进行了进一步的改良。
GOD葡萄糖+ H2O+ O2 H2O2+葡萄糖酸 PODH2O+AAP + HBA 醌亚胺（红色）H2O 式中：AAP 为4-氨基安替比林；HBA 为4-羟基苯甲酸上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在波长500nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。
3 标本：3.1 病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清，标本最好不要溶血。
迅速分离血清或，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3.3 标本存放：血清应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5标本拒收标集：细菌污染、超时送检的的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司GLU试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：过氧化物酶 375U/L 4-羟基苯甲酸15mmol/L4-氨基安替比林0.75mmol/L磷酸盐缓冲液110mmol/L试剂2（R2）：葡萄糖氧化酶6000U/L 磷酸盐缓冲液110mmol/L4.1.2 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月4.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
检验科血液葡萄糖测定技术操作规程
检验科血液葡萄糖测定技术操作规程1.检测目的：检测血清或血浆中葡萄糖的含量，为临床对相关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果，以及对健康人群正常生理指标的监测提供重要的参考价值。
3.标本要求：3.1病人准备：空腹12小时。
3.2标本类型：血清或NaF抗凝的血浆。
采血后及时分离，以避免血清或血浆中葡萄糖被细胞利用而降低。
4.设备和试剂：4.1仪器设备：奥林巴斯AU600生化分析仪4.2试剂材料：四川迈克公司试剂参与反应成份：R1：酚（12.0mmol/L）R2：GOD（≥35KU/L）、POD（≥5KU/L）、4-AAP （1.20mmol/L）4.3试剂的贮存：4.3.12～8℃密闭避光贮存至标签所注失效期。
℃避光稳定30天。
4.4注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。
试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。
叠氮化钠可以和铜、铅等金属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液和冲洗排水管。
4.5试剂准备：即开即用的，无需特殊准备。
5质量控制：5.1质控物：RANDOX多项人基质血清5.2质控措施：6.参考区间及可报区间：6.1参考范围：空腹 3.89～6.11mmol/L餐后1小时7.78～8.89mmol/L餐后2小时 3.89～7.78mmol/L6.2可报范围：0.00～22.30mmol/L。
样品GLU含量超过线性范围应用生理盐水稀释重做，结果乘以稀释倍数。
7.危急值及处理方法：<2.5mmol/L或>10mmol/L。
及时与临床联络。
实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验1
4、消除干扰的方法有
1）空白对照 包括试剂空白和标本空白。 2）物理、化学方法去除干扰（可能会引入新的干扰） 3）只使用对干扰物的敏感度不高的方法。如：己糖激酶法 测定GLU，酶法测定肌酐等 4）以两点法或双波长法消除部分干扰，可以设计双试剂法 消除内源性干扰
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样 品的10%，避免将血清稀释过度，引起误差 的改变。
3．准确加量是最主要的技术关键。
注意事项(干扰试验)
1、加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所 见浓度的上限，有可能时应达到病理标本 的最高值。
2、凡可疑干扰物都应做，这里仅是举例示范。 3、适当增加测定次数以减少实验的随机误差。
样本测定
37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
结果计算-回收率
加入浓度= 标准液浓度* 标准液量ml 血清量(ml) 标准液量(ml) 生理盐水量(ml)
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
100％
一般要求回收率95-105%
干扰值计算
试剂与器材
1、试剂组成：R1：苯酚10mmol/L，POD>1000U/L，抗VIC氧化 酶； R2： GOD>1600U/L, 4-AAP2mmol/L
2、试剂包装：R1及R2，标准液浓度5.55 mmol/L 3、工作试剂配制：本试剂盒为液态双试剂，加双试剂的仪器
可直接应用，试剂更稳定，加单一试剂的仪器临用时缓冲 液和酶溶液以R1：R2=3:1的比例混合。
干扰物加入浓度= 干扰物浓度*
干扰物溶液量 ml
血清量 (ml ) 干扰物溶液量 (ml ) 生理盐水量(ml )
干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
血清葡萄糖浓度的测定解析
实验步骤
B
S
T
工作液
1.00 mL 1.0 mL 1.0 mL
dH2O
10 uL
-
葡萄糖标准液
-
10 uL
血清
-
-
混匀， 37C， 15 mins
10 uL
dH2O
0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL
混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度.
✓ 计算:
葡萄糖 (mmol/L) =
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，为葡萄糖测定参考方法，但试剂较贵。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
Schiff碱 (青色)
葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩 合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，特异性较高。
A E1 B E2 C
（三）酶法
• 单酶反应法：A
B
– 直接测定底物的含量，由酶的变化量来测定底物量
• 酶偶联反应法：A
B
C
– 常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶
1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK)
葡萄糖 + ATP HK 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+ 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH
血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)
POD
红色醌类化合物
2019/2/15
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实验试剂
器材
5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿， 37度恒温水 浴锅。
试剂
0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0） 称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L 酶试剂 取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸 盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度 保存，可稳定存在3个月。 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。 酶-酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。
6
2019/2/15
实验操作
试剂
血清/μL 葡萄糖标准液/μL 蒸馏水/μL
空白管
0.02
标准管
0.02 -
测定管
0.02 -
酶酚混合试剂/μL
3.00
3.00
3.00
混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管 调零，读取标准管和测定管的吸光度。 血清葡萄糖的含量= 参考值：3.89-6.11mmol/L
5 2019/2/15
实验试剂
12mmol苯甲酸钠溶液 称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容 至1L。 葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml 12mmol/L苯甲酸 钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯 甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
化学分析计量
2008年 , 第 17 卷 , 第 3 期
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
戴新华 齐韬 杨梦瑞 徐蓓 方向
100013) ( 中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所 , 北京
*
摘要 关键词
阐述 了血清中葡萄糖的检测在临床诊 断研究方 面的重 要意义 , 较 全面地 综述了血 清葡萄 糖常用 的检测 血清 葡萄糖 检测方法 20. 0 mm ol/L ) [ 5] 。葡 萄糖 氧 化酶 对 葡萄糖溶液中有 需要 型到 型及 D 葡萄 糖 高度 敏 感。
* 国家 科 技基 础 条 件平 台 项 目标 准 物 质资 源 共享 平 台 建设 ( 2005DKA 21501 )与 十一五 国家科技支撑计划 重点项目 科研用高 纯有 机 试 剂 核 心 单 元 物 质 及 共 性 关 键 技 术 的 研 制 与 开 发 ( 2006BA F07B03) 收稿日期 : 2008 03 05
型两种葡萄糖 , 葡萄糖的 完全氧化
型 的转 化。新配 制的 葡萄糖 标准 液主 要是
型葡萄糖 , 必须放置 2 h 以上 ( 最好过夜 ) 待其变旋 平衡后方 可应用 [ 6] 。 1. 2 微电流法 微电流法的检测原 理是在电极表面固化 GOD, 当血液滴 到电极上时 , 葡萄糖氧化酶可氧化血液 中的葡萄糖 产生葡萄 糖内酯和 H 2 O2, 同时 释放 出电 子。所产 生的 电子 被导 电介 质转移给电极 , 在一 定电压 作用 下 , 流过电 极的 电流 将发生 变化 , 通过检测电流变化与葡萄糖浓度 的线性关系 达到检测 血糖浓度的目 的 [ 7] 。 1. 3 氧速率法 氧速率 法又 称 氧电 极 法 , 其原 理是 测 定溶 液 中氧 的消 耗 , 根据从酶反应开 始至结 束的 氧浓度 差 , 求得 标本 中葡萄 糖浓度。 葡萄糖 + O2 + H 2 O 葡萄糖酸 + H 2 O2 氧电极置 于含有适量葡萄糖氧化酶的 溶液中 , 当加入样 品后 , 样品中的葡萄糖被氧化而消耗 氧。由于氧消 耗量与血 清中的葡萄糖 浓度成 正比 , 而 电极 的极 限扩 散电 流 ( I M )又 与溶液中氧含量成正比 , 因此 , 氧 电极 I M 值即可反 映样品中 血清葡萄糖的浓 度 [ 8] 。氧速 率法 的精密 度好、 准 确性高 , 且 具有极高的抗 特异性。 该法中 氧电 极只监 测高 度特 异的葡 萄糖氧化酶催 化反应 , 且电极检测到的 是样本的最 大氧消耗 速率 , 因而它不受大气中氧的干扰 , 也不受溶 血黄疸、 乳糜和 其它代谢物的 干扰 , 其 测定结 果与 参考 方法最 接近 [ 9] ; 由于 氧速率法的使 用 , 血糖的 结果可 以在加 入样本 20 s 后获 得 , 大大地提高了 检测速 度。该法 的不 足之处 是需 要特 殊仪器 反应槽和电极 , 只能测定葡萄糖含量 , 不能测 定其它项 目 ; 由 于氧电极膜具 有一定寿 命 , 使用 一段时 间后 , 膜 的老 化使其 对氧通透性降 低 , 灵 敏度下 降 , 检测 结果的 准确 度也 随之下 降 [ 10] 。
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)简介：葡萄糖(Glucose, Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。
用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。
上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。
Leagene葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等，其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时消耗溶液中的氧，产生过氧化氢，过氧化氢与氧化色原物质反应生成有色化合物，初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比，酶标仪进行比色测定。
本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定，但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量，其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、生理盐水或PBS2、96孔板或离心管、小试管3、水浴锅或恒温箱4、酶标仪或分光光度计5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考)：编号名称TC0711200TTC0711500TStorage试剂(A): 酚试剂30ml75ml RT 避光试剂(B): 酶试剂磷酸盐缓冲液(pH7.0)30ml75ml -20℃避光4-氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶临用前，按酚试剂：酶试剂混匀，即GOD-POD工作液，4℃保存。
试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml1ml -20℃试剂(D): ddH2O 1ml1ml RT 使用说明书1份1、样本处理：①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围(25mmol/L)，用生理盐水稀释后检测。
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)简介：葡萄糖(Glucose, Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。
用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。
上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。
Leagene葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等，其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时消耗溶液中的氧，产生过氧化氢，过氧化氢与氧化色原物质反应生成有色化合物，初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比，分光光度计进行比色测定。
本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定，但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量，其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、生理盐水或PBS2、离心管、小试管或96孔板3、水浴锅或恒温箱4、分光光度计或酶标仪5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考)：编号名称TC0713100TTC0713200TStorage试剂(A): 酚试剂50ml2×50ml RT 避光试剂(B): 酶试剂磷酸盐缓冲液(pH7.0)50ml2×50ml -20℃避光4-氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶临用前，按酚试剂：酶试剂混匀，即GOD-POD工作液，4℃保存。
试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml2×1ml -20℃试剂(D): ddH2O 1ml2ml RT 使用说明书1份1、样本处理：①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围(25mmol/L)，用生理盐水稀释后检测。
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临床意义
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的 相对平衡时，则出现高血糖和低血糖。
高血糖： 1.生理性高血糖：见于饭后1~2h；注射葡萄糖后；情绪紧张时分泌肾上腺
素增加或注射肾上腺素后等。 2.病理性高血糖： ①内分泌功能障碍：如糖尿病等 ②颅内压增加刺激血糖中枢而使血糖升高，如颅外伤，颅内出血等。 ③严重脱水：引起血液浓缩而导致血糖升高，如呕吐、腹泻、高热等。 血糖降低.： 1.生理性的低血糖：有饥饿、剧烈运动等。 2.病理性的低血糖： 胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞增生或肿瘤。 对抗胰岛素的激素分泌不足：如垂体前叶、肾上腺皮质和甲状腺功能减退等。 血糖来源减少：如长期营养不良，严重的肝病等。
操作步骤：
1、配制酶工作液：
2、按下表操作：
加入物(ml) U
SB
血清
0.03 — —
葡萄糖标准液 — 0.03 —
蒸馏水
— — 0.03
酶工作液
3
33
混匀， 置37℃水浴10min , 比色（ 用分光光度计波长500nm, B管调零），读取各管A值。
结果与参考值
计算及结果报告： 血清葡萄糖mmol/L== A U/A事项
-葡萄糖有ɑ型和ß型之分，在溶液中可互相转 变。新配制的葡萄糖标准液须放置2小时以上 （最好过夜），使两者在溶液中达到平衡。
COD-POD 法初始反应特异性高，而指示反 应特异性较差，干扰往往发生在指示反应。血 液中的一些还原性物质，如维生素C、谷胱甘 肽及左旋多巴可与色原性氧受体竞争H2O2， 使结果出现偏差。
血清葡萄糖（ＧＬＵ）测定—GOD-POD法
实验目的：
⒈掌握GOD-POD法测定血糖的原理及注意事 项。
⒉熟练进行实验操作并能够正确使用加样枪 ⒊了解血糖测定的主要临床意义。
实验原理：
ＧＯＤ催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过 氧化氢，过氧化氢被偶联的ＰＯＤ催化释放出 初生态氧，后者将色原性氧受体４-氨基安替 比林偶联的酚氧化，并与4-氨基安替比林结合 生成红色醌类化合物。