血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法
检测方法对HK法血清葡萄糖测定结果的影响
[ J] . 上海医学检验杂志, 2003, 18( 3) : 167-169. ( 收稿日期: 2004-10-30)
三种方法检查阴道霉菌的比较
杨 丽
( 西安一四一医院, 陕西 西安 710089)
参考文献: [ 1] 陈文列, 陈金富, 钟秀容, 等. 阴道毛滴虫粘附、吞噬宿主细胞的超
微结构研究[ J] . 福建医药杂志, 1997, 19: 176. [ 2] A lderet e J F, Garza GE . Specif ic nat ure of Trichomonas vaginal is
[ 关键词] 阴道分泌物; 霉菌; 亚甲蓝 [ 中图分类号] R711. 31 [ 文献标识码] B [ 文章编号] 1671-5098( 2005) 1A-0047-02
阴道 分泌物的实 验室检查 是诊断霉菌 性阴道炎 的常用方
法, 我室采用 常规盐水 法、N aO H 法 和亚甲蓝 溶液法 对 280 例 妇科阴道分泌物进行检查, 结果分析如下。 1 材料与方法 1. 1 标本来源 本院妇科门诊疑诊阴道炎病人的阴道分泌物 标本 280 份。 1. 2 试剂 生理盐水, 10 g/ L N aO H 溶液 1 g / L 亚甲蓝溶液, 50 g / L Na OH 溶液。 1. 3 方法 1. 3. 1 常规盐 水法 取阴道分泌物, 以生理盐水稀释, 涂片镜 检。
( 收稿日期: 2004-10-10)
检测方法对 HK 法血清葡萄糖测定结果的影响
马中伟
( 溧阳市中医医院, 江苏 溧阳 213300)
[ 摘 要] 目的: 探讨己糖激酶( HK ) 法血清葡萄糖测定中, 检测方法 对克服溶血、脂浊、黄疸的干扰。方法: 用 HK 法血糖双试剂, 一点终点法、二点终点法、速率法, 在日立 7060 生化分析仪上测定 溶血、脂浊、黄疸血 清及其对照 血清 的葡萄糖。结果: 两点终点法干扰误差< 4 % , 较一点终点法、速率法小, 结果优于该两法。
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法。
它可以检测血清中的水溶性葡萄糖的含量，从而可以反映机体的糖代谢情况。
血清葡萄糖测定方法有多种，其中最常用的是酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK）。
2、酶联免疫法（ELISA）
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的血清葡萄糖测定方法。
ELISA技术利用免疫反应原理，把糖尿病患者血清中的葡萄糖水解酶以抗原或抗体的形式结合起来，然后用抗体识别，经过可见性染料和酶的底物分解，用放大效应得到明显的反应信号，通过测量信号来确定葡萄糖的浓度。
ELISA对葡萄糖的检测灵敏度很高，但是分析时间比较长，且需要有特殊的仪器。
3、磷酸二氢钾滴定法（HK）
磷酸二氢钾滴定法（HK）是另一种检测血清葡萄糖浓度的常用方法。
它是一种血清中葡萄糖的滴定法，用40-50℃的磷酸二氢钾溶液作为比色剂，通过比色分析得到血清中的葡萄糖含量。
这种方法分析速度快，结果准确，但是需要较高的技术要求。
4、结论
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法，它可以准确反映机体的糖代谢状况。
目前最常用的血清葡萄糖测定方法有酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK），它们具有自己的优缺点，根据实际情况选择合适的方法。
01 GLU-HK
复星长征体外诊断试剂标准操作规程试剂名称：葡萄糖测定试剂盒（己糖激酶法）上海复星长征医学科学有限公司目录1 试剂盒概况2 方法学原理3 试剂主要组分4 样本准备5 试剂准备6 校准要求7 质量控制8 计算方法9 参数设定10 参考范围11 试剂性能概要12 超出可报告范围的处理13 其他必须说明的内容14 参考文献1 试剂盒概况1．1 货号：1.02.0702/1.02.0704/1.02.0801。
1．2 包装规格：试剂1（R1）：4×50ml ；试剂2（R2）：2×50ml试剂1（R1）：4×50ml ；试剂2（R2）：4×25ml 试剂1（R1）：2×250 测试；试剂2（R2）：1×500 测试1．3 产品注册证号：沪食药监械（准）字2014第2401267号 1．4 产品标准号：YZB/沪 2727-40-2014 1．5 版本号：2014－1 2 方法学原理本试剂所采用的反应式如下：+--+++-−−−→−+--+--−→−+HNADH PG NAD ADPATP PDHG HK 6666磷酸葡萄糖磷酸葡糖糖葡萄糖式中：ATP 为三磷酸腺苷；ADP 为二磷酸腺苷；HK 为己糖激酶；G-6-PDH 为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；6-PG 为6-磷酸葡萄糖酸上述反应中，NADH 的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在340nm 处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。
3 试剂主要组分 3．1 试剂1（R1）三磷酸腺苷0.75mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶375U/LNAD15mmol/L哌嗪-N,N ’-双（2-乙磺酸）缓冲液 50 mmol/L 3．2 试剂2（R2）己糖激酶60KU/L哌嗪-N,N’-双（2-乙磺酸）缓冲液50 mmol/L3．3 储存条件3．3 . 1 在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起效期12个月。
葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)试剂盒与己糖激酶法(HK)试剂盒测定血糖比较
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）试剂盒与己糖激酶法（HK）试剂盒测定血糖比较摘要:通过对本实验室常规使用的己糖激酶法试剂盒的比较，分析葡萄糖氧化酶法试剂盒检测血糖的可靠性和应用性。
对本实验室使用的血糖测定参考方法HK法试剂盒与GOD-POD法试剂盒从重复性、试剂稳定性、特异性等方面进行比较。
结果显示GOD-POD法在重复性、试剂稳定性等方面均能满足一般实验室要求，且与HK法相关性良好。
关键词：GOD-POD、HK、血糖测定、方法比较1 引言。
血糖测定是诊断糖尿病的重要依据，血糖的准确测定对诊断和处理高血糖和低血糖症十分重要测定方法主要有化学法和酶法，而酶法有分为葡萄糖氧化酶与过氧化物酶偶联的的GOD-POD法及己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联的HK 法。
酶法中的GOD-POD法，因具有操作简单，无毒、无害，试剂已商品化、易于质控、价格低等优点，现已广泛用于临床。
为此，将GOD-POD法与血糖参考方法HK法从重复性、试剂稳定性、特异性及两种方法的相关性方面作比较，现报告如下：2 材料与方法2.1仪器与试剂己糖激酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310葡萄糖氧化酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310胆红素校准品（430 umol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101120血糖中值质控品（4.80 mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008血糖高值质控品（11.20mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008日立-7180全自动生化分析仪2.2方法按试剂盒使用说明设置参数和操作。
2.2.1重复性试验取两个血糖浓度的定值质控血清用两种方法分别平行测20次，计算批内误差。
另取两个血糖浓度同一批号定值质控血清用两种方法每天各做两次，累计20个结果，计算天间误差。
2.2.2回收试验取若干健康体检人群血清混合，分装，按9:1的比例分别加入浓度为4.80 mmol/L和11.20 mmol/l的糖标准溶液，用两种方法分别测定，每种方法的每一浓度平行测定三次，分别计算回收率。
葡萄糖试剂盒(己糖激酶法)标准操作程序
葡萄糖试剂盒（己糖激酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中葡萄糖的含量。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆中葡萄糖的含量。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是己糖激酶法(HK)。
5. 原理葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP ）和镁离子存在下被已糖激酶（HK ）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P ）和二磷酸腺苷（ADP ）。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH ）使G-6-P 氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH ）。
在340/380nm 的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。
+++−−−→−+--+--−→−+HNADH ADP P G ADPP G ATP PDH G HK磷酸葡萄糖葡萄糖-66666. 仪器日立7600自动生化分析仪 7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、G-6-PDH 、ATP ； R2：Good ’s 缓冲液、HK 、NAD +； 校准品：葡萄糖7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。
开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定7天。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展【摘要】血清葡萄糖含量是临床生化检验中重要的指标，其的准确测定对糖尿病等疾病的诊断、治疗都有重大意义。
本文介绍了近几年血清中葡萄糖含量检测的主要方法以及这些方法的一些研究结果。
【关键词】血清；葡萄糖；检测方法血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。
人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。
正常人在空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。
空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖而血糖浓度低于3.9mmol/L 称为低血糖。
血清中葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。
因此，对其进行准确的测定具有极其重要的意义。
1血清中葡萄糖的主要检测方法目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、己糖激酶法（HK法）、葡萄糖脱氢酶法（GDH法）、气相色谱-同位素稀释质谱法（GC-IDMS法）以及无创血糖测量法等。
下面就对以上方法进行简要的介绍。
1.1葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
通过测定吸光度就能计算出血液中葡萄糖的含量。
该法的优点有：操作简便，用血量少，成本低，多见于便携式血糖仪，是我国卫生部推荐的血糖测定的常规方法。
但缺点是：过氧化酶的特异性较差，尿酸、维生素C、胆红素等可与色原性物质竞争过氧化氢而抑制反应，引起结果偏低。
且该法线性范围较窄（0.1~20.0mmol/L）。
同时，葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度敏感，而新配制的葡萄糖标准溶液主要为α-D-葡萄糖，为使检测结果准确，需静置溶液2h以上（最好过夜）待其完全转化为β-D-葡萄糖再使用。
临床生化检验 第三章 葡萄糖的测定
糖代谢紊乱－－高血糖和糖尿 脂类代谢紊乱－－高血脂、酮症酸中毒 体重减轻和生长迟缓 微血管、神经病变和白内障的发生
糖尿病的诊断
临床症状
糖尿病的诊断
生化诊断
血糖的测定 尿糖的测定 葡萄糖耐量试验
一、血糖的测定
1．出现糖病症状加上随机血糖浓度≥11.1mmol/L。 2．空腹血糖≥7.0mmol/L。空腹指至少8h内无含热量食 物的摄入。 3．口服葡萄糖耐量试验（OGTT） ，2h血糖浓度 ≥11.1mmol/L。
空白管（B） 标准管（S） 测定管（U）
－
－
0.1
－
0.1
－
0.1
－
－
3.0
3.0
3.0
混匀，置沸水中煮沸10min，取出置冷水中冷却5min， 在630nm处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
计算
血清葡萄糖 (mmol/L)
测定管吸光度 标准管吸光度
5
参考值
临床意义
评价
回收率98.6%～99.6%，线性范围可达30.8mmol/L， 日 内CV2%左右，日间CV不大于4%。特异性强，但不及氧化 酶法。
第一节 体液葡萄糖测定 一、己糖激酶法（ＨＫ法）（理解） 原理：
葡萄糖＋ATP ＨＫ 葡萄糖-６-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋ G-6-PD ６-磷酸葡萄糖内酯 +NADPH
NADPH在340nm有吸收峰
评价：
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。
生理性：饥饿和剧烈运动
低血糖
病理性:药源性、肝源性、胰岛素瘤等
三、邻邻甲苯胺法（理解）
原理：
葡萄糖测定试剂盒(己糖激酶法)产品技术要求haifeng
葡萄糖测定试剂盒（己糖激酶法）
适用范围：本产品适用于定量测定人血清中葡萄糖的含量。
1.1 产品规格
1.2 主要组成成分
2.1 外观
2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损；
2.1.2试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；
2.1.3试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
2.2 净含量
试剂的净含量不低于标示值。
2.3 空白吸光度
测定待检试剂在主波长340nm、副波长405nm、37℃条件下： A≤0.6。
2.4 线性范围
[2，30]mmol/L，相关系数r≥0.990；
[2，5.0]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.5mmol/L；
(5，30]mmol/L范围内，相对偏差不超过±10%。
2.5 分析灵敏度
测定浓度为5.55mmol/L校准血清，吸光度变化不小于0.001。
2.6 精密度
2.6.1批内重复性
CV≤5%。
2.6.2 批间差
相对偏差R≤10%。
2.7 准确度
测定参考物质GBW(E)090545，相对偏差不超过±10%。
2.8 稳定性
未开封试剂2℃～8℃储存，可稳定12个月。
取到效期后2个月内产品进行检测，检测结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1和2.7的规定。
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血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法
1.实验原理
己糖激酶紫外比色测定法。
HK
葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADP
Mg2+
G6PDH
G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。
迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的
葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂威特曼血糖测定试剂盒试剂1 ＋试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品血糖校准值校准
仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。
手工测定计算方法为：
Au
葡萄糖浓度（mmol/L）＝×校准液浓度
As
12. 参考值范围：（mmol/L）
新生儿
脐带血 3.5～8.8
1小时 2.0～5.5
2小时 2.2～4.9
5～14小时 1.9～4.3
10～28小时 2.6～4.5
44～52小时 2.7～4.4
儿童（空腹）
1～6岁 4.1～7.0
7～19岁 3.9～5.9
成人（空腹） 3.9～6.4
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差
别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。
血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。
葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。
葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。
妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。
脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。
癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。
14. 操作性能
14.1 线性范围：0.1～28mmol/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(mmol/
L)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
样品1 5.05 0.047 0.94 样品1 3.65 0.077 2.11 样品2 6.50 0.059 0.91 样品2 6.72 0.142 2.11 样品316.10 0.127 0.79 样品316.54 0.296 1.79
14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂
盒(x)，同时对76个样品进行GLU检测，将检测结果作
方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00mmol/L；
r=0.998。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.1mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围：0.1～28mmol/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限为28mmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。
16. 病危报警值的处理：女性及婴儿的血糖测定值<2.2mmo/L或者>22.2mmol/L；男性的血糖测定值<2.7mmo/L或>22.2mmol/L；新生儿的血糖测定值<1.6mmo/L或>16.6mmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为28mmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。
17.2 干扰物质：使用试剂起始法，当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家
进行维修。
19. 参考文献
1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.131-7.
2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3r d ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. p. 750-808.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。