高效液相方法验证
高效液相色谱仪验证
中心化验室型高效液相色谱仪验证（一）验证方案（二）验证报告药业有限公司中心化验室型高效液相色谱仪验证方案（SOP-YZ-???）方案制定人：制定日期：方案审查人：审查日期：方案审核人：审核日期：方案批准人：批准日期：药业有限公司目录1、概述2、验证目的3、验证实施小组成员及有关责任4、验证文件5、合格标准6、验证方法和步骤7、验证结果分析和综合评价8、最终评价9、验证周期10、验证记录1、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理；操作员??????负责验证的具体操作工作；QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件高效液相色谱法（SOP-ZL-???）、中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）、UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、溶液传输单元LC-20AB说明书、中华人民共和国药典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作说明书安装手册和维修手册。
5、合格标准6、验证方法和步骤6.1验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
高效液相色谱方法的验证
高效液相色谱方法的验证•方法验证的目的•方法验证的内容•方法验证的项目及测定方法方法验证的目的目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。
方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。
同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。
方法验证的内容•准确度•精密度•专属性•检测限•定量限•线性和范围•耐用性准确度定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。
一般用回收率%表示。
1. 主成分含量测定原料药：对照品或方法比对2. 制剂、中药：标准加样回收杂质定量测定：加样回收（n³9）杂质对照品方法比对回收率C-A%=´B100%杂质与主成分的相对含量A:试验供试品中被测成分的量（通常为含量测定量的50%）B: 试验供试品中加入的对照品的量（通常为±20%）C:试验测定值精密度定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差1. 重复性（n 9）³2. 中间精密度3. 重复性测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度，分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。
同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。
专属性定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。
1. 鉴别反应2. 含量测定杂质测定测定：限量检查空白制剂，模拟复方加速破坏试样测试DAD峰纯度检查检测限和定量限检测限（LOD）：供试品中被测物能被检测出的最低量。
通常采用信噪比3:1或2:1定量限（LOQ）: 供试品中被测物能被定量测定的最低量。
通常采用信噪比10:1SN=hP hbaselinenoise测定：将一对照品储备溶液，逐步稀释，分别进样分析，计算相应色谱峰高h和平均基线噪音（hp）之比。
HPLC有关物质分析方法验证
HPLC有关物质分析方法验证HPLC（高效液相色谱）是一种常用的物质分析方法，广泛应用于药品、食品、环境等领域。
为了保证分析结果的准确性和可靠性，对HPLC方法进行验证是非常必要的。
HPLC方法验证包括了准确性、精密度、线性范围、灵敏度、特异性和系统适应性等方面的评估。
首先，准确性是衡量方法是否精确地测量目标物质含量的能力。
方法准确性的验证包括添加回收试验、标准品浓度重现性试验以及样品稀释后的测试。
通过添加已知浓度的目标物质到待测样品中，在不同浓度下测定回收率，可以评估方法的准确性。
其次，精密度是衡量方法在短期内进行重复实验的一致性。
精密度的验证包括了重复测定试验以及系统精密度试验。
通过重复测定同一样品多次，计算相对标准偏差，可以评估方法的精密度。
线性范围是指方法在一定浓度范围内的目标物质含量与测定结果之间的关系。
验证线性范围时，需要测试少量目标物质的浓度，以及相对较高的浓度，测定结果在一定限度内应与浓度成比例关系。
灵敏度是指方法在检测限下测定目标物质的能力。
灵敏度的验证包括了检测限试验和定量限试验。
检测限试验是通过在基质中添加多个不同浓度的目标物质溶液，确定出检测限。
定量限试验是通过在基质中添加不同浓度的目标物质溶液，确定出定量限。
特异性是指方法所测定的目标物质与其他干扰物之间的选择性。
特异性的验证包括了干扰物试验和选择性试验。
通过加入干扰物到目标物质溶液中，然后进行测定，确定干扰物是否对结果产生影响。
选择性试验是通过测定其他可能存在的相关物质浓度，确定是否与目标物质有影响。
最后，系统适应性主要是验证HPLC仪器和设备的稳定性和可靠性。
系统适应性的验证包括了仪器精度试验和仪器稳定性试验。
精度试验是通过测定标准品溶液的浓度，评估仪器的精度。
稳定性试验是在一定时间范围内，对同一样品进行多次测定，评估仪器的稳定性。
在进行HPLC方法验证时，需要根据相关规范文件，制定详细的验证计划和方案，确保验证方法的全面性和科学性。
高效液相色谱分析技术方法认证和注意事项陈桂良.ppt
检测限
• 非仪器分析目视法(用已知浓度的被测 物，试验出能被可靠地检测出的最低 浓度或量);信噪比法(用于能显示基线 噪音的分析方法，即把已知低浓度试 样测出的信号与空白样品测出的信号 进行比较，算出能被可靠地检测出的 最低浓度或量。一般以信噪比为3∶1 或2∶1时相应浓度或注入仪器的量确 定检测限)。
• 对于①法的要求是：除检测限和精密 度指标不必要求外，对准确度、选择
性、线性与范围、定量限、耐用性等 均应有所要求；
• 对于②法的要求是：只对检测限、选 择性和耐用性三项指标有所要求，其 余均无需要求。
• 用于溶出度测定的方法及药物释 放度测定的方法，只有精密度和 耐用性有所要求，其余项目可不 作要求。
其他影响因素
• 实验条件如避光，pH值或流动相组 份比，温度，衍生化反应时间，进 样温度等要进行论证评估。
灵敏度
• 检测限和定量限，在仪器设置在最 高灵敏度时可检出注入样品的最小 量。最小检出量通常是指分析样品 量产生的响应大于噪声的2~3倍，灵 敏度可用检出限度或定量限度来表 示，检出限度或定量限度越小，该 方法灵敏度越高。
药品质量标准分析方法验证的目的
• 证明采用的方法适合于相应检测要 求。在起草药品质量标准时，分析 方法需经验证；在药物生产方法变 更、制剂的组分变更、原分析方法 进行修订时，则质量标准分析方法 也需进行验证。方法验证过程和结 果均应记载在药品标准起草或修订 说明中。
需验证的分析项目
• 鉴别试验，杂质定量或限度检查， 原料药或制剂中有效成分含量测定， 以及制剂中其他成分(如降解产物、 防腐剂等)的测定。药品溶出度、释 放度等功能检查中，其溶出量等测 试方法也应作必要验证。
色谱条件与系统适用性试验
• 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以0.01mol/ml十二烷基硫酸钠溶液 （用磷酸调节pH值至2.5）-乙腈 （60：40）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按醋酸可的松峰计 算应不低于2500，醋酸可的松峰与 盐酸四环素峰的分离度应不小于3.0。
WATERS高效液相色谱仪验证方案
WATERS高效液相色谱仪验证方案名称：WATERS高效液相色谱仪验证方式：检验设备测试确认验证编号：目录1.设备的基本情况1.1.概述1.2.文件资料1.3.维修服务1.4.基本情况2.验证目的3.职责4.验证内容4.1.安装确认4.2.高压泵4.3.2489紫外检测器4.4.2424蒸发光散射检测器5.再确认6.验证周期7.验证确认8.验证结果确认9.附件1.设备的基本情况1.1.概述本仪器由美国WATERS公司生产，由1525泵、2489紫外检测器、2424蒸发光检测器、1500系列柱温箱及电脑系统组成。
主要用于我公司生产所需的各种原料药、中间体及成品的含量测定。
1.2.文件资料1.3.维修服务供货单位名称：本地维修站联系人：电话：1.4.基本情况2.验证目的为确认高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行。
3.职责QC：负责验证方案的起草及具体实施。
QC负责人：负责按验证方案组织实施验证工作，协助验证方案的起草，组织协调验证工作，总结验证结果，出具验证报告。
质量部经理：负责验证方案和验证报告的审核、以及对验证工作的管理。
负责验证数据及结果的审核，负责验证报告的审批，负责再验证周期的确定。
质量授权人：负责验证方案和验证报告批准。
4.验证内容4.1.安装确认4.2.高压泵4.2.1.流量准确度可执行标准：＜±3%（0.97ml/min～1.03ml/min，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱（两通）和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，分别设定1.0、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0ml/min六段，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得。
4.2.2.流量精确度可执行标准：＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱（两通）和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，设定流量为1.0ml/min，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得，共收集5次。
lc20at高效液相色谱仪验证方案
高效液相色谱仪验证方案（一）、验证方案首页(二)、概述型高效液相色谱仪为岛津公司生产的产品，我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究，在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。
购买该产品的目的是为今后新产品研制、开发、生产。
为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的验证。
(三)、验证目的确认高效液相色谱仪的安装、运行、性能确认符合中国药典标准，为日常检验提供准确的检测结果。
(四)、验证依据及标准《药品生产验证指南》年版《型高效液相色谱仪标准操作规程》7-0002-00《中国药典》年版二部附录(五)、验证判断标准：．安装确认判断标准：仪器应具备的技术资料齐全，仪器安装后符合设计要求。
．运行确认判断标准：安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
．性能确认判断标准：符合《中国药典》年版二部附录要求。
(六)、验证人员(七)、验证内容、安装确认安装确认所需文件及资料安装场地单项结论：检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日运行确认：严格按《高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。
单项结论：检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日．性能确认高压恒流泵3.1.1流量准确度可执行标准：＜±（以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，分别设定、、、、和六段，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集分钟，称重，查表，即得。
结论：3.1.2流量精确度可执行标准：＜±（～，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，设定流量为，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集分钟，结论：3.1.3压力范围可执行标准：±设定值测试方法：在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用的盲管封住。
高效液相色谱仪验证方案
高效液相色谱仪验证方案引言高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，它在药物分析、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用。
为了确保HPLC仪器的准确性和可靠性，以及测试结果的可信度，对HPLC仪器进行验证是非常重要的。
本文将介绍一种高效液相色谱仪验证方案，以确保仪器的正常运行和测试结果的准确性。
1. 验证目的HPLC仪器验证的主要目的是评估仪器是否满足预定的性能要求，包括准确性、精密度和线性范围等指标。
通过验证，可以确保仪器在正常使用过程中能够提供准确和可靠的测试结果，以满足相关的法规和质量标准要求。
2. 验证内容HPLC仪器验证的内容包括以下几个方面：2.1 仪器安装和传感器校准在验证之前，首先需要确保HPLC仪器已正确安装，并且各个传感器和检测器已进行校准。
校准过程应按照仪器的操作手册进行。
2.2 仪器性能参数验证仪器性能参数验证是验证HPLC仪器在运行过程中是否符合规定的性能要求。
主要包括以下几个方面：•准确性验证：通过添加已知浓度的标准溶液，并测定其浓度来评估仪器的准确性。
•精密度验证：通过重复测定同一样品，评估仪器的精密度。
可以使用相对标准偏差（RSD）来评估测量结果的一致性。
•线性范围验证：通过逐渐增加样品浓度，测定仪器的线性范围。
应选取不同浓度的标准溶液进行测试，并绘制曲线来评估仪器的线性关系。
2.3 方法验证方法验证是验证HPLC方法是否可用于定量分析的过程。
主要包括以下几个方面：•特异性验证：通过检测样品中其他成分的干扰来评估方法的特异性。
可以使用纯溶液和样品添加物进行测试。
•精密度和重复性验证：通过重复测定同一样品，评估方法的精密度和重复性。
可以使用RSD来评估测量结果的一致性。
•准确性验证：通过添加已知浓度的标准溶液，并测定其浓度来评估方法的准确性。
3. 验证计划为了有效进行HPLC仪器的验证，需要制定详细的验证计划。
验证计划应包括以下几个方面：3.1 验证目标和范围明确验证的目标和范围，确定需要验证的仪器性能参数和方法。
高效液相测甘草酸释放量的可靠性评价及验证方法探索
高效液相测甘草酸释放量的可靠性评价及验证方法探索一、引言甘草酸是一种天然的药物成分，具有广泛的药理作用和临床应用价值。
在制药领域中，准确测定甘草酸的释放量对于药物质量控制非常重要。
本文将探索高效液相法测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证方法。
二、方法1. 准备样品首先，收集不同批次的含有甘草酸的样品。
将样品粉碎并均匀混合，取样量一致。
2. 高效液相测定采用高效液相色谱仪进行甘草酸的测定。
优化色谱条件，选取适当的柱和流动相。
设置合适的检测波长，并根据样品特性确定合适的进样量和检测时间。
3. 可靠性评价为了评估高效液相测定甘草酸释放量的可靠性，我们可以采取以下措施：- 重复性：在相同的条件下，重复测试同一批次的样品。
重复测定应该具有较小的变异系数，以确保测定结果的稳定性。
- 中间精确度：在不同的实验室和不同的操作员之间进行测试，并计算出不同实验室之间的变异系数，以评估该方法的可重复性和可移植性。
- 限制的可靠性：确定方法的检测限和定量限，并评估测定结果的精确度和准确度。
4. 验证方法对于高效液相测定法，我们还应该进行方法的验证，以确保其可靠性和准确性。
主要的验证参数包括：- 线性范围：确定甘草酸浓度的线性范围，验证方法是否适用于不同浓度的样品。
- 精密度：通过重复测定同一样品的甘草酸含量，评估方法的精密度。
- 准确度：将高效液相测定结果与参考方法进行比较，评估方法的准确度。
- 选择性：测试其他可能存在的干扰物质对甘草酸测定的影响，并评估方法对干扰物质的选择性。
三、结果分析根据可靠性评价和验证方法的结果，我们可以获得高效液相测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证结果。
通过重复性和中间精确度的评估，我们可以得到测定结果的稳定性和可重复性。
通过限制的可靠性评价，我们可以判定高效液相测定法的精确度和准确度。
四、结论本研究探索了高效液相测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证方法。
通过评估重复性、中间精确度和限制的可靠性，我们可以验证该方法的可靠性。
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Method Development – HPLC Column (cont.) 色谱柱
Col mm x 15 cm 4.6 mm x 10 cm
Particle Diameter: 粒径 10 µm, 5 µm, 3.5 µm, 1.8 µm Pore size, Surface area, End capping 孔径，表面积，封尾
Method Development 方法开发
– HPLC Column (cont.)色谱柱
Guard Column 预柱 Column Wash 柱子冲洗 Column Temperature (35 ˚C - 60 ˚C) 柱温 （ 35 ˚C - 60 ˚C ） Column Storage 柱子的储存
Method Development 方法开发 – HPLC Column 色谱柱
Reversed phase: C18(USP L1), C8(L7) 反相：C18(USP L1), C8(L7) Normal phase: Silica, CN, and NH2 Silica, CN, and NH2 Ion-Exchange: Dionex column 离子交换： Dionex column Ion pair Chromatography: C18/C8/CN 离子对色谱法： C18/C8/CN Size Exclusion Chromatography 排阻色谱法 Chiral separation 手性分离
封尾
Method Development 方法开发
– HPLC Mobile Phase 流动相
Strong solvent component: 强溶剂组份 Methanol 甲醇 Acetonitrile 乙腈 Tetrahydrofuran 四氢呋喃 Weak solvent component: 弱溶剂组份 Water 水 Buffer 缓冲液 Diluted acid (0.1% H3PO4)
Method Development 方法开发 – Resource Planning & Gathering 资源计划收集
Solvents and reagents 溶剂和试剂 Placebo materials 安慰剂 Individual formulation components 各个处方成分 Related substance standards 有关物质标准品 API Reference Standards 活性成分标准品 Accelerated stress sample 强降解样品
Method Development 方法开发 – HPLC column selection summary 色谱柱选择：总结
C18 Column: first choice C18柱：首选 Short length: 10 cm or 15 cm 短柱： 10 cm or 15 cm Small diameter: 3.5 µ m or 5 µ m 小的粒径： 3.5 µ m or 5 µ m End-capped
Method Development – HPLC Mobile Phase: Buffer 流动相：缓冲液
Method Development 方法开发 – HPLC Column色谱柱：考考你 ???
Particle Size 粒径Length长度 Expected N 要求 3.5 µm 5 cm 4200 3.5 µm 10 cm ??? 5 µm 25 cm 12000 10 µm 25 cm ??? Particle Size粒径 Length长度 Resolution分离度 3.5 µm 5 cm 1.5 3.5 µm 10 cm ???
Analytical Method Development and Validation
分析方法的建立和验证 28 March 2008
Outline总纲
HPLC Method Development
高效液相方法建立 HPLC Trouble-shooting Guide HPLC问题解答 Method Optimization 方法优化 Method Validation 方法验证 System Suitability Requirements 系统适应性要求 GMP “Mind-set” GMP理念
Method Development 方法开发 – Useful Information 有用的信息
Chemical structure and MW 化学结构和分子量 Solvent solubility 溶剂中的溶解度 pKa and pH solubility 酸性解离常数和PH溶解度 UV spectrum 紫外光谱 Process impurities 工艺杂质 Possible degradation impurities 可能的降解杂质 Literature References 参考文献 MSDS – Material safety data sheets 安全数据表
Method Development – Method Classification 方法开发－分析方法分类 Assay Method 含量方法 Impurity Profile 杂质情况 - Related Substances 有关物质 Chiral Purity 手性纯度 Content Uniformity 含量均一性 Dissolution Cleaning Validation 清洁验证 Identity – Fingerprint 鉴别－指纹 法