遗传学实验报告植物基因组总DNA的分离
实验一植物基因组DNA提取
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
植物基因组DNA的提取
பைடு நூலகம் 一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
植物基因组DNA的提取及分析
植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。
样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。
2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。
3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。
4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。
加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。
5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。
静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。
7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。
二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。
首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。
电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。
3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。
根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。
4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。
通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。
5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。
通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。
植物基因组DNA提取
植物基因组DNA提取第一篇：植物基因组DNA提取植物基因组DNA提取一、实验目的1、掌握植物基因组总DNA的抽提方法和基本原理。
2、学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。
加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。
三、实验仪器及试剂实验仪器：高速离心机；烘箱；冰箱；水浴锅；高压灭菌锅；Nanodrop。
实验试剂：玻璃珠，十二烷基磺酸钠(SDS)；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸（EDTA）；氯化钠；苯酚；氯仿；无水乙醇等。
四、实验步骤1.SDS提取缓冲液在65℃水浴中预热。
2.将叶片置于1.5ml离心管中，液氮速冻，组织研磨器打样。
3.加入700 μl的SDS提取缓冲液，涡旋摇匀。
4.置于65℃的水浴中，每隔10 min轻轻摇动，30 min后取出。
5.加入200 μl KAc溶液，摇匀，放入-20℃冰箱30 min。
6.10000 rpm离心5 min，上清移至新离心管中，12000 rpm离心5 min。
7.上清移至新离心管中，加入700 μl异丙醇，-20℃冰箱30 min。
实验五植物基因组DNA提取
电泳原理
DNA分子在高于等电 点的PH溶液中带负电 荷，在电场中向正极 移动。在一定电场强 度下，DNA分子的迁 移速度与相对分子质 量的对数成反比。
琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
0.3
线型DNA分子的分离范围 (Kb)
5～60
0.6
0.7 0.9
注意事项
1)选取新鲜材料，研磨迅速彻底，研磨好的材料应与 CTAB 抽提 液充分混匀； 2)若提取产物有颜色，可能是材料中含有较多的多酚类物质，添 加巯基乙醇（2－5％），尽可能选取幼嫩的材料； 3）收集 CTAB 与核酸形成的复合物时不要离心过度，否则沉淀 再溶解难；
4）为了获得具有生物活性的天然核酸，在分离制备过程中必须采 用温和的条件，避免过酸过碱、剧烈地搅拌，防止热变性，同 时还要避免核酸降解酶类的降解。
核酸的理化性质
DNA为白色类似石棉样的纤维状物， RNA的纯品
呈白色粉末或结晶。核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于
水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比 游离酸易溶于水。
在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液
中较稳定。
操作步骤 细胞破碎 抽提去蛋白质 沉淀核酸
DNA纯化（去杂质）
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1） 或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大 分子的RNA。 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩 的材料。 多糖 提取液中加1％PVP。
材料与试剂
实验材料 新鲜蔬菜叶片(去叶脉) 试剂 2×CTAB抽提液
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
试验一植物基因组DNA提取
实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。
原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。
2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。
3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。
4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。
植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。
本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。
在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。
首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。
接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。
随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。
在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。
首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。
其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。
最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。
提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。
随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。
通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。
下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。
本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。
总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。
提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。
实验报告-植物基因组的提取和检测
题目：植物基因组DNA的提取与检测一、实验目的1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二、实验原理1.在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；2.SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来；3.苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA 溶；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三、实验材料1.设备移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心管2.材料植物幼嫩叶片3.试剂（1）细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）（2）氯仿:异戊醇（24:1）（3）其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液四、方法和步骤1、取500μL细胞提取液于650C水浴（金属浴）中加热备用；2、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水冲洗干），去除叶脉，剪成细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；3、取0.1g粉末（大约两勺半）转移至500μL预热的细胞提取液中，迅速摇匀，650C 水浴（金属浴）中保温30min，10min左右温和颠倒混匀一次；第 1 页题目：植物基因组DNA的提取与检测4、从水浴（金属浴）中取出离心管，加等体积(约500μL)氯仿/异戊醇（24:1），室温下10000rpm×10min；5.将上清液转移到另一1.5mL离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等2/3体积的异丙醇，轻轻混匀，静置1min,使核酸沉淀下来，12000r/min× 5min，倒掉上清液；6、加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，静置5min,12000r/min × 2min,去除上清液，再加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，放置5min;7、12000r/min× 10min后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉，室温静置干燥；8、干燥后，加入20μLTE缓冲液，溶解DNA，做好标记；9、取5μL溶液，0.7%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小和质量。
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遗传学实验报告
植物基因组总DNA的分离
年级：专业：姓名：学号：日期：
一、实验背景
植物体的根、茎、叶、种子等部位都具有植物体全部的DNA（细胞的全能性），均可用来提取植物细胞总DNA，由于叶片的纤维、淀粉含量相对较少，且易于磨碎（液氮冷冻研磨或干燥后破碎机打碎），因此叶片是提取植物总DNA的理想材料。
相比于动物细胞，植物细胞具有细胞壁，因为提取时必须剧烈破碎，以破碎细胞壁。
而且植物细胞中，多糖、多酚类物质含量较高，不易去除，给植物总DNA的提取工作带来了困难。
广谱植物DNA小提试剂盒通常是利用可以与DNA结合的膜将DNA从植物细胞裂解液中提取出来，并通过洗脱液去除DNA与吸附柱之间的结合，将DNA洗脱下来。
相比传统的方法，DNA小提试剂盒耗时短，可以快速获得植物细胞总DNA。
二、实验目的
1. 了解植物基因组DNA分离的原理和方法。
2. 掌握利用广谱植物DNA小提试剂盒分离植物基因组DNA的方法与技术。
三、实验材料、仪器与试剂：
1. 实验材料：
硅胶干燥的野牡丹叶片样本
2. 实验仪器与用具：
电子天平，破碎机，漩涡震荡仪，电泳仪，水浴锅，10μL、100μL和1000μL移液枪和枪头，金属小匙，高速离心机，凝胶成像仪。
3. 实验试剂和耗材：
广谱植物DNA小提试剂盒（本次实验采用美基生物生产的试剂盒，包括：HiPure gDNA Mini Column、2mL收集管、PVP-40（聚乙烯吡咯烷酮 40）、Buffer PTL（裂解液）、Buffer PBD（结合液）、Buffer GW1（洗液1）、Buffer GW2（洗液2）、RNase A（核糖核酸酶A）、Protease Dissolve Buffer、Buffer AE（DNA洗脱液）），氯仿，异戊醇，无
水乙醇，琼脂糖，1× TAE溶液，1.5mL和2mL离心管，GOLDVIEW，6×溴酚蓝，DNA ladder
四、实验步骤：
1. 在实验前，先根据要求，将PVP-40干粉加入Buffer PTL中并颠倒混匀（终浓度2%（W/V），以增加减少多酚类物质对DNA的损伤。
另外，在Buffer PBD、GW1和GW2中加入规定量的无水乙醇，待用。
最后，按照24:1的比例配置氯仿/异戊醇溶液。
2. 取2mL 离心管，在管盖上编号，加入700μL Buffer PTL。
用破碎机将干叶片打碎，取适量加入2mL 离心管中，使用漩涡震荡仪剧烈涡旋震荡使样品充分分散。
65℃水浴30分钟，期间混匀3-5次。
3. 加入700 μL 24:1氯仿/异戊醇，高速涡旋混匀15秒，12,000×g 离心5分钟。
4. 转移500 μL上清液至新的离心管中，加入1.5倍体积（750 μL）的Buffer PBD至上清中，涡旋混匀15秒。
（若出现明显的沉淀，用移液枪吸打几次打散沉淀团）。
5. 把gDNA吸附柱装在收集管中，转移一半体积的混合液至柱子中。
12,000×g离心60秒。
6. 倒弃滤液并把柱子装回收集管，把剩余的混合液转移至柱子中。
12,000×g离心60秒。
7. 倒弃滤液把柱子装回收集，加入500 μL Buffer GW1至柱子中。
12,000×g离心60秒。
8. 倒弃滤液把柱子装回收集，加入650 μL Buffer GW2至柱子中。
12,000×g离心60秒。
9. 倒弃滤液把柱子装回收集， 12,000×g离心2分钟去除柱子中残留的乙醇。
10. 将柱子转移至新的1.5 mL离心管中，逐滴加入40 μL预热到65℃的Buffer AE至柱子膜中央。
室温静置2分钟，12,000×g离心1分钟。
11. 琼脂糖凝胶的制备：先将内槽插入制胶槽，并选取合适的梳子并插入相应卡槽。
取1g 琼脂糖倒入三角瓶，加入1× TAE缓冲液100mL，置微波炉内加热至完全熔化，并摇匀。
注意：加热过程中也应适时摇匀，防止局部过热造成的暴沸！稍冷却后倒入胶槽，等待大约15min至凝胶完全凝固，完成制胶。
12. 取出内槽，放入电泳槽。
吸取少许电泳液点在薄膜手套上，混入1 μL 6×上样缓冲液，1 μL GOLDVIEW，并吸取3 μL DNA提取产物与上样缓冲液混匀。
将混匀的上样样品加入凝胶的点样孔，并加入DNA ladder。
13. 接通电泳仪与电泳槽之间的电源连接。
（注意：连接时认真检查正负极的匹配情况，如果连接错误会导致上样样品在凝胶中向相反方向移动，最终进入电泳液中）。
接通电源，设置电压为100V，等待溴酚蓝染料移动至距前沿1-2 cm处时，停止电泳；
14. 取出内槽，在凝胶成像仪的玻璃板上小心推出凝胶，关闭仪器门，对凝胶进行紫外拍照。
实验报告
1、DNA提取过程记录：
附电泳图，清晰标注泳道及片段长度：
3、结论，及本次实验存在的问题与讨论：
本人对该报告内容真实性负
责。
责任人签名：。