遗传学实验报告

蚕豆微核设计实验

姓名：陈婷班级：生物技术0911 组别：第六组

一、实验目的

1）了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义。

2）学习蚕豆根尖的微核测试技术。寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。

二、实验原理

微核简称MCN，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。

微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三核块。

已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射积累效应呈正相关，这一点和染色体畸变情况一样，所以可用简易的间期微核数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。

三、实验思路

1、香烟及其燃烧物中含有多种致癌物质和致癌前体物质，通过收集，这些致突变物主要存

在于水溶液中，流行病学和细胞遗传学都证实了这些物质可引起遗传物质损伤。蚕豆根尖细胞微核技术是目前证实遗传物质损伤的快速、有效的方法。因此，我们选择用烟头浸出液为诱变剂。据俄《消息报》报道，科研人员发现，制作发酵食品时所使用的乳酸菌能够释放出蛋白酶，分解部分诱变剂的特定蛋白。乳酸菌在发酵时会合成乳酸，这种物质可抑制多种诱变剂的活性。乳酸菌还能直接与部分诱变剂发生化学反应，使后者失去诱变能力。所以，我们选择了取材方便且富含乳酸菌的酸奶作为拮抗剂，来验证其功能。

四、实验材料

显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、固定液、改良苯酚品红、蚕豆、烟头浸出液（红山茶<焦油含量：12mg/根）、酸奶（味全<原味>）

五、实验步骤

1、将蚕豆放入盛有蒸馏水的烧杯中，25℃浸泡24h。种子吸涨后放入加有棉花的培养

基中催芽，24h左右。

2、将20根烟头处理后加至100ml蒸馏水于水浴锅60°处理1h，得20/100的浓度烟

头浸出液。再分别稀释后得到20/400,20/600,20/800,20/1000浓度的浸出液，每个浓度中投入三个长势相同蚕豆，培养箱中进行诱变6h。

3、另配三组20/600浓度的浸出液，分别滴加2滴，5滴，8滴酸奶作为拮抗组，同上

诉诱变组一同培养。另加一组空白对照。

4、将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，再将种子放入铺好棉花的培养皿中在25℃的

培养箱中恢复培养24h。

5、将恢复后的种子根尖切下，放入卡纳氏固定液中进行固定。

6、常规制片及镜检。

六、实验结果及图片（图片见附页）

每组浓度的三个制片，我们分别令三名同学分别计数，将计得的数据进行取平均数，得到视野微核的千分率。如表所示，烟头浸出液的浓度与微核率大致呈正比关系。

七、实验数据分析与讨论

1、由于培养箱是共用的，不排除其他组的其他试剂通过纱布滴水，或是蒸发等途径，间接

污染本小组实验梯度，以造成部分实验数据有所偏差。本实验使用酸奶作为拮抗的机理是酸奶中富含乳酸菌，它能够释放出蛋白酶，分解部分诱变剂的特定蛋白，而且乳酸菌在发酵时会合成乳酸，这种物质可抑制多种诱变剂的活性。乳酸菌还能直接与部分诱变剂发生化学反应，使后者失去诱变能力。但本实验的烟草浸出液与其发生反应的机制还不确定，有待进一步探索。酸奶成分太过复杂，本次实验并未进一步研究是其中的乳酸还是各种益生菌群起拮抗作用，可将乳酸和乳酸菌悬液分别进行后续实验来进行探索性研究。本组实验的诱变剂浓度是根据资料进行决定的，经过预实验的分析，我们在20/600处滴加不同程度的酸奶量，以此来分析在不同浓度的拮抗剂下与未加拮抗剂的组别进行对照和分析。

5、根据拮抗组数据可以看出，生长环境的ph对微核也有影响，酸奶的滴加量应控制在5

滴左右是较合适的，过酸或太少都不能促进其拮抗作用。但是具体的分析还得对酸奶浓度进行系统的规划和测定后才能准确定位，这也是本实验的不足之处。

6、最后实验数据统计分析时，也存在不足，微核数据的统计有一定的人为观察的影响，也

与每个根尖的生长状况有关，本组仅仅是取了数据的平均数，并未对实验整体进行统计学的估定，因此实验数据有误差。

八、实验注意事项

1、蚕豆浸泡24h过程中，应适当换水两次，在催芽培养过程中也要记得换水，大致长

到2mm左右就可以进行下步诱变了，避免诱变过程中根尖过长过老影响实验结果。

2、诱变处理过程中记录好浓度梯度的数据，科学有序的进行。

3、滴加拮抗剂时应注意生长环境的ph，保证其生长力。

4、诱变之后的蚕豆根尖必须进行恢复培养。

5、固定过程中的卡纳氏固定液是现配现用的。

6、制片镜检过程中，滴加染液的同时要将根尖捣碎，保证染色的成功，压片时，尽量

平整，减少气泡。

7、科学合理的对实验数据进行分析讨论。九、实验心得

第一次做遗传学这样大的设计性实验，实话说，很有趣，很有挑战性。大家一组六个同学，在实验中，分享、分析自己对实验的看法，共同对实验的方案进行设计、讨论，这种过程就是我们平时的学习或者是实验都体会不到的。也许老师您第一次提及这设计实验的时候我们都是比较担忧的心态，可是真正投入了进去之后，我们小组的所有成员都是可以非常自豪自信地说一句：我们成功了。从开始挑豆子开始，我们每一个人都全身心的付出了自己的那份力量，大家分工合作，有条不紊的进行，我们组做了两次预实验和一次单独的正式实验，可以说是所有实验组中做的最多的组别了。当然我们收获的也不止止是实验结果而已，我们收获了自己内心的那份坚定。感谢老师，感谢同组的同学，感谢所有对我们进行批评指正与赞扬的大家，给予我们的肯定。我相信我们所有的同学都会在实验结束后收获自己的那份成功。