肺炎支原体下呼吸道感染患儿外周血辅助性T细胞亚群Th1Th2及B细胞的研究

肺炎支原体下呼吸道感染患儿外周血辅助性T 细胞亚群T h 1／T h 2及B 细胞的研究史瑞明，雷春莲，包瑛，罗树舫（西安交通大学第一医院儿科，陕西西安710061）摘要：目的探讨辅助性T 淋巴细胞亚群T h 1／T h 2及B 细胞在肺炎支原体（M P）下呼吸道感染患儿免疫学发病机制中的作用。

方法应用流式细胞仪单克隆抗体免疫荧光标记法，对30例M P 下呼吸道感染患儿的外周血B 淋巴细胞C D 19+及辅助性T 淋巴细胞T h 1亚群C D 4+C D 45R A +、T h 2亚群C D 4+C D 45R O +的表达情况进行研究。

结果M P 下呼吸道感染患儿外周血B 淋巴细胞C D 19+表达明显升高。

辅助性T 淋巴细胞T h 1亚群C D 4+C D 45R A +表达明显升高，T h 2亚群C D 4+C D 45R O +表达无显著性变化。

C D 4+C D 45R A +／C D 4+C D 45R O +明显升高。

结论M P 下呼吸道感染患儿存在多种免疫失衡和紊乱情况，主要表现为T h 1细胞为主的免疫反应及B 淋巴细胞过度增殖，符合自身免疫性疾病的免疫病理基本特征，推测M P 下呼吸道感染与自身免疫性疾病密切相关。

关键词：肺炎支原体；T h 1／T h 2细胞；B 淋巴细胞；流式细胞仪中图分类号：R 725.6文献标识码：A文章编号：1671-8259（2003）03-0234-03T h e s t u d y o f P B M C s T -h e l p e r c e l l s u b p o pu l a t i o nT h 1／T h 2a n dB c e l l s f o r c h i l d r e nw i t hM PL R T I sS h i R u i m i n g ，L e i C h u n l i a n ，B a oY i n g ，L u o S h u f a n g（D e p a r t m e n t o f P e d i a t r i c s ，F i r s tH o s p i t a l o f X i ’a n J i a o t o n g U n i v e r s i t y，X i ’a n 710061，C h i n a ）A B S T R A C T ：O b j e c t i (e !"#$%&’$())**)+$"*!,()-.)/+)--#014+#%2.".%-3$4"5!(1／!(235&6+)--#457680#*"/+(4-&/)594$(:’+".-3#:3.5)%:"543)（87）-"9)//)#.4/3$"/’$/3+$45*)+$4"5#（;<!=#）>)e t *+,-014+0145<?+，014+0145<@+35&0119+457680#9)/)&)$)/:45)&2’*-"9+’$":)$/’353-’#4#4530+(4-&/)594$(87;<!=#，35&$()5+":.3/)&94$($("#)"*+"5$/"-A /"%.>.e -/0t -=587（+）+(4-&/)50119++)--#45+/)3#)&A /)3$-’（!<0>05）>!()/)93#5"&4**)/)5+)45014++)--#2)$9))5#%2B )+$A /"%.35&+"5$/"-A /"%.（!>0>05）>014+0145<?++)--#45+/)3#)&A /)3$-’（!<0>01）9(4-)014+0145<@++)--#&4&5"$45+/)3#)&#4A 54*4+35$-’（!>0>05）>!()/3$4""*014+0145<?+／014+0145<@+45+/)3#)&/):3/C 32-’（!<0>01）>1+2c 0/-i +2=5$()7680#"*87;<!=#+(4-&/)5，$()/)4#4::%5)&4#"/&)/>6+)--#45+/)3#)&"2D 4"%#-’，35&!(1／!(24:23-35+)&)D )-".#>=$#("9#3./)&":4535$!(1,-4C )4::%5",/)3+$4"54587;<!=#，9(4+(#%A A )#$#87;<!=#(3D )#":)3##"+43$4"594$(3%$"4::%5)&4#)3#)#>K E Y W O R D S ：:’+".-3#:3.5)%:"543)；!(1／!(2；6+)--；E 08收稿日期：2002-08-30修回日期：2002-10-20作者简介：史瑞史（1975-），女（汉族），硕士，研究方向：儿童呼吸免疫.肺炎支原体（m y c o p l a s m a p n e u m o n i a e ，M P ）是小儿下呼吸道感染的最主要病原之一。

近年来小儿M P 下呼吸道感染呈现出发病率逐年上升、肺外并发症表现多样、可涉及多脏器受累的趋势，已引起广泛的临床重视。

但其发病机理仍未完全阐明。

多数学者认为除与病原直接侵犯有关外，还与免疫紊乱、免疫失衡有密切的关系。

本研究通过检测30名M P 下呼吸道感染患儿外周血B 淋巴细胞及辅助性T 淋巴细胞亚群T h 1／T h 2的水平，旨在进一步探讨M P 下呼吸道感染的免疫学发病机制及免疫失衡的关键环节。

1对象和方法1.1研究对象实验组：为2001年6月至2001年12月本院儿科和西安市儿童医院住院的患儿，共30例，男17例，女13例。

最小年龄3岁，最大年龄13岁，平均年龄5岁。

诊断符合《实用儿科学》（第六版）支气管炎和肺炎诊断标准。

其中支气管炎6例，肺炎24例。

入选条件：3岁以上，病史3周以内；半定量酶联免疫法（E I A ）检测外周血肺炎支原体抗体I gM 活性>950U ・m L -1，即呈阳性者；排除其他可能细菌、病毒感染。

对照组：选自幼儿园和健康查体第24卷第3期2003年6月西安交通大学学报（医学版）F "%/53-"*G 4’35F 43"$"5AH 54D )/#4$’（8)&4+3-I +4)5+)#）V o l .24N o .3J u n .2003儿童，共15例，男9例，女6例。

最小年龄3岁，最大年龄14岁，平均年龄5岁3月。

与实验组比较年龄及性别无统计学差异。

所有对照组儿童近2月无呼吸系统及其他系统感染病史，无特殊疾病史，既往体健。

1.2主要试剂肺炎支原体抗体半定量检测试剂盒（美国G E N B I O公司）；C D4C D45R AP E／F I T C双标记单克隆抗体，C D4C D45R OP E／F I T C双标记单克隆抗体及阴性对照（美国I Q公司，美国S E R O T E 公司，美国B D公司）；C D19F I T C标记单克隆抗体及阴性对照（美国B D公司）。

1.3方法1.3.1标本采集患儿于入院当日无菌抽取静脉血2m L（无需抗凝），2000r・m i n-1离心5m i n，取血清装于清洁试管，编号，用半定量酶联免疫法检测肺炎支原体抗体。

阳性且符合入选条件的患儿次日晨无菌抽取空腹静脉血4m L，E D T A2m L抗凝，混匀，4h内分离、标记辅助性T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞表面分化抗原，固定后待测。

1.3.2肺炎支原体抗体I g M检测半定量酶联免疫法。

每份标本均用标本稀释液1:100倍稀释，把100μL预稀释的标准液、1:100稀释的质控和标本分别加到含有20μL吸附剂的清洁试管中，室温孵育30m i n。

确定包括空白、患者标本、校准液和质控在内的所需孔的总数量，根据需要取试验孔。

第1孔内加100μL标本稀释液作为底物空白，分别将100μL已处理的校准液、标本和质控物加到相应孔中，室温孵育60m i n，洗板。

分别向每孔中加入100μL结合液，室温孵育30m i n，洗板。

配制新鲜显色剂，向每孔加入100μL显色剂，室温孵育30m i n。

每孔加100μL终止液。

用空白孔调零，30m i n内在405n m下读取每孔的光密度值。

计算支原体抗体I g M值。

1.3.3B淋巴细胞检测标本中加红细胞裂解液6m L，混匀，静置清亮后2000r・m i n-1离心10m i n，弃去上清液，获P B M C s。

调P B M C s细胞浓度为1*107・m L-1，分别置于4个试管，加入F I T C单荧光素标记抗体及阴性对照20μL，4࠷孵育30m i n，离心弃上清液，各加1m LP B S洗涤后，甲醛P B S固定。

流式细胞仪检测，计数5000个细胞中C D19阳性细胞率。

1.3.4辅助性T淋巴细胞及亚群T h1／T h2检测采用F I T C／P E双色荧光素标记C D4+C D45R A+／C D4+C D45R O+流式细胞术，过程同上。

1.4统计学处理实验数据均采用均数+标准差（x+s）表示，组间均数比较用t检验。

2结果2.1外周血C D19+（B淋巴细胞）检测结果实验组患儿外周血C D19+细胞为（15.3+5.2）%，明显高于对照组（9.2+4.7）%，两组比较差异显著（P< 0.05）。

2.2外周血辅助性T淋巴细胞亚群检测结果实验组与对照组比较，外周血C D4+细胞表达稍有增高，但无显著性差异（P>0.05）。

外周血T h1细胞C D4+ C D45R A+明显升高，差异显著（P<0.01）；T h2细胞C D4+C D45R O+细胞稍有升高，但两组间比较无显著性差异（P>0.05）；T h1／T h2比值实验组较对照组明显升高，差异显著（P<0.01）。