穿心莲内酯检验操作规程
RP—HPLC法测定不同产地穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量
RP—HPLC法测定不同产地穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量目的：建立高效液相色谱法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心蓮内酯含量的方法。
方法：采用AgiLent C18（250mm×4.6mm，5·m）色谱柱，甲醇-水（56：44）为流动相，流速为0.8 mL/min，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的检测波长分别为225nm、250nm。
结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在0.172μg～1.892μg、0.186μg～2.046μg的范围内呈良好的相关性，相关系数分别为0.9997、0.9998，平均回收率分别为98.53%、99.11%，RSD分别为0.63%、0.57%。
结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于穿心莲药材的质量控制。
标签：RP-HPLC法穿心莲穿心莲内酯脱水穿心莲内酯含量测定穿心莲为爵床科植物穿心莲（Andrographis paniculata（Burm.f.）Nees）的干燥地上部分[1]。
又名春莲秋柳、一见喜、榄核莲、金香草、印度草、苦草等。
有清热解毒，消肿止痛之功效。
主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎及流行性感冒等多种感染性疾病，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。
穿心莲主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种栽培，但质量差异较大。
故建立合理的穿心莲质量分析评价方法，将有利于中药材生产、加工及其制剂质量控制[2-4]。
穿心莲主要活性成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，其含量常作为控制药材及制剂质量的指标。
通过查阅资料，在对不同产地药材研究中一般采用紫外、薄层扫描法，本研究采用高效液相色谱法测定两种成分含量对不同产地穿心莲药材进行对比研究，作为评价该药材的质量标准依据，通过试验证明此方法稳定可靠、重现性好，为穿心莲制剂的生产投料及质量控制提供依据。
1 材料与方法1.1 实验材料高效液相色谱仪：美国安捷伦（1）1200高效液相色谱仪；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；MeltterAE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。
穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定
天然药物化学设计试验题目：穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定学生：学号：院（系）：生命科学与工程学院专业：药物制剂指导教师：2011年12月30日天然药物化学课程实验任务书一、题目：穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定二、实验任务1.查阅文献资料并写出所选药材化学研究进展的文献综述2.设计实验方案并进行可行性分析（方案应包括目的意义，设计原理、流程、实验方法、时间安排、需要的仪器与试剂）3.对实验材料进行性状、显微和理化鉴定4.完成穿心莲内酯单体化合物的分离及结构鉴定，鉴定数据应包括熔点、旋光度、紫外图谱。
5.对所得数据进行分析6.完成实验报告并提交少量穿心莲内酯样品。
三、实验要求1.实验中要求学生不完全依赖现成条件，能在教师指导下自己创造一些条件完成实验。
2.实验方法力求创新。
3.目的物的纯度要求用薄层层析法和熔点的测定数据说明；4.本题目要求2-3名学生配合完成。
四、实验报告内容1.题目2.实验目的3.基本原理4.实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家5.分离方法创新之处6.自制或创造了那些实验条件条件7.实验流程及操作方法8.结果与分析9.结论10.在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题11.合理化建议穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定一、文献综述1、成分来源：为爵床科植物穿心功Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的地上部分，主产广东、福建。
结构及化学成分：穿心莲内酯的结构式[中文名称] 穿心莲内酯[别名] 穿心莲乙素、熊耳内酯[分子式] C20H30 O5[分子量] Mw＝350.45[ 熔点 ] 229-232℃[物理性质] 斜方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭, 味极苦,穿心莲内酯在水中的溶解度非常小（几乎不容），易溶于丙酮、甲醇、乙醇。
比旋度[A]2 126. 6? 2b( 冰醋酸)[药理作用] 穿心莲内酯为天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。
穿心莲内酯的提取分离鉴别与
穿心莲内酯的提取分离鉴别与亚硫酸氢钠加成物的制备穿心莲系爵床科植物穿心莲Andrographis Paniculata （Burm.f.）Ness的全草。
主产于我国南方各省，具清热解毒、抗菌消炎、消肿止痛功能，用于治疗急性菌痢、肠胃炎，感冒发热、咽喉炎、尿路感染等。
穿心莲中含有多种苦味素，属二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯等，前二者是穿心莲抗菌消炎的主要有效成分。
据报道，穿心莲内酯能抑制肺炎球菌、甲链球菌及卡那球菌。
对细菌性痢疾，上呼吸道感染、扁桃体炎等有显著疗效。
临床上将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物、丁二酸半酯的钾盐或磺酸钠衍生物，以增加它们在水中的溶解度，用于制备浓度较高的注射剂，提高疗效。
一、实验目的：1．掌握从穿心莲中提取分离穿心莲内酯的原理和操作方法；2．熟悉去除叶绿素的方法；3．熟悉α,β-不饱和内酯类成分的识别反应与薄层鉴定；4．了解穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅超声提取器玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（50mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药穿心莲叶粗粉 80％乙醇活性炭氯仿 95％乙醇中性氧化铝柱无水乙醇中性氧化铝色谱柱（1.8 cm×28 cm）蒸发皿硅胶H-CMC-Na板正丁醇穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯对照品亚硫酸氢钠异羟肟酸铁盐酸羟胺氢氧化钾盐酸三氯化铁试液亚硝酰铁氰化钠氢氧化钠三、穿心莲中主要的有效成分：表8－1 黄芩中主要成分的物理性质此外，穿心莲还含有高穿心莲内酯、穿心莲烷、甾醇类、黄酮类、甾体皂苷、糖类、叶绿素和缩合鞣质等。
穿心莲内酯 新穿心莲内酯 脱氧穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯四、实验原理：1．穿心莲中的内酯类成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，故利用此性质选用乙醇提取；2．穿心莲中含有大量叶绿素，可用活性炭脱色法除去叶绿素杂质；3．利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同，初步将二者分离；4．利用穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯结构上的差异，而造成的极性不同，用氧化铝柱分离；5．将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物以增加其在水中的溶解度，用于制备注射剂。
穿心莲内酯的提取分离及鉴定
穿心莲内酯的提取分离及鉴定2011级16班摘要：穿心莲为解毒消炎类临床常用药，穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分，分子式C20H30O5，白色方形或长方形结晶，味极苦，难溶于水易溶于乙醇、甲醇等。
利用乙醇提取方法、超声、回流、旋转蒸发浓缩方法对穿心莲内酯进行提取分离以及纯化，使用TLC法对其鉴别，可得到纯度较高的穿心莲内酯。
关键词：穿心莲、穿心莲内酯、超声提取法、乙醇提取法、TLC鉴别Isolation & Identification of AndrographolideABSTRACT:Clinical commonly used medicines, creat for detoxification counter Andrographolide is the main effective component, Traditional Chinese medicine (TCM) andrographis formula C20H30O5, white square or rectangle crystal, taste bitter, soluble in water, soluble in ethanol，methanol, ing the ethanol extract method, ultrasound, reflux, rotary evaporation enrichment method to extraction separation and purification of Andrographolide, using TLC method for the identification, can get high purity Andrographolide.KEY WORDS:Andrographis paniculata；Ultrasonic extraction；Andrographolide；alcohol extraction；Thin layer chromatography (TLC)穿心莲为常用中药，来源于爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata（Burm. f.）Nees.的干燥地上部分。
HPLC法测定穿心莲片中穿心莲内酯的含量
一、实验目的 二、仪器与试药 三、色谱条件 四、实验步骤 五、注意事项 六、数据处理 七、思考题
[实验目的] 1. 掌握HPLC法定量分析原理及实验方法。 2. 熟悉HPLC仪基本操作及其在中药制剂分析中应用。
[仪器与试药] 美国Agilent1100 高效液相色谱仪、紫外检测器、 手动进样器、自动进样器 上海必能信SB3200超声提取器 穿心莲内酯对照品 穿心莲片
流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动 相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不液的制备：取穿心莲内酯对照品适量，精密 称定，加甲醇制成0.1mg/ml溶液。
2．供试品制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细， 取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45um的微孔滤 膜过滤，置样品瓶中，备用。
[色谱条件]
ODS柱（250×4.6，5um），以甲醇-水 （60：40）为流动相，检测波长为225nm， 流速1ml/min。
注意事项
流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲 液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用 范围；
水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐
3．测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl， 注入液相色谱仪，测定。
[数据处理及计算] 外标一点法计算（mg/片）
[思考题] 1．取样时为什么取10片，不是取1片提取测定？ 2．为何要补足重量？ 3．什么是续滤液？
高效液相色谱法脱水穿心莲内酯的含量测定
高效液相色谱法脱水穿心莲内酯的含量测定高效液相色谱法脱水穿心莲内酯的含量测定随着科学技术的进步，人们对于天然药物的认识越来越深入。
穿心莲是一种传统中药材，具有良好的保健功效。
其中的有效成分内酯类物质，被广泛应用于中药的制备中。
在穿心莲内酯的提取、制备过程中，更需要准确地测定样品的内酯含量，以保证产品质量和安全性。
为了达到从样品中高效、准确测定内酯含量的目的，常常使用高效液相色谱法（HPLC）进行分析和检测。
下面将对HPLC法进行详细介绍。
HPLC法的基本原理HPLC法是一种高效、高精密度并且具有高灵敏度的分析方法。
在HPLC分析过程中，采用液相色谱柱对样品进行分离、纯化，再通过检测器对样品进行测定。
其中，可选用的柱和检测器是非常多样化的，不同的柱和检测器可适用于不同的样品和检测目的。
在脱水穿心莲内酯的含量测定中，可以选择烷基或芳香基取代的正相和反相柱，这两种柱分别可用于正相和反相分离，用来分离和检测疏水性或亲水性物质。
而检测器可选择紫外-可见光检测器和荧光检测器等。
这些检测器对于内酯类物质具有比较高的检测灵敏度，因此可用于对内酯含量进行测定。
HPLC法的具体操作步骤下面将介绍HPLC法的具体操作步骤：1. 样品准备：取穿心莲提取物5.0 mL置于100 mL烧结瓶中，加入0.2 mol/L氢氧化钠溶液(5 mL)，加入氢氧化钠溶液数字分别为10、20、40、80、120、160，各5毫升。
标准品的准备，将内酯标准品称取精确的10 mg，用甲醇稀释至100 mL，最后得到内酯标准溶液，将其分别稀释5倍、10倍用于检测。
2. 加热：将上述烧结瓶放入加热水浴中，在90℃恒温条件下反应2 h。
冷却，取出；加入冷离心管中。
3. 萃取：用pH=3.5磷酸缓冲液提取，加入萃取液1 0 mL，振荡1 h，离心10 min，取上清液备用。
4. 柱前处理：取上清液4.0 mL加入1 mol/L HCl调节pH到2.0，然后用微孔过滤膜过滤，取2.5 mL待用。
穿心莲内酯检验操作规程
四川省宜宾五粮液集团宜宾制药有限责任公司穿心莲内酯检验操作规程1 目的：建立穿心莲内酯检验操作规程。
2 范围：适用于穿心莲内酯的检验，使穿心莲内酯的检验规范化、标准化。
3 引用标准：《中国药典》2010年版一部 P387 穿心莲内酯4 责任：检验员对检验过程及数据负责；复核人对检验结果的复核负责。
5 内容：5.1 性状：本品为无色结晶性粉末，无臭，味苦。
5.2 鉴别：5.2.1 试剂和溶液：乙醇、3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液、5%氢氧化钠溶液、乙醇制氢氧化钾试液、无水乙醇。
5.2.2 仪器与设备：紫外分光光度仪、烧杯、量筒、天平。
5.2.3 分析步骤：a) 取本品约10mg，加乙醇2ml溶解后，加2%的3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液与5%氢氧化钾的乙醇溶液各2滴，混匀，即显紫红色。
b) 取本品约10mg，加乙醇2ml溶解后，加乙醇制氢氧化钾试液2～3滴，渐显红色，放置后变为黄色。
c) 取本品，加无水乙醇制成每1ml中含10ug的溶液，照《紫外-可见分光光度法》测定，在224nm的波长处有最大吸收。
5.3 检查：5.3.1 熔点：a) 仪器与设备：熔点仪。
b) 分析步骤：取本品，照《熔点测定法》DR.SOP/QC.Ⅸ010测定，熔点应为224～230℃，熔融同时分解。
5.3.2 其他内酯：a) 试剂和溶液：无水乙醇、三氯甲烷、甲醇、2%3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液、5%氢氧化钾的乙醇溶液。
b) 仪器与设备：硅胶G薄层板。
c) 分析步骤：取本品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液作为供试品溶液，照《薄层色谱法》DR.SOP/QC.Ⅸ012试验，吸取上述溶液10ul，点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（19：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%3，5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液与5%氢氧化钾的乙醇溶液的等量混合液（临用配制）。
供试品色谱中，除主斑点外，不得显其他斑点。
5.3.3 干燥失重：a) 仪器与设备：电子天平、鼓风干燥箱、称量瓶。
HPLC法测定穿心莲注射液中穿心莲内酯的含量
HPLC法测定穿心莲注射液中穿心莲内酯的含量目的建立穿心莲注射液中穿心莲内酯的高效液相色谱法含量测定方法。
方法采用高效液相色谱法测定含量，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（50∶50）；检测波长：224 nm；流速：1.0 ml/min。
结果穿心莲内酯在0.02 022～0.1011 mg/ml（r=0.9999）内呈良好的线性关系，平均回收率（n=6）为99.1%（RSD=1.1%）。
结论建立的测定穿心莲内酯的方法准确有效，有助于进一步完成穿心莲注射液的质量控制方法。
[Abstract]Objective To establish the HPLC method for determination of Andrographolide content in Chuanxinlian Injection.Methods HPLC was used in content determination，the chromatographic column was Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-water （50：50），the detection wavelength was 224 nm and the flow rate was 1.0 ml/min.Results The good linear relation was maintained when Andrographolide was from 0.02 022 to 0.1011 mg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 99.1% （n=6，RSD=1.1%）.Conclusion The method of determination of Andrographolide is accurate and effective，which can help to complete the quality control method of Andrographolide Injection.[Key words]HPLC method；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content穿心莲注射液是由穿心莲的乙醇提取物制成的注射液，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热解毒的功效，主要用于咽喉肿痛、肺热咳嗽、热痢，亦可用于上呼吸道感染、细菌性痢疾等。
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穿心莲内酯检验操作规程
1 目的：
建立穿心莲内酯检验操作规程。
2 范围：
适用于穿心莲内酯的检验，使穿心莲内酯的检验规范化、标准化。
3 引用标准：
《中国药典》2010年版一部 P387 穿心莲内酯
4 责任：
检验员对检验过程及数据负责；复核人对检验结果的复核负责。
5 内容：
5.1 性状：本品为无色结晶性粉末，无臭，味苦。
5.2 鉴别：
5.2.1 试剂和溶液：乙醇、3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液、5%氢氧化钠溶液、乙醇制氢氧化钾试液、无水乙醇。
5.2.2 仪器与设备：紫外分光光度仪、烧杯、量筒、天平。
5.2.3 分析步骤：
a) 取本品约10mg，加乙醇2ml溶解后，加2%的3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液与5%氢氧化钾的乙醇溶液各2滴，混匀，即显紫红色。
b) 取本品约10mg，加乙醇2ml溶解后，加乙醇制氢氧化钾试液2～3滴，渐显红色，放置后变为黄色。
c) 取本品，加无水乙醇制成每1ml中含10ug的溶液，照《紫外-可见分光光度法》测定，在224nm的波长处有最大吸收。
5.3 检查：
5.3.1 熔点：
a) 仪器与设备：熔点仪。
b) 分析步骤：取本品，照《熔点测定法》DR.SOP/QC.Ⅸ010测定，熔点应为224～230℃，熔融同时分解。
5.3.2 其他内酯：
a) 试剂和溶液：无水乙醇、三氯甲烷、甲醇、2%3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液、5%氢氧化钾的乙醇溶液。
b) 仪器与设备：硅胶G薄层板。
c) 分析步骤：取本品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液作为供试品溶液，照《薄层色谱法》DR.SOP/QC.Ⅸ012试验，吸取上述溶液10ul，点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（19：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%3，5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液与5%氢氧化钾的乙醇溶液的等量混合液（临用配制）。
供试品色谱中，除主斑点外，不得显其他斑点。
5.3.3 干燥失重：
a) 仪器与设备：电子天平、鼓风干燥箱、称量瓶。
b) 分析步骤：取本品1.0g，照《干燥失重测定法》DR.SOP/QC.Ⅸ008测定，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0%。
5.3.4 炽灼残渣：
a) 仪器与设备：电子天平、马弗炉、坩埚、电炉。
b) 分析步骤：取本品1.0g，照《炽灼残渣检查法》DR.SOP/QC.Ⅸ011测定，炽灼残渣不得过0.1%。
5.3.5 含量测定：照《高效液相色谱法》DR.SOP/QC.Ⅸ018测定。
a) 试剂和溶液：色谱甲醇。
b) 仪器与设备：电子天平、液相色谱仪、容量瓶。
c) 分析步骤：
1) 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇－水（60：40）为流动相，穿心莲内酯检测波长为225nm。
理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于5000。
2) 对照品溶液的配制：取穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
3) 供试品溶液的配制：取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
4) 操作步骤：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得，本品按干燥品计算，含穿心莲内酯应为95.0～101.0%。
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