电化学发光免疫分析法
电化学发光免疫分析法
免疫学检测历史演进
放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现 仍普遍使用于县级以上医院）； 酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各 临床机构普遍使用）； 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫 检测技术（20世纪90年代开始推广使用， 产品步入成长期）三个阶段。
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按分离方法不同分
微粒子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定
化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按发光剂不同分为
发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） 化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） 电化学发光免疫测定技术（electro－ chemiluminescence immunoassay， ECLI ）
方法评价
利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结 合态和游离态，方便迅速，实现了精确 的全自动化； 标记物的再循环利用，使发光时间更长、 强度更高、易于测定。
ELIA优越性
高度敏感，可达pg／ml或pmol水平； 特异性强，重复性好，CV＜5％。 测定范围宽，可达7个数量级。 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长， 达数月甚至数年。 操作简单，耗时短，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代 RIA的首选方法。
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施 加一定波形的电压或电流信号进行电解 反应的产物之间或与体系中共存组分反 应产生化学发光的现象。
分析电化学发光免疫法和放射免疫法检测血清FT3、FT4、TSH的方法(精)
分析电化学发光免疫法和放射免疫法检测血清FT3、FT4、TSH的方法【电化学发光免疫法【摘要目的探索电化学发光免疫法检测替换放射免疫法检测的可靠性及在方法学上前者是否更具上风。
方法利用2种方法法分别检测血清FT3、FT4、TSH，并进行精密度、正确度、患者结果可报告范围、分析灵敏度、分析特异性、回收率等几方面的比较。
结果 2种方法法检测结果差异有明显性（P ＜0.05），并且电化学发光免疫法在患者结果可报告范围、精密度、分析灵敏度、抗干扰能力、正确度试验方面均优于放射免疫法。
结论电化学发光免疫法完全能够替换放射免疫法，并且还具有报告范围宽，精密度、分析灵敏度高，抗干扰能力强的优点。
【电化学发光免疫法；检测低限；抗干扰试验由于放射免疫法（RIA）检测血清FT3、FT4、TSH本钱较低，目前还有部分实验室仍在采用，但因该法报告时间长，结果不稳定，且存在同位素污染新题目，在国外已趋于淘汰。
近年来国内推出的电化学发光免疫法（ECLIA）检测具有快速、正确、重复性好并平安无毒等优点，受到临床和实验室的关注。
本文分别采用2种方法对血清FT3、FT4、TSH检测做了患者结果可报告范围、精密度、分析灵敏度、抗干扰试验、正确度试验，结果报告如下。
1 材料和方法1.1 仪器和试剂美国罗氏公司生产的2010型电化学发光免疫分析仪，美国生产的Cap-Ria-16型全自动γ计数仪。
电化学发光免疫分析试剂购于罗氏公司，放射免疫分析试剂购于天津九鼎公司。
1.2 方法和结果1.2.1 精密度分别取FT3、FT4、TSH 3种不同浓度的混合血清，见表1。
其中一半重复测定20次，另外一半分成10份，装进塑料离心管置于-20℃冰箱，天天1次共测定10次，测定结果，见表2。
表1 FT3、FT4、TSH 3项不同浓度的混合血清（略）表2 电化学发光免疫法和放射免疫法检测的精密度情况（略）1.2.2 分析灵敏度用2种方法分别对空缺零标准做批内20次检测，分别记录放射强度和发光强度并做统计，再计算检测低限（LLD）［1］。
评价电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果
评价电化学发光免疫分析法 (ECLIA)在梅毒检测中的应用效果【摘要】目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果。
方法梅毒患者血清标本51例和非梅毒患者血清样本91例，运用电化学发光免疫分析法和毒螺旋体抗体(ELISA)进行检测，对比敏感度、特异性和准确性。
结果电化学发光免疫与毒螺旋体抗体的敏感度为100％、98.04%，而特异性98.90%、100％，对比两方法差异无统计学意义(P>0.05)。
ECLIA方法在敏感性方面高于ELISA方法。
结论 ECLIA用于梅毒检测中，有着很高的敏感度，有着较高的特异性，且准确性也很高，在进行梅毒检测的时候，操作上比较的简便，能够进行快速的检测，结果较为客观，有着较好的重复性等。
【关键词】电化学发光免疫分析法；梅毒检测；诊断梅毒是一种慢性全身性性传播疾病，该疾病的引发主要由苍白密螺旋体苍白亚种感染造成的，梅毒的传染性非常强，能够对全身各器官进行侵犯，对多器官造成损害，对人们的身心健康造成严重的影响。
近年来我国梅毒的发病率呈现攀升的趋势[1]。
但部分梅毒感染者由于有着较长的潜伏期而没有明显的症状，难以及早地发现，若是没有得到有效的治疗，容易引发严重的并发症。
在对梅毒进行诊断的时候，梅毒血清检测是重要的指标。
选择敏感性高、特异性高、准确性高的检测方法，能够使筛查和诊断更加的快速、准确，从而符合检测机构的要求，这显得十分的重要。
本文对梅毒检测中使用的电化学发光免疫分析法进行了研究，现报告如下。
1资料和方法1.1一般资料将2019年5月-2020年8月收治的经过病史询问、临床症状分析、血清学试验诊断，确诊51例梅毒患者血清标本，91例非梅毒患者血清标本，样本年龄介于22至78岁之间，平均（40.11±3.57）岁。
1.2 方法使用E601电化学发光免疫分析仪，还有与之相配的梅毒检测试剂，通过化学发光免疫来对苍白密螺旋抗体机械能检测苍。
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析是一种在电极表面由电化学引发的异性化学发光反应，是电化学和化学
发光两个过程的完美结合。
电化学发光免疫测定是电化学发光和免疫测定相结合的产物，是
目前非常先进的标记免疫测定技术。
电化学发光技术主要技术：
1. 三联吡啶钌标记技术；
（1）循环使用，不会被消耗，电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号无限循环放大，检测灵敏度大大提高
（2）其盐是很稳定的水溶性化合物，试剂的稳定性好，效期长
（3）N 羟基琥珀酰胺（ NHS ）酯能与蛋白质赖氨酸的ε-氨基或核酸上的氨基形成稳定的酰
胺键，应用广泛，宽广的检测菜单
（4）惰性元素，非放射性元素，稳定
（5） [Ru(bpy)32+]和TPA ，无电压的情况非常稳定，确保反应结果的准确性
2. 链霉亲和素—生物素技术；
（1）特异性强且结合紧密，灵敏度高
（2）一分子SA可与四分子B相结合，增大了抗体结合量，灵敏度高
3. 磁性微粒子技术；
（1）反应面积大，结合量增大
（2）反应在近乎液相中进行，信号均匀精确
（3）分离方便迅速，无背景干扰
4. 电启动的化学发光反应。
（1）实现了结合相和游离相的完全自动化分离
（2）彻底清洗，反应易于控制
电化学发光技术特点：试剂稳定、测量范围宽，灵敏度高、特异性优异、检测菜单丰富、准
确性好，精密度高、操作便捷；。
电化学发光免疫分析的原理
电化学发光免疫分析的原理电化学发光免疫分析（ELISA）是一种流行的抗体检测技术，可以检测和测定抗体或抗原。
ELISA最初由发明者迪卡贝尔（Dica Bell）于1970年发明，以前称为发光免疫分析法或发光免疫比色法。
它可以快速准确地检测抗原或抗体在生物样品中的浓度。
ELISA技术的基本原理是：首先将特定的抗原和发光探针分别固定到水凝胶的微孔平板上，然后将待测样品加入微孔平板，抗原识别抗体或抗原与它结合，抗体和发光探针之间形成免疫复合物。
然后，抗体免疫复合物结合到抗原，使抗体免疫复合物和发光探针之间形成发光免疫复合物。
最后，将产生的发光免疫复合物可以在发光分析仪上读取，从而实现抗原检测目的。
ELISA技术的预处理过程是：首先将特异性抗原固定到微孔平板上，然后将抗原固定物体洗涤干净，洗涤后，将含有实验样品的溶液加入。
抗原和实验抗体在抗原上结合，产生免疫复合物。
接下来，将发光探针加入该免疫复合物，使免疫复合物和发光探针形成发光免疫复合物，以发光的方式检测体外抗原的浓度。
ELISA技术的优点是快速、准确、可重复，可以用来检测各种抗原的抗体，如霍乱抗原、疱疹病毒抗原、轮状病毒、肝炎抗原等。
ELISA 技术也可以用来研究抗体的特异性、可稳定性和稳定性，从而为研究抗原提供重要的理论基础。
ELISA技术也有一些缺点，如测定样品抗体或抗原的反应强度不够准确。
此外，ELISA技术的准确性受到实验参数的影响，如反应温度、反应时间，以及抗原和抗体的浓度和稀释比例等。
ELISA技术具有快速、可靠和可重复性等特性，是当今最常用的免疫学检测方法。
它不仅能用于抗原抗体检测，还经常被用于临床检测，用于诊断疾病，如癌症、HIV等。
ELISA技术对对医学和科学领域都具有重要的意义，它可以准确、快速地检测抗原或抗体，为疾病的早期诊断和治疗提供有效的支持。
总之，电化学发光免疫分析（ELISA）技术是一种常见的抗体检测技术，也是当今最常用的免疫学检测方法，可以根据其特定的技术原理来进行抗原检测。
电化学发光免疫分析方法及其在医学中的应用研究
电化学发光免疫分析方法及其在医学中的应用研究目的：分析电化学发光免疫分析的方法和医学中的应用情况。
方法：对AFP 含量进行电化学发光免疫分析与放射免疫分析，做出线性评价、精密度评价与回收实验，并进行对比，运用两种方法对60例患者血清标本的AFP含量进行平行检测，然后进行相关性分析。
结果：电化学发光免疫分析法的重复率明显优于放射免疫分析。
电化学发光免疫分析法的回收率明显优于放射免疫分析。
数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。
结论：电化学发光免疫检测血清甲胎蛋白的精确度与准确性都要优于放射免疫分析法，值得临床推广与运用。
标签：电化学发光免疫；临床运用；放射免疫；检验电化学发光免疫分析出现于自20世纪90年代，是一类化学发光免疫分析技术，集纳米微粒子技术、电子发光技术、抗原-抗体免疫反应、生物素-亲和素系统以及电磁场分离整合设计的自动化标记免疫分析系统，结合了电化学发光与免疫测定，具有化学发光与电化学两个过程，磁珠微球当做固相载体，发光物质为三氯联吡啶钌[Ru（bpy）3]2+，电极进行激发，三丙胺参与循环反应，稳定快速的发光，检测的结果可靠、稳定，具有的准确度与精密度要高于酶联免疫法[1]。
发光检测灵敏度高，不具有人为操作误差的影响。
1材料与方法1.1材料选取60例患者血清标本，18份标本血清甲胎蛋白浓度正常，42份标本血清甲胎蛋白的浓度超出正常的范围。
通过Roche Elecsys2010全自动化学发光免疫分析仪器与SN-697型自动双探头放射免疫γ计数器进行检验。
1.2方法放射免疫分析法运用甲胎蛋白宽范围放射免疫分析测定盒，电化学发光免疫分析运用的检测试剂为Elecsys2010配套AFP定量检测试剂盒，按照试剂说明书进行检测操作。
2结果2.1 通过NCCLS精密度评价方案，运用电化学发光免疫分析与放射免疫分析法对高浓度、中浓度、低浓度的血清甲胎蛋白质控血清作重复性实验。
实验结果显示，电化学发光免疫分析与放射免疫分析法都具有较好的重复性，而电化学发光免疫分析的CV值对比放射免疫分析法相对较小。
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析化学发光免疫分析，也称为化学发光法或发光免疫测定法，是一种高灵敏度和高特异性的生物分析技术。
它结合了免疫学、生物学和化学的原理，利用特异性抗体与其抗原（或其他生物分子）相互作用，通过化学反应使其辐射出光信号，从而定量地检测目标物质的存在和含量。
一、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析原理基于化学发光原理和免疫学原理。
化学发光原理就是将化学反应的能量通过光子的辐射转换为光的能量。
免疫学原理是利用特异性免疫反应来识别和区分不同的抗原或抗体。
化学发光免疫分析技术的基本步骤如下：1.选择特异性的抗体与目标物质的结合；2.引入辐射源激活化学发光前体（例如，过氧化物或二氧化硫酞）；3.目标物质与抗体发生结合后，释放了辐射源激活前体，使其进一步分解并产生化学发光；4.测定样品中的荧光强度，用于定量分析目标物质的存在和含量。
化学发光免疫分析发出的荧光信号对于抗原-抗体的结合非常敏感和特异。
比较常见的荧光标记物包括酶（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、荧光染料（如荧光素和荧光素衍生物）、金纳米粒子等。
二、化学发光免疫分析的应用化学发光免疫分析的应用涉及生物分子、环境污染、中药等领域。
下面将从这些不同应用领域来介绍化学发光免疫分析技术的具体应用。
1.生物分子分析生物分子分析是化学发光免疫分析技术的主要应用领域之一。
常见的生物分子包括蛋白质、核酸、糖等。
如免疫荧光分析技术可以快速、准确地分析细胞表面分子、内部生物分子和变态反应特异性IgE。
同时，化学发光免疫分析技术可以用于患者体液中的特定免疫球蛋白或蛋白质的定量检测。
2.环境污染分析环境污染分析是化学发光免疫分析技术的另一个主要应用领域。
通过测量土壤、水、空气等样品中的污染物含量，可以快速精准地确定其存在和含量。
化学发光免疫分析技术可用于检测重金属、有机污染物、致癌物等。
该技术不仅检测灵敏，而且简便易行。
3.中药分析中药分析中常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、电化学法等。
电化学发光免疫分析法课件
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
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化学发光免疫分析
Chemiluminescence immunoassay (CLIA)
• 化学发光分析----根据化学发光反应在某一时刻的发光强 度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方 法，成为化学发光分析。
• 化学发光免疫分析----是集灵敏的化学发光技术和特异的 抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。
• 化学发光免疫分析的特点：灵敏度高、特异性高、分离简 便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。
化学发光免疫技术的类型
按发光剂不同分为
1. 发光酶免疫测定（Chemiluminescence enzyme immunpassay CLEIA）
2. 化学发光免疫测定技术（Chemiluminescence immunoassay CLIA）
活性。
酶1,促酶反促应反的应发的光发底物光底物
• 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物 • CLEIA中常用的酶有HRP和AP • HRP的发光底物有鲁米诺、对一羟基苯乙酸 • AP的发光底物有AMPPD、4—MUP（荧光底物） 特点：可做标记物，也可以做过氧化物酶的底物
1.鲁鲁米米诺诺
对一羟基苯乙酸（HPA）
进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化 学发光的现象. 它包含了电化学和化学发光两个过程.
ECL和CL的区别在于:ECL是电启动发光反应,而CL是通 过化合物混合启动发光反应,因此ECL反应便于精确控制, 具有灵活性.
电化学发光剂
三联吡啶钌的特点
ECL分析中采用三联吡啶钌作为标记物，其活化衍生物是 三联吡啶钌+N羟基琥珀酸胺脂（NHS），该衍生物具有水 溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和稳定， 而且避免了本底噪声的干扰。
三丙胺(tripropylamine,TPA)
氧化
.+
CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3
电极 CH2CH2CH3
+ e-
CH2CH2CH3
Ru(bpy)33+ 还原
Ru(bpy)32+
+Ru(bpy)32+
..
CH3CH2CH2-N-C-CH2CH3
• 二价的三联吡啶钌在电场的作用下，失去一个电子氧化成 三价的三联吡啶钌
• 同时，在电场的作用下，三丙胺也失去一个电子被氧化, 然后脱氢成三丙胺自由基
• 三丙胺自由基传递一个电子给三价的三联吡啶钌使之进入 激发态
• 激发态的三联吡啶钌不稳定,以发射一个波长为620nm的光 子的形式释放能量而回到基态三联吡啶钌不被消耗,即发 光标记物可循环发光
• HPA在H2O2存在下被ＨPR氧化成氧化二聚体（荧光物质），在 350nm激发光作用下，发出450nm波长的荧光，可用荧光光度 计计量。
一，发光酶免疫测定（CLEIA）
• 原理 属于酶免疫测定的一种，只是最后一步酶 反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光 在特定的仪器上进行测定。
• 技术类型 根据酶促反应所用底物不同可分为： 1 荧光酶免疫测定技术 2 化学发光酶免疫测定技术
免疫学检测的发展阶段
免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应 进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、 酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显 示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。 我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程:
中国免疫学检测的历史演进
• 放射免疫检测：兴于20世纪70年代，现在已经基 本淘汰，可能有些小医院还在使用。
免疫分析法
它是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一 种技术手段。
抗原抗体反应是指抗原与相ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的抗体之间发生的 特异性反应，它既可以发生在体内，也可以发生 在体外。
免疫标记技术是将一些既容易测定又具有高度敏 感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通 过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中 抗原或抗体的性质或含量。
注:试剂表现不仅仅表现在灵敏度和宽线性,还有特异性,
重现性,线性回归,携带率,准确性和临床符合性等多种表现
ECL的临床应用
肝炎 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体 乙肝核心抗体 乙肝核心抗体M 乙肝e抗原 乙肝e抗体
甲状腺功能 三碘甲状腺原氨酸 甲状腺素 游离三碘甲状腺原氨酸 游离甲状腺素 超敏促甲状腺素 甲状腺摄取 甲状腺球蛋白 抗-TPO 抗-Tg
3. 电化学发光免疫测定技术 （Electrocheminluminescence immunoassay ECLI）
按分离方法不同分
1. 微离子化学发光免疫测定 2. 磁颗粒化学发光免疫测定
化学发光剂
• 机制 某些化合物可以利用化学反应产生能量使其产物
分子或反应中间态分子上升至电子激发态，当此产物分子 或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量 （即发光）。
心血管急诊 肌酸激酶同工酶 心肌钙蛋白-T 心肌红蛋白 Pre-BNP 地高辛 洋地黄
2. 微粒子捕获法 采用无磁性的微粒子作为抗原抗体的包 被载体，然后用纤维膜柱子进行酶标记物的结合和游离 状态的分离。
3. 包被珠分离法 用聚苯乙烯等材料制成用作包被抗原抗 体的小珠，经抗原抗体反应后，将结合状态和游离状态 的酶标记物分离。
二.化学发光免疫测定技术(ELIA)
• 原理 用发光剂直接标记抗原或抗体，与待测样本中相应 的抗体或抗原、磁性颗粒上的抗原或抗体反应，通过磁场 把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物 分离开来，然后加入发光促进剂进行发光发应。
按测定物反应体系的物理状态分
匀相免疫测定 非匀相免疫测定
发光的分类
光照发光：发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当 回复至基态时发出较长波长的可见光。
生物发光：反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能， 生成激发态的氧化荧光素，后者在回复到基态时多余的能 量以光子的形式放出。
化学发光：在常温下由化学反应产生的光的发射，化学发 光是一个多步骤的过程。
根据免疫学反应模式分 1 双抗体夹心法和双抗原夹心法 2 固相抗原竞争法
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
发光酶免疫测定技术的技术要点
1. 抗原抗体结合反应 将已包被了抗体的乳胶颗粒和待 测标本加入反应杯中，经温育一定时间后，再加入AP标 记抗体，温育，形成固相包被抗原—抗体—酶标记复合 物。
2. 分离技术 将复合物转移到玻璃纤维上，用缓冲液洗 涤，没结合的抗原被洗脱，酶标抗体-抗原-胶乳微粒抗 体复合物被保留在纤维膜上。
• 技术类型 1 分离方法 常用磁颗粒分离技术 2 免疫学反应模式同酶发光免疫测定技术，不同的只是相 应的标记物是吖啶脂而不是酶。
磁性微粒子固相
直径2.8微米
亲和素—生物素
亲和素—生物素
三,电化学发光免疫测定技术(CLIA)
• 电化学发光(ECL) 原理 是指在电极上施加一定波形的电压或电流信号,
+H+
H CH2CH2CH3
氧化
CH3CH2CH2-N-H
+ CH3CH2CHO CH2CH2CH3
ECL的测定模式
ECL的优势
• 灵敏度高(10-12~10-18)，可达Pg/ml或Pmol水平 • 重复性好 CV＜5.0% • 检测线性宽(7个数量级) • 试剂稳定，无污染，有效期长 • 操作简单，易于自动化
肿瘤标志物 甲胎蛋白 癌胚抗原 糖类抗原12-5 糖类抗原15-3 糖类抗原19-9 糖类抗原72-4 游离前列腺特异性抗原 前列腺特异性抗原 Cyfra21-1 烯醇化酶
代谢 铁蛋白 B12 叶酸 胰岛素 免疫球蛋白E
生殖/内分泌 人绒毛膜促性腺激素 总B人绒毛膜促性腺激素 促黄体生成素 促卵泡生成素 雌二醇 孕酮 睾酮 催乳素 可的松 硫酸脱氢表雄酮
3. 酶促发光反应 加入4-MUP，酶标抗体上的AP将4-MUP 分解，形成4-MU，它在360nm激发光照射下发出448nm的 荧光，经光记录仪放大处理计算出待测物质的含量。
分离技术
1. 磁颗粒分离法 原理为血清样品与标准品中的抗原或抗 体与磁颗粒上的一定量的抗体或抗原反应，产生的抗原 抗体磁性颗粒复合物，在磁场作用下沉降，使结合部分 与游离部分分离。
• 化学发光剂或发光底物 在化学发光反应中参与
能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物。
• 发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂。
化学发光剂应符合以下几个条件
① 能参与化学反应； ② 与抗原或抗体偶联后成稳定的结合物试剂； ③ 偶联后仍保留高的量子效应和反应动力； ④ 应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫
• 酶联免疫检测：兴于20世纪80年代，现普遍使用 于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方 法。
• 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技 术，始于20世纪90年代，现广泛应用于县级以上 各医疗机构，产品已经步入成熟期。
免疫分析检测的技术分类
•按示按踪示物踪及物标及记标种记类种分类分
放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 化学发光免疫技术 金免疫技术
在自然界有各种各样的发光现象
萤火发虫发光光萤火虫
深海鱼发光
化学发光
Chemiluminescence （CL）
• 化学发光是指在某些特殊的化学反应中， 反应的中间体或产物由于吸收了反应释放 的化学能而处于电子激发态，当其回到基 态时伴随产生的光辐射现象。
化学发光反应 包括两个关键 的步骤：化学 激发和发光
电化电化学学发发光光免免疫疫分分析析法法
ElectErole-ctCro-hCehemmiilulummineisnceenscecence ImmImumnuonoaassssayay(EC(LEI) CLI)
主讲人 崔天根